Claims (48)
1. Одиночный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина (ISVD), в котором аминокислотный остаток в положении 89 представляет собой L, а аминокислотный остаток в положении 110 представляет собой K или Q, причем аминокислотные остатки/положения указаны нумерацией по Kabat.1. A single immunoglobulin heavy chain variable domain (ISVD), in which the amino acid residue at position 89 is L and the amino acid residue at position 110 is K or Q, the amino acid residues/positions being indicated by Kabat numbering.
2. ISVD тяжелой цепи по п. 1, который содержит аминокислотный остаток в положении 11, выбранный из L, E, K, V или Y.2. The heavy chain ISVD of claim 1, which contains an amino acid residue at position 11 selected from L, E, K, V or Y.
3. ISVD тяжелой цепи по п. 2, который содержит аминокислотный остаток в положении 11, который представляет собой V.3. The heavy chain ISVD of claim 2, which contains an amino acid residue at position 11 which is V.
4. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-3, который содержит аминокислоту в положении 112, выбранную из S, K или Q.4. Heavy chain ISVD according to any one of paragraphs. 1-3, which contains an amino acid at position 112 selected from S, K or Q.
5. ISVD тяжелой цепи по любому из пп.1-4, который содержит замену Q108L.5. Heavy chain ISVD according to any one of claims 1 to 4, which contains the Q108L substitution.
6. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-5, в котором указанный ISVD тяжелой цепи содержит C-концевое удлинение (X)n, в котором n равно от 1 до 10, предпочтительно от 1 до 5, например, 1, 2, 3, 4 или 5 (и предпочтительно 1 или 2, например, 1); и каждый X представляет собой аминокислотный остаток (предпочтительно встречающийся в природе), который выбран независимо и предпочтительно независимо выбран из группы, состоящей из аланина (А), глицина (G), валина (V), лейцина (L) или изолейцина (I).6. Heavy chain ISVD according to any one of paragraphs. 1-5, wherein said heavy chain ISVD contains a C-terminal extension (X) n , wherein n is from 1 to 10, preferably from 1 to 5, for example 1, 2, 3, 4 or 5 (and preferably 1 or 2, for example 1); and each X is an amino acid residue (preferably naturally occurring) that is independently selected and preferably independently selected from the group consisting of alanine (A), glycine (G), valine (V), leucine (L) or isoleucine (I) .
7. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-6, в котором С-концевой конец ISVD тяжелой цепи представляет собой один из: VKVSS (SEQ ID NO: 95), VKVSS(X)n (SEQ ID NO: 97), VQVSS (SEQ ID NO: 96), VQVSS(X)n (SEQ ID NO: 98), VZVZS (SEQ ID NO: 107, в котором каждый аминокислотный остаток Z независимо представляет собой K или Q) и VZVZS(X)n (SEQ ID NO: 108, в котором каждый аминокислотный остаток Z независимо представляет собой K или Q), в котором n равно от 1 до 10, предпочтительно от 1 до 5, например, 1, 2, 3, 4 или 5 (и предпочтительно 1 или 2, например, 1); и каждый X представляет собой аминокислотный остаток (предпочтительно встречающийся в природе), который выбран независимо и предпочтительно независимо выбран из группы, состоящей из аланина (А), глицина (G), валина (V), лейцина (L) или изолейцина (I).7. Heavy chain ISVD according to any one of paragraphs. 1-6, wherein the C-terminal end of the heavy chain ISVD is one of: VKVSS (SEQ ID NO: 95), VKVSS(X) n (SEQ ID NO: 97), VQVSS (SEQ ID NO: 96), VQVSS (X) n (SEQ ID NO: 98), VZVZS (SEQ ID NO: 107, in which each amino acid residue Z is independently K or Q) and VZVZS(X) n (SEQ ID NO: 108, in which each amino acid the remainder Z is independently K or Q), wherein n is from 1 to 10, preferably from 1 to 5, for example 1, 2, 3, 4 or 5 (and preferably 1 or 2, for example 1); and each X is an amino acid residue (preferably naturally occurring) that is independently selected and preferably independently selected from the group consisting of alanine (A), glycine (G), valine (V), leucine (L) or isoleucine (I) .
8. ISVD тяжелой цепи по п. 7, в котором C-концевой конец ISVD тяжелой цепи представляет собой один из VKVSS (SEQ ID NO: 95), VQVSS (SEQ ID NO: 96), VKVSS(X)n (SEQ ID NO: 95). ID NO: 97) и VQVSS(X)n (SEQ ID NO: 98), в которых X и n имеют значения, определенные в п. 7.8. The heavy chain ISVD of claim 7, wherein the C-terminal end of the heavy chain ISVD is one of VKVSS (SEQ ID NO: 95), VQVSS (SEQ ID NO: 96), VKVSS(X) n (SEQ ID NO : 95). ID NO: 97) and VQVSS(X) n (SEQ ID NO: 98), in which X and n have the meanings defined in paragraph 7.
