Claims (136)
1. Фармацевтическая композиция, содержащая липидную наночастицу (LNP), терапевтическую нуклеиновую кислоту (TNA) и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент, причем LNP содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), связанный с LNP, и при этом scFv направлен против антигена, присутствующего на поверхности клетки.1. A pharmaceutical composition comprising a lipid nanoparticle (LNP), a therapeutic nucleic acid (TNA) and at least one pharmaceutically acceptable excipient, wherein the LNP contains a single chain variable fragment (scFv) associated with the LNP, and wherein the scFv is directed against an antigen present on the surface of the cell.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой scFV ковалентно связан с LNP.2. The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein scFV is covalently linked to LNP.
3. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 2, в которой scFV химически конъюгирован с LNP.3. Pharmaceutical composition according to claim 1 or 2, in which scFV is chemically conjugated to LNP.
4.Фармацевтическая композиция по п. 3, в которой scFV химически конъюгирован с LNP посредством нерасщепляемого линкера.4. The pharmaceutical composition according to claim 3, wherein scFV is chemically conjugated to LNP via a non-cleavable linker.
5.Фармацевтическая композиция по п. 4, в которой нерасщепляемый линкер представляет собой линкер, содержащий малеимид.5. The pharmaceutical composition according to claim 4, wherein the non-cleavable linker is a maleimide-containing linker.
6. Фармацевтическая композиция по п. 3, в которой scFV химически конъюгирован с LNP посредством расщепляемого линкера.6. The pharmaceutical composition according to claim 3, wherein the scFV is chemically conjugated to the LNP via a cleavable linker.
7. Фармацевтическая композиция по п. 3, в которой расщепляемый линкер представляет собой линкер, содержащий пиридилдисульфид (PDS).7. The pharmaceutical composition according to claim 3, wherein the cleavable linker is a pyridyl disulfide (PDS) containing linker.
8. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой scFv связан с LNP посредством опосредованного трансглутаминазой конъюгирования.8. The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the scFv is linked to the LNP via transglutaminase-mediated conjugation.
9. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-8, в которой антиген представляет собой опухолеассоциированный антиген (TAA) или опухолеспецифический антиген (TSA), причем необязательно антиген представляет собой человеческий рецептор 2 эпидермального фактора роста (HER2). 9. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-8, wherein the antigen is a tumor associated antigen (TAA) or a tumor specific antigen (TSA), and optionally the antigen is human epidermal growth factor receptor 2 (HER2).
10. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-9, в которой scFv является бивалентным. 10. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-9, in which scFv is bivalent.
11. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-10, в которой LNP может быть интернализирован в клетку. 11. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-10, in which the LNP can be internalized into the cell.
12. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-11, в которой scFV содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или имеет сходство последовательности по меньшей мере 99% с аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO: 2.12. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-11, wherein the scFV contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 or has at least 99% sequence similarity to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO: 2.
13. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-12, в которой scFV содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 или имеет сходство последовательности по меньшей мере 99% с аминокислотной последовательностью, указанной в SEQ ID NO: 3.13. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-12, wherein the scFV contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 or has at least 99% sequence similarity to the amino acid sequence specified in SEQ ID NO: 3.
14. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-13, в которой LNP содержит липид, выбранный из группы, состоящей из: катионного липида, стерина или его производного, некатионного липида и пегилированного липида.14. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-13, wherein the LNP contains a lipid selected from the group consisting of: a cationic lipid, a sterol or derivative thereof, a non-cationic lipid and a PEGylated lipid.
15. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-14, в которой TNA инкапсулирована в LNP.15. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-14, in which TNA is encapsulated in LNP.
16. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-15, в которой TNA выбрана из группы, состоящей из минигенов, плазмид, миниколец, короткой интерферирующей РНК (киРНК), микроРНК (миРНК), антисмысловых олигонуклеотидов (ASO), рибозимов, ДНК с замкнутыми концами (зкДНК), мининити, doggybone™, протеломерной ДНК с замкнутыми концами или гантелеобразной линейной ДНК, дцРНК субстрата Дайсера, короткой шпилечной РНК (кшРНК), асимметричной интерферирующей РНК (аиРНК), микроРНК (миРНК), мРНК, тРНК, рРНК, вирусных векторов ДНК, вектора вирусной РНК, невирусного вектора и любой их комбинации. 16. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-15, wherein the TNA is selected from the group consisting of minigenes, plasmids, minicircles, short interfering RNA (siRNA), microRNA (miRNA), antisense oligonucleotides (ASO), ribozymes, closed-end DNA (ccDNA), ministrand, doggybone ™, protelomeric DNA with closed ends or dumbbell linear DNA, Dicer substrate dsRNA, short hairpin RNA (shRNA), asymmetric interfering RNA (aiRNA), microRNA (miRNA), mRNA, tRNA, rRNA, viral DNA vectors, viral RNA vector, non-viral vectors and any combination thereof.
