Claims (140)
1. Вектор, содержащий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:1, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит кодон, соответствующий положениям 53575-53577 SEQ ID NO:1, который кодирует серин, или его комплемент.1. A vector comprising an isolated nucleic acid molecule comprising at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% nucleic acid sequence % identical to SEQ ID NO:1, provided that the specified nucleic acid sequence contains a codon corresponding to provisions 53575-53577 of SEQ ID NO:1, which encodes a serine, or its complement.
2. Вектор по п. 1, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит нуклеотиды, соответствующие положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:2, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентична части SEQ ID NO:2 содержащей экзоны с 1 по 6 гена B4GALT1, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает SEQ ID NO:2.2. The vector of claim 1, wherein said nucleic acid sequence comprises nucleotides corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:2, or at least about 90% of said nucleic acid sequence, at least about 95% of said nucleic acid sequence is at least about 98% or at least about 99% identical to the portion of SEQ ID NO:2 containing exons 1 to 6 of the B4GALT1 gene, or the specified nucleic acid sequence includes SEQ ID NO:2.
3. Вектор по п. 1 или 2, дополнительно содержащий последовательность экзогенного донора.3. The vector according to claim 1 or 2, additionally containing the sequence of an exogenous donor.
4. Вектор по любому из пп. 1-3, где указанный вектор содержит плазмиду или вирус.4. Vector according to any one of paragraphs. 1-3, where the specified vector contains a plasmid or virus.
5. Композиция, содержащая выделенную молекулу нуклеиновой кислоты,содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:1, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит кодон, соответствующий положениям 53575-53577 SEQ ID NO:1, который кодирует серин, или его комплемент, и носитель.5. A composition comprising an isolated nucleic acid molecule comprising at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% nucleic acid sequence % identical to SEQ ID NO:1, provided that the specified nucleic acid sequence contains a codon corresponding to provisions 53575-53577 of SEQ ID NO:1, which encodes a serine, or its complement, and a carrier.
6. Композиция по п.5, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит нуклеотиды, соответствующие положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:2, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентична части SEQ ID NO:2 содержащей экзоны с 1 по 6 гена B4GALT1, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает SEQ ID NO:2.6. The composition of claim 5, wherein said nucleic acid sequence comprises nucleotides corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:2, or at least about 90% of said nucleic acid sequence, at least about 95% of said nucleic acid sequence is at least about 98% or at least about 99% identical to the portion of SEQ ID NO:2 containing exons 1 to 6 of the B4GALT1 gene, or the specified nucleic acid sequence includes SEQ ID NO:2.
7. Композиция, содержащая вектор по любому из пп. 1-4 и носитель.7. A composition containing a vector according to any one of paragraphs. 1-4 and carrier.
8. Клетка-хозяин, содержащая выделенную молекулу нуклеиновой кислоты содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:1, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит кодон, соответствующий положениям 53575-53577 SEQ ID NO:1, который кодирует серин, или его комплемент.8. A host cell containing an isolated nucleic acid molecule containing a nucleic acid sequence of at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% identical to SEQ ID NO:1, provided that the specified nucleic acid sequence contains a codon corresponding to positions 53575-53577 of SEQ ID NO:1, which encodes a serine, or its complement.
9. Клетка-хозяин по п.8, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит нуклеотиды, соответствующие положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:2, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентична части SEQ ID NO:2 содержащей экзоны с 1 по 6 гена B4GALT1, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает SEQ ID NO:2.9. The host cell of claim 8, wherein said nucleic acid sequence comprises nucleotides corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:2, or at least about 90% of said nucleic acid sequence 95%, at least about 98%, or at least about 99% identical to the portion of SEQ ID NO:2 containing exons 1 to 6 of the B4GALT1 gene, or the specified nucleic acid sequence includes SEQ ID NO:2.
10. Клетка-хозяин, содержащая вектор по любому из пп. 1-4.10. A host cell containing the vector according to any one of paragraphs. 1-4.
11. Клетка-хозяин по любому из пп. 8-10, где указанная выделенная молекула нуклеиновой кислоты функционально связана с промотором активным в клетке-хозяине.11. Host cell according to any one of paragraphs. 8-10, wherein said isolated nucleic acid molecule is operably linked to a promoter active in the host cell.
12. Клетка-хозяин по п. 11, где указанный промотор является индуцибельным промотором.12. The host cell according to claim 11, wherein said promoter is an inducible promoter.
13. Клетка-хозяин по пп. 8-12, где указанная клетка-хозяин представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку, клетку насекомого или клетку млекопитающего.13. Host cell according to claims. 8-12, wherein said host cell is a bacterial cell, a yeast cell, an insect cell, or a mammalian cell.
14. Зонд на основе нуклеиновой кислоты, содержащий по меньшей мере около 15 нуклеотидов, и который гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:1, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит кодон, соответствующий положениям 53575-53577 SEQ ID NO:1, который кодирует серин, или его комплемент,, при условии, что зонд гибридизуется с положениями с 53575 по 53577 SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2 или их комплементом.14. A nucleic acid probe containing at least about 15 nucleotides and which hybridizes to a nucleic acid molecule containing the nucleic acid sequence by at least about 90%, at least about 95%, at least , about 98%, or at least about 99%, identical to SEQ ID NO:1, provided that the specified nucleic acid sequence contains a codon corresponding to positions 53575-53577 of SEQ ID NO:1, which encodes a serine, or its complement, provided that the probe hybridizes to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1 or SEQ ID NO:2 or their complement.
15. Зонд по п.14, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит нуклеотиды, соответствующие положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:2, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентична части SEQ ID NO:2 содержащей экзоны с 1 по 6 гена B4GALT1, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты включает SEQ ID NO:2.15. The probe of claim 14, wherein said nucleic acid sequence comprises nucleotides corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:2, or at least about 90% of said nucleic acid sequence, at least about 95% of said nucleic acid sequence is at least about 98% or at least about 99% identical to the portion of SEQ ID NO:2 containing exons 1 to 6 of the B4GALT1 gene, or the specified nucleic acid sequence includes SEQ ID NO:2.
16. Вектор, содержащий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:4, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит кодон, кодирующий серин в положении, соответствующем положению 352 полноразмерного/зрелого полипептида B4GALT1, или его комплемент.16. A vector comprising an isolated nucleic acid molecule comprising at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% nucleic acid sequence % identical to SEQ ID NO:4, provided that the specified nucleic acid sequence contains a codon encoding a serine at a position corresponding to position 352 of the full-length/mature B4GALT1 polypeptide, or its complement.
17. Вектор по п. 16, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентична части SEQ ID NO:4, содержащей экзоны с 1 по 6 гена B4GALT1, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит SEQ ID NO:4.17. The vector of claim 16, wherein said nucleic acid sequence is at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% identical to the portion of SEQ ID NO:4 containing exons 1 to 6 of the B4GALT1 gene, or the specified nucleic acid sequence contains SEQ ID NO:4.
