Claims (207)
1. Клетка, содержащая 1. Cell containing
а. экзогенный Т-клеточный рецептор (TCR); A. exogenous T cell receptor (TCR);
b. экзогенный CD8.b. exogenous CD8.
2. Клетка по п.1, в которой экзогенный CD8 содержит по меньшей мере один мономер.2. The cell of claim 1, wherein the exogenous CD8 contains at least one monomer.
3. Клетка по п.2, в которой по меньшей мере один мономер экзогенного CD8 содержит внеклеточный домен, трансмембранный домен, внутриклеточный домен, их фрагменты или их комбинации.3. The cell of claim 2, wherein at least one exogenous CD8 monomer comprises an extracellular domain, a transmembrane domain, an intracellular domain, fragments thereof, or combinations thereof.
4. Клетка по п.3, в которой внеклеточный домен содержит внеклеточный домен CD8α или внеклеточный домен CD8β.4. The cell of claim 3, wherein the extracellular domain comprises a CD8α extracellular domain or a CD8β extracellular domain.
5. Клетка по п.3 или 4, в которой трансмембранный домен содержит трансмембранный домен CD8α или трансмембранный домен CD8β.5. A cell according to claim 3 or 4, wherein the transmembrane domain comprises a CD8α transmembrane domain or a CD8β transmembrane domain.
6. Клетка по любому из пп.3-5, которой внутриклеточный домен содержит внутриклеточный домен CD8α или внутриклеточный домен CD8β.6. A cell according to any one of claims 3 to 5, wherein the intracellular domain comprises a CD8α intracellular domain or a CD8β intracellular domain.
7. Клетка по любому из пп.3-5, в которой внутриклеточный домен содержит внутриклеточный домен CD4.7. A cell according to any one of claims 3 to 5, wherein the intracellular domain contains the CD4 intracellular domain.
8. Клетка по любому из пп.2-6, в которой по меньшей мере один мономер содержит внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8α.8. A cell according to any one of claims 2 to 6, wherein at least one monomer comprises a CD8α extracellular domain, a CD8α transmembrane domain, and an intracellular CD8α domain.
9. Клетка по любому из пп.2-6, в которой по меньшей мере один мономер содержит внеклеточный домен CD8β, трансмембранный домен CD8β и внутриклеточный домен CD8β.9. A cell according to any one of claims 2 to 6, wherein at least one monomer comprises an extracellular CD8β domain, a CD8β transmembrane domain, and an intracellular CD8β domain.
10. Клетка по любому из пп.2-6, в которой по меньшей мере один мономер содержит внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8β.10. A cell according to any one of claims 2 to 6, wherein at least one monomer comprises a CD8α extracellular domain, a CD8α transmembrane domain, and an intracellular CD8β domain.
11. Клетка по любому из пп.2-7, в которой по меньшей мере один мономер содержит внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD4.11. A cell according to any one of claims 2 to 7, wherein at least one monomer comprises a CD8α extracellular domain, a CD8α transmembrane domain, and an intracellular CD4 domain.
12. Клетка по любому из пп.2-11, в которой по меньшей мере один мономер содержит сигнальный пептид.12. A cell according to any one of claims 2-11, wherein at least one monomer contains a signal peptide.
13. Клетка по п.12, в которой сигнальный пептид представляет собой сигнальный пептид CD8.13. The cell of claim 12, wherein the signal peptide is a CD8 signal peptide.
14. Клетка по любому из пп.3-13, в которой внеклеточный домен содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 140 или SEQ ID NO: 145.14. A cell according to any one of claims 3-13, wherein the extracellular domain contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 140 or SEQ ID NO: 145.
15. Клетка по любому из пп.3-14, в которой трансмембранный домен содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 141 или SEQ ID NO: 146.15. A cell according to any one of claims 3-14, wherein the transmembrane domain contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 141 or SEQ ID NO: 146.
16. Клетка по любому из пп.3-15, в которой внутриклеточный домен содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 147 или SEQ ID NO: 148.16. A cell according to any one of claims 3-15, wherein the intracellular domain contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 147, or SEQ ID NO: 148.
17. Клетка по любому из пп.12-16, в которой сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 139 или SEQ ID NO: 144.17. A cell according to any one of claims 12-16, wherein the signal peptide comprises the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 139 or SEQ ID NO: 144.
18. Клетка по любому из пп.1-17, в которой экзогенный CD8 содержит последовательность 2А.18. A cell according to any one of claims 1-17, wherein the exogenous CD8 contains the 2A sequence.
19. Клетка по любому из пп.1-18, в которой экзогенный CD8 содержит линкер.19. A cell according to any one of claims 1-18, wherein the exogenous CD8 contains a linker.
20. Клетка по п.19, в которой линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 137.20. The cell of claim 19, wherein the linker contains the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 137.
21. Клетка по любому из пп.1-20, в которой экзогенный CD8 содержит сайт расщепления протеазой.21. A cell according to any one of claims 1-20, wherein the exogenous CD8 contains a protease cleavage site.
22. Клетка по п.21, в которой сайт расщепления протеазой представляет собой сайт расщепления фурином.22. The cell of claim 21, wherein the protease cleavage site is a furin cleavage site.
23. Клетка по любому из пп.1-22, в которой экзогенный TCR представляет собой TCR, полученный от пациента.23. A cell according to any one of claims 1 to 22, wherein the exogenous TCR is a patient-derived TCR.
24. Клетка по любому из пп.1-23, в которой экзогенный TCR содержит сигнальную последовательность, первую и вторую последовательности 2A и последовательность полипептида TCR.24. A cell according to any one of claims 1 to 23, wherein the exogenous TCR contains a signal sequence, first and second 2A sequences, and a TCR polypeptide sequence.
