RU2024905C1 - Способ определения активности иммунокомпетентных клеток в эксперименте - Google Patents
Способ определения активности иммунокомпетентных клеток в эксперименте Download PDFInfo
- Publication number
- RU2024905C1 RU2024905C1 SU4927857A RU2024905C1 RU 2024905 C1 RU2024905 C1 RU 2024905C1 SU 4927857 A SU4927857 A SU 4927857A RU 2024905 C1 RU2024905 C1 RU 2024905C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lymphocytes
- activity
- complement
- sheep erythrocytes
- blood
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: экспериментальная медицина, иммунология. Цель: повышение экономичности и упрощение способа. Сущность: из крови животного выделяют лимфоциты и стандартизируют их, инкубируют эритроциты барана в присутствии комплемента с лимфоцитами и без лимфоцитов, а активность рассчитывают как отношение первого показателя к второму.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.
Известен способ определения активности иммунокомпетентных клеток, заключающийся в том, что вначале из лимфоидных органов животного после забоя получают лимфоциты путем гомогенизации этих органов, после чего отмывают и стандартизуют эту взвесь. В расплавленную агарозу или агар вносят 0,1 мл 10%-ной суспензии эритроцитов барана (ЭБ), после чего туда же добавляют 0,1 мл взвеси лимфоцитов, разливают по чашкам Петри и инкубируют при 37оС в течение 1-2 ч. Затем на поверхность агарозы (агара) наслаивают комплемент морской свинки, инкубируют 30 мин при температуре 37оС и производят подсчет зон гемолиза, ассоциируемых с антителообразующими клетками -АОК (Прямой метод локального гемолиза. Кн.: Иммунологические методы. Под. ред. Г.Фримеля. М. , Медицина, 1987. с. 61-62). Принцип метода заключается в том, что лимфоциты животного, сенсибилизированные к ЭБ, синтезируют антиэритроцитарные антитела, которые в присутствии комплемента гемолизируют эти эритроциты.
Данный способ недостаточно экономичен и прост в исполнении. При эксперименте на мелких лабораторных животных он требует либо больших объемов забираемой крови (концентрация взвеси до 50 млн. клеток/мл), изъятие которой несовместимо с жизнью, либо извлечения селезенки, из-за чего также приходится животных забивать. Это лишает возможности тестирования по данному показателю хронических экспериментов. Сам агар при температуре плавления (свыше 45оС) также обладает гемолитическим действием и не может быть разлит с достаточной точностью.
Цель изобретения - повышение экономичности и упрощение способа.
Поставленная цель достигается путем предварительной иммунизации животных эритроцитами барана, выделения и стандартизации взвеси лимфоцитов и проведения гемолиза эритроцитов барана лимфоцитарными антителами в присутствии комплемента. Лимфоциты выделяют из крови, инкубацию стандартизированных эритроцитов с эритроцитами барана и комплементом проводят в пробирках, активность оценивают по отношению числа эритроцитов барана после инкубации в пробирке, содержащей лимфоциты и комплемент, к таковому в пробирке, содержащей лимфоциты.
Способ осуществляют следующим образом. Группе животных, например крыс, производят внутрибрюшную иммунизацию 2,5 мл 10% взвеси ЭБ. Спустя 5 сут производят забор гепаринизированной крови в количестве 2-2,5 мл их хвоста. Затем проводят выделение взвеси лимфоцитов на градиенте фиколл-верографина (уд.вес. 1,077 г/л), после чего эту взвесь дважды отмывают забуференным физраствором и стандартизуют в питательной среде (например среда 199) до концентрации 2 млн. клеток/мл. Для каждого животного берут 3 пробирки. В первую и вторую пробирки помещают по 0,15 мл среды 199, в третью - по 0,15 мл 20% -ного раствора комплемента морской свинки. Во все три пробирки помещают по 0,2 мл стандартизированной взвеси лимфоцитов, после чего туда же добавляют 0,2 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов. Пробирки инкубируют в течение 60 мин при температуре 37оС. После этого во второй и третьей пробирках проводят сравнительный подсчет концентрации эритроцитов.
Отношение концентрации эритроцитов в пробирке N 2 (содержит смесь лимфоцитов с эритроцитами барана без комплемента) к таковой в пробирке N 3 (содержит полный ассортимент гемолитической системы - эритроциты барана, лимфоциты и комплемент) называется гемолитическим индексом и характеризуют В-клеточную активность культуры лимфоцитов (продукцию гемолизинов). Содержимое пробирки N 1 (смесь ЭБ с лимфоцитарной взвесью) используется для последующей постановки теста Е-розеткообразования по стандартной методике ("Оценка субпопуляций Т-лимфоцитов у человека: T-супрессоры и Т-помощники". Методические рекомендации. Авт.: А.С.Павлюк и др. М., 1982. с. 8-12). Таким образом, представляется возможность без забоя животных в одной культуре лимфоцитов определить и В-клеточную активность, и Т-клеточную рецепцию параллельно.
Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.
1. Крыса-самка линии Вистар исследована по известному способу и предлагаемой методике. Количество АОК селезенки на 1 чашку - 600, гемолитический индекс лимфоцитов селезенки - 2,55. Гемолитический индекс лимфоцитов крови (ГИ) - 2,29.
2. Крыса-самка N 2 линии Вистар. Количество АОК - 392, ГИ селезенки 2,05, ГИ крови - 2,07.
3. Крыса-самка линии Вистар также исследована по способам прототипа и изобретения. Количество АОК-1696, ГИ селезенки - 3,97, ГИ крови - 3,52.