17. Фармацевтическая композиция по п. 16, в которой TNA представляет собой зкДНК.17. The pharmaceutical composition according to claim 16, wherein the TNA is cccDNA.
18. Фармацевтическая композиция по п. 16, в которой зкДНК представляет собой линейную дуплексную ДНК.18. The pharmaceutical composition according to claim 16, in which the ccDNA is linear duplex DNA.
19. Фармацевтическая композиция по п. 16, в которой TNA представляет собой мРНК.19. The pharmaceutical composition according to claim 16, wherein TNA is mRNA.
20. Фармацевтическая композиция по п. 16, в которой TNA представляет собой киРНК.20. The pharmaceutical composition according to claim 16, in which TNA is siRNA.
21. Фармацевтическая композиция по п. 16, в которой TNA представляет собой плазмиду.21. The pharmaceutical composition according to claim 16, wherein the TNA is a plasmid.
22. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-21, которую вводят субъекту. 22. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-21, which is administered to the subject.
23. Фармацевтическая композиция по п. 22, причем субъект представляет собой пациента-человека, нуждающегося в лечении с помощью LNP, инкапсулированной с TNA.23. The pharmaceutical composition according to claim 22, wherein the subject is a human patient in need of treatment with LNP encapsulated with TNA.
24. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-23, нацеленная на клетку, экспрессирующую антиген клеточной поверхности, на который направлен scFv. 24. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-23, targeting a cell expressing the cell surface antigen targeted by the scFv.
25. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-24, нацеленная на опухолевые клетки.25. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-24, targeting tumor cells.
26. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-24, нацеленная на клетки печени.26. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-24, targeting liver cells.
27. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-24, нацеленная на гепатоциты печени.27. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-24, targeting liver hepatocytes.
28. Фармацевтическая композиция по п. 14, в которой катионный липид представлен формулой (I):28. The pharmaceutical composition according to claim 14, in which the cationic lipid is represented by formula (I):
(I) (I)
или его фармацевтически приемлемой солью, где:or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein:
R1 и R1’, каждый независимо, представляют собой необязательно замещенный линейный или разветвленный C1-3 алкилен;R 1 and R 1' are each independently an optionally substituted linear or branched C 1-3 alkylene;
R2 и R2’, каждый независимо, представляют собой необязательно замещенный линейный или разветвленный C1-6 алкилен; R 2 and R 2' are each independently an optionally substituted linear or branched C 1-6 alkylene;
R3 и R3’, каждый независимо, представляют собой необязательно замещенный линейный или разветвленный C1-6 алкил; R 3 and R 3' are each independently an optionally substituted straight or branched C 1-6 alkyl;
или альтернативно, если R2 представляет собой необязательно замещенный разветвленный C1-6 алкилен, то R2 и R3 вместе с их промежуточным атомом N образуют 4-8-членный гетероциклил; or alternatively, if R 2 is an optionally substituted branched C 1-6 alkylene, then R 2 and R 3 together with their intermediate N atom form a 4-8 membered heterocyclyl;
или альтернативно, если R2’ представляет собой необязательно замещенный разветвленный C1-6 алкилен, то R2’ и R3’ вместе с их промежуточным атомом N образуют 4-8-членный гетероциклил;or alternatively, if R 2' is an optionally substituted branched C 1-6 alkylene, then R 2' and R 3' together with their intermediate N atom form a 4-8 membered heterocyclyl;
R4 и R4’, каждый независимо, представляют собой -CRa, -C(Ra)2CRa или -[C(Ra)2]2CRa;R 4 and R 4' are each independently -CR a , -C(R a ) 2 CR a or -[C(R a ) 2 ] 2 CR a ;
Ra для каждого случая независимо представляет собой H или C1-3 алкил;R a in each case is independently H or C 1-3 alkyl;
или альтернативно, если R4 представляет собой -C(Ra)2CRa или -[C(Ra)2]2CRa и если Ra представляет собой C1-3 алкил, то R3 и R4 вместе с их промежуточным атомом N образуют 4-8-членный гетероциклил; or alternatively, if R 4 is -C(R a ) 2 CR a or -[C(R a ) 2 ] 2 CR a and if R a is C 1-3 alkyl, then R 3 and R 4 together their intermediate N atom forms a 4-8-membered heterocyclyl;
или альтернативно, если R4’ представляет собой -C(Ra)2CRa или -[C(Ra)2]2CRa и если Ra представляет собой C1-3 алкил, то R3’ и R4’ вместе с их промежуточным атомом N образуют 4-8-членный гетероциклил;or alternatively, if R 4' is -C(R a ) 2 CR a or -[C(R a ) 2 ] 2 CR a and if R a is C 1-3 alkyl, then R 3' and R 4 ' together with their intermediate N atom form a 4-8 membered heterocyclyl;
R5 и R5’, каждый независимо, представляют собой водород, C1-20 алкилен или C2-20 алкенилен; R 5 and R 5' are each independently hydrogen, C 1-20 alkylene or C 2-20 alkenylene;
R6 и R6’ для каждого случая независимо представляют собой C1-20 алкилен, C3-20 циклоалкилен или C2-20 алкенилен; иR 6 and R 6' are each independently C 1-20 alkylene, C 3-20 cycloalkylene or C 2-20 alkenylene; And
m и n, каждый независимо, представляют собой целое число, выбранное из 1, 2, 3, 4 и 5. m and n, each independently, represent an integer selected from 1, 2, 3, 4 and 5.