25. Клетка по любому из пп.1-24, в которой экзогенный TCR распознает раковый антиген.25. A cell according to any one of claims 1-24, wherein the exogenous TCR recognizes a cancer antigen.
26. Клетка по п.25, в которой раковый антиген представляет собой неоантиген.26. The cell of claim 25, wherein the cancer antigen is a neoantigen.
27. Клетка по п.25, в которой раковый антиген представляет собой специфический для пациента антиген.27. The cell of claim 25, wherein the cancer antigen is a patient-specific antigen.
28. Клетка по любому из пп.1-27, представляющая собой первичную клетку.28. A cell according to any one of claims 1 to 27, which is a primary cell.
29. Клетка по любому из пп.1-27, представляющая собой клетку, полученную от пациента.29. A cell according to any one of claims 1 to 27, which is a cell obtained from a patient.
30. Клетка по любому из пп.1-27, представляющая собой лимфоцит.30. A cell according to any one of claims 1 to 27, which is a lymphocyte.
31. Клетка по любому из пп.1-27, представляющая собой Т-клетку.31. A cell according to any one of claims 1 to 27, which is a T cell.
32. Клетка по любому из пп.1-27, представляющая собой молодую Т-клетку.32. A cell according to any one of claims 1 to 27, which is a young T cell.
33. Клетка по п.32, которая является CD45RA+, CD62L+, CD28+, CD95-, CCR7+ и CD27+.33. The cell of claim 32 which is CD45RA+, CD62L+, CD28+, CD95-, CCR7+ and CD27+.
34. Клетка по п.32, которая является CD45RA+, CD62L+, CD28+, CD95+, CD27+, CCR7+.34. A cell according to claim 32, which is CD45RA+, CD62L+, CD28+, CD95+, CD27+, CCR7+.
35. Клетка по п.32, которая является CD45RO+, CD62L+, CD28+, CD95+, CCR7+, CD27+, CD127+.35. The cell according to claim 32, which is CD45RO+, CD62L+, CD28+, CD95+, CCR7+, CD27+, CD127+.
36. Клетка по любому из пп.1-35, дополнительно содержащая модификацию гена для увеличения персистирования клетки и/или усиления дифференцировки в клетку памяти.36. A cell according to any one of claims 1 to 35, further comprising a gene modification to increase cell persistence and/or enhance differentiation into a memory cell.
37. Клетка по любому из пп.1-36, где цитотоксическая активность клетки увеличена от примерно 10% до примерно 500% по сравнению с цитотоксической активностью клетки, которая не имеет экзогенного CD8.37. A cell according to any one of claims 1-36, wherein the cytotoxic activity of the cell is increased from about 10% to about 500% compared to the cytotoxic activity of a cell that does not have exogenous CD8.
38. Клетка по любому из пп.1-37, где пролиферация клетки при связывании TCR с антигеном увеличивается от примерно 10% до примерно 500% по сравнению с пролиферацией клетки, которая не имеет экзогенного CD8.38. A cell according to any one of claims 1 to 37, wherein cell proliferation upon binding of the TCR to the antigen is increased from about 10% to about 500% compared to cell proliferation that does not have exogenous CD8.
39. Клетка по любому из пп.1-38, где секреция провоспалительного цитокина клеткой при связывании TCR с антигеном увеличивается от примерно 10% до примерно 500% по сравнению с секрецией клеткой, которая не имеет экзогенного CD8.39. The cell of any one of claims 1 to 38, wherein secretion of a pro-inflammatory cytokine by the cell upon binding of the TCR to the antigen is increased from about 10% to about 500% compared to secretion by a cell that does not have exogenous CD8.
40. Клетка по любому из пп.1-39, где аффинность клетки к LCK увеличена от примерно 10% до примерно 500% по сравнению с аффинностью клетки к LCK, которая не имеет экзогенного CD8.40. A cell according to any one of claims 1-39, wherein the cell's affinity for LCK is increased from about 10% to about 500% compared to the cell's affinity for LCK that does not have exogenous CD8.
41. Клетка по любому из пп.1-40, где персистирование клетки увеличено от примерно 10% до примерно 500% по сравнению с персистированием клетки, которая не имеет экзогенного CD8.41. A cell according to any one of claims 1-40, wherein the persistence of the cell is increased from about 10% to about 500% compared to the persistence of a cell that does not have exogenous CD8.
42. Клетка по любому из пп.1-41, где способность клетки к инфильтрации в опухоль увеличена от примерно 10% до примерно 500% по сравнению со способностью к инфильтрации в опухоль клетки, которая не имеет экзогенного CD8.42. The cell of any one of claims 1 to 41, wherein the cell's ability to infiltrate into a tumor is increased from about 10% to about 500% compared to the ability to infiltrate into a tumor of a cell that does not have exogenous CD8.
43. Клетка по любому из пп.1-42, в которой экзогенный TCR представляет собой CD8-зависимый TCR.43. A cell according to any one of claims 1-42, wherein the exogenous TCR is a CD8-dependent TCR.
44. Клетка по любому из пп.1-42, в которой экзогенный TCR представляет собой CD8-независимый TCR.44. A cell according to any one of claims 1-42, wherein the exogenous TCR is a CD8-independent TCR.
45. Клетка по любому из пп.1-44, в которой экзогенный CD8 кодируется конструкцией 1 CD8, конструкцией 2 CD8, конструкцией 3 CD8 или конструкцией 4 CD8.45. A cell according to any one of claims 1-44, wherein exogenous CD8 is encoded by CD8 construct 1, CD8 construct 2, CD8 construct 3, or CD8 construct 4.
