RU2027434C1

RU2027434C1 - Immunomodulating drug

Info

Publication number: RU2027434C1
Authority: RU
Inventors: Б.И. Шальнев; В.С. Сускова; В.И. Емец; В.А. Пасешниченко; И.С. Васильева; А.С. Воробьев
Original assignee: Научно-Исследовательский Институт Трансплантологии И Искусственных Органов
Priority date: 1988-08-16
Filing date: 1988-08-16
Publication date: 1995-01-27

Abstract

FIELD: medicine, particularly, medicinal preparations used for correcting immune response. SUBSTANCE: this oligofurostanoside-based drug is prepared from suspension culture of deltoid diascorea and employed as immunomodulator. Selective effect is produced by disclosed preparation on structure and function of membranes of immunocompetent cells. Novel drug is classed among water-soluble antioxidants of biogenic type. EFFECT: no nephrotoxic effect. 4 tbl

Description

Изобретение относится к новому биологически активному препарату олигофуростанозидов из суспензионной культуры клеток диоскореи дельтовидной, который может найти применение в медицине, в частности для коррекции иммунного ответа. The invention relates to a new biologically active preparation of oligofurostanosides from a suspension culture of dioscorea deltoid cells, which may find application in medicine, in particular for correction of the immune response.

В последние годы важное значение приобрели соединения, оказывающие иммсуномодулирующее действие (угнетение или стимуляция клеточного и гуморального иммунного ответа, зависящее от дозы). Большинство из этих соединений относится к природным малотоксичным препаратам. Практическое применение из них получили левамизол, применяющийся главным образом в иммуностимулирующем режиме, и циклоспорин А, применяющийся как иммуносупрессант. В качестве базового объекта (он же - прототип) взят циклоспорин А - новый тип иммуносупрессанта, действующий только на стадии антиген-чувствительных клеток-предшественников. Циклоспорин А допускает активацию регуляторных механизмов клеток-супрессоров, но ингибирует индукцию хелперных и цитотоксичных Т-лимфоцитов. Циклоспорин А наиболее активен при введении во время иммунизации, т.е. он действует на ранней стадии запуска лимфоцитов антигеном и это действие явно отличается от действия азатиоприна или циклофосфамида (1). Недостатком данного препарата является его нефротоксичность при использовании в терапевтических дозах (17-15 мг/кг/день при снижении к концу 1-го месяца до 6 мг/кг/день) (2,3). In recent years, compounds having an immunomodulatory effect (inhibition or dose-dependent stimulation of the cellular and humoral immune response) have gained importance. Most of these compounds are natural low-toxic drugs. Of these, levamisole, used mainly in the immunostimulating mode, and cyclosporin A, used as an immunosuppressant, received practical use. Cyclosporin A, a new type of immunosuppressant that acts only at the stage of antigen-sensitive progenitor cells, was taken as the base object (aka prototype). Cyclosporin A allows the activation of the regulatory mechanisms of suppressor cells, but inhibits the induction of helper and cytotoxic T lymphocytes. Cyclosporin A is most active when administered during immunization, i.e. it acts at an early stage of lymphocyte launch by an antigen and this action is clearly different from the action of azathioprine or cyclophosphamide (1). The disadvantage of this drug is its nephrotoxicity when used in therapeutic doses (17-15 mg / kg / day with a decrease to 6 mg / kg / day by the end of the 1st month) (2,3).

У веществ, относящихся к растительным стероидным гликозидам ряда фуростана, к которым относится заявляемый препарат, иммуномодулирующая активность ранее не была обнаружена. В то же время у них известна: 1) антиоксидантная активность и 2) липотропная активность, выражающая в гипохолестероллитическом действии. Препараты, содержащие в качестве активного начала стероидные гликозиды ряда фуростана - полиспонин и диоспонины, применяются в СССР в течение многих лет в качестве антисклеротических препаратов и представляют собой сумму олигофуростанозидов из корневищ диоскореи кавказской и диоскореи ниппонской, по составу мало отличающихся от заявляемого препарата олигофуростанозидов из суспензионной культуры клеток диоскореи дельтовидной. In substances related to plant steroid glycosides of a number of furostan, which include the claimed drug, immunomodulating activity has not been previously detected. At the same time, they know: 1) antioxidant activity and 2) lipotropic activity, which expresses in the hypocholesterolitic effect. Preparations containing steroid glycosides of the furostan series, polysponin and diosponins, as active agents, have been used in the USSR for many years as antisclerotic drugs and represent the sum of oligofurostanosides from the rhizomes of the Caucasian dioscorea and Nippon dioscorea, the composition of which differs little from the claimed preparation of oligofurostanostenosides Dioscorea deltoid cell culture.