18. Вектор по п. 16 или 17, дополнительно содержащий экзогенную последовательность донора.18. The vector according to claim 16 or 17, additionally containing an exogenous donor sequence.
19. Вектор по любому из пп. 16-18, где указанный вектор содержит плазмиду или вирус.19. Vector according to any one of paragraphs. 16-18, where the specified vector contains a plasmid or virus.
20. Композиция, содержащая выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:4, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит кодон, кодирующий серин в положении, соответствующем положению 352 полноразмерного/зрелого полипептида B4GALT1, или его комплемент, и носитель.20. A composition comprising an isolated nucleic acid molecule comprising at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% nucleic acid sequence % identical to SEQ ID NO:4, provided that the specified nucleic acid sequence contains a codon encoding a serine at a position corresponding to position 352 of the full-length/mature B4GALT1 polypeptide, or its complement, and a carrier.
21. Композиция по п. 20, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентична части SEQ ID NO:4, содержащей экзоны с 1 по 6 гена B4GALT1, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит SEQ ID NO:4.21. The composition of claim 20, wherein said nucleic acid sequence is at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% identical to the portion of SEQ ID NO:4 containing exons 1 to 6 of the B4GALT1 gene, or the specified nucleic acid sequence contains SEQ ID NO:4.
22. Композиция, содержащая вектор по любому из пп. 16-19 и носитель.22. A composition containing a vector according to any one of paragraphs. 16-19 and carrier.
23. Клетка-хозяин, содержащая выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:4, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит кодон, кодирующий серин в положении, соответствующем положению 352 полноразмерного/зрелого полипептида B4GALT1, или его комплемент.23. A host cell containing an isolated nucleic acid molecule comprising at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 98% nucleic acid sequence about 99% identical to SEQ ID NO:4, provided that the specified nucleic acid sequence contains a codon encoding a serine at a position corresponding to position 352 of the full-length/mature B4GALT1 polypeptide, or its complement.
24. Клетка-хозяин по п.23, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентична части SEQ ID NO:4, содержащей экзоны с 1 по 6 гена B4GALT1, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит SEQ ID NO:4.24. The host cell of claim 23, wherein said nucleic acid sequence is at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% identical to the portion of SEQ ID NO:4 containing exons 1 to 6 of the B4GALT1 gene, or the specified nucleic acid sequence contains SEQ ID NO:4.
25. Клетка-хозяин, содержащая вектор по любому из пп. 16-19.25. A host cell containing the vector according to any one of paragraphs. 16-19.
26. Клетка-хозяин по любому из пп. 23-25, где указанная выделенная молекула нуклеиновой кислоты функционально связана с промотором активным в клетке-хозяине.26. Host cell according to any one of paragraphs. 23-25, wherein said isolated nucleic acid molecule is operably linked to a promoter active in the host cell.
27. Клетка-хозяин по п. 26, где указанный промотор является индуцибельным промотором.27. The host cell of claim 26, wherein said promoter is an inducible promoter.
28. Клетка-хозяин по любому из пп. 23-27, где указанная клетка-хозяин представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку, клетку насекомого или клетку млекопитающего.28. Host cell according to any one of paragraphs. 23-27, wherein said host cell is a bacterial cell, a yeast cell, an insect cell or a mammalian cell.
29. Зонд на основе нуклеиновой кислоты, содержащий по меньшей мере около 15 нуклеотидов, и который гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты,содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:4, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит кодон, кодирующий серин в положении, соответствующем положению 352 полноразмерного/зрелого полипептида B4GALT1, или его комплемент, при условии, что указанный зонд гибридизуется с положениями 1243-1245 SEQ ID NO:4 или их комплементом.29. A nucleic acid probe containing at least about 15 nucleotides and which hybridizes to a nucleic acid molecule containing the nucleic acid sequence by at least about 90%, at least about 95%, at least , about 98%, or at least about 99%, identical to SEQ ID NO:4, provided that the specified nucleic acid sequence contains a codon encoding a serine at a position corresponding to position 352 of the full-length/mature B4GALT1 polypeptide, or its complement, provided that said probe hybridizes to positions 1243-1245 of SEQ ID NO:4 or their complement.
30. Зонд по п. 29, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентична части SEQ ID NO:4, содержащей экзоны с 1 по 6 гена B4GALT1, или указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит SEQ ID NO:4.30. The probe of claim 29, wherein said nucleic acid sequence is at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% identical to the portion of SEQ ID NO:4 containing exons 1 to 6 of the B4GALT1 gene, or said nucleic acid sequence contains SEQ ID NO:4.
31. Вектор, содержащий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичный SEQ ID NO:8, при условии, что полипептид содержит серин в положении 352 или ее комплемент.31. A vector containing an isolated nucleic acid molecule containing a nucleic acid sequence encoding a polypeptide that is at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% identical to SEQ ID NO:8, provided that the polypeptide contains serine at position 352 or its complement.
32. Вектор по п. 31, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8.32. The vector of claim 31, wherein said nucleic acid sequence encodes the polypeptide sequence of SEQ ID NO:8.
33. Вектор по п. 31 или 32, дополнительно содержащий последовательность экзогенного донора.33. The vector according to claim 31 or 32, additionally containing the sequence of an exogenous donor.
34. Вектор по любому из пп. 31-33, где указанный вектор содержит плазмиду или вирус.34. Vector according to any one of paragraphs. 31-33, where the specified vector contains a plasmid or virus.
35. Композиция, содержащая выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичный SEQ ID NO:8, при условии, что полипептид содержит серин в положении 352 или ее комплемент, и носитель.35. A composition comprising an isolated nucleic acid molecule comprising a nucleic acid sequence encoding a polypeptide of at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% identical to SEQ ID NO:8, provided that the polypeptide contains serine at position 352 or its complement, and a carrier.
36. Композиция по п. 35, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8.36. The composition of claim 35, wherein said nucleic acid sequence encodes the polypeptide sequence of SEQ ID NO:8.
36. Композиция, содержащая вектор по любому из пп. 31-34 и носитель.36. A composition containing a vector according to any one of paragraphs. 31-34 and media.
37. Клетка-хозяин, содержащая выделенную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичный SEQ ID NO:8, при условии, что полипептид содержит серин в положении 352 или ее комплемент.37. A host cell comprising an isolated nucleic acid molecule comprising a nucleic acid sequence encoding a polypeptide of at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least at least about 99% identical to SEQ ID NO:8, provided that the polypeptide contains serine at position 352 or its complement.