29.Фармацевтическая композиция по п. 14, в которой катионный липид представлен формулой (II):29. Pharmaceutical composition according to claim 14, in which the cationic lipid is represented by formula (II):
(II) (II)
или его фармацевтически приемлемой солью, где:or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein:
a представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 20;a is an integer ranging from 1 to 20;
b представляет собой целое число в диапазоне от 2 до 10;b is an integer ranging from 2 to 10;
R1 отсутствует или выбран из (C2-C20)алкенила, -C(O)O(C2-C20)алкила и циклопропила, замещенного (C2-C20)алкилом; и R 1 is absent or selected from (C 2 -C 20 )alkenyl, -C(O)O(C 2 -C 20 )alkyl and cyclopropyl substituted with (C 2 -C 20 )alkyl; And
R2 представляет собой (C2-C20)алкил. R 2 represents (C 2 -C 20 )alkyl.
30. Фармацевтическая композиция по п. 14, в которой липид представлен формулой (V):30. Pharmaceutical composition according to claim 14, in which the lipid is represented by formula (V):
(V) (V)
или его фармацевтически приемлемой солью, где:or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein:
R1 и R1’, каждый независимо, представляют собой (C1-C6)алкилен, необязательно замещенный одной или более группами, выбранными из Ra;R 1 and R 1' are each independently (C 1 -C 6 )alkylene, optionally substituted with one or more groups selected from R a ;
R2 и R2’, каждый независимо, представляют собой (C1-C2)алкилен;R 2 and R 2' are each independently (C 1 -C 2 )alkylene;
R3 и R3’, каждый независимо, представляют собой (C1-C6)алкил, необязательно замещенный одной или более группами, выбранными из Rb; R 3 and R 3' are each independently (C 1 -C 6 )alkyl, optionally substituted with one or more groups selected from R b ;
или альтернативно R2 и R3 и/или R2’ и R3’ взяты вместе с их промежуточным атомом N с образованием 4-7-членного гетероциклила; or alternatively R 2 and R 3 and/or R 2' and R 3' are taken together with their intermediate N atom to form a 4-7 membered heterocyclyl;
каждый R4 и R4’ представляет собой (C2-C6)алкилен, прерванный -C(O)O-;R 4 and R 4 ' are each (C 2 -C 6 )alkylene interrupted by -C(O)O-;
R5 и R5’, каждый независимо, представляют собой (C2-C30)алкил или (C2-C30)алкенил, каждый из которых необязательно прерывается -C(O)O- или (C3-C6)циклоалкилом; иR 5 and R 5 ' are each independently (C 2 -C 30 )alkyl or (C 2 -C 30 )alkenyl, each optionally terminated with -C(O)O- or (C 3 -C 6 ) cycloalkyl; And
каждый из Ra и Rb представляет собой галоген или циано.R a and R b are each halogen or cyano.