Цель изобретения - новый иммуномодулятор избирательного действия, не обладающий нефротоксическим действием. The purpose of the invention is a new immunomodulator of selective action that does not have nephrotoxicity.

Указанная цель достигается применением препарата олигофуростанозидов из суспензионной культуры клеток диоскореи дельтовидной впервые в качестве иммуномодулятора, что соответствует критериям "новизна" и "существенные отличия". Избирательность действия этого препарата осуществляется за счет возведения на структуру и функцию мембран иммунокомпетентных клеток, так как предлагаемый препарат относится к водорастворимым антиоксидантам биогенного типа. Его получают известным способом (5) . This goal is achieved by using the drug oligofurostanosides from a suspension culture of dioscorea deltoid cells for the first time as an immunomodulator, which meets the criteria of "novelty" and "significant differences". The selectivity of the action of this drug is carried out by erecting on the structure and function of the membranes of immunocompetent cells, since the proposed drug refers to water-soluble biogenic antioxidants. It is obtained in a known manner (5).

П р и м е р 1. Получение препарата олигофуростанозидов. Препарат получают из суспензионной культуры клеток Dioscorea deltoidea Well (диоскореи дельтовидной), штамм ИФР ДМ-0,5, которую получили в Институте физиологии растений АН СССР. Биомассу для препаративного выделения препарата отбирали в стационарную фазу роста. Препарат олигофуростанозидов выделяли из этой биомассы путем осаждения с белками. Для этого клеточную массу после отделения от культуральной жидкости экстрагируют водой в соотношении 1:(10-20) в течение 2-3 ч. Осадок отделяют центрифугированием, экстракцию повторяют. К объединенной надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония до полного насыщения и выдерживают 30 мин. При этом вместе с белками происходит соосаждение низкомолекулярных гликозидов. Полученный осадок обрабатывают 5-6 раз 96% этанолом, осадок отделяют, промывают этанолом. Надосадочную жидкость упаривают в роторном испарителе. В осадке получают препарат олигофуростанозидов, который состоит из двух гликозидов: 1) протодиосцина (26-0-β -D-глюкопиранозил-22-окси-фурост-5-ен-3β , 26-диол 3-0- β -чакотриозид) и 2) дельтозида (26-0-β -D-глюкопиранозил-22-окси-фурост-5ен-3 β ,-26-диол 3-0-β -дельтотриозид). Общая формула препарата

где R для 1) равно 1 молекуле глюкозы и 2 молекулам рамнозы и для 2) R равно 2 молекулам глюкозы и 1 молекуле рамнозы.PRI me R 1. Obtaining the drug oligofurostanosides. The drug is obtained from a suspension culture of Dioscorea deltoidea Well cells (deltus dioscorea), strain IGF DM-0.5, which was obtained at the Institute of Plant Physiology of the USSR Academy of Sciences. Biomass for preparative isolation of the drug was selected in the stationary phase of growth. The oligofurostanoside preparation was isolated from this biomass by protein precipitation. For this, the cell mass after separation from the culture fluid is extracted with water in a ratio of 1: (10-20) for 2-3 hours. The precipitate is separated by centrifugation, the extraction is repeated. Ammonium sulfate is added to the combined supernatant until it is completely saturated and incubated for 30 minutes. At the same time, together with proteins, low molecular weight glycosides are coprecipitated. The resulting precipitate is treated 5-6 times with 96% ethanol, the precipitate is separated, washed with ethanol. The supernatant was evaporated in a rotary evaporator. In the precipitate, a preparation of oligofurostanosides is obtained, which consists of two glycosides: 1) protodioscin (26-0-β-D-glucopyranosyl-22-hydroxy-furost-5-en-3β, 26-diol 3-0-β-chacotrioside) and 2) deltoside (26-0-β-D-glucopyranosyl-22-hydroxy-furost-5en-3 β, -26-diol 3-0-β-deltotrioside). The general formula of the drug

where R for 1) is 1 glucose molecule and 2 rhamnose molecules and for 2) R is 2 glucose molecules and 1 rhamnose molecule.