46. Клетка по любому из пп.1-44, в которой экзогенный CD8 содержит46. The cell according to any one of claims 1-44, in which exogenous CD8 contains
а. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8α;A. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain and CD8α intracellular domain;
b. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α, внутриклеточный домен CD8α, внеклеточный домен CD8β, трансмембранный домен CD8β и внутриклеточный домен CD8β;b. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, CD8α intracellular domain, CD8β extracellular domain, CD8β transmembrane domain, and CD8β intracellular domain;
c. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8β; илиc. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain and CD8β intracellular domain; or
d. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD4.d. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, and CD4 intracellular domain.
47. Клетка по любому из пп.1-44, в которой экзогенный CD8 содержит:47. A cell according to any one of claims 1 to 44, wherein the exogenous CD8 contains:
а. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142);A. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141) and CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142);
b. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141), внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142), сигнальный пептид CD8β (SEQ ID NO: 144), внеклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 145), трансмембранный домен CD8β (SEQ ID NO: 146) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147);b. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142), CD8β signal peptide (SEQ ID NO: 144), CD8β extracellular domain (SEQ ID NO: 145), CD8β transmembrane domain (SEQ ID NO: 146), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147);
c. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147); илиc. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147); or
d. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD4 (SEQ ID NO: 148).d. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD4 intracellular domain (SEQ ID NO: 148).
48. Способ модификации клетки, включающий48. Cell modification method, including
а. введение в клетку последовательности нуклеиновой кислоты-матрицы для гомологичной рекомбинации (HR), где матрица для HR содержитA. introduction into the cell of a homologous recombination (HR) template nucleic acid sequence, where the HR template contains
i. первое и второе плечи гомологии, гомологичные первой и второй целевым последовательностям нуклеиновой кислоты;i. first and second homology arms homologous to the first and second target nucleic acid sequences;
ii. последовательность гена TCR, расположенную между первым и вторым плечами гомологии;ii. the TCR gene sequence located between the first and second homology arms;
iii. последовательность гена CD8, расположенную между первым и вторым плечами гомологии; iii. the CD8 gene sequence located between the first and second homology arms;
b. рекомбинацию нуклеиновой кислоты-матрицы для HR в эндогенном локусе клетки.b. recombination of the nucleic acid template for HR at the endogenous locus of the cell.
49. Способ по п.48, в котором матрица для HR содержит первую 2А-кодирующую последовательность, расположенную выше последовательности гена CD8, вторую 2A-кодирующую последовательность, расположенную ниже последовательности гена CD8 и выше последовательности гена TCR, и третью 2А-кодирующую последовательность, расположенную ниже последовательности гена TCR; где первая, вторая и третья 2А-кодирующие последовательности кодируют одну и ту же аминокислотную последовательность, но отличаются кодонами друг относительно друга.49. The method of claim 48, wherein the HR template comprises a first 2A coding sequence upstream of the CD8 gene sequence, a second 2A coding sequence downstream of the CD8 gene sequence and upstream of the TCR gene sequence, and a third 2A coding sequence, downstream of the TCR gene sequence; where the first, second and third 2A coding sequences encode the same amino acid sequence, but differ in codons from each other.
50. Способ по п.48 или 49, где матрица для HR содержит последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность Gly Ser Gly, расположенную непосредственно выше первой, второй и/или третьей 2А-кодирующей последовательностью.50. The method of claim 48 or 49, wherein the HR template contains a sequence encoding the Gly Ser Gly amino acid sequence immediately upstream of the first, second and/or third 2A coding sequence.
51. Способ по п.49 или 50, где матрица для HR дополнительно содержит последовательность, кодирующую сайт расщепления фурином, расположенный выше первой, второй и/или третьей 2A-кодирующей последовательности.51. The method of claim 49 or 50, wherein the HR template further comprises a sequence encoding a furin cleavage site upstream of the first, second and/or third 2A coding sequence.
52. Способ по любому из пп.48-51, где матрица для HR дополнительно содержит последовательность, кодирующую сигнальную последовательность, расположенную непосредственно выше последовательности гена TCR и/или последовательности гена CD8.52. The method according to any one of claims 48-51, wherein the HR template further comprises a sequence encoding a signal sequence immediately upstream of the TCR gene sequence and/or the CD8 gene sequence.
53. Способ по любому из пп.48-52, где матрица для HR содержит вторую последовательность TCR, расположенную между третьей 2А-кодирующей последовательностью и вторым плечом гомологии.53. The method according to any one of claims 48-52, wherein the template for HR contains a second TCR sequence located between the third 2A coding sequence and the second homology arm.
54. Способ по п.53, где матрица для HR содержит54. The method of claim 53, wherein the matrix for HR contains
а. последовательность, кодирующую первую сигнальную последовательность, расположенную непосредственно выше первой последовательности гена TCR; иA. a sequence encoding a first signal sequence immediately upstream of the first sequence of the TCR gene; And
b. последовательность, кодирующую вторую сигнальную последовательность, расположенную непосредственно выше второй последовательностью гена TCR.b. a sequence encoding a second signal sequence located immediately upstream of the second sequence of the TCR gene.
55. Способ по любому из пп.48-54, где матрица для HR содержит вторую последовательность гена CD8, расположенную между первой последовательностью гена CD8 и второй 2А-кодирующей последовательностью.55. The method of any one of claims 48-54, wherein the HR template comprises a second CD8 gene sequence located between the first CD8 gene sequence and the second 2A coding sequence.