31.Фармацевтическая композиция по п. 14, в которой катионный липид представлен формулой (XV):31. Pharmaceutical composition according to claim 14, in which the cationic lipid is represented by formula (XV):
(XV)(XV)
или его фармацевтически приемлемой солью, где:or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein:
R’ отсутствует, представляет собой водород или C1-C6 алкил; при условии, что когда R’ представляет собой водород или C1-C6 алкил, атом азота, к которому присоединены все R’, R1 и R2, протонирован;R' is absent, represents hydrogen or C 1 -C 6 alkyl; with the proviso that when R' is hydrogen or C 1 -C 6 alkyl, the nitrogen atom to which all R', R 1 and R 2 are attached is protonated;
R1 и R2, каждый независимо, представляют собой водород, C1-C6 алкил или C2-C6 алкенил; R 1 and R 2 are each independently hydrogen, C 1 -C 6 alkyl or C 2 -C 6 alkenyl;
R3 представляет собой C1-C12 алкилен или C2-C12 алкенилен;R 3 represents C 1 -C 12 alkylene or C 2 -C 12 alkenylene;
R4 представляет собой C1-C16 неразветвленный алкил, C2-C16 неразветвленный алкенил или ; где: R 4 is C 1 -C 16 straight alkyl, C 2 -C 16 straight alkenyl or ; Where:
R4a и R4b, каждый независимо, представляют собой C1-C16 неразветвленный алкил или C2-C16 неразветвленный алкенил;R 4a and R 4b are each independently C 1 -C 16 straight alkyl or C 2 -C 16 straight alkenyl;
R5 отсутствует, представляет собой C1-C8 алкилен или C2-C8 алкенилен;R 5 is absent, represents C 1 -C 8 alkylene or C 2 -C 8 alkenylene;
R6a и R6b, каждый независимо, представляют собой C7-C16 алкил или C7-C16 алкенил; при условии, что общее количество атомов углерода в R6a и R6b в комбинации больше 15;R 6a and R 6b are each independently C 7 -C 16 alkyl or C 7 -C 16 alkenyl; provided that the total number of carbon atoms in R 6a and R 6b in combination is greater than 15;
X1 и X2, каждый независимо, представляют собой -OC(=O)-, -SC(=O)-, -OC(=S)-,
-C(=O)O-, -C(=O)S-, -S-S-, -C(Ra)=N-, -N=C(Ra)-, -C(Ra)=NO-, -O-N=C(Ra)-, -C(=O)NRa-, X 1 and X 2 are each independently -OC(=O)-, -SC(=O)-, -OC(=S)-,
-C(=O)O-, -C(=O)S-, -SS-, -C(R a )=N-, -N=C(R a )-, -C(R a )=NO -, -ON=C(R a )-, -C(=O)NR a -,
-NRaC(=O)-, -NRaC(=O)NRa-, -OC(=O)O-, -OSi(Ra)2O-, -C(=O)(CRa 2)C(=O)O- или OC(=O)(CRa 2)C(=O)-; где:-NR a C(=O)-, -NR a C(=O)NR a -, -OC(=O)O-, -OSi(R a ) 2 O-, -C(=O)(CR a 2 )C(=O)O- or OC(=O)(CR a 2 )C(=O)-; Where:
Ra для каждого случая независимо представляет собой водород или C1-C6 алкил; иR a in each case independently represents hydrogen or C 1 -C 6 alkyl; And
n представляет собой целое число, выбранное из 1, 2, 3, 4, 5 и 6.n is an integer selected from 1, 2, 3, 4, 5 and 6.
32. Фармацевтическая композиция по п. 14, в которой катионный липид представлен формулой (XX):32. The pharmaceutical composition according to claim 14, in which the cationic lipid is represented by formula (XX):
(XX)(XX)
или его фармацевтически приемлемой солью, где:or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein:
R’ отсутствует, представляет собой водород или C1-C3 алкил; при условии, что когда R’ представляет собой водород или C1-C3 алкил, атом азота, к которому присоединены все R’, R1 и R2, протонирован;R' is absent, represents hydrogen or C 1 -C 3 alkyl; with the proviso that when R' is hydrogen or C 1 -C 3 alkyl, the nitrogen atom to which all R', R 1 and R 2 are attached is protonated;
R1 и R2, каждый независимо, представляют собой водород или C1-C3 алкил; R 1 and R 2 are each independently hydrogen or C 1 -C 3 alkyl;
R3 представляет собой C3-C10 алкилен или C3-C10 алкенилен;R 3 represents C 3 -C 10 alkylene or C 3 -C 10 alkenylene;
R4 представляет собой C1-C16 неразветвленный алкил, C2-C16 неразветвленный алкенил или ; где: R 4 is C 1 -C 16 straight alkyl, C 2 -C 16 straight alkenyl or ; Where:
R4a и R4b, каждый независимо, представляют собой C1-C16 неразветвленный алкил или C2-C16 неразветвленный алкенил;R 4a and R 4b are each independently C 1 -C 16 straight alkyl or C 2 -C 16 straight alkenyl;
R5 отсутствует, представляет собой C1-C6 алкилен или C2-C6 алкенилен;R 5 is absent, represents C 1 -C 6 alkylene or C 2 -C 6 alkenylene;
R6a и R6b, каждый независимо, представляют собой C7-C14 алкил или C7-C14 алкенил; R 6a and R 6b are each independently C 7 -C 14 alkyl or C 7 -C 14 alkenyl;
X представляет собой -OC(=O)-, -SC(=O)-, -OC(=S)-, -C(=O)O-, -C(=O)S-, -S-S-,
-C(Ra)=N-, -N=C(Ra)-, -C(Ra)=NO-, -O-N=C(Ra)-, -C(=O)NRa-, -NRaC(=O)-, -NRaC(=O)NRa-, X represents -OC(=O)-, -SC(=O)-, -OC(=S)-, -C(=O)O-, -C(=O)S-, -SS-,
-C(R a )=N-, -N=C(R a )-, -C(R a )=NO-, -ON=C(R a )-, -C(=O)NR a -, -NR a C(=O)-, -NR a C(=O)NR a -,
-OC(=O)O-, -OSi(Ra)2O-, -C(=O)(CRa 2)C(=O)O- или OC(=O)(CRa 2)C(=O)-; где:-OC(=O)O-, -OSi(R a ) 2 O-, -C(=O)(CR a 2 )C(=O)O- or OC(=O)(CR a 2 )C( =O)-; Where:
Ra для каждого случая независимо представляет собой водород или C1-C6 алкил; иR a in each case independently represents hydrogen or C 1 -C 6 alkyl; And
n представляет собой целое число, выбранное из 1, 2, 3, 4, 5 и 6.n is an integer selected from 1, 2, 3, 4, 5 and 6.