Количественный анализ выделенного препарата проводили с помощью спектрометрического метода, основанного на цветной реакции олигофуростанозидов с реактивом Эрлиха - 1%-ный раствор п-диметиламинобензальдегида в смеси метанол: соляная кислота (концентрированная 66:34г). Чистота полученного препарат 80%. Методом жидкостной хроматографии с 25%-ным ацетонитрилом в качестве подвижной фазы с детектированием при 207 нм в составе препарата нашли следующее соотношение между дельтозидом и протодиосцином 10:16. Препарат представляет собой белый, аморфный порошок, растворимый в воде. Стабилен при хранении при +20^оС в закрытой склянке.Quantitative analysis of the isolated preparation was carried out using a spectrometric method based on the color reaction of oligofurostanosides with Ehrlich's reagent - a 1% solution of p-dimethylaminobenzaldehyde in a mixture of methanol: hydrochloric acid (concentrated 66: 34g). The purity of the resulting drug is 80%. Using liquid chromatography with 25% acetonitrile as the mobile phase with detection at 207 nm, the following ratio between deltoside and protodioscin 10:16 was found in the composition of the preparation. The drug is a white, amorphous powder, soluble in water. Is stable when stored at 20 ^{° C} in a sealed flask.

Иммуномодулирующий эффект препарата и избирательное действие на иммунокомпетентные клетки и иммунорегуляторные их субпопуляции изучены в тестах ин витро (примеры 2-4). Предварительно было изучено цитотоксическое действие препарата на лимфоциты периферической крови человека при культивировании их в течение 72 ч в присутствии препарата в концентрациях от 0,1 до 100 мкг/мл. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью трипанового синего. Процент живых клеток составлял 85-90%, что соответствовало контрольным (без препарата культурам, 10-15% составляла естественная гибель клеток. Таким образом, было показано, что испытуемый препарат в исследованных концентрациях не токсичен. The immunomodulatory effect of the drug and the selective effect on immunocompetent cells and their immunoregulatory subpopulations were studied in vitro tests (examples 2-4). Previously, the cytotoxic effect of the drug on human peripheral blood lymphocytes was studied when they were cultured for 72 hours in the presence of the drug in concentrations from 0.1 to 100 μg / ml. Cell viability was evaluated using trypan blue. The percentage of living cells was 85-90%, which corresponded to the control (without cultures, 10-15% was natural cell death. Thus, it was shown that the test drug in the studied concentrations is not toxic.

П р и м е р 2. Влияние препарата олигофуростанозидов на Т-хелперы изучено в реакции бласттрансформации лимфоцитов, индуцированных ФГА. При этом мононуклеарные клетки (МНК) выделяли из гепаринизированной крови дифференциальным центрифугированием на градиенте плотности фиколл-гипака (р-1.077) по Bouym. При постановке реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) лимфоциты в количестве 0,25-0,50 х 10⁶ инкубировали в 1 мл среды 199, содержащей 10% сыворотки АВ (IV) группы и 5 мкг ФГА-Р (фирмы "Serva"). В момент постановки культуры до ФГА в опытные пробирки вносили испытуемый препарат в концентрациях от 0,01 до 100 мкг/мл. Пролиферативный ответ лимфоцитов оценивали через 72 ч, причем за 4 ч до окончания культивирования клеток в культуру вносили ³Н-тимидин в концентрации 0,04 МБК (1 мккюри) на 1 мл культуры. Через 72 ч от начала культивирования каждую пробу переносили на миллипоровые фильтры, отмывали холодным 10%-ным раствором ТХУ и физраствором. Радиоактивность подсчитывали на жидкостном сцинтилляционном счетчике. Результаты выражали в индексе стимуляции, который высчитывали по формуле
ИС =