56. Способ по п.55, где 2А-кодирующая последовательность расположена между первой и второй последовательностями гена CD8.56. The method of claim 55, wherein the 2A coding sequence is located between the first and second sequences of the CD8 gene.
57. Способ по п.55 или 56, где последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность Gly Ser Gly, расположена между первой и второй последовательностями гена CD8.57. The method according to claim 55 or 56, wherein the sequence encoding the Gly Ser Gly amino acid sequence is located between the first and second sequences of the CD8 gene.
58. Способ по любому из пп.55-57, где последовательность, кодирующая сайт расщепления фурином, расположена между первой и второй последовательностями гена CD8.58. The method according to any one of claims 55-57, wherein the sequence encoding the furin cleavage site is located between the first and second sequences of the CD8 gene.
59. Способ по любому из пп.48-58, где последовательность гена CD8 содержит последовательность, кодирующую внеклеточный домен, последовательность, кодирующую внутриклеточный домен, последовательность, кодирующую внутриклеточный домен, их фрагменты или их комбинации.59. The method according to any one of claims 48-58, wherein the CD8 gene sequence comprises an extracellular domain coding sequence, an intracellular domain coding sequence, an intracellular domain coding sequence, fragments thereof, or combinations thereof.
60. Способ по п.59, где последовательность, кодирующая внеклеточный домен, содержит последовательность, кодирующую внеклеточный домен CD8α или внеклеточный домен CD8β.60. The method of claim 59, wherein the sequence encoding the extracellular domain comprises a sequence encoding a CD8α extracellular domain or a CD8β extracellular domain.
61. Способ по п. 59 или 60, где последовательность, кодирующая трансмембранный домен, содержит последовательность, кодирующую трансмембранный домен CD8α или трансмембранный домен CD8β.61. The method of claim 59 or 60, wherein the sequence encoding the transmembrane domain comprises a sequence encoding a CD8α transmembrane domain or a CD8β transmembrane domain.
62. Способ по любому из пп.59-61, где последовательность, кодирующая внутриклеточный домен, содержит последовательность, кодирующую внутриклеточный домен CD8α или внутриклеточный домен CD8β.62. The method of any one of claims 59-61, wherein the sequence encoding the intracellular domain comprises a sequence encoding a CD8α intracellular domain or a CD8β intracellular domain.
63. Способ по любому из пп.59-61, где последовательность, кодирующая внутриклеточный домен, содержит последовательность, кодирующую внутриклеточный домен CD4.63. The method according to any one of claims 59-61, wherein the sequence encoding the intracellular domain contains a sequence encoding the intracellular domain of CD4.
64. Способ по любому из пп.59-62, где последовательность гена CD8 содержит последовательность, кодирующую внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8α.64. The method according to any one of claims 59-62, wherein the CD8 gene sequence comprises a sequence encoding a CD8α extracellular domain, a CD8α transmembrane domain, and an intracellular CD8α domain.
65. Способ по любому из пп.59-62, где последовательность гена CD8 содержит последовательность, кодирующую внеклеточный домен CD8β, трансмембранный домен CD8β и внутриклеточный домен CD8β.65. The method according to any one of claims 59-62, wherein the CD8 gene sequence contains a sequence encoding an extracellular domain of CD8β, a transmembrane domain of CD8β, and an intracellular domain of CD8β.
66. Способ по любому из пп.59-62, где последовательность гена CD8 содержит последовательность, кодирующую внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8β.66. The method according to any one of claims 59-62, wherein the CD8 gene sequence contains a sequence encoding a CD8α extracellular domain, a CD8α transmembrane domain, and an intracellular CD8β domain.
67. Способ по любому из пп.59-63, где последовательность гена CD8 содержит последовательность, кодирующую внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD4.67. The method according to any one of claims 59-63, wherein the CD8 gene sequence contains a sequence encoding an extracellular CD8α domain, a CD8α transmembrane domain, and an intracellular CD4 domain.
68. Способ по любому из пп.55-67, где матрица для HR содержит68. The method according to any one of claims 55-67, where the matrix for HR contains
а. последовательность, кодирующую первую сигнальную последовательность, расположенную непосредственно выше первой последовательности гена CD8; A. a sequence encoding a first signal sequence immediately upstream of the first sequence of the CD8 gene;
b. последовательность, кодирующую вторую сигнальную последовательность, расположенную непосредственно выше второй последовательностью гена CD8.b. a sequence encoding a second signal sequence located immediately upstream of the second sequence of the CD8 gene.
69. Способ по любому из пп.52-68, где сигнальная последовательность представляет собой сигнальную последовательность CD8, сигнальную последовательность человеческого гормона роста, их фрагменты или их комбинации.69. The method of any one of claims 52-68, wherein the signal sequence is a CD8 signal sequence, a human growth hormone signal sequence, fragments thereof, or combinations thereof.
70. Способ по любому из пп.48-69, где каждое первое и второе плечи гомологии матрицы для HR имеют длину от примерно 300 оснований до примерно 2000 оснований.70. The method of any one of claims 48-69, wherein each of the first and second arms of the template homology for HR are from about 300 bases to about 2000 bases in length.
71. Способ по любому из пп.48-70, где каждое первое и второе плечи гомологии матрицы для HR имеют длину от примерно 600 оснований до примерно 2000 оснований.71. The method of any one of claims 48-70, wherein each of the first and second arms of the template homology for HR are from about 600 bases to about 2000 bases in length.
72. Способ по любому из пп.48-71, где экзогенный TCR представляет собой TCR, полученный от пациента.72. The method of any one of claims 48-71, wherein the exogenous TCR is a TCR obtained from a patient.
