Claims (30)
1. Вариант антитела, который содержит вариабельную область, включающую аминокислотную последовательность SISPSGQSTYYRREVKG (SEQ ID NO: 2), в которой1. An antibody variant that contains a variable region comprising the amino acid sequence SISPSGQSTYYRREVKG (SEQ ID NO: 2), in which
(а) аминокислотный остаток R в положении 12 с N-терминального конца аминокислотной последовательности; или(a) amino acid residue R at position 12 from the N-terminal end of the amino acid sequence; or
(б) аминокислотные остатки YYR в положениях с 10 по 12 с N-терминального конца аминокислотной последовательности,(b) amino acid residues YYR at positions 10 to 12 from the N-terminal end of the amino acid sequence,
удалены и вариабельная область расщеплена по сайту делеции.removed and the variable region cleaved at the deletion site.
2. Вариант антитела по п. 1, в котором последовательность является последовательностью CDR.2. A variant of the antibody according to claim 1, wherein the sequence is a CDR sequence.
3. Вариант антитела по п. 1, в котором последовательность является последовательностью CDR2.3. An antibody variant according to claim 1, wherein the sequence is a CDR2 sequence.
4. Вариант антитела по п. 1, в котором последовательность является последовательностью, содержащейся в тяжелой цепи.4. A variant of the antibody according to claim 1, wherein the sequence is a sequence contained in the heavy chain.
5. Вариант антитела по п. 1, который является вариантом биспецифического антитела.5. A variant of the antibody according to claim 1, which is a variant of a bispecific antibody.
6. Вариант антитела по п. 1, который является вариантом эмицизумаба.6. A variant of the antibody according to claim 1, which is a variant of emicizumab.
7. Способ определения варианта антитела по одному из пп. 1-6, включающий стадию разделения образца, содержащего антитело, которое включает вариабельную область с аминокислотной последовательностью SISPSGQSTYYRREVKG (SEQ ID NO: 2), с помощью аффинной хроматографии, ионообменной хроматографии, нормально-фазовой хроматографии, хроматографии с обращенной фазой, хроматографии гидрофильного взаимодействия (HILIC), хроматографии гидрофобного взаимодействия (HIC), разделения на основе заряда, эксклюзионной хроматографии (SEC), гель-проникающей хроматографии (GPC) или их комбинации.7. A method for determining an antibody variant according to one of claims. 1-6, comprising the step of separating a sample containing an antibody that includes a variable region with the amino acid sequence SISPSGQSTYYRREVKG (SEQ ID NO: 2), using affinity chromatography, ion exchange chromatography, normal phase chromatography, reverse phase chromatography, hydrophilic interaction chromatography ( HILIC), hydrophobic interaction chromatography (HIC), charge separation, size exclusion chromatography (SEC), gel permeation chromatography (GPC), or a combination thereof.
8. Способ определения по п. 7, в котором применяют вариант антитела по одному из пп. 1-6 в качестве контрольного стандарта.8. The method of determination according to claim 7, in which a variant of the antibody according to one of claims is used. 1-6 as control standard.
9. Фармацевтическая композиция, содержащая вариант антитела по одному из пп. 1-6, в котором процент варианта антитела от общего числа молекул антитела в фармацевтической композиции составляет 5% или менее.9. Pharmaceutical composition containing a variant of the antibody according to one of paragraphs. 1-6, wherein the percentage of the antibody variant of the total number of antibody molecules in the pharmaceutical composition is 5% or less.
10. Фармацевтическая композиция по п. 9, в которой антителом является эмицизумаб.10. The pharmaceutical composition according to claim 9, in which the antibody is emicizumab.
11. Фармацевтическая композиция по п. 9, которую получают в процессе очистки, включающем очистку катионообменной хроматографией (СЕХ).11. The pharmaceutical composition according to claim 9, which is obtained by a purification process including purification by cation exchange chromatography (CEX).
12. Способ подавления выработки варианта антитела по одному из пп. 1-6, включающий стадию культивирования клеток, вырабатывающих антитело при рН 7,1 или более, и/или при температуре культивирования 36°С или менее.12. A method for suppressing the production of an antibody variant according to one of claims. 1-6, comprising the step of culturing cells producing the antibody at a pH of 7.1 or more and/or at a culture temperature of 36°C or less.