Результаты представлены в табл.1.PRI me R 2. The influence of the drug oligofurostanosides on T-helpers studied in the reaction of blast transformation of lymphocytes induced by PHA. In this case, mononuclear cells (MNCs) were isolated from heparinized blood by differential centrifugation on a density gradient of ficoll-hypak (p-1.077) according to Bouym. When setting up the reaction of blast transformation of lymphocytes (RBTL), lymphocytes in an amount of 0.25-0.50 x 10 ^{6 were} incubated in 1 ml of medium 199 containing 10% serum of AB (IV) group and 5 μg of PHA-R (firm "Serva"). At the time the culture was set up to PHA, the test drug was added to the test tubes in concentrations from 0.01 to 100 μg / ml. The proliferative response of lymphocytes was evaluated after 72 hours, and 4 hours before the end of cell cultivation, ³ N-thymidine was added to the culture at a concentration of 0.04 MBK (1 μcurie) per 1 ml of culture. After 72 hours from the start of cultivation, each sample was transferred to millipore filters, washed with cold 10% TCA solution and saline. Radioactivity was counted on a liquid scintillation counter. The results were expressed in the stimulation index, which was calculated by the formula
IP =

The results are presented in table 1.

Как видно, действие препарата зависело от концентрации, вызывая либо стимуляцию, либо супрессию пролиферативного ответа лимфоцитов на митогенный стимул ФГА. Наибольший стимулирующий эффект препарата олигофуростанозидов выражен в концентрации от 0,01 до 0,10 мкг/мл (в 1,5 раза эффект выше по сравнению с контролем). Препарат в концентрации от 1,0 до 100 мкг/мл оказывал ингибирующий эффект на пролиферативный эффект лимфоцитов, индуцированный ФГА, вплоть до полного исчезновения ответа. Циклоспорин А, взятый в качестве тест-препарата, с выраженным иммуносупрессивным действием, в аналогичных концентрациях ингибировал функцию Т-лимфоцитов в тесте РБТЛ. As can be seen, the effect of the drug depended on the concentration, causing either stimulation or suppression of the proliferative response of lymphocytes to the mitogenic stimulus of PHA. The greatest stimulating effect of the drug oligofurostanosides is expressed in a concentration of from 0.01 to 0.10 μg / ml (the effect is 1.5 times higher compared to the control). The drug at a concentration of 1.0 to 100 μg / ml had an inhibitory effect on the proliferative effect of lymphocytes induced by PHA, up to the complete disappearance of the response. Cyclosporin A, taken as a test preparation, with a pronounced immunosuppressive effect, in similar concentrations inhibited the function of T-lymphocytes in the RBTL test.

Как было показано, РТБЛ, индуцированная ФГА, является моделью активации Т-хелперов. Таким образом, исследованный препарат оказывал зависимый от дозы иммуномодулированный (стимулирующий или ингибирующий) эффект на активность Т-хелперов в тесте бласттрансформации, индуцированной ФГА. PHA-induced RTLB has been shown to be a model of T helper activation. Thus, the studied drug had a dose-dependent immunomodulated (stimulating or inhibitory) effect on the activity of T-helpers in the blast transformation test induced by PHA.

П р и м е р 3. Влияние препарата олигофуростанозидов на активность естественных клеток-киллеров (ЕКК) оценивали, используя в качестве мишеней перевиваемую миелоидную линию К562 человека, которая по многочисленным работам определяется как высоко чувствительная мишень в цитотоксическом тесте. Клетки, тестируемые на активность спонтанных киллеров, получены от здоровых доноров. Перевиваемые линии К562 и постановку цитотоксического теста осуществляли по методу Зарецкой Ю.М. Данные экспериментов представлены в табл.2. PRI me R 3. The effect of the preparation of oligofurostanosides on the activity of natural killer cells (EKCs) was evaluated using the transplantable human K562 myeloid line, which, according to numerous studies, is defined as a highly sensitive target in the cytotoxic test. Cells tested for spontaneous killer activity were obtained from healthy donors. The transferred K562 lines and the staging of the cytotoxic test were carried out according to the method of Zaretskaya Yu.M. The experimental data are presented in table.2.