73. Способ по любому из пп.48-72, где экзогенный TCR содержит сигнальную последовательность, первую и вторую последовательности 2A и последовательность полипептида TCR.73. The method of any one of claims 48-72, wherein the exogenous TCR comprises a signal sequence, first and second 2A sequences, and a TCR polypeptide sequence.
74. Способ по любому из пп.48-73, где экзогенный TCR распознает раковый антиген.74. The method of any one of claims 48-73, wherein the exogenous TCR recognizes a cancer antigen.
75. Способ по п.74, где раковый антиген представляет собой неоантиген.75. The method of claim 74 wherein the cancer antigen is a neoantigen.
76. Способ по п.74, где раковый антиген представляет собой специфический для пациента антиген.76. The method of claim 74 wherein the cancer antigen is a patient specific antigen.
77. Способ по любому из пп.48-76, где матрица для HR не является вирусной.77. The method of any one of claims 48-76, wherein the HR template is not viral.
78. Способ по любому из пп.48-77, где матрица для HR представляет собой кольцевую ДНК.78. The method of any one of claims 48-77, wherein the template for HR is cDNA.
79. Способ по любому из пп.48-77, где матрица для HR представляет собой линейную ДНК.79. The method of any one of claims 48-77, wherein the template for HR is linear DNA.
80. Способ по любому из пп.48-79, где введение осуществляют посредством электропорации.80. The method according to any one of claims 48-79, wherein the administration is by electroporation.
81. Способ по любому из пп.48-80, где рекомбинация включает81. The method according to any one of claims 48-80, where the recombination includes
а. расщепление эндогенного локуса нуклеазой; A. cleavage of the endogenous locus by nuclease;
b. рекомбинацию последовательности нуклеиновой кислоты-матрицы для HR в эндогенном локусе путем гомологически направленной репарации.b. recombination of the HR template nucleic acid sequence at the endogenous locus by homology-directed repair.
82. Способ по п.81, где нуклеаза представляет собой нуклеазу семейства кластерных коротких палиндромных повторов с регулярными интервалами (CRISPR) или ее производное.82. The method of claim 81, wherein the nuclease is a regularly spaced clustered short palindromic repeat (CRISPR) family nuclease or a derivative thereof.
83. Способ по п.82, дополнительно включающий гРНК.83. The method of claim 82, further comprising gRNA.
84. Способ по любому из пп.48-83, дополнительно включающий культивирование клетки.84. The method according to any one of claims 48-83, further comprising culturing the cell.
85. Способ по п.84, где культивирование выполняют в присутствии по меньшей мере одного цитокина.85. The method of claim 84, wherein the culture is performed in the presence of at least one cytokine.
86. Способ по п.84 или 85, где культивирование выполняют в присутствии IL2, IL7, IL15 или любой их комбинации.86. The method of claim 84 or 85, wherein the culture is performed in the presence of IL2, IL7, IL15, or any combination thereof.
87. Способ по п.84 или 85, где культивирование выполняют в присутствии IL7 и IL15.87. The method of claim 84 or 85, wherein the culture is performed in the presence of IL7 and IL15.
88. Способ по любому из пп.48-87, дополнительно включающий модификацию гена для увеличения персистирования клетки и/или усиления дифференцировки в клетку памяти.88. The method of any one of claims 48-87, further comprising modifying the gene to increase cell persistence and/or enhance memory cell differentiation.
89. Способ по любому из пп.48-88, где клетка является первичной клеткой.89. The method according to any one of claims 48-88, wherein the cell is a primary cell.
90. Способ по любому из пп.48-88, где клетка является клеткой, полученной от пациента.90. The method according to any one of claims 48-88, wherein the cell is a cell obtained from a patient.
91. Способ по любому из пп.48-88, где клетка представляет собой лимфоцит.91. The method according to any one of claims 48-88, wherein the cell is a lymphocyte.
92. Способ по любому из пп.48-88, где клетка представляет собой Т-клетку.92. The method of any one of claims 48-88, wherein the cell is a T cell.
93. Способ по любому из пп.48-88, где клетка является молодой Т-клеткой.93. The method of any one of claims 48-88, wherein the cell is a young T cell.
94. Способ по п.93, где клетка является CD45RA+, CD62L+, CD28+, CD95-, CCR7+ и CD27+.94. The method of claim 93 wherein the cell is CD45RA+, CD62L+, CD28+, CD95-, CCR7+ and CD27+.
95. Способ по п.93, где клетка является CD45RA+, CD62L+, CD28+, CD95+, CD27+, CCR7+.95. The method of claim 93, wherein the cell is CD45RA+, CD62L+, CD28+, CD95+, CD27+, CCR7+.
96. Способ по п.93, где клетка является CD45RO+, CD62L+, CD28+, CD95+, CCR7+, CD27+, CD127+.96. The method of claim 93, wherein the cell is CD45RO+, CD62L+, CD28+, CD95+, CCR7+, CD27+, CD127+.
97. Способ по любому из пп.48-96, где цитотоксическая активность клетки увеличена от примерно 10% до примерно 500% по сравнению с цитотоксической активностью клетки, которая не имеет последовательности гена CD8.97. The method of any one of claims 48-96, wherein the cytotoxic activity of the cell is increased from about 10% to about 500% compared to the cytotoxic activity of a cell that lacks the CD8 gene sequence.
98. Способ по любому из пп.48-97, где пролиферация клетки при связывании TCR с антигеном увеличивается от примерно 10% до примерно 500% по сравнению с пролиферацией клетки, которая не имеет последовательности гена CD8.98. The method of any one of claims 48-97, wherein cell proliferation upon binding of the TCR to the antigen is increased from about 10% to about 500% compared to cell proliferation that lacks the CD8 gene sequence.