13. Изоформа биспецифического антитела, содержащая первую тяжелую цепь и вторую тяжелую цепь,13. An isoform of a bispecific antibody containing a first heavy chain and a second heavy chain,
где дисульфидные связи формируются следующим образом:where disulfide bonds are formed as follows:
(1а) между цистеином в положении 144 по нумерации EU первой тяжелой цепи и цистеином в положении 200 по нумерации EU второй тяжелой цепи; и(1a) between the cysteine at EU numbering position 144 of the first heavy chain and the cysteine at EU numbering position 200 of the second heavy chain; And
(1б) между цистеином в положении 200 по нумерации EU первой тяжелой цепи и цистеином в положении 144 по нумерации EU второй тяжелой цепи, или(1b) between the cysteine at EU numbering position 200 of the first heavy chain and the cysteine at EU numbering position 144 of the second heavy chain, or
где дисульфидные связи формируются следующим образом:where disulfide bonds are formed as follows:
(2а) между цистеином в положении 226 по нумерации EU первой тяжелой цепи и цистеином в положении 229 по нумерации EU второй тяжелой цепи; и (2a) between the cysteine at position 226 in EU numbering of the first heavy chain and the cysteine at position 229 in EU numbering of the second heavy chain; And
(2б) между цистеином в положении 229 по нумерации EU первой тяжелой цепи и цистеином в положении 226 по нумерации EU второй тяжелой цепи.(2b) between the cysteine at position 229 in the EU numbering of the first heavy chain and the cysteine at position 226 in the EU numbering of the second heavy chain.
14. Изоформа биспецифического антитела по п. 13, в которой дисульфидные связи формируются в (1а) и (1б).14. The bispecific antibody isoform according to claim 13, in which disulfide bonds are formed in (1a) and (1b).
15. Изоформа биспецифического антитела, включающая первую тяжелую цепь и вторую тяжелую цепь, отличающаяся тем, что она элюирует в области, более щелочной, чем биспецифическое антитело, при разделении методом катионообменной хроматографии.15. An isoform of a bispecific antibody comprising a first heavy chain and a second heavy chain, characterized in that it elutes in a region more alkaline than the bispecific antibody when separated by cation exchange chromatography.
16. Изоформа биспецифического антитела по пп. 13-15, которая является изоформой эмицизумаба.16. Isoform of a bispecific antibody according to claims. 13-15, which is an isoform of emicizumab.
17. Способ обнаружения изоформы антитела по одному из пп. 13-16, включающий стадию разделения образца, содержащего биспецифическое антитело, методом аффинной хроматографии, ионообменной хроматографии, нормально-фазовой хроматографии, хроматографии с обращенной фазой, хроматографии гидрофильного взаимодействия (HILIC), хроматографии гидрофобного взаимодействия (HIC), разделения на основе заряда, эксклюзионной хроматографии (SEC), гель-проникающей хроматографии (GPC) или их комбинацией.17. A method for detecting an antibody isoform according to one of claims. 13-16, including the step of separating a sample containing a bispecific antibody by affinity chromatography, ion exchange chromatography, normal phase chromatography, reverse phase chromatography, hydrophilic interaction chromatography (HILIC), hydrophobic interaction chromatography (HIC), charge-based separation, size exclusion chromatography (SEC), gel permeation chromatography (GPC) or a combination thereof.
18. Способ обнаружения по п. 17, в котором применяют изоформу антитела по одному из пп. 13-16 в качестве контрольного стандарта.18. The detection method according to claim 17, in which the antibody isoform according to one of claims is used. 13-16 as control standard.
19. Фармацевтическая композиция, содержащая изоформу биспецифического антитела по одному из пп. 13-16, в которой процентное содержание изоформы антитела от общего содержания молекул антитела в фармацевтической композиции составляет 2% или меньше.19. Pharmaceutical composition containing an isoform of a bispecific antibody according to one of paragraphs. 13-16, wherein the percentage of the antibody isoform of the total antibody molecules in the pharmaceutical composition is 2% or less.
20. Способ снижения процентного содержания изоформы биспецифического антитела по одному из пп. 13-16, включающий стадию очистки методом катионообменной хроматографии.20. A method for reducing the percentage of the isoform of a bispecific antibody according to one of claims. 13-16, including the stage of purification by cation exchange chromatography.
21. Вариант антитела по п. 1 или изоформы биспецифического антитела по п. 13 или 15, в которых биологическая активность антитела существенно снижена.21. A variant of the antibody according to claim 1 or an isoform of a bispecific antibody according to claim 13 or 15, in which the biological activity of the antibody is significantly reduced.