38. Клетка-хозяин по п. 37, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует полипептидную последовательность из SEQ ID NO:8 .38. The host cell of claim 37, wherein said nucleic acid sequence encodes the polypeptide sequence of SEQ ID NO:8.
39. Клетка-хозяин, содержащая вектор по любому из пп. 31-34.39. A host cell containing the vector according to any one of paragraphs. 31-34.
40. Клетка-хозяин по любому из пп. 35-37, где указанная выделенная молекула нуклеиновой кислоты функционально связана с промотором активным в клетке-хозяине.40. Host cell according to any one of paragraphs. 35-37, wherein said isolated nucleic acid molecule is operably linked to a promoter active in the host cell.
41. Клетка-хозяин по п. 40, где промотор является индуцибельным промотором.41. The host cell of claim 40, wherein the promoter is an inducible promoter.
42. Клетка-хозяин по любому из пп. 37-41, где указанная клетка-хозяин представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку, клетку насекомого или клетку млекопитающего.42. Host cell according to any one of paragraphs. 37-41, wherein said host cell is a bacterial cell, a yeast cell, an insect cell or a mammalian cell.
43. Зонд на основе нуклеиновой кислоты, содержащий по меньшей мере около 15 нуклеотидов, и который гибридизуется с молекулой нуклеиновой кислоты содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичный SEQ ID NO:8, при условии, что полипептид содержит серин в положении 352 или ее комплемент, при условии, что зонд гибридизуется с частью последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей серин в положении 352, или ее комплементом.43. A nucleic acid probe containing at least about 15 nucleotides, and which hybridizes to a nucleic acid molecule containing a nucleic acid sequence encoding a polypeptide by at least about 90%, at least about 95%, by at least about 98%, or at least about 99%, identical to SEQ ID NO:8, provided that the polypeptide contains serine at position 352 or its complement, provided that the probe hybridizes to a portion of the nucleic acid sequence , encoding serine at position 352, or its complement.
44. Зонд по п. 43, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует полипептидную последовательность из SEQ ID NO:844. The probe of claim 43, wherein said nucleic acid sequence encodes the polypeptide sequence of SEQ ID NO:8
45. Вектор, содержащий кДНК, кодирующую белок бета-1,4-галактозилтрансферазы 1 человека (B4GALT1), содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:6, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует серин в положении, соответствующем положению 352 полноразмерного/зрелого полипептида B4GALT1, или ее комплемент.45. A vector containing a cDNA encoding human beta-1,4-galactosyltransferase 1 ( B4GALT1 ) protein containing at least about 90% of the nucleic acid sequence, at least about 95% of the about 98%, or at least about 99% identical to SEQ ID NO:6, provided that the specified nucleic acid sequence encodes a serine at a position corresponding to position 352 of the full-length/mature B4GALT1 polypeptide, or its complement.
46. Вектор по п. 45, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит SEQ ID NO:6.46. The vector of claim 45, wherein said nucleic acid sequence comprises SEQ ID NO:6.
47. Вектор по п. 45 или 46, дополнительно содержащий последовательность экзогенного донора.47. The vector according to claim 45 or 46, additionally containing the sequence of an exogenous donor.
48. Вектор по любому из пп. 45-47, где указанный вектор содержит плазмиду или вирус.48. Vector according to any one of paragraphs. 45-47, where the specified vector contains a plasmid or virus.
49. Композиция, содержащая кДНК, кодирующую белок бета-1,4-галактозилтрансферазы 1 человека (B4GALT1), содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:6, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует серин в положении, соответствующем положению 352 полноразмерного/зрелого полипептида B4GALT1, или ее комплемент, и носитель.49. A composition comprising a cDNA encoding a human beta-1,4-galactosyltransferase 1 ( B4GALT1 ) protein containing at least about 90% of the nucleic acid sequence, at least about 95% of the about 98%, or at least about 99% identical to SEQ ID NO:6, provided that the nucleic acid sequence encodes a serine at a position corresponding to position 352 of the full-length/mature B4GALT1 polypeptide, or its complement, and carrier.
50. Композиция по п. 49, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит SEQ ID NO:6.50. The composition of claim 49, wherein said nucleic acid sequence comprises SEQ ID NO:6.
51. Композиция, содержащая вектор по любому из пп. 45-48 и носитель.51. A composition containing a vector according to any one of paragraphs. 45-48 and carrier.
52. Клетка-хозяин, содержащая кДНК, кодирующую белок бета-1,4-галактозилтрансферазы 1 человека (B4GALT1), содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:6, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует серин в положении, соответствующем положению 352 полноразмерного/зрелого полипептида B4GALT1, или ее комплемент.52. A host cell containing a cDNA encoding human beta-1,4-galactosyltransferase 1 protein ( B4GALT1 ) containing at least about 90% of the nucleic acid sequence, at least about 95% of the , about 98%, or at least about 99%, identical to SEQ ID NO:6, provided that the specified nucleic acid sequence encodes a serine at a position corresponding to position 352 of the full-length/mature B4GALT1 polypeptide, or its complement.
53. Клетка-хозяин по п. 52, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит SEQ ID NO:6.53. The host cell of claim 52, wherein said nucleic acid sequence comprises SEQ ID NO:6.
54. Клетка-хозяин, содержащая вектор по любому из пп. 45-48.54. A host cell containing the vector according to any one of paragraphs. 45-48.
55. Клетка-хозяин по любому из пп. 52-54, где указанная кДНК функционально связана с промотором активным в указанной клетке-хозяине.55. Host cell according to any one of paragraphs. 52-54, wherein said cDNA is operably linked to a promoter active in said host cell.
56. Клетка-хозяин по п. 55, где указанный промотор является индуцибельным промотором.56. The host cell of claim 55, wherein said promoter is an inducible promoter.
57. Клетка-хозяин по пп. 52-56, где указанная клетка-хозяин представляет собой бактериальную клетку, дрожжевую клетку, клетку насекомого или клетку млекопитающего.57. Host cell according to claims. 52-56, wherein said host cell is a bacterial cell, a yeast cell, an insect cell, or a mammalian cell.
58. Зонд на основе нуклеиновой кислоты, содержащий по меньшей мере около 15 нуклеотидов, который гибридизуется с кДНК, кодирующей белок бета-1,4-галактозилтрансферазы 1 человека (B4GALT1), содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную SEQ ID NO:6, при условии, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует серин в положении, соответствующем положению 352 полноразмерного/зрелого полипептида B4GALT1, или ее комплемент, при условии, что указанный зонд гибридизуется с положениями 1054-1056 SEQ ID NO:6 или их комплементом.58. A nucleic acid probe containing at least about 15 nucleotides that hybridizes to a cDNA encoding human beta-1,4-galactosyltransferase 1 protein ( B4GALT1 ) containing at least about 90% nucleic acid sequence, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% identical to SEQ ID NO:6, provided that said nucleic acid sequence encodes a serine at a position corresponding to 352 full-length/mature B4GALT1 polypeptide, or its complement, provided that the probe hybridizes to positions 1054-1056 of SEQ ID NO:6 or its complement.