99. Способ по любому из пп.48-98, где секреция провоспалительного цитокина клеткой при связывании TCR с антигеном увеличивается от примерно 10% до примерно 500% по сравнению с секрецией клеткой, которая не имеют последовательности гена CD8.99. The method of any one of claims 48-98, wherein secretion of a pro-inflammatory cytokine by the cell upon binding of the TCR to the antigen is increased from about 10% to about 500% compared to secretion by a cell that lacks a CD8 gene sequence.
100. Способ по любому из пп.48-99, где аффинность клетки к LCK увеличена от примерно 10% до примерно 500% по сравнению с аффинностью к LCK у клетки, не имеющей последовательности гена CD8.100. The method of any one of claims 48-99, wherein the cell's affinity for LCK is increased from about 10% to about 500% compared to the affinity for LCK in a cell lacking a CD8 gene sequence.
101. Способ по любому из пп.48-100, где персистирование клетки увеличено от примерно 10% до примерно 500% по сравнению с персистированием клетки, которая не имеет последовательности гена CD8.101. The method of any one of claims 48-100, wherein the persistence of the cell is increased from about 10% to about 500% compared to the persistence of a cell that lacks a CD8 gene sequence.
102. Способ по любому из пп.48-101, где способность клетки к инфильтрации в опухоль увеличена от примерно 10% до примерно 500% по сравнению со способностью к инфильтрации в опухоль клетки, которая не имеет последовательности гена CD8.102. The method of any one of claims 48-101, wherein the ability of the cell to infiltrate into the tumor is increased from about 10% to about 500% compared to the ability to infiltrate into the tumor of a cell that lacks a CD8 gene sequence.
103. Способ по любому из пп.48-102, где ген TCR кодирует CD8-зависимый TCR.103. The method of any one of claims 48-102, wherein the TCR gene encodes a CD8-dependent TCR.
104. Способ по любому из пп.48-102, где ген TCR кодирует CD8-независимый TCR.104. The method of any one of claims 48-102, wherein the TCR gene encodes a CD8-independent TCR.
105. Способ по любому из пп.48-104, где последовательность гена CD8 кодируется конструкцией 1 CD8, конструкцией 2 CD8, конструкцией 3 CD8 или конструкцией 4 CD8.105. The method of any one of claims 48-104, wherein the CD8 gene sequence is encoded by CD8 construct 1, CD8 construct 2, CD8 construct 3, or CD8 construct 4.
106. Способ по любому из пп.48-104, где последовательность гена CD8 содержит106. The method according to any one of claims 48-104, wherein the CD8 gene sequence contains
а. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8α;A. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain and CD8α intracellular domain;
b. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α, внутриклеточный домен CD8α, внеклеточный домен CD8β, трансмембранный домен CD8β и внутриклеточный домен CD8β;b. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, CD8α intracellular domain, CD8β extracellular domain, CD8β transmembrane domain, and CD8β intracellular domain;
c. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8β; илиc. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain and CD8β intracellular domain; or
d. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α, внутриклеточный домен CD4.d. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, CD4 intracellular domain.
1107. Способ по любому из пп.48-104, где последовательность гена CD8 содержит1107. The method according to any one of claims 48-104, wherein the CD8 gene sequence contains
а. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142);A. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141) and CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142);
b. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141), внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142), сигнальный пептид CD8β (SEQ ID NO: 144), внеклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 145), трансмембранный домен CD8β (SEQ ID NO: 146) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147);b. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142), CD8β signal peptide (SEQ ID NO: 144), CD8β extracellular domain (SEQ ID NO: 145), CD8β transmembrane domain (SEQ ID NO: 146), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147);
c. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147); илиc. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147); or
d. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD4 (SEQ ID NO: 148).d. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD4 intracellular domain (SEQ ID NO: 148).
108. Клетка, модифицированная способом по любому из пп.48-107.108. A cell modified by the method of any one of claims 48-107.
109. Композиция, содержащая эффективное количество клетки по любому из пп.1-47 или клетки по п.108.109. A composition containing an effective amount of a cell according to any one of claims 1 to 47 or a cell according to claim 108.
110. Композиция по п.109, представляющая собой фармацевтическую композицию, которая дополнительно содержит фармацевтически приемлемый наполнитель.110. The composition according to item 109, which is a pharmaceutical composition, which additionally contains a pharmaceutically acceptable excipient.
111. Композиция по п.109 или 110, которую вводят нуждающемуся в этом пациенту для лечения рака.111. A composition according to claim 109 or 110, which is administered to a patient in need thereof for the treatment of cancer.
112. Композиция по любому из пп.109-111, содержащая агент криоконсервации.112. A composition according to any one of claims 109-111 containing a cryopreservation agent.
113. Композиция по любому из пп.109-112, содержащая сывороточный альбумин.113. A composition according to any one of claims 109-112 containing serum albumin.
114. Композиция по любому из пп.109-113, содержащая Plasma-Lyte A, HSA и CryoStor CS10.114. Composition according to any one of claims 109-113, containing Plasma-Lyte A, HSA and CryoStor CS10.
115. Способ лечения рака у нуждающегося в этом пациента, включающий введение терапевтически эффективного количества клетки по любому из пп.1-47, клетки по п.108 или композиции по любому из пп.109-114.115. A method of treating cancer in a patient in need thereof, comprising administering a therapeutically effective amount of a cell according to any one of claims 1-47, a cell according to claim 108, or a composition according to any one of claims 109-114.
