Claims (21)
1. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, адаптированный к росту в клетках Vero, полученный из исходного субштамма вируса желтой лихорадки 17D, который не адаптирован к росту в клетках Vero, для защиты пациентов от инфекции вируса желтой лихорадки, где указанный живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки является менее нейровирулентным, чем указанный исходный субштамм 17D вируса желтой лихорадки, и где указанный живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки является менее нейровирулентным, чем исходный субштамм вируса желтой лихорадки 17D, согласно тесту с определением дозы, летальной для 50% мышей (MLD50).1. Live attenuated strain of yellow fever virus adapted to grow in Vero cells, obtained from the original substrain of yellow fever virus 17D, which is not adapted to grow in Vero cells, to protect patients from yellow fever virus infection, where the specified live attenuated strain of yellow fever virus fever is less neurovirulent than the specified parent substrain 17D of yellow fever virus, and where the specified live attenuated strain of yellow fever virus is less neurovirulent than the parent substrain of yellow fever 17D, according to the test with a dose that is lethal to 50% of mice (MLD 50 ) .
2. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по п.1, где исходный штамм вируса желтой лихорадки представляет собой живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, адаптированный к росту в яйцах.2. The live attenuated yellow fever virus strain of claim 1, wherein the original yellow fever virus strain is a live attenuated yellow fever virus strain adapted to growth in eggs.
3. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по п.1 или 2, где исходный штамм вируса желтой лихорадки представляет собой субштамм вируса желтой лихорадки 17D-204.3. A live attenuated yellow fever virus strain according to claim 1 or 2, wherein the original yellow fever virus strain is a substrain of yellow fever virus 17D-204.
4. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-3, где исходный субштамм вируса желтой лихорадки 17D содержит последовательность РНК под SEQ ID NO. 2.4. Live attenuated strain of yellow fever virus according to any one of paragraphs. 1-3, where the original substrain of yellow fever virus 17D contains the RNA sequence under SEQ ID NO. 2.
5. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-4, где указанный штамм был получен путем пассирования указанного исходного субштамма 17D вируса желтой лихорадки на клетках Vero.5. Live attenuated strain of yellow fever virus according to any one of paragraphs. 1-4, wherein said strain was obtained by passage of said parental yellow fever virus 17D substrain on Vero cells.
6. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-5, где указанный штамм достигает log10MLD50/мл ниже или равного 4, ниже или равного 3,5, ниже или равного 3 или ниже или равного 2,5 в тесте на летальную дозу 50 для мышей (MLD50).6. Live attenuated strain of yellow fever virus according to any one of paragraphs. 1-5, wherein said strain achieves a log 10 MLD 50 /ml less than or equal to 4, less than or equal to 3.5, less than or equal to 3 or less than or equal to 2.5 in a mouse lethal dose 50 (MLD 50 ) test.
7. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-6, где указанный штамм является по меньшей мере таким же аттенуированным по висцеротропизму, как и исходный субштамм 17D вируса желтой лихорадки.7. Live attenuated strain of yellow fever virus according to any one of paragraphs. 1-6, wherein said strain is at least as attenuated in viscerotropism as the parent substrain 17D of yellow fever virus.
8. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-7, где указанный штамм является по меньшей мере таким же иммуногенным для индукции иммунного ответа против вируса желтой лихорадки, как и исходный субштамм 17D вируса желтой лихорадки.8. Live attenuated strain of yellow fever virus according to any one of paragraphs. 1-7, wherein said strain is at least as immunogenic to induce an immune response against yellow fever virus as the original yellow fever virus substrain 17D.
9. Иммуногенная композиция для индукции иммунного ответа против вируса желтой лихорадки, содержащая живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-8 и фармацевтически приемлемый носитель.9. An immunogenic composition for inducing an immune response against yellow fever virus, containing a live attenuated strain of yellow fever virus according to any one of paragraphs. 1-8 and a pharmaceutically acceptable carrier.