33. Фармацевтическая композиция по п. 14, в которой катионный липид выбран из любого липида в таблице 2, таблице 5, таблице 6, таблице 7 или таблице 8.33. The pharmaceutical composition according to claim 14, wherein the cationic lipid is selected from any lipid in Table 2, Table 5, Table 6, Table 7 or Table 8.
34. Фармацевтическая композиция по п. 14, в которой катионный липид представляет собой липид, имеющий структуру:34. The pharmaceutical composition according to claim 14, in which the cationic lipid is a lipid having the structure:
или его фармацевтически приемлемую соль.or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
35. Фармацевтическая композиция по п. 14, в которой катионный липид представляет собой MC3 (6Z,9Z,28Z,31Z)-гептатриаконта-6,9,28,31-тетраен-19-ил-4-(диметиламино)бутаноат (DLin-MC3-DMA или MC3), имеющий следующую структуру:35. The pharmaceutical composition according to claim 14, in which the cationic lipid is MC3 (6Z,9Z,28Z,31Z)-heptatriakonta-6,9,28,31-tetraen-19-yl-4-(dimethylamino)butanoate (DLin -MC3-DMA or MC3), having the following structure:
, ,
или его фармацевтически приемлемую соль.or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
36. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 28-35, в которой стерин или его производное представляет собой холестерин или бета-ситостерин.36. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 28-35, in which the sterol or derivative thereof is cholesterol or beta-sitosterol.
37. Фармацевтическая композиция по п. 14, в которой некатионный липид выбран из группы, состоящей из дистеароил-sn-глицеро-фосфоэтаноламина (DSPE), дистеароилфосфатидилхолина (DSPC), диолеоилфосфатидилхолина (DOPC), дипальмитоилфосфатидилхолина (DPPC), диолеоилфосфатидилглицерина (DOPG), дипальмитоилфосфатидилглицерина (DPPG), диолеоилфосфатидилэтаноламина (DOPE), пальмитоилолеоилфосфатидилхолина (POPC), пальмитоилолеоилфосфатидилэтаноламина (POPE), диолеоилфосфатидилэтаноламин-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилата (DOPE-mal), дипальмитоилфосфатидилэтаноламина (DPPE), димиристоилфосфоэтаноламина (DMPE), дистеароилфосфатидилэтаноламина (DSPE), монометилфосфатидилэтаноламина (такого как 16-O-монометил-PE), диметилфосфатидилэтаноламина (такого как 16-O-диметил-PE), 18-1-транс-PE, 1-стеароил-2-олеоилфосфатидилэтаноламина (SOPE), гидрированного соевого фосфатидилхолина (HSPC), яичного фосфатидилхолина (EPC), диолеоилфосфатидилсерина (DOPS), сфингомиелина (SM), димиристоилфосфатидилхолина (DMPC), димиристоилфосфатидилглицерина (DMPG), дистеароилфосфатидилглицерина (DSPG), диэрукоилфосфатидилхолина (DEPC), пальмитоилолеоилфосфатидилглицерина (POPG), диэлаидоилфосфатидилэтаноламина (DEPE), 1,2-дилауроил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламина (DLPE); 1,2-дифитаноил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламина (DPHyPE); лецитина, фосфатидилэтаноламина, лизолецитина, лизофосфатидилэтаноламина, фосфатидилсерина, фосфатидилинозитола, сфингомиелина, яичного сфингомиелина (ESM), цефалина, кардиолипина, фосфатидикацида, цереброзидов, дицетилфосфата, лизофосфатидилхолина, дилинолеоилфосфатидилхолина и их смесей. 37. The pharmaceutical composition according to claim 14, wherein the non-cationic lipid is selected from the group consisting of distearoyl-sn-glycero-phosphoethanolamine (DSPE), distearoylphosphatidylcholine (DSPC), dioleoylphosphatidylcholine (DOPC), dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC), dioleoylphosphatidylglycerol (DOPG), dipalmitoylphosphatidylglycerol (DPPG), dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE), palmitoyloleoylphosphatidylcholine (POPC), palmitoyloleoylphosphatidylethanolamine (POPE), dioleoylphosphatidylethanolamine-4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate (DOPE-mal), dipalmitoylphosphatidylethanolamine (DPPE), dimyristo ylphosphoethanolamine (DMPE), distearoylphosphatidylethanolamine (DSPE), monomethylphosphatidylethanolamine (such as 16-O-monomethyl-PE), dimethylphosphatidylethanolamine (such as 16-O-dimethyl-PE), 18-1-trans-PE, 1-stearoyl-2-oleoylphosphatidylethanolamine (SOPE), hydrogenated soy phosphatidylcholine (HSPC), egg phosphatidylcholine (EPC), dioleoylphosphatidylserine (DOPS), sphingomyelin (SM), dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC), dimyristoylphosphatidylglycerol (DMPG), distearoylphosphatidylglycerol (DSPG), dierucoylphosphatidylcholine (DEPC), palmitoyloleoylphosphatidylglycerol (POPG), di elaidoylphosphatidylethanolamine ( DEPE), 1,2-dilauroyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DLPE); 1,2-diphytanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DPHyPE); lecithin, phosphatidylethanolamine, lysolecithin, lysophosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidylinositol, sphingomyelin, egg sphingomyelin (ESM), cephalin, cardiolipin, phosphatidicacid, cerebrosides, dicetyl phosphate, lysophosphatidylcholine, dilinoleoylphosphatidylcholine and mixtures thereof.
38. Фармацевтическая композиция по п. 37, в которой некатионный липид выбран из группы, состоящей из диолеоилфосфатидилхолина (DOPC), дистеароилфосфатидилхолина (DSPC) и диолеоилфосфатидилэтаноламина (DOPE).38. The pharmaceutical composition according to claim 37, wherein the non-cationic lipid is selected from the group consisting of dioleoylphosphatidylcholine (DOPC), distearoylphosphatidylcholine (DSPC) and dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE).
39. Фармацевтическая композиция по п. 14, в которой пегилированный липид выбран из группы, состоящей из PEG-дилаурилоксипропила; PEG-димиристилоксипропила; PEG-дипальмитилоксипропила, PEG-дистеарилоксипропила; 1-(монометоксиполиэтиленгликоль)-2,3-димиристоилглицерина (DMG-PEG); PEG-дилаурилглицерина; PEG-дипальмитоилглицерина; PEG-дистерилглицерина; PEG-дилаурилгликамида; PEG-димиристилгликамида; PEG-дипальмитоилгликамида; PEG-дистерилгликамида; (1-[8’-(холест-5-ен-3[бета]-окси)карбоксамидо-3’,6’-диоксаоктанил]карбамоил-[омега]-метилполи(этиленгликоль)(PEG-холестерина); 3,4-дитетрадекоксилбензил-[омега]-метил-поли(этиленгликоль) эфира (PEG-DMB), и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси(полиэтиленгликоля) (DSPE-PEG), и 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-поли(этиленгликоль)-гидроксила (DSPE-PEG-OH).39. The pharmaceutical composition according to claim 14, in which the pegylated lipid is selected from the group consisting of PEG-dilauryloxypropyl; PEG-dimyristyloxypropyl; PEG-dipalmityloxypropyl, PEG-distearyloxypropyl; 1-(monomethoxypolyethylene glycol)-2,3-dimyristoylglycerol (DMG-PEG); PEG-dilaurylglycerol; PEG-dipalmitoylglycerol; PEG-disterylglycerol; PEG-dilauryl glycamide; PEG-dimyristyl glycamide; PEG-dipalmitoylglycamide; PEG-disteryl glycamide; (1-[8'-(cholest-5-ene-3[beta]-oxy)carboxamido-3',6'-dioxaoctanyl]carbamoyl-[omega]-methylpoly(ethylene glycol)(PEG-cholesterol); 3.4 -ditetradecoxybenzyl-[omega]-methyl-poly(ethylene glycol) ether (PEG-DMB), and 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol) (DSPE-PEG), and 1 ,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-poly(ethylene glycol)-hydroxyl (DSPE-PEG-OH).
40. Фармацевтическая композиция по п. 39, в которой пегилированный липид представляет собой DMG-PEG, DSPE-PEG, DSPE-PEG-OH или их комбинацию.40. The pharmaceutical composition according to claim 39, wherein the PEGylated lipid is DMG-PEG, DSPE-PEG, DSPE-PEG-OH, or a combination thereof.
41. Фармацевтическая композиция по п. 39 или 40, в которой по меньшей мере один пегилированный липид представляет собой DMG-PEG2000, DSPE-PEG2000, DSPE-PEG2000-OH, DMG-PEG5000, DSPE-PEG5000, DSPE-PEG5000-OH или их комбинацию.41. The pharmaceutical composition according to claim 39 or 40, in which at least one PEGylated lipid is DMG-PEG2000, DSPE-PEG2000, DSPE-PEG2000-OH, DMG-PEG5000, DSPE-PEG5000, DSPE-PEG5000-OH or their combination.
42. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 14 или 39-41, в которой scFv химически конъюгирован или ковалентно связан с пегилированным липидом LNP с образованием конъюгата пегилированных липидов.42. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 14 or 39-41, wherein the scFv is chemically conjugated or covalently linked to a PEGylated lipid LNP to form a PEGylated lipid conjugate.
43. Фармацевтическая композиция по п. 42, в которой пегилированный липид, с которым scFv химически конъюгирован или ковалентно связан, представляет собой DSPE-PEG.43. The pharmaceutical composition according to claim 42, wherein the PEGylated lipid to which the scFv is chemically conjugated or covalently linked is DSPE-PEG.
44.Фармацевтическая композиция по п. 43, в которой пегилированный липид, с которым scFv химически конъюгирован или ковалентно связан, представляет собой DSPE-PEG2000.44. The pharmaceutical composition according to claim 43, wherein the PEGylated lipid to which the scFv is chemically conjugated or covalently linked is DSPE-PEG2000.
45. Фармацевтическая композиция по п. 43, в которой пегилированный липид, с которым scFv химически конъюгирован или ковалентно связан, представляет собой DSPE-PEG5000.45. The pharmaceutical composition according to claim 43, wherein the PEGylated lipid to which the scFv is chemically conjugated or covalently linked is DSPE-PEG5000.
46. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 28-35, в которой катионный липид присутствует в молярном процентном содержании от около 30% до около 80%.46. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 28-35, in which the cationic lipid is present in a molar percentage of from about 30% to about 80%.
47. Фармацевтическая композиция по п. 36, в которой стерин присутствует в молярном процентном содержании от около 20% до около 50%.47. The pharmaceutical composition of claim 36, wherein the sterol is present in a molar percentage of from about 20% to about 50%.
48. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 37, 38, в которой некатионный липид присутствует в молярном процентном содержании от около 2% до около 20%.48. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 37, 38, in which the non-cationic lipid is present in a molar percentage of from about 2% to about 20%.
49. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 39-45, в которой по меньшей мере один пегилированный липид присутствует в молярном процентном содержании от около 2,1% до около 10%.49. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 39-45, wherein the at least one PEGylated lipid is present in a molar percentage of from about 2.1% to about 10%.
50. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-49, в которой scFv присутствует в общем количестве от около 0,02 мкг/мкг TNA до около 0,1 мкг/мкг TNA.50. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-49, in which the scFv is present in a total amount of from about 0.02 μg/μg TNA to about 0.1 μg/μg TNA.
51. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-50, дополнительно содержащая пальмитат дексаметазона.51. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-50, additionally containing dexamethasone palmitate.
52. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-51, причем LNP имеет общее соотношение липидов и TNA от около 10 до около 40 52. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-51, with LNP having a total lipid to TNA ratio of about 10 to about 40
53. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-52, в которой LNP имеет диаметр в диапазоне от около 40 нм до около 120 нм.53. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-52, in which the LNP has a diameter ranging from about 40 nm to about 120 nm.
54. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-53, в которой наночастица имеет диаметр менее около 100 нм.54. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-53, in which the nanoparticle has a diameter of less than about 100 nm.
55. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-54, в которой наночастица имеет диаметр от около 60 нм до около 80 нм.55. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-54, in which the nanoparticle has a diameter of from about 60 nm to about 80 nm.
56. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 16-55, в которой зкДНК содержит экспрессионную кассету, и при этом экспрессионная кассета содержит последовательность промотора и трансген.56. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 16-55, wherein the cccDNA contains an expression cassette, and wherein the expression cassette contains a promoter sequence and a transgene.
57. Фармацевтическая композиция по п. 56, в которой экспрессионная кассета содержит последовательность полиаденилирования.57. The pharmaceutical composition according to claim 56, wherein the expression cassette contains a polyadenylation sequence.
58. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 16-57, в которой зкДНК содержит по меньшей мере один инвертированный концевой повтор (ITR), фланкирующий либо 5’-, либо 3’-конец экспрессионной кассеты.58. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 16-57, wherein the cccDNA contains at least one inverted terminal repeat (ITR) flanking either the 5' or 3' end of the expression cassette.
59. Фармацевтическая композиция по п. 58, в которой экспрессионная кассета фланкирована двумя ITR, причем два ITR содержат один 5’-ITR и один 3’-ITR.59. The pharmaceutical composition according to claim 58, wherein the expression cassette is flanked by two ITRs, the two ITRs containing one 5'-ITR and one 3'-ITR.