59. Зонд по п. 58, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты содержит SEQ ID NO:6.59. The probe of claim 58, wherein said nucleic acid sequence comprises SEQ ID NO:6.
60. Композиция, содержащая полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную полипептиду варианта B4GALT1, имеющему SEQ ID NO:8, при условии, что указанный полипептид содержит серин, соответствующий положению 352 SEQ ID NO:8, и носитель или наполнитель.60. A composition comprising a polypeptide comprising an amino acid sequence that is at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% identical to the polypeptide variant B4GALT1 having SEQ ID NO:8, provided that the polypeptide contains a serine corresponding to position 352 of SEQ ID NO:8, and a carrier or excipient.
61. Композиция по п. 60, где указанный вариантный полипептид B4GALT1 содержит SEQ ID NO:8.61. The composition of claim 60, wherein said B4GALT1 variant polypeptide comprises SEQ ID NO:8.
62. Композиция по п. 60 или 61, где указанный полипептид дополнительно слит с гетерологичным пептидом, необязательно при этом гетерологичная молекула содержит Fc-домен иммуноглобулина, пептидный тэг, флуоресцентный белок или домен трансдукции.62. The composition of claim 60 or 61, wherein said polypeptide is further fused to a heterologous peptide, optionally the heterologous molecule comprising an immunoglobulin Fc domain, a peptide tag, a fluorescent protein, or a transduction domain.
63. Композиция по любому из пп. 60-62, где указанный полипептид дополнительно связан с меткой, необязательно при этом указанная метка содержит полиэтиленгликоль, полисиаловую кислоту, гликолевую кислоту, флуоресцентную метку или радиоактивную метку.63. Composition according to any one of paragraphs. 60-62, wherein said polypeptide is further linked to a label, optionally said label comprising polyethylene glycol, polysialic acid, glycolic acid, a fluorescent label or a radioactive label.
64. Клетка-хозяин, экспрессирующая полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную полипептиду варианта B4GALT1, имеющему SEQ ID NO:8, при условии, что указанный полипептид содержит серин, соответствующий положению 352 SEQ ID NO:8.64. A host cell expressing a polypeptide comprising an amino acid sequence of at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99%, identical to the B4GALT1 variant polypeptide having SEQ ID NO:8, provided that the polypeptide contains a serine corresponding to position 352 of SEQ ID NO:8.
65. Клетка-хозяин по п. 64, где указанный вариантный полипептид B4GALT1 содержит SEQ ID NO:8.65. The host cell of claim 64, wherein said B4GALT1 variant polypeptide comprises SEQ ID NO:8.
66. Способ получения полипептида содержащий аминокислотную последовательность, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99%, идентичную полипептиду варианта B4GALT1, имеющему SEQ ID NO:8, при условии, что указанный полипептид содержит серин, соответствующий положению 352 SEQ ID NO:8, включающий культивирование клетки-хозяина, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую указанный полипептид, таким образом, что указанная клетка экспрессирует указанный полипептид, и выделение указанного экспрессированного полипептида.66. A method of producing a polypeptide containing an amino acid sequence that is at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or at least about 99% identical to the B4GALT1 variant polypeptide having SEQ ID NO:8 , provided that said polypeptide contains a serine corresponding to position 352 of SEQ ID NO:8, comprising culturing a host cell containing a nucleic acid molecule encoding said polypeptide such that said cell expresses said polypeptide and isolating said expressed polypeptide.
67. Способ по п. 66, где указанный вариантный полипептид B4GALT1 содержит SEQ ID NO:8.67. The method of claim 66, wherein said B4GALT1 variant polypeptide comprises SEQ ID NO:8.
68. Способ по п. 66 или 67, где указанная молекула нуклеиновой кислоты находится под контролем гетерологичного промотора, необязательно при этом указанная молекула нуклеиновой кислоты находится под контролем индуцибельного промотора.68. The method of claim 66 or 67, wherein said nucleic acid molecule is under the control of a heterologous promoter, optionally wherein said nucleic acid molecule is under the control of an inducible promoter.
69. Направляющая РНК, эффективная для направления фермента Cas для связывания или расщепления эндогенного гена B4GALT1, причем указанная направляющая РНК содержит нацеленный на ДНК сегмент, который гибридизуется с последовательностью, распознаваемой направляющей РНК, в последовательности эндогенного гена B4GALT1, которая включает в себя или является близкой к положению, соответствующему положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:1.69. A guide RNA effective to direct a Cas enzyme to bind or cleave an endogenous B4GALT1 gene, wherein the guide RNA comprises a DNA targeting segment that hybridizes to a sequence recognized by the guide RNA in a sequence of the endogenous B4GALT1 gene that includes or is closely related to to a provision corresponding to provisions 53575 through 53577 of SEQ ID NO:1.
70. Направляющая РНК по п. 69, где указанная последовательность, распознаваемая направляющей РНК, выбрана из SEQ ID NO:9-12.70. The guide RNA of claim 69, wherein said sequence recognized by the guide RNA is selected from SEQ ID NO:9-12.
71. Направляющая РНК по п. 69, где указанная последовательность, распознаваемая направляющей РНК, находится в пределах около 1000 нуклеотидов от положеня, соответствующего положениям с 53575 по 53577 последовательности SEQ ID NO:1.71. The guide RNA of claim 69, wherein said sequence recognized by the guide RNA is within about 1000 nucleotides of a position corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1.
72. Направляющая РНК по п. 71, где указанная последовательность, распознаваемая направляющей РНК, включает положение, соответствующее положениям с 53575 по 53577 последовательности SEQ ID NO:1.72. The guide RNA of claim 71, wherein said sequence recognized by the guide RNA includes a position corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1.
73. Направляющая РНК по п. 72, где указанный эндогенный ген B4GALT1 содержит SEQ ID NO:1.73. The guide RNA of claim 72, wherein said endogenous B4GALT1 gene contains SEQ ID NO:1.
74. Направляющая РНК по любому из пп. 69-73, где указанная направляющая РНК содержит кластерную РНК с короткими палиндромными повторами (CRISPR) (crRNA), содержащую направленный на ДНК сегмент и транс-активирующую CRISPR РНК (tracrRNA).74. Guide RNA according to any one of paragraphs. 69-73, wherein said guide RNA comprises a clustered short palindromic repeat RNA (CRISPR) (crRNA) containing a DNA targeting segment and a trans-activating CRISPR RNA (tracrRNA).
75. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая ДНК, кодирующую направляющую РНК, по любому из пп. 69-74.75. An isolated nucleic acid molecule containing DNA encoding guide RNA according to any one of claims. 69-74.