Для обоснования способа было изучено 30 крыс линии Вистар (интактных), у которых изучена активность В-лимфоцитов по способу прототипа (уровень АОК селезенки) и по методике изобретения (гемолитический индекс). Причем, для досконального уточнения информативности параметров, гемолитический индекс изучен с двумя вариантами культур лимфоцитов: из селезенки и из крови. Средний уровень АОК на чашку Петри составил 445,5 ± 48,1, гемолитического индекса с лимфоцитами селезенки - 2,65± ±0,30, с лимфоцитами крови - 2,40 ± 0,19. Обращало внимание практическое отсутствие расхождения между уровнем ГИ селезенки и ГИ крови (Р>0,6). Был проведен регрессионно-корреляционный анализ связи между тремя изученными параметрами. Коэффициенты парной корреляции составили: 1) между уровнем АОК и ГИ селезенки +0,57 ± 0,15 (Р<0,001); 2) между уровнем АОК селезенки и ГИ крови +0,72 ± 0,13 (Р<0,001); 3) между уровнями ГИ селезенки и крови +0,66 ± 0,14 (Р<0,001). Линейные регрессионные модели этих связей были соответственно: 1) Y= 0,35X-108,0; 2) Y=0,28X-115,6; 3) Y=0,42X-128,5.
Высокая корреляция между уровнями АОК селезенки и гемолитическим индексом лимфоцитов крови указывает на очевидную информативность последнего показателя.
Таким образом, способ экономичен, так как при определении гемолитического индекса крови нет необходимости забивать животных, что позволяет обходиться в эксперименте меньшим их количеством. Способ более прост по сравнению с известным за счет исключения постановки сложной и трудоемкой реакции локального гемолиза в агаре.
Claims (1)
- СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК В ЭКСПЕРИМЕНТЕ путем предварительной иммунизации животных эритроцитами барана, выделения и стандартизации взвеси лимфоцитов, проведения гемолиза эритроцитов барана лимфоцитарными антителами в присутствии комплемента с последующим расчетом, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения экономичности способа, лимфоциты выделяют из крови, инкубацию стандартизированных лимфоцитов с эритроцитами барана и комплементом проводят в пробирках, а активность рассчитывают как отношение числа эритроцитов барана после инкубации в пробирке, содержащей лимфоциты и комплемент, к таковому в пробирке, содержащей лимфоциты.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4927857 RU2024905C1 (ru) | 1993-07-23 | 1993-07-23 | Способ определения активности иммунокомпетентных клеток в эксперименте |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4927857 RU2024905C1 (ru) | 1993-07-23 | 1993-07-23 | Способ определения активности иммунокомпетентных клеток в эксперименте |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2024905C1 true RU2024905C1 (ru) | 1994-12-15 |
Family
ID=21569974
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU4927857 RU2024905C1 (ru) | 1993-07-23 | 1993-07-23 | Способ определения активности иммунокомпетентных клеток в эксперименте |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2024905C1 (ru) |
-
1993
- 1993-07-23 RU SU4927857 patent/RU2024905C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
"Иммунологические методы." Под ред. Г.Фримеля. М., Медицина, 1987, с.61-62. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Zola et al. | Techniques for the production and characterization of monoclonal hybridoma antibodies | |
Cinader et al. | Acquired immune tolerance to human albumin and the response to subsequent injections of diazo human albumin | |
Lopez et al. | Phylogenetic studies on T cells: I. Lymphocytes of the shark with differential response to phytohemagglutinin and concanavalin A | |
Thompson et al. | New granulocyte antigens demonstrated by microgranulocytotoxicity assay | |
Tonkonogy et al. | A new alloantigenic system associated with the Mls locus in the mouse | |
Hildemann et al. | Alloantibody production measured by plaque assay in relation to strong and weak histoincompatibility | |
Thorsby | HL—A Antigens and Genes-I. A Study of Unrelated Norwegians | |
RU2024905C1 (ru) | Способ определения активности иммунокомпетентных клеток в эксперименте | |
Caldwell et al. | Serologically detected lymphocyte antigens in Holstein cattle 1 | |
US4745053A (en) | Process for producing human interferon and method for assaying the interferon productivity of blood | |
Grewal et al. | Bovine T lymphocytes—An improved technique of E rosette formation | |
Baran et al. | Cell sorting using a universally applicable affinity chromatography matrix: solid-phase anti-fluorescein isothiocyanate antibody | |
Lavelle et al. | Identification of a new platelet aggregating factor released by sensitized leukocytes | |
Gengozian | A Blood Factor in the Marmoset, Saguinus fuscicollis-its Detection, Mode of Inheritance, and Species Specificity1 | |
SU1730592A1 (ru) | Способ определени естественной киллерной активности клеток | |
RU2080061C1 (ru) | Способ отбора крупного рогатого скота на устойчивость к туберкулезу | |
Edwards‐Moulds et al. | Methods for the detection of Jk heterozygotes: interpretations and applications | |
Poloskey et al. | Genetic studies in inbred rats. IV. Xenoantisera against rat erythrocyte (Ag‐C) antigens | |
Tønnesen et al. | Recovery of peripheral lymph cells from congenitally athymic nude rats | |
Walter et al. | Abnormal membrane surface properties during maturation of rat reticulocytes elicited by bleeding as measured by partition in two‐polymer aqueous phases | |
Cushing et al. | The Ju blood typing system of the sperm whale and specific soluble substances | |
CA1211047A (en) | Process for cell surface phenotyping of lymphocyte subpopulations | |
Fujino et al. | The Y system of Skipjack Tuna blood groups | |
SU1758556A1 (ru) | Способ определени розеткообразующей реакции нейтрофилов | |
SU1649444A1 (ru) | Способ выделени лейкоцитов из крови |