60. Фармацевтическая композиция по п. 58, в которой экспрессионная кассета соединена с ITR на 3’-конце (3’-ITR).60. The pharmaceutical composition according to claim 58, wherein the expression cassette is connected to an ITR at the 3' end (3'-ITR).
61. Фармацевтическая композиция по п. 58 или 60, в которой экспрессионная кассета соединена с ITR на 5’-конце (5’-ITR).61. The pharmaceutical composition according to claim 58 or 60, in which the expression cassette is connected to the ITR at the 5' end (5'-ITR).
62. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 58-61, в которой по меньшей мере один ITR представляет собой ITR, полученный из серотипа аденоассоциированного вируса (AAV), ITR, полученный из ITR вируса гусей, ITR, полученный из ITR вируса B19, или ITR дикого типа из парвовируса. 62. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 58-61, wherein the at least one ITR is an ITR derived from an adeno-associated virus (AAV) serotype, an ITR derived from a goose virus ITR, an ITR derived from a B19 virus ITR, or a wild-type ITR from a parvovirus.
63. Фармацевтическая композиция по п.62, в которой упомянутый серотип AAV выбран из группы, состоящей из: AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 и AAV12. 63. The pharmaceutical composition according to claim 62, wherein said AAV serotype is selected from the group consisting of: AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 and AAV12.
64. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 59-63, в которой по меньшей мере один из 5’-ITR и 3’-ITR представляет собой ITR AAV дикого типа.64. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 59-63, wherein at least one of the 5'-ITR and 3'-ITR is a wild-type AAV ITR.
65. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 59-63, в которой по меньшей мере один из 5’-ITR и 3’-ITR представляет собой модифицированный или мутантный ITR.65. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 59-63, wherein at least one of the 5'-ITR and 3'-ITR is a modified or mutant ITR.
66.Фармацевтическая композиция по любому из пп. 59-65, в которой 5’-ITR и 3’-ITR являются симметричными.66. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 59-65, in which the 5'-ITR and 3'-ITR are symmetrical.
67. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 59-65, в которой 5’-ITR и 3’-ITR являются асимметричными.67. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 59-65, in which the 5'-ITR and 3'-ITR are asymmetric.
68. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 59-67, в которой зкДНК дополнительно содержит спейсерную последовательность между 5’-ITR и экспрессионной кассетой.68. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 59-67, in which the cccDNA further contains a spacer sequence between the 5'-ITR and the expression cassette.
69. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 59-68, в которой зкДНК дополнительно содержит спейсерную последовательность между 3’-ITR и экспрессионной кассетой.69. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 59-68, in which the cccDNA further contains a spacer sequence between the 3'-ITR and the expression cassette.
70. Фармацевтическая композиция по п. 68 или 69, в которой спейсерная последовательность имеет длину по меньшей мере 5 пар оснований.70. The pharmaceutical composition according to claim 68 or 69, wherein the spacer sequence is at least 5 base pairs in length.
71. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 16-70, в которой зкДНК содержит разрыв или гэп.71. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 16-70, in which the cDNA contains a break or gap.
72. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 16-71, в которой зкДНК представляет собой линейную дуплексную ДНК с замкнутыми концами (CELiD), миникольцо на основе ДНК, минималистичный иммунологически определяемый вектор экспрессии генов (MIDGE), мининитевую ДНК, гантелеобразную дуплексную линейную ДНК с замкнутыми концами, содержащую две шпилечные структуры ITR на 5’- и 3’-концах экспрессионной кассеты, или ДНК doggybone™.72. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 16-71, in which the cccDNA is closed-end linear duplex DNA (CELiD), DNA-based minicircle, minimalist immunologically defined gene expression vector (MIDGE), ministrand DNA, dumbbell-shaped closed-end duplex linear DNA containing two hairpin ITR structures at the 5' and 3' ends of the expression cassette, or doggybone™ DNA.
73. Способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп. 1-72.73. A method of treating cancer in a subject, comprising administering to the subject an effective amount of a pharmaceutical composition according to any one of claims. 1-72.
74. Способ по п. 73, причем субъектом является человек.74. The method according to claim 73, wherein the subject is a person.
75. Способ доставки терапевтической нуклеиновой кислоты (TNA) или увеличения концентрации TNA в опухоли у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп. 1-72.75. A method of delivering a therapeutic nucleic acid (TNA) or increasing the concentration of TNA in a tumor in a subject, comprising administering to the subject an effective amount of a pharmaceutical composition according to any one of claims. 1-72.
76. Способ доставки терапевтической нуклеиновой кислоты (TNA) или увеличения концентрации TNA в печени у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп. 1-72.76. A method of delivering a therapeutic nucleic acid (TNA) or increasing the concentration of TNA in the liver of a subject, comprising administering to the subject an effective amount of a pharmaceutical composition according to any one of claims. 1-72.