76. Вектор, содержащий выделенную молекулу нуклеиновой кислоты по п. 75 и гетерологичную нуклеиновую кислоту.76. A vector containing an isolated nucleic acid molecule according to claim 75 and a heterologous nucleic acid.
77. Композиция, содержащая направляющую РНК по любому из пп. 69-75 и белок Cas.77. A composition containing guide RNA according to any one of paragraphs. 69-75 and Cas protein.
78. Клетка, содержаща направляющую РНК по любому из пп. 69-74.78. A cell containing guide RNA according to any one of paragraphs. 69-74.
79. Способ модификации эндогенного гена B4GALT1 в клетке, включающий приведение генома клетки в контакт с:79. A method for modifying the endogenous B4GALT1 gene in a cell, including bringing the cell genome into contact with:
а) белком Cas; а такжеa) Cas protein; and
b) направляющей РНК, которая образует комплекс с белком Cas и гибридизуется с последовательностью, распознаваемой направляющей РНК, в эндогенном гене B4GALT1, при этом последовательность, распознаваемая направляющей РНК, включает или находится вблизи положения, соответствующего положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:1, при этом Cas расщепляет ген B4GALT1. b) a guide RNA that forms a complex with the Cas protein and hybridizes to a guide RNA recognition sequence in the endogenous B4GALT1 gene, wherein the guide RNA recognition sequence includes or is located near the position corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1 , while Cas cleaves the B4GALT1 gene.
80. Способ по п. 79, где указанная последовательность, распознаваемая направляющей РНК, выбрана из SEQ ID NO:9-12.80. The method of claim 79, wherein said sequence recognized by the guide RNA is selected from SEQ ID NO:9-12.
81. Способ по п. 79, где указанная последовательность, распознаваемая направляющей РНК, находится в пределах около 1000 нуклеотидов от положения, соответствующего положениям с 53575 по 53577 последовательности SEQ ID NO:1.81. The method of claim 79, wherein said sequence recognized by the guide RNA is within about 1000 nucleotides of a position corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1.
82. Способ по п. 81, где указанная последовательность, распознаваемая направляющей РНК, включает в себя положения, соответствующие положениям с 53575 по 53577 последовательности SEQ ID NO:1.82. The method of claim 81, wherein said guide RNA recognition sequence includes positions corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1.
83. Способ по любому из пп. 79-82, дополнительно включающий приведение генома в контакт с последовательностью экзогенного донора, содержащей 5' плечо гомологии, которое гибридизуется с целевой последовательностью c 5' стороны в положении, соответствующем положениям с 53575 по 53577 последовательности SEQ ID NO:1 и 3' плече гомологии, которое гибридизуется с целевой последовательностью с 3' стороны в положении, соответствующем положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:1, при этом экзогенная донорная последовательность рекомбинирует с эндогенным геном B4GALT1. 83. Method according to any one of paragraphs. 79-82, further comprising bringing the genome into contact with an exogenous donor sequence containing a 5' homology arm that hybridizes to the target sequence on the 5' side at a position corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1 and the 3' homology arm , which hybridizes to the target sequence on the 3' side at a position corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1, with the exogenous donor sequence recombining with the endogenous B4GALT1 gene.
84. Способ по п. 83, где указанная последовательность экзогенного донора дополнительно содержит вставку нуклеиновой кислоты, фланкированную 5' плечом гомологии и 3' плечом гомологии.84. The method of claim 83, wherein said exogenous donor sequence further comprises a nucleic acid insert flanked by a 5' homology arm and a 3' homology arm.
85. Способ по п. 79, где указанная вставка нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую серин, и где при рекомбинации экзогенной донорной последовательности с эндогенным геном B4GALT1 указанная вставка нуклеиновой кислоты вставляется в эндогенный B4GALT1 ген, при этом последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая серин, вставлена в положения эндогенного гена B4GALT1, соответствующие положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:1.85. The method of claim 79, wherein said nucleic acid insert comprises a nucleic acid sequence encoding a serine, and wherein by recombination of an exogenous donor sequence with an endogenous geneB4GALT1specified nucleic acid insertion is inserted into the endogenousB4GALT1gene, wherein a nucleic acid sequence encoding serine is inserted at positions of the endogenous geneB4GALT1, corresponding to provisions 53575 to 53577 SEQ ID NO:1.
86. Способ по любому из пп. 79-85, где указанная экзогенная донорная последовательность имеет длину от около 50 нуклеотидов до около 1 т.п.н.86. Method according to any one of paragraphs. 79-85, wherein said exogenous donor sequence is from about 50 nucleotides to about 1 kb in length.
87. Способ по п. 86, где указанная экзогенная донорная последовательность имеет длину от около 80 нуклеотидов до около 200 нуклеотидов.87. The method of claim 86, wherein said exogenous donor sequence has a length of from about 80 nucleotides to about 200 nucleotides.
88. Способ по любому из пп. 83-87, где указанная экзогенная донорная последовательность представляет собой одноцепочечный олигодезоксинуклеотид.88. Method according to any one of paragraphs. 83-87, wherein said exogenous donor sequence is a single-stranded oligodeoxynucleotide.
89. Способ модификации эндогенного гена B4GALT1 в клетке, включающий приведение генома клетки в контакт с:89. A method for modifying the endogenous B4GALT1 gene in a cell, including bringing the cell genome into contact with:
а) белком Cas; а такжеa) Cas protein; and
b) первой направляющей РНК, которая образует комплекс с белком Cas и гибридизуется с первой последовательностью, распознаваемой направляющей РНК, в эндогенном гене B4GALT1, при этом указанная последовательность, распознаваемая первой направляющей РНК, содержит стартовый кодон для гена B4GALT1 или находится в пределах около 1000 нуклеотидов от стартового кодона или выбрана из SEQ ID NO:9-12, при этом Cas расщепляет или изменяет экспрессию эндогенного гена B4GALT1. b) a first guide RNA that forms a complex with the Cas protein and hybridizes to a first guide RNA recognition sequence in the endogenous B4GALT1 gene, wherein said first guide RNA recognition sequence contains a start codon for the B4GALT1 gene or is within about 1000 nucleotides from the start codon or selected from SEQ ID NO:9-12, wherein Cas cleaves or alters the expression of the endogenous B4GALT1 gene.
90. Способ по п. 89, где указанная последовательность, распознаваемая первой направляющей РНК, выбрана из SEQ ID NO:9-12.90. The method of claim 89, wherein said sequence recognized by the first guide RNA is selected from SEQ ID NO:9-12.
91. Способ по п. 89 или 90, где указанный белок Cas является нуклеазно-активным белком Cas.91. The method of claim 89 or 90, wherein said Cas protein is a nuclease-active Cas protein.