9. ISVD тяжелой цепи, в котором:9. ISVD heavy chain, in which:
аминокислотный остаток в положении 11 представляет собой один из K, L и V; иthe amino acid residue at position 11 is one of K, L and V; And
аминокислотный остаток в положении 14 представляет собой один из A и P; иthe amino acid residue at position 14 is one of A and P; And
аминокислотный остаток в положении 41 представляет собой один из A и P; иthe amino acid residue at position 41 is one of A and P; And
аминокислотный остаток в положении 89 представляет собой L; иthe amino acid residue at position 89 is L; And
аминокислотный остаток в положении 108 представляет собой один из Q и L; иthe amino acid residue at position 108 is one of Q and L; And
аминокислотный остаток в положении 110 представляет собой один из K и Q; иthe amino acid residue at position 110 is one of K and Q; And
аминокислотный остаток в положении 112 представляет собой один из S, K и Q, где аминокислотные остатки/положения указаны нумерацией по Kabat.the amino acid residue at position 112 is one of S, K and Q, where the amino acid residues/positions are indicated by Kabat numbering.
10. ISVD тяжелой цепи по п. 9, в котором аминокислотный остаток в положении 112 представляет собой S.10. The heavy chain ISVD of claim 9, wherein the amino acid residue at position 112 is S.
11. ISVD тяжелой цепи по п. 9, в котором аминокислотный остаток в положении 11 представляет собой V.11. The heavy chain ISVD of claim 9, wherein the amino acid residue at position 11 is V.
12. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 9-11, в котором указанный ISVD тяжелой цепи содержит C-концевое удлинение (X)n, в котором n равно от 1 до 10, предпочтительно от 1 до 5, например, 1, 2, 3, 4 или 5 (и предпочтительно 1 или 2, например, 1); а каждый X представляет собой аминокислотный остаток (предпочтительно встречающийся в природе), который выбран независимо и предпочтительно независимо выбран из группы, состоящей из аланина (А), глицина (G), валина (V), лейцина (L) или изолейцина (I).12. Heavy chain ISVD according to any one of paragraphs. 9-11, wherein said heavy chain ISVD contains a C-terminal extension (X) n , wherein n is from 1 to 10, preferably from 1 to 5, for example 1, 2, 3, 4 or 5 (and preferably 1 or 2, for example 1); and each X is an amino acid residue (preferably naturally occurring) that is independently selected and preferably independently selected from the group consisting of alanine (A), glycine (G), valine (V), leucine (L) or isoleucine (I) .
13. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-13, который представляет собой домен VHH, гуманизированный домен VHH или домен VH камелизированного типа.13. Heavy chain ISVD according to any one of paragraphs. 1-13, which is a VHH domain, a humanized VHH domain, or a camellized-type VH domain.
14. ISVD тяжелой цепи по любому из пп.1-13, который направлен против Kv1.3, IL-23, OX40L, IgE, CXCR4, HER3, TNF, c-Met, RANKL, CXCR7 или A-бета.14. A heavy chain ISVD according to any one of claims 1 to 13, which is directed against Kv1.3, IL-23, OX40L, IgE, CXCR4, HER3, TNF, c-Met, RANKL, CXCR7 or A-beta.
15. ISVD тяжелой цепи по п. 14, который может специфически связываться с TNF и в котором:15. A heavy chain ISVD according to claim 14, which can specifically bind to TNF and wherein:
CDR1 представляет собой аминокислотную последовательность TADMG (SEQ ID NO: 335);CDR1 is the amino acid sequence of TADMG (SEQ ID NO: 335);
CDR2 представляет собой аминокислотную последовательность RISGIDGTTYYDEPVKG (SEQ ID NO: 336);CDR2 is the amino acid sequence RISGIDGTTYYDEPVKG (SEQ ID NO: 336);
CDR3 представляет собой аминокислотную последовательность PRYADQWSAYDY (SEQ ID NO: 337).CDR3 is the amino acid sequence PRYADQWSAYDY (SEQ ID NO: 337).
16. ISVD тяжелой цепи по п. 15, который содержит или состоит из одной из SEQ ID NO: 338-339 и 346-347.16. The heavy chain ISVD of claim 15, which contains or consists of one of SEQ ID NOs: 338-339 and 346-347.
17. ISVD тяжелой цепи по п. 14, который может специфически связываться с TNF и в котором:17. A heavy chain ISVD according to claim 14, which can specifically bind to TNF and wherein:
CDR1 представляет собой аминокислотную последовательность DYWMY (SEQ ID NO: 317);CDR1 is the amino acid sequence DYWMY (SEQ ID NO: 317);
CDR2 представляет собой аминокислотную последовательность EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO: 318);CDR2 is the amino acid sequence EINTNGLITKYPDSVKG (SEQ ID NO: 318);
CDR3 представляет собой аминокислотную последовательность SPSGFN (SEQ ID NO: 319).CDR3 is the amino acid sequence of SPSGFN (SEQ ID NO: 319).
18. ISVD тяжелой цепи по п. 17, который содержит или состоит из одной из SEQ ID NO: 320-321 и 328-329.18. The heavy chain ISVD of claim 17, which comprises or consists of one of SEQ ID NOs: 320-321 and 328-329.