116. Способ по п.115, в котором перед введением терапевтически эффективного количества клеток пациент получает немиелоаблативный режим лимфодеплеции.116. The method of claim 115, wherein the patient receives a non-myeloablative lymphodepletion regimen prior to administration of a therapeutically effective amount of cells.
117. Способ по п.115 или 116, где рак представляет собой солидную опухоль.117. The method of claim 115 or 116 wherein the cancer is a solid tumor.
118. Способ по п.115 или 116, где рак представляет собой гемобластоз.118. The method of claim 115 or 116 wherein the cancer is hemoblastosis.
119. Способ по п.117, где солидную опухоль выбирают из группы, состоящей из меланомы, рака грудной клетки, рака легких, рака яичников, рака груди, рака поджелудочной железы, рака головы и шеи, рака простаты, гинекологического рака, рака центральной нервной системы, рака кожи, HPV+ рака, рака пищевода, рака щитовидной железы, рака желудка, гепатоцеллюлярного рака, холангиокарциномы, рака почечных клеток, рака яичек, саркомы и рака прямой кишки.119. The method of claim 117, wherein the solid tumor is selected from the group consisting of melanoma, chest cancer, lung cancer, ovarian cancer, breast cancer, pancreatic cancer, head and neck cancer, prostate cancer, gynecological cancer, central nervous system cancer. system, skin cancer, HPV+ cancer, esophageal cancer, thyroid cancer, gastric cancer, hepatocellular cancer, cholangiocarcinoma, kidney cell cancer, testicular cancer, sarcoma, and rectal cancer.
120. Способ по п.118, где гемобластоз выбирают из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы, лейкемии и множественной миеломы.120. The method of claim 118, wherein the hemoblastosis is selected from the group consisting of follicular lymphoma, leukemia, and multiple myeloma.
121. Набор, содержащий клетку по любому из пп.1-47, реагенты для выполнения способа по любому из пп.48-107, клетку по п.108 или композицию по любому из пп.109-114.121. A kit containing a cage according to any one of claims 1-47, reagents for performing the method according to any one of claims 48-107, a cage according to claim 108, or a composition according to any one of claims 109-114.
122. Набор по п.121, дополнительно содержащий письменные инструкции по лечению рака.122. The kit of claim 121, further comprising written instructions for treating cancer.
123. Клетка, содержащая123. Cell containing
а. экзогенный Т-клеточный рецептор (TCR); A. exogenous T cell receptor (TCR);
b. экзогенный CD8, содержащий:b. exogenous CD8 containing:
i. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α, внутриклеточный домен CD8α;i. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, CD8α intracellular domain;
ii. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α, внутриклеточный домен CD8α, внеклеточный домен CD8β, трансмембранный домен CD8β и внутриклеточный домен CD8β;ii. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, CD8α intracellular domain, CD8β extracellular domain, CD8β transmembrane domain, and CD8β intracellular domain;
iii. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8β; илиiii. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain and CD8β intracellular domain; or
iv. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD4.iv. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, and CD4 intracellular domain.
124. Клетка, содержащая124. Cell containing
а. экзогенный Т-клеточный рецептор (TCR); A. exogenous T cell receptor (TCR);
b. экзогенный CD8, содержащийb. exogenous CD8 containing
i. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142);i. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141) and CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142);
ii. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141), внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142), сигнальный пептид CD8β (SEQ ID NO: 144), внеклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 145), трансмембранный домен CD8β (SEQ ID NO: 146) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147);ii. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142), CD8β signal peptide (SEQ ID NO: 144), CD8β extracellular domain (SEQ ID NO: 145), CD8β transmembrane domain (SEQ ID NO: 146), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147);
iii. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147); илиiii. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147); or
iv. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD4 (SEQ ID NO: 148).iv. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD4 intracellular domain (SEQ ID NO: 148).
125. Способ модификации клетки, включающий125. Cell modification method, including
а. введение в клетку последовательности нуклеиновой кислоты-матрицы для гомологичной рекомбинации (HR), где матрица для HR содержитA. introduction into the cell of a homologous recombination (HR) template nucleic acid sequence, where the HR template contains
i. первое и второе плечи гомологии, гомологичные первой и второй целевым последовательностям нуклеиновой кислоты;i. first and second homology arms homologous to the first and second target nucleic acid sequences;
ii. последовательность гена TCR, расположенную между первым и вторым плечами гомологии;ii. the TCR gene sequence located between the first and second homology arms;
iii. последовательность гена CD8, расположенную между первым и вторым плечами гомологии; iii. the CD8 gene sequence located between the first and second homology arms;
b. рекомбинацию нуклеиновой кислоты-матрицы для HR в эндогенном локусе клетки,b. recombination of nucleic acid template for HR in the endogenous locus of the cell,
где последовательность гена CD8 содержитwhere the CD8 gene sequence contains
i. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8α;i. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain and CD8α intracellular domain;
ii. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α, внутриклеточный домен CD8α, внеклеточный домен CD8β, трансмембранный домен CD8β и внутриклеточный домен CD8β;ii. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, CD8α intracellular domain, CD8β extracellular domain, CD8β transmembrane domain, and CD8β intracellular domain;
iii. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α, внутриклеточный домен CD8β; илиiii. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, CD8β intracellular domain; or
iv. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD4.iv. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, and CD4 intracellular domain.