Как видно из табл.2, спонтанный лизис (выход Сч⁵¹) в среднем составлял 31%. Уровень активности спонтанных киллеров в контроле без препарата составлял 55 ±4%. На клетки-мишени исследуемый препарат не оказывал токсического эффекта. Лизис клеток К562, обработанных разными дозами препарата, не превышал уровня спонтанного лизиса этих клеток. Средний показатель активности ЕКК после обработки их препаратом олигофуростанозидов в дозе от 0,1 до 10,0 мкг/мл не отличался от контроля.As can be seen from table 2, spontaneous lysis (yield SC ⁵¹ ) averaged 31%. The activity level of spontaneous killers in the control without the drug was 55 ± 4%. The studied drug had no toxic effect on the target cells. The lysis of K562 cells treated with different doses of the drug did not exceed the level of spontaneous lysis of these cells. The average indicator of EKK activity after treatment with oligofurostanosides with a dose of 0.1 to 10.0 μg / ml did not differ from the control.

Таким образом, исследованный препарат в диапазоне доз от 0,1 до 10,0 мкг/мл не оказывал влияния на активность естественных (спонтанных) клеток-киллеров, также как и контрольный препарат - циклоспорин А. Thus, the studied drug in the dose range from 0.1 to 10.0 μg / ml did not affect the activity of natural (spontaneous) killer cells, as well as the control drug cyclosporin A.

П р и м е р 4. Проводилась также оценка влияния препарата олигофуростанозидов на генерацию и активность Кон-А-Т-супрессоров. Активацию клеток-супрессоров проводили по методу Shou L с соавт. Лимфоциты донора инкубировали в 1 мл среды RPMI 1640 в отсутствии (контроль 1 - спонтанные супрессоры) или в присутствии 60 мкг/мл Клн-А (контроль 2 - индуцированные Т-супрессоры) в течение 48 ч при 37^оС. Затем клетки обрабатывали митомицином С, чтобы ингибировать синтез ДНК, и трижды отмывали средой RPMI 1640. К 0,5х10⁶ клеток, проинкубированных с Кон-А (или без него), добавляли 0,5х10⁶ аллогенных лимфоцитов и 5 мкг/мл ФГА фирмы "Serva" (тест-систему). Клетки инкубировали 72 ч, за 4 ч до конца культивирования добавляли 3Н-тимидин. Результаты рассчитывали по формуле:
(1 -

) х 100% где Р - число имп/мин в опытных культурах с Кон-А, К-то же в культурах без Кон-А. Испытуемый препарат добавляли в инкубационные среды с Кон-А в концентрациях 0,1, 1,0, 10,0, 100,0 мкг/мл и инкубировали 48 ч при 37^оС - для оценки влияния их на генерацию Кон-А индуцированных Т-супрессоров. Все эксперименты проводили дважды по 3-5 параллелей в каждом опыте. Данные представлены в табл.3.PRI me R 4. An assessment was also made of the effect of the drug oligofurostanosides on the generation and activity of Con-A-T-suppressors. Suppressor cell activation was performed according to the method of Shou L et al. Donor lymphocytes were incubated in 1 ml RPMI 1640 medium in the absence (control 1 - spontaneous suppressor) or in the presence of 60 ug / ml KLN-A (Control 2 - induced T-suppressors) for 48 hours at 37 ^C. The cells were then treated with mitomycin C to inhibit DNA synthesis, and washed three times with RPMI 1640 medium. To 0.5x10 ⁶ cells incubated with Con-A (or without it), 0.5x10 ⁶ allogeneic lymphocytes and 5 μg / ml PHA from Serva were added ( test system). Cells were incubated for 72 hours, 3H-thymidine was added 4 hours before the end of cultivation. The results were calculated by the formula:
(1 -

) x 100% where P is the number of pulses / min in experimental cultures with Con-A, K is the same in cultures without Con-A. The test drug was added to the incubation medium with Con A at concentrations of 0.1, 1.0, 10.0, 100.0 ug / ml and incubated for 48 hours at ³⁷ ° C - for the assessment of their effect on the generation of Con A-induced T suppressors. All experiments were performed twice in 3-5 parallels in each experiment. The data are presented in table.3.