19. ISVD тяжелой цепи по любому из пп.1-14, который может специфически связываться с сывороточным альбумином человека.19. A heavy chain ISVD according to any one of claims 1 to 14, which can specifically bind to human serum albumin.
20. ISVD тяжелой цепи по п.19, в котором:20. The heavy chain ISVD of claim 19, wherein:
CDR1 представляет собой аминокислотную последовательность SFGMS (SEQ ID NO: 41);CDR1 is the amino acid sequence of SFGMS (SEQ ID NO: 41);
CDR2 представляет собой аминокислотную последовательность SISGSGSDTLYADSVKG (SEQ ID NO: 42); иCDR2 is the amino acid sequence SISGSGSDTLYADSVKG (SEQ ID NO: 42); And
CDR3 представляет собой аминокислотную последовательность GGSLSR (SEQ ID NO: 43);CDR3 is the amino acid sequence GGSLSR (SEQ ID NO: 43);
21. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 19 или 20, в котором аминокислотный остаток в положении 89 представляет собой L, а аминокислотный остаток в положении 110 представляет собой K или Q, который может специфически связываться с сывороточным альбумином человека и в котором тяжелая цепь ISVD имеет по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, например, по меньшей мере 95% идентичности последовательности по меньшей мере с одним из Alb-1 (SEQ ID NO: 52, Alb-8 (SEQ ID NO: 46) и/или Alb-23 (SEQ ID NO: 61).21. Heavy chain ISVD according to any one of paragraphs. 19 or 20, wherein the amino acid residue at position 89 is L and the amino acid residue at position 110 is K or Q, which can specifically bind to human serum albumin and in which the ISVD heavy chain has at least 80%, preferably by at least 85%, more preferably at least 90%, for example at least 95% sequence identity with at least one of Alb-1 (SEQ ID NO: 52, Alb-8 (SEQ ID NO: 46) and/ or Alb-23 (SEQ ID NO: 61).
22. ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 19-21, который содержит или состоит из одной из SEQ ID NO: 123-136, 496-497, 500-505, 506-509.22. Heavy chain ISVD according to any one of paragraphs. 19-21, which contains or consists of one of SEQ ID NO: 123-136, 496-497, 500-505, 506-509.
23. Библиотека ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-13.23. The heavy chain ISVD library according to any one of claims. 1-13.
24. Библиотека остатков нуклеиновых кислот, кодирующих ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-13.24. A library of nucleic acid residues encoding heavy chain ISVD according to any one of claims. 1-13.
25. Библиотека по п. 23, которая представляет собой экспрессирующую библиотеку.25. The library according to claim 23, which is an expression library.
26. Библиотека по любому из пп. 23-25, которая представляет собой синтетическую библиотеку.26. Library according to any one of paragraphs. 23-25, which is a synthetic library.
27. Библиотека по любому из пп. 23-26, которая содержит по меньшей мере 100 различных последовательностей, например, по меньшей мере 1000 различных последовательностей, в частности более 105 различных последовательностей, более конкретно более 106 различных последовательностей, например, от 108 до 1010 или более различных последовательностей.27. Library according to any one of paragraphs. 23-26, which contains at least 100 different sequences, for example at least 1000 different sequences, in particular more than 10 5 different sequences, more particularly more than 10 6 different sequences, for example from 10 8 to 10 10 or more different sequences .
28. Полипептид, конструкция или соединение, которое содержит по меньшей мере один ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-22.28. A polypeptide, construct or compound that contains at least one heavy chain ISVD according to any one of paragraphs. 1-22.
29. Нуклеиновая кислота, которая кодирует ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-22, или полипептид, конструкция или соединение по п. 28.29. A nucleic acid that encodes a heavy chain ISVD according to any one of claims. 1-22, or the polypeptide, construct or compound of claim 28.
30. Способ получения ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-22, или полипептида, конструкции или соединения по п. 28, необязательно включающий экспрессию нуклеиновой кислоты по п. 29 в подходящем организме-хозяине.30. A method for producing heavy chain ISVD according to any one of claims. 1-22, or a polypeptide, construct or compound of claim 28, optionally comprising expression of the nucleic acid of claim 29 in a suitable host organism.
31. Композиция, содержащая ISVD тяжелой цепи по любому из пп. 1-22, полипептид, конструкцию или соединение по п. 28 или нуклеиновую кислоту по п. 29, причем композиция необязательно представляет собой фармацевтическую композицию.31. A composition containing a heavy chain ISVD according to any one of paragraphs. 1-22, the polypeptide, construct or compound of claim 28, or the nucleic acid of claim 29, wherein the composition is not necessarily a pharmaceutical composition.
32. Одиночный вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина по любому из пп. 1-22, или полипептид, конструкция или соединение по п. 28 для применения в медицине.32. Single variable domain of an immunoglobulin heavy chain according to any one of paragraphs. 1-22, or a polypeptide, construct or compound according to claim 28 for medical use.