126. Способ модификации клетки, включающий126. Cell modification method, including
а. введение в клетку последовательности нуклеиновой кислоты-матрицы для гомологичной рекомбинации (HR), где матрица для HR содержит:A. introduction into the cell of a homologous recombination (HR) template nucleic acid sequence, where the HR template contains:
i. первое и второе плечи гомологии, гомологичные первой и второй целевым последовательностям нуклеиновой кислоты;i. first and second homology arms homologous to the first and second target nucleic acid sequences;
ii. последовательность гена TCR, расположенную между первым и вторым плечами гомологии;ii. the TCR gene sequence located between the first and second homology arms;
iii. последовательность гена CD8, расположенную между первым и вторым плечами гомологии; iii. the CD8 gene sequence located between the first and second homology arms;
b. рекомбинацию нуклеиновой кислоты-матрицы для HR в эндогенном локусе клетки,b. recombination of nucleic acid template for HR in the endogenous locus of the cell,
где последовательность гена CD8 содержитwhere the CD8 gene sequence contains
i. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142);i. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141) and CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142);
ii. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141), внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142), сигнальный пептид CD8β (SEQ ID NO: 144), внеклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 145), трансмембранный домен CD8β (SEQ ID NO: 146) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147);ii. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142), CD8β signal peptide (SEQ ID NO: 144), CD8β extracellular domain (SEQ ID NO: 145), CD8β transmembrane domain (SEQ ID NO: 146), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147);
iii. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147); илиiii. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147); or
iv. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD4 (SEQ ID NO: 148).iv. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD4 intracellular domain (SEQ ID NO: 148).
127. Композиция, содержащая клетку, где клетка содержит экзогенный Т-клеточный рецептор (TCR) и экзогенный CD8, причем экзогенный CD8 содержит127. Composition containing a cell, where the cell contains an exogenous T-cell receptor (TCR) and exogenous CD8, and exogenous CD8 contains
а. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8α;A. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain and CD8α intracellular domain;
b. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α, внутриклеточный домен CD8α, внеклеточный домен CD8β, трансмембранный домен CD8β и внутриклеточный домен CD8β,b. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, CD8α intracellular domain, CD8β extracellular domain, CD8β transmembrane domain and CD8β intracellular domain,
c. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8β; илиc. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain and CD8β intracellular domain; or
d. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD4.d. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, and CD4 intracellular domain.
128. Композиция, содержащая клетку, где клетка содержит экзогенный Т-клеточный рецептор (TCR) и экзогенный CD8, причем экзогенный CD8 содержит128. A composition containing a cell, where the cell contains an exogenous T-cell receptor (TCR) and exogenous CD8, and the exogenous CD8 contains
а. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142);A. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141) and CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142);
b. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141), внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142), сигнальный пептид CD8β (SEQ ID NO: 144), внеклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 145), трансмембранный домен CD8β (SEQ ID NO: 146) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147);b. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142), CD8β signal peptide (SEQ ID NO: 144), CD8β extracellular domain (SEQ ID NO: 145), CD8β transmembrane domain (SEQ ID NO: 146), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147);
c. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147); илиc. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147); or
d. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD4 (SEQ ID NO: 148).d. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD4 intracellular domain (SEQ ID NO: 148).
129. Способ лечения рака у нуждающегося в этом пациента, включающий введение терапевтически эффективного количества клетки, при этом клетка содержит экзогенный Т-клеточный рецептор (TCR) и экзогенный CD8, причем экзогенный CD8 содержит129. A method for treating cancer in a patient in need thereof, comprising administering a therapeutically effective amount of a cell, wherein the cell contains an exogenous T-cell receptor (TCR) and exogenous CD8, wherein the exogenous CD8 contains
а. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8α;A. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain and CD8α intracellular domain;
b. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α, внутриклеточный домен CD8α, внеклеточный домен CD8β, трансмембранный домен CD8β и внутриклеточный домен CD8β,b. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, CD8α intracellular domain, CD8β extracellular domain, CD8β transmembrane domain and CD8β intracellular domain,
c. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD8β; илиc. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain and CD8β intracellular domain; or
d. внеклеточный домен CD8α, трансмембранный домен CD8α и внутриклеточный домен CD4.d. CD8α extracellular domain, CD8α transmembrane domain, and CD4 intracellular domain.
130. Способ лечения рака у нуждающегося в этом пациента, включающий введение терапевтически эффективного количества клетки, где клетка содержит экзогенный Т-клеточный рецептор (TCR) и экзогенный CD8, причем экзогенный CD8 содержит130. A method of treating cancer in a patient in need thereof, comprising administering a therapeutically effective amount of a cell, wherein the cell contains an exogenous T-cell receptor (TCR) and exogenous CD8, wherein the exogenous CD8 contains
а. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142);A. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141) and CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142);
b. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141), внутриклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 142), сигнальный пептид CD8β (SEQ ID NO: 144), внеклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 145), трансмембранный домен CD8β (SEQ ID NO: 146) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147);b. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), CD8α intracellular domain (SEQ ID NO: 142), CD8β signal peptide (SEQ ID NO: 144), CD8β extracellular domain (SEQ ID NO: 145), CD8β transmembrane domain (SEQ ID NO: 146), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147);
c. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD8β (SEQ ID NO: 147); илиc. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD8β intracellular domain (SEQ ID NO: 147); or
d. сигнальный пептид CD8α (SEQ ID NO: 139), внеклеточный домен CD8α (SEQ ID NO: 140), трансмембранный домен CD8α (SEQ ID NO: 141) и внутриклеточный домен CD4 (SEQ ID NO: 148). d. CD8α signal peptide (SEQ ID NO: 139), CD8α extracellular domain (SEQ ID NO: 140), CD8α transmembrane domain (SEQ ID NO: 141), and CD4 intracellular domain (SEQ ID NO: 148).