Как видно из табл.3, уровень бласттрансформации тест-клеток при добавлении к ним лимфоцитов, инкубированных 48 ч при 37^оС без Кон-А (контроль 1), за счет индукции спонтанных Т-супрессоров, составил 80% уровня бласттрансформации клеток, стимулированных ФГА, который принят за 100% (контроль). Внесение в тест-систему клеток, инкубированных с Кон-А, приводило к снижению уровня бласттрансформации до 20% от контроля за счет ингибирующего действия индуцированных Кон-А-Т-супрессоров (контроль 2). Культивирование лимфоцитов в присутствии препарата олигофуростанозидов и Кон-А в течение 48 ч при 37^оС и внесение их после отмывки в тест-систему угнетало бласттрансформацию тест-клеток практически до спонтанного уровня (5-10%). Это может быть следствием увеличения количества индуцированных Кон-А-Т-супрессоров за счет стимулирующего влияния исследуемого препарата на их генерацию. Циклоспорин А в дозах от 0,1 до 10,0 мкг/мл не оказывал влияния на Т-супрессоры (% % бласттрасформации остается на уровне контроля 2), доза 100,0 мкг/мл является для циклоспорина А цитотоксической, поэтому % бласттрансформации снижен до 10%.As seen from Table 3, the level of blast-transformation test cells by the addition thereto of lymphocytes incubated 48 hours at ³⁷ ° C without Con A (control 1), due to spontaneous induction of T-suppressor was 80% level blasttransformation cells stimulated PHA, which is taken as 100% (control). The introduction of cells incubated with Con-A into the test system led to a decrease in the level of blast transformation to 20% of the control due to the inhibitory effect of the induced Con-A-T suppressors (control 2). Culturing lymphocytes in the presence of drug and oligofurostanozidov Con A for 48 hours at 37 ^{° C} and after washing their introduction in the test system depressed blast transformation test cells to almost spontaneous level (5-10%). This may be due to an increase in the number of Con-A-T-suppressors induced due to the stimulating effect of the studied drug on their generation. Cyclosporin A in doses of 0.1 to 10.0 μg / ml did not affect T-suppressors (% blast transformation remains at control level 2), a dose of 100.0 μg / ml is cytotoxic for cyclosporin A, therefore,% blast transformation is reduced to 10%.

Были также проведены эксперименты по изучению влияния предлагаемого препарата по сравнению с известным иммуномодулятором левамизолом на формирование гиперчувствительности замедленного типа у мышей после иммунизации их эритроцитами барана (пример 5). Влияние препарата олигофуростанозидов на формирование ГЗТ у мышей. Experiments were also conducted to study the effect of the proposed drug in comparison with the known immunomodulator levamisole on the formation of delayed-type hypersensitivity in mice after immunization with ram red blood cells (Example 5). The effect of oligofurostanosides on the formation of HRT in mice.

Реакция гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ) является типичной моделью клеточно-опосредованных иммунных реакций ин виво, которые играют центральную роль в отторжении аллотрансплантата, резистентности к злокачественным опухолям и инфекции. The delayed-type hypersensitivity reaction (RGT) is a typical model of in vivo cell-mediated immune responses that play a central role in allograft rejection, resistance to malignant tumors and infection.

Воздействуя препаратом до или после сенсибилизации антигеном и оценивая степень проявления РГЗТ, определяли не только на какую из фаз иммунного ответа - индуктивную (до антигенного стимула) или продуктивную (после антигена), в большей степени оказывает действие препарат, но и оценивали чувствительность к нему различных субпопуляций Т-лимфоцитов, вовлеченных в РГЗТ. В качестве сенсибилизирующего антигена использовали эритроциты барана (ЭБ) у мышей. РГЗТ и ЭБ оценивали по разнице веса контрольной и опытной (после введения разрешающей дозы антигена) лапок. By acting on the drug before or after sensitization with an antigen and assessing the degree of manifestation of RGT, we determined not only which phase of the immune response - inductive (before antigenic stimulus) or productive (after antigen), has a greater effect on the drug, but also evaluated the sensitivity to it of various subpopulations of T-lymphocytes involved in RGT. The sheep erythrocytes (EB) in mice were used as a sensitizing antigen. RGZT and EB were evaluated by the difference in weight of the control and experimental (after the introduction of the resolving dose of antigen) paws.