92. Способ по п. 89 или 90, где указанный белок Cas является нуклеазно-активным белком Cas, слитым с доменом активатора транскрипции или доменом репрессора транскрипции.92. The method of claim 89 or 90, wherein said Cas protein is a nuclease-active Cas protein fused to a transcription activator domain or a transcription repressor domain.
93. Способ по любому из пп. 89-91, дополнительно включающий приведение генома клетки в контакт со второй направляющей РНК, которая образует комплекс с белком Cas и гибридизуется со последовательностью, распознаваемой второй направляющей РНК, в эндогенном гене B4GALT1, при этом последовательность, распознаваемая второй направляющей РНК, содержит стоп-кодон для эндогенного гена B4GALT1 или находится в пределах около 1000 нуклеотидов от стоп-кодона или выбрана из SEQ ID NO:9-12, при этом клетка модифицируется так, чтобы содержать делецию между последовательностью, распознаваемой первой направляющей РНК, и последовательностью, распознаваемой второй направляющей РНК.93. Method according to any one of paragraphs. 89-91, further comprising bringing the cell genome into contact with a second guide RNA, which forms a complex with the Cas protein and hybridizes to a sequence recognized by the second guide RNA in the endogenous B4GALT1 gene, wherein the sequence recognized by the second guide RNA contains a stop codon for the endogenous B4GALT1 gene or is within about 1000 nucleotides of a stop codon or selected from SEQ ID NO: 9-12, wherein the cell is modified to contain a deletion between a sequence recognized by the first guide RNA and a sequence recognized by the second guide RNA .
94. Способ по любому из пп. 89-93, дополнительно включающий введение вектора экспрессии в клетку, при этом указанный вектор экспрессии содержит рекомбинантный ген B4GALT1, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую серин, вставленный в положениях, соответствующих положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:2.94. Method according to any one of paragraphs. 89-93, further comprising introducing an expression vector into a cell, wherein said expression vector contains a recombinant B4GALT1 gene containing a nucleotide sequence encoding a serine inserted at positions corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:2.
95. Способ по п. 94, где указанный рекомбинантный ген B4GALT1 представляет собой миниген B4GALT1, в котором один или более несущественных сегментов гена были удалены по отношению к соответствующему гену B4GALT1 дикого типа.95. The method of claim 94, wherein said recombinant B4GALT1 gene is a B4GALT1 minigene in which one or more nonessential gene segments have been deleted relative to the corresponding wild-type B4GALT1 gene.
96. Способ по п. 95, где указанные удаленные сегменты содержат одну или более интронных последовательностей.96. The method of claim 95, wherein said deleted segments comprise one or more intronic sequences.
97. Способ по любому из пп. 89-93, дополнительно включающий введение вектора экспрессии в клетку, при этом указанный вектор экспрессии содержит молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид B4GALT1, который, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентичен SEQ ID NO:8 и содержи серин в положении 352, соответствующем SEQ ID NO:8.97. Method according to any one of paragraphs. 89-93, further comprising introducing an expression vector into a cell, wherein said expression vector contains a nucleic acid molecule encoding a B4GALT1 polypeptide that is at least about 90%, at least about 95%, at least about 98% or at least about 99% identical to SEQ ID NO:8 and containing serine at position 352 corresponding to SEQ ID NO:8.
98. Способ по любому из пп. 89-93, дополнительно включающий введение полипептида B4GALT1 или его фрагмента в клетку, при этом указанный белок или его фрагмент, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентичны SEQ ID NO:8 и содержат серин в положении 352, соответствующем SEQ ID NO:8.98. The method according to any one of paragraphs. 89-93, further comprising introducing a B4GALT1 polypeptide or a fragment thereof into a cell, wherein said protein or fragment thereof is at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or are at least about 99% identical to SEQ ID NO:8 and contain serine at position 352 corresponding to SEQ ID NO:8.
99. Способ по любому из пп. 89-93, где указанный белок Cas представляет собой Cas9.99. The method according to any one of paragraphs. 89-93, wherein said Cas protein is Cas9.
100. Способ лечения субъекта, который не является носителем варианта B4GALT1 и имеет или подвержен развитию сердечно-сосудистого заболевания, включающий введение субъекту:100. A method of treating a subject who is not a carrier of the B4GALT1 variant and has or is susceptible to developing cardiovascular disease, comprising administering to the subject:
а) белка Cas или нуклеиновой кислоты, кодирующей белок Cas; a) a Cas protein or a nucleic acid encoding a Cas protein;
b) направляющей РНК или нуклеиновой кислоты, кодирующей направляющую РНК, при этом указанная направляющая РНК образует комплекс с белком Cas и гибридизуется с последовательностью, распознаваемой направляющей РНК, в эндогенном гене B4GALT1, при этом последовательность, распознаваемая направляющей РНК, включает или находится вблизи положения, соответствующего положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:1; а такжеb) a guide RNA or a nucleic acid encoding a guide RNA, wherein the guide RNA forms a complex with a Cas protein and hybridizes to a guide RNA recognition sequence in the endogenous B4GALT1 gene, wherein the guide RNA recognition sequence includes or is located near a position, corresponding to provisions 53575 to 53577 SEQ ID NO:1; and
c) экзогенной донорной последовательности, содержащей 5' плечо гомологии, которое гибридизуется с расположенной 5' последовательностью-мишенью в положениях, соответствующих положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:1, 3' плече гомологии, которое гибридизуется с целевой последовательностью расположенной 3' в положениях, соответствующих положениям с 53575 по 53577 последовательности SEQ ID NO:1, и вставки нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую серин, в положениях, соответствующих положениям с 53575 по 53577 последовательности SEQ ID NO:2, фланкированной 5' плечом гомологии и 3' плечом гомологии,c) an exogenous donor sequence containing a 5' homology arm that hybridizes to the 5' target sequence at positions corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1, a 3' homology arm that hybridizes to the 3' target sequence positions corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1, and a nucleic acid insert containing a nucleotide sequence encoding a serine at positions corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:2, flanked by a 5' homology arm and 3 ' shoulder of homology,
при этом Cas расщепляет эндогенный ген B4GALT1 в клетке у субъекта, а экзогенная последовательность донора рекомбинирует с эндогенным геном B4GALT1 в клетке, при этом при рекомбинации экзогенной донорной последовательности с эндогенным геном B4GALT1 серин вставляется в нуклеотиды, соответствующие положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:1.wherein Cas cleaves the endogenous B4GALT1 gene in a cell in the subject, and the exogenous donor sequence recombines with the endogenous B4GALT1 gene in the cell, wherein when the exogenous donor sequence recombines with the endogenous B4GALT1 gene, a serine is inserted at the nucleotides corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO: 1.
101. Способ по п. 100, где указанная последовательность, распознаваемая направляющей РНК, выбрана из SEQ ID NO:9-12.101. The method of claim 100, wherein said sequence recognized by the guide RNA is selected from SEQ ID NO:9-12.
