Claims (11)
1. Способ получения унипотентных незрелых бета-клеток человека, включающий обеспечение контакта клеток дефинитивной эндодермальной линии человека in vitro с членом суперсемейства TGFβ и членом семейства Wnt с получением таким образом унипотентных незрелых бета-клеток человека.1. A method for producing unipotent immature human beta cells, comprising contacting cells of a definitive human endodermal line in vitro with a member of the TGFβ superfamily and a member of the Wnt family, thereby obtaining unipotent immature human beta cells.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанные унипотентные незрелые бета-клетки человека экспрессируют INS и NKX6.1, и по существу не экспрессируют NGN3.2. The method of claim 1, wherein said unipotent immature human beta cells express INS and NKX6.1, and essentially do not express NGN3.
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанные унипотентные незрелые бета-клетки человека экспрессируют INS, NKX6.1 и MAFB, и по существу не экспрессируют NGN3.3. The method according to claim 1 or 2, wherein said unipotent immature human beta cells express INS, NKX6.1 and MAFB, and essentially do not express NGN3.
4. Способ по любому из пп. 1-3, дополнительно включающий стадию контакта клеток дефинитивной эндодермальной линии человека in vitro с херегулином.4. The method according to any one of paragraphs. 1-3, further comprising the step of contacting cells of the definitive human endodermal line in vitro with heregulin.
5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что указанным членом суперсемейства TGFβ является активин А.5. The method according to any one of paragraphs. 1-4, characterized in that said member of the TGFβ superfamily is Activin A.
6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что указанным членом семейства Wnt является Wnt3a.6. The method according to any one of paragraphs. 1-5, characterized in that the specified member of the Wnt family is Wnt3a.
7. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанным херегулином является херегулин-1, херегулин-2, херегулин-3 или херегулин-4.7. The method according to claim 4, wherein said heregulin is heregulin-1, heregulin-2, heregulin-3 or heregulin-4.
8. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что указанные клетки дефинитивной эндодермальной линии человека контактируют с по меньшей мере 50 нг/мл члена суперсемейства TGFβ.8. The method according to any one of paragraphs. 1-7, characterized in that these cells of the definitive human endodermal line are in contact with at least 50 ng/ml of a member of the TGFβ superfamily.
9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что указанные клетки дефинитивной эндодермальной линии человека контактируют с по меньшей мере 25 нг/мл члена семейства Wnt.9. The method according to any one of paragraphs. 1-8, characterized in that these cells of the definitive human endodermal line are in contact with at least 25 ng/ml of a member of the Wnt family.
10. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанные клетки дефинитивной эндодермальной линии человека контактируют с в 5-15 раз меньшим количеством херегулина, чем количество члена суперсемейства TGFβ и члена семейства Wnt.10. The method of claim 4, wherein said cells of the definitive human endodermal line are contacted with 5 to 15 times less heregulin than the TGFβ superfamily member and the Wnt family member.
11. Применение унипотентных незрелых бета-клеток человека, полученных способом по любому из пп. 1-10, для получения культуры клеток in vitro для лечения сахарного диабета.11. The use of unipotent immature human beta cells obtained by the method according to any one of paragraphs. 1-10, to obtain an in vitro cell culture for the treatment of diabetes mellitus.