10. Способ получения живого аттенуированного штамма вируса желтой лихорадки, адаптированного к росту в клетках Vero, для защиты пациентов от инфекции вируса желтой лихорадки, включающий стадии:10. A method for obtaining a live attenuated strain of yellow fever virus adapted to growth in Vero cells to protect patients from yellow fever virus infection, comprising the steps:
а) очистки вирусной геномной РНК исходного живого аттенуированного штамма вируса желтой лихорадки, который не адаптирован к росту в клетках Vero и который необязательно адаптирован к росту в яйцах;a) purifying the viral genomic RNA of the original live attenuated strain of yellow fever virus which is not adapted to growth in Vero cells and which is not necessarily adapted to growth in eggs;
b) трансфекции клеток Vero вирусной геномной РНК, очищенной на стадии а), в результате чего получают трансфицированные клетки Vero;b) transfecting Vero cells with the viral genomic RNA purified in step a), resulting in transfected Vero cells;
c) выращивания трансфицированных клеток Vero, полученных на стадии b), в культуральной среде, в результате чего получают, а затем выделяют первую популяцию вируса желтой лихорадки;c) growing the transfected Vero cells obtained in step b) in a culture medium, whereby a first population of yellow fever virus is obtained and then isolated;
d) амплификации выделенной первой популяции вируса желтой лихорадки, полученной в конце стадии c), в 2 раза или больше в свежих клетках Vero, в результате чего получают вторую популяцию вируса желтой лихорадки;d) amplifying the isolated first population of yellow fever virus obtained at the end of step c) by 2-fold or more in fresh Vero cells, resulting in a second population of yellow fever virus;
e) клонирования второй популяции вируса желтой лихорадки, полученной на стадии d), посредством двух или больше последовательных клонирований методом бляшкообразования с использованием клеток Vero, в результате чего получают множество клонов вируса желтой лихорадки; e) cloning the second yellow fever virus population obtained in step d) by two or more successive plaque clonings using Vero cells, resulting in a plurality of yellow fever virus clones;
f) амплификации отдельно каждого из выделенных клонов вируса желтой лихорадки, полученных в конце стадии e), в 2 раза или больше в свежих клетках Vero, в результате чего получают множество штаммов вируса желтой лихорадки; иf) amplifying separately each of the isolated yellow fever virus clones obtained at the end of step e) by 2-fold or more in fresh Vero cells, resulting in a plurality of yellow fever virus strains; and
g) отбора из указанного множества штаммов вируса желтой лихорадки, выделенных на стадии f), одного или нескольких живых аттенуированных штаммов вируса желтой лихорадки, которые являются менее нейровирулентными, чем исходный живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, согласно тесту с определением дозы, летальной для 50% мышей (MLD50).g) selecting from said plurality of yellow fever virus strains isolated in step f), one or more live attenuated yellow fever virus strains that are less neurovirulent than the original live attenuated yellow fever virus strain, according to a lethal dose test of 50 % mice (MLD 50 ).
11. Способ по п.10, где указанная культуральная среда является бессывороточной и необязательно не содержит какого-либо вещества человеческого или животного происхождения.11. The method of claim 10, wherein said culture medium is serum-free and optionally free of any substance of human or animal origin.
12. Живой аттенуированный штамм вируса желтой лихорадки, который может быть получен способом по любому из пп. 10 или 11.12. Live attenuated strain of yellow fever virus, which can be obtained by the method according to any one of paragraphs. 10 or 11.
13. Применение живого аттенуированного штамма вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-8 или 12 для получения вакцины против вируса желтой лихорадки.13. The use of a live attenuated strain of yellow fever virus according to any one of paragraphs. 1-8 or 12 for a yellow fever vaccine.
14. Применение живого аттенуированного штамма вируса желтой лихорадки по любому из пп. 1-8 или 12, для получения вакцины для применения в профилактике инфекции, вызываемой вирусом желтой лихорадки.14. The use of a live attenuated strain of yellow fever virus according to any one of paragraphs. 1-8 or 12 to obtain a vaccine for use in the prevention of yellow fever virus infection.