102. Способ по п. 100, где указанная последовательность, распознаваемая направляющей РНК, находится в пределах около 1000 нуклеотидов от положения, соответствующего положениям с 53575 по 53577 последовательности SEQ ID NO:1, или включает положение, соответствующее положениям с 53575 по 53577 последовательности SEQ ID NO:1.102. The method of claim 100, wherein said guide RNA recognition sequence is within about 1000 nucleotides of a position corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1, or includes a position corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:1.
103. Способ по любому из пп. 100-102, где длина экзогенной донорной последовательности составляет от около 50 нуклеотидов до около 1 т.п.н.103. Method according to any one of paragraphs. 100-102, where the length of the exogenous donor sequence is from about 50 nucleotides to about 1 kb.
104. Способ по п. 103, где указанная экзогенная донорная последовательность имеет длину от около 80 нуклеотидов до около 200 нуклеотидов.104. The method of claim 103, wherein said exogenous donor sequence has a length of from about 80 nucleotides to about 200 nucleotides.
105. Способ по любому из пп. 100-104, где указанная экзогенная донорная последовательность представляет собой одноцепочечный олигодезоксинуклеотид.105. Method according to any one of paragraphs. 100-104, wherein said exogenous donor sequence is a single-stranded oligodeoxynucleotide.
106. Способ по любому из пп. 100-105, где указанное сердечно-сосудистое заболевание включает повышенный уровень одного или более сывороточных липидов.106. Method according to any one of paragraphs. 100-105, wherein said cardiovascular disease includes elevated levels of one or more serum lipids.
107. Способ по п. 106, где указанные сывороточные липиды включают один или более из холестерина, ЛПНП, ЛПВП, триглицеридов, ЛПВП-холестерина и холестерина не-ЛПВП.107. The method of claim 106, wherein said serum lipids include one or more of cholesterol, LDL, HDL, triglycerides, HDL-cholesterol, and non-HDL cholesterol.
108. Способ по любому из пп. 100-105, где указанное сердечно-сосудистое заболевание включает повышенные уровни кальцификации коронарной артерии,повышенные уровни перикардиального жира атеротромботическое заболевание или повышенные уровни фибриногена.108. Method according to any one of paragraphs. 100-105, wherein said cardiovascular disease includes elevated levels of coronary artery calcification, elevated levels of pericardial fat, atherothrombotic disease, or elevated levels of fibrinogen.
109. Способ по п. 108, где указанное атеротромботическое заболевание включает повышенные уровни фибриногена или сгусток крови, образованный в результате активности фибриногена.109. The method of claim 108, wherein said atherothrombotic disease comprises elevated levels of fibrinogen or a blood clot formed as a result of fibrinogen activity.
110. Способ лечения субъекта, который не является носителем варианта B4GALT1 и имеет или подвержен развитию сердечно-сосудистого заболевания, включающий введение субъекту:110. A method of treating a subject who is not a carrier of the B4GALT1 variant and has or is susceptible to developing cardiovascular disease, comprising administering to the subject:
а) белка Cas или нуклеиновой кислоты, кодирующей белок Cas; a) a Cas protein or a nucleic acid encoding a Cas protein;
b) первой направляющей РНК или нуклеиновой кислоты, кодирующей первую направляющую РНК, при этом первая направляющая РНК образует комплекс с белком Cas и гибридизуется с последовательностью, распознаваемой первой направляющей РНК, в эндогенном гене B4GALT1, при этом последовательность, распознаваемая первой направляющей РНК, содержит стартовый кодон для эндогенного гена B4GALT1 или находится в пределах около 1000 нуклеотидов от стартового кодона или выбрана из SEQ ID NO:9-12; а такжеb) a first guide RNA or a nucleic acid encoding a first guide RNA, wherein the first guide RNA forms a complex with the Cas protein and hybridizes to a sequence recognized by the first guide RNA in the endogenous B4GALT1 gene, wherein the sequence recognized by the first guide RNA contains a start the codon for the endogenous B4GALT1 gene is either within about 1000 nucleotides from the start codon or selected from SEQ ID NO:9-12; and
c) вектора экспрессии, содержащего рекомбинантный ген B4GALT1, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую серин в положениях, соответствующих положениям с 53575 по 53577 SEQ ID NO:2, при этом Cas расщепляет или изменяет экспрессию эндогенного гена B4GALT1 в клетке субъекта, и вектор экспрессии экспрессирует рекомбинантный ген B4GALT1 в клетке субъекта.c) an expression vector containing a recombinant B4GALT1 gene containing a nucleotide sequence encoding serine at positions corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:2, wherein Cas cleaves or alters the expression of the endogenous B4GALT1 gene in a cell of the subject, and the expression vector expresses the recombinant B4GALT1 gene in a subject's cell.
111. Способ по п. 110, где указанную последовательность, распознаваемую первой направляющей РНК, выбирают из SEQ ID NO:9-12.111. The method of claim 110, wherein said sequence recognized by the first guide RNA is selected from SEQ ID NO:9-12.
112. Способ по п. 110 или 111, где указанный Cas является нуклеазно-активным белком Cas.112. The method of claim 110 or 111, wherein said Cas is a nuclease-active Cas protein.
113. Способ по п. 110 или 111, где указанный белок Cas является нуклеазно-активным белком Cas, слитым с репрессорным доменом транскрипции.113. The method of claim 110 or 111, wherein said Cas protein is a nuclease-active Cas protein fused to a transcription repressor domain.
114. Способ по любому из пп. 110-113, дополнительно включающий введение субъекту второй направляющей РНК, при этом вторая направляющая РНК образует комплекс с белком Cas и гибридизуется со последовательностью, распознаваемой второй направляющей РНК, в эндогенном B4GALT1 гене, при этом последовательность, распознаваемая второй направляющей РНК, содержит стоп-кодон для эндогенного гена B4GALT1 или находится в пределах около 1000 нуклеотидов от стоп-кодона, или выбрана из SEQ ID NO:9-12, при этом Cas расщепляет эндогенный ген B4GALT1 в клетке, как в последовательности, распознаваемой первой направляющей РНК, так и в последовательности, распознаваемой второй направляющей РНК, при этом указанная клетка модифицируется так, чтобы содержать делецию между последовательностью, распознаваемой первой направляющей РНК, и последовательностью, распознаваемой второй направляющей РНК.114. The method according to any one of paragraphs. 110-113, further comprising administering to the subject a second guide RNA, wherein the second guide RNA forms a complex with a Cas protein and hybridizes to a sequence recognized by the second guide RNA in an endogenousB4GALT1 gene, wherein the sequence recognized by the second guide RNA contains a stop codon for the endogenous geneB4GALT1 or is within about 1000 nucleotides of a stop codon, or is selected from SEQ ID NO:9-12, wherein Cas cleaves an endogenous geneB4GALT1 in a cell, both in a sequence recognized by the first guide RNA and in a sequence recognized by the second guide RNA, wherein the cell is modified to contain a deletion between the sequence recognized by the first guide RNA and the sequence recognized by the second guide RNA.