Изучение влияния нового препарата олигофуростанозидов на формирование реакции ГЗТ у мышей к ЭБ проводили при введении препарата по схемам: за 2 дня до иммунизации, за 1 день до иммунизации и в день иммунизации (-2,-1,0 дни) (влияние на пре-Т-супрессоры) и по схеме: в день иммунизации и на 1 и 2 сут после иммунизации (0,+1,+2 дни) (влияние на Т_гзт-эффекторы). Данные представлены в табл.4.A study of the effect of the new oligofurostanoside preparation on the formation of HRT reaction in mice to EB was carried out when the drug was administered according to the schemes: 2 days before immunization, 1 day before immunization and on the day of immunization (-2, -1.0 days) (effect on pre- T-suppressors) and according to the scheme: on the day of immunization and on 1 and 2 days after immunization (0, + 1, + 2 days) (effect on T _gzt effects). The data are presented in table 4.

Дозы препаратов выбирались пропорционально терапевтическим дозам препаратов (для препарата олигофуростанозидов учитывалась терапевтическая доза для полиспонина). Doses of the drugs were selected in proportion to the therapeutic doses of the drugs (for the drug oligofurostanosides, the therapeutic dose for polysponin was taken into account).

Результаты эксперимента показали, что в исследованных дозах препарат олигофуростанозидов оказывает преимущественное влияние на зрелые Т_гзт-эффекторы (при введении препарата по второй схеме). Эффект статистически достоверен. Циклоспорин А - прототип - не оказывает влияния на Т_гзт-эффекторы (другой механизм действия). Левамизол - аналог - оказывает действие как на пре-Т-супрессоры, так и на зрелые Тгзт-эффекторы при обоих схемах введения, 6-меркаптопурин (контроль к левамизолу) не оказывает влияния ни на клетки-предшественники (при введении по 1 схеме ни на Т_гзт-эффекторы (при введении по второй схеме). Полученные результаты показывают, что по механизму действия заявляемый препарат отличается от механизма действия циклоспорина А (прототип). Наиболее вероятно, что его действие в используемой дозе связано со стимуляцией Т-супрессорной активности.The results of the experiment showed that in the studied doses, the preparation of oligofurostanosides exerts a predominant effect on mature _TGT effects (when the drug is administered according to the second scheme). The effect is statistically significant. Cyclosporin A - a prototype - does not affect T _gz t-effectors (another mechanism of action). Levamisole, an analogue, has an effect on both pre-T-suppressors and mature TGT effectors in both administration schemes; 6-mercaptopurine (control for levamisole) has no effect on progenitor cells (when administered according to 1 scheme, T _hzt- effects (when administered according to the second scheme). The obtained results show that according to the mechanism of action of the claimed drug differs from the mechanism of action of cyclosporin A. (prototype). Most likely, its effect in the dose used is associated with stimulation of T-suppressor activity.

Таким образом, в трех тестах клеточного иммунитета ин витро и в тесте РГЗТ ин виво показано иммуномодулирующее действие препарата олигофуростанозидов, выделенного из суспензионной культуры клеток диоскореи дельтовидной, относящемуся к классу стероидных гликозидов и обладающих антиоксидантным действием, зависящее от дозы и схемы введения относительно антигенного стимула. Thus, in three tests of cellular immunity in vitro and in the RGT test, the immunomodulating effect of an oligofurostanoside preparation isolated from a suspension culture of dioscorea deltoid cells belonging to the class of steroid glycosides and having an antioxidant effect, in vivo and depending on the dose and administration schedule relative to antigen, is shown in vivo.

Claims

IMMUNOMODULATING MEANS.

The use of the drug oligofurostanosides from a suspension culture of deltoid diskorrhea containing protodioscin and deltoside of the general formula

where R for protodioscin is equal to one glucose molecule and two rhamnose molecules, and for deltoside - two glucose molecules and one rhamnose,
as an immunomodulatory agent.