115. Способ по любому из пп. 110-114, где указанное сердечно-сосудистое заболевание включает повышенный уровень одного или более сывороточных липидов.115. The method according to any one of paragraphs. 110-114, wherein said cardiovascular disease includes elevated levels of one or more serum lipids.
116. Способ по п. 115, где указанные сывороточные липиды включают один или более из холестерина, ЛПНП, ЛПВП, триглицеридов, ЛПВП-холестерина и холестерина не-ЛПВП.116. The method of claim 115, wherein said serum lipids include one or more of cholesterol, LDL, HDL, triglycerides, HDL-cholesterol and non-HDL cholesterol.
117. Способ по любому из пп. 110-114, где указанное сердечно-сосудистое заболевание включает повышенные уровни кальцификации коронарной артерии, повышенные уровни перикардиального жира или атеротромботическое заболевание.117. The method according to any one of paragraphs. 110-114, wherein said cardiovascular disease includes elevated levels of coronary artery calcification, elevated levels of pericardial fat, or atherothrombotic disease.
118. Способ по п. 117, где указанное атеротромботическое заболевание включает повышенные уровни фибриногена или сгусток крови, образованный в результате активности фибриногена.118. The method of claim 117, wherein said atherothrombotic disease comprises elevated levels of fibrinogen or a blood clot formed as a result of fibrinogen activity.
119. Способ по любому из пп. 100-118, где указанный белок Cas представляет собой Cas9.119. The method according to any one of paragraphs. 100-118, wherein said Cas protein is Cas9.
120. Способ лечения субъекта, который не является носителем варианта B4GALT1 и имеет или подвержен развитию сердечно-сосудистого заболевания, включающий введение субъекту антисмысловой РНК, миРНК или кшРНК, которая гибридизуется с последовательностью внутри эндогенного B4GALT1 гена и уменьшает экспрессию полипептида B4GALT1 в клетке у субъекта.120. A method of treating a subject who is not a carrier of a B4GALT1 variant and has or is susceptible to developing cardiovascular disease, comprising administering to the subject an antisense RNA, siRNA, or shRNA that hybridizes to a sequence within the endogenous B4GALT1 gene and reduces cellular expression of the B4GALT1 polypeptide in the subject.
121. Способ по п. 120, дополнительно включающий введение вектора экспрессии субъекту, при этом указанный вектор экспрессии содержит рекомбинантный ген B4GALT1, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую серин, в положениях, соответствующих положениям с 53575 по 53577 последовательности SEQ ID NO:2, при этом указанный вектор экспрессии экспрессирует рекомбинантный ген B4GALT1 в клетке субъекта.121. The method of claim 120, further comprising administering an expression vector to a subject, wherein said expression vector comprises a recombinant B4GALT1 gene comprising a nucleotide sequence encoding serine at positions corresponding to positions 53575 to 53577 of SEQ ID NO:2, wherein said expression vector expresses the recombinant B4GALT1 gene in a cell of the subject.
122. Способ по п. 120, дополнительно включающий введение указанного вектора экспрессии субъекту, при этом указанный вектор экспрессии включает молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид B4GALT1, который, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере на около 95%, по меньшей мере на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентичен SEQ ID NO:8 (Asn352Ser B4GALT1), при этом вектор экспрессии экспрессирует нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид B4GALT1 в клетке субъекта.122. The method of claim 120, further comprising administering said expression vector to a subject, wherein said expression vector comprises a nucleic acid molecule encoding a B4GALT1 polypeptide that is at least about 90%, at least about 95%, is at least about 98% or at least about 99% identical to SEQ ID NO:8 (Asn352Ser B4GALT1 ), wherein the expression vector expresses a nucleic acid encoding a B4GALT1 polypeptide in a cell of the subject.
123. Способ по п. 120, дополнительно включающий введение мРНК субъекту, при этом указанная мРНК кодирует полипептид B4GALT1, который, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, около 98% или, по меньшей мере, около 99% идентичен SEQ ID NO:8 (Asn352Ser B4GALT1), при этом мРНК экспрессирует полипептид B4GALT1 в клетке у субъекта.123. The method of claim 120, further comprising administering mRNA to a subject, wherein said mRNA encodes a B4GALT1 polypeptide that is at least about 90%, at least about 95%, at least about 98%, or is at least about 99% identical to SEQ ID NO:8 (Asn352Ser B4GALT1 ), wherein the mRNA expresses the B4GALT1 polypeptide in a cell in the subject.
124. Способ по п. 120, дополнительно включающий введение полипептида Asn352Ser B4GALT1 или его фрагмента субъекту, при этом указанный полипептид, по меньшей мере, на около 90%, по меньшей мере, на около 95%, по меньшей мере, на около 98% или, по меньшей мере, на около 99% идентичен SEQ ID NO:8 и содержит серин в положении 352, соответствующий SEQ ID NO:8.124. The method of claim 120, further comprising administering an Asn352Ser B4GALT1 polypeptide or a fragment thereof to a subject, wherein said polypeptide is at least about 90%, at least about 95%, at least about 98% or is at least about 99% identical to SEQ ID NO:8 and contains the serine at position 352 corresponding to SEQ ID NO:8.
125. Способ по любому из пп. 120-124, где указанное сердечно-сосудистое заболевание включает повышенный уровень одного или более сывороточных липидов.125. The method according to any one of paragraphs. 120-124, wherein said cardiovascular disease includes elevated levels of one or more serum lipids.
126. Способ по п. 125, где указанные липиды сыворотки включают один или более из холестерина, ЛПНП, ЛПВП, триглицеридов, ЛПВП-холестерина и холестерина не-ЛПВП.126. The method of claim 125, wherein said serum lipids include one or more of cholesterol, LDL, HDL, triglycerides, HDL-cholesterol, and non-HDL cholesterol.
127. Способ по любому из пп. 120-124, где указанное сердечно-сосудистое заболевание включает повышенные уровни кальцификации коронарных артерий, повышенные уровни перикардиального жира или атеротромботическое заболевание.127. The method according to any one of paragraphs. 120-124, wherein said cardiovascular disease includes elevated levels of coronary artery calcification, elevated levels of pericardial fat, or atherothrombotic disease.
128. Способ по п. 127, где указанное атеротромботическое заболевание включает повышенные уровни фибриногена или сгусток крови, образованный в результате активности фибриногена.128. The method of claim 127, wherein said atherothrombotic disease comprises elevated levels of fibrinogen or a blood clot formed as a result of fibrinogen activity.