Claims (33)
1. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая трансген, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей вариант белка фактора Н, имеющую аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на 70% идентичной аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3, функционально связанную с последовательностью Козак (SEQ ID NO: 19).1. An isolated nucleic acid containing a transgene containing a nucleic acid sequence encoding a factor H protein variant having an amino acid sequence that is at least 70% identical to the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3, operably linked to the Kozak sequence ( SEQ ID NO: 19).
2. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 1, в которой вариант белка фактора Н содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на 80%, 90%, 99% или 100% идентичной аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3, необязательно при этом вариант белка фактора Н состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3.2. The isolated nucleic acid of claim 1, wherein the factor H protein variant contains an amino acid sequence that is at least 80%, 90%, 99%, or 100% identical to the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3, optionally wherein the factor H protein variant consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3.
3. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 1 или п. 2, в которой последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей вариант белка фактора Н, является по меньшей мере на 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или 99,9% идентичной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4.3. The isolated nucleic acid according to claim 1 or claim 2, wherein the nucleic acid sequence encoding the factor H protein variant is at least 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, or 99 .9% identical to the sequence shown in SEQ ID NO: 4.
4. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-3, в которой трансген содержит промотор, функционально связанный с последовательностью нуклеиновой кислоты и/или последовательностью Козак.4. Selected nucleic acid according to any one of paragraphs. 1-3, wherein the transgene contains a promoter operably linked to a nucleic acid sequence and/or a Kozak sequence.
5. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 4, в которой промотор содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11 или 12.5. The isolated nucleic acid according to claim 4, wherein the promoter contains the sequence shown in SEQ ID NO: 11 or 12.
6. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 5, в которой промотор дополнительно содержит энхансерную последовательность, необязательно при этом энхансерная последовательность содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9 или 10.6. The isolated nucleic acid of claim 5, wherein the promoter further comprises an enhancer sequence, optionally the enhancer sequence comprising the sequence shown in SEQ ID NO: 9 or 10.
7. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 6, в которой промотор содержит последовательности, представленные в SEQ ID NO: 9 и 11.7. The isolated nucleic acid of claim 6, wherein the promoter contains the sequences shown in SEQ ID NOs: 9 and 11.
8. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 6, в которой промотор содержит последовательности, представленные в SEQ ID NO: 10 и 12.8. The isolated nucleic acid according to claim 6, wherein the promoter contains the sequences shown in SEQ ID NOs: 10 and 12.
9. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-8, в которой трансген содержит один или более интронов.9. Selected nucleic acid according to any one of paragraphs. 1-8, in which the transgene contains one or more introns.
10. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 9, в которой по меньшей мере один интрон расположен между промотором и нуклеотидной последовательностью, кодирующей вариант белка фактора Н.10. The isolated nucleic acid according to claim 9, wherein at least one intron is located between the promoter and the nucleotide sequence encoding the factor H protein variant.
11. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 9 или 10, в которой по меньшей мере один интрон содержит последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 13-15.11. An isolated nucleic acid according to claim 9 or 10, wherein at least one intron contains the sequence shown in any of SEQ ID NOs: 13-15.
12. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-11, в которой трансген содержит 3' нетранслируемую область (3'UTR).12. Selected nucleic acid according to any one of paragraphs. 1-11, in which the transgene contains a 3' untranslated region (3'UTR).
13. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 12, в которой 3'UTR содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 17 или 18.13. The isolated nucleic acid of claim 12, wherein the 3'UTR contains the sequence shown in SEQ ID NO: 17 or 18.
14. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-13, в которой трансген дополнительно содержит один или более сайтов связывания микроРНК.14. Selected nucleic acid according to any one of paragraphs. 1-13, in which the transgene additionally contains one or more microRNA binding sites.
15. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 14, в которой один или более сайтов связывания микроРНК расположены в 3'UTR трансгена.15. The isolated nucleic acid of claim 14, wherein one or more microRNA binding sites are located in the 3'UTR of the transgene.
16. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 14 или 15, в которой по меньшей мере один сайт связывания микроРНК представляет собой сайт связывания miR-122.16. The isolated nucleic acid of claim 14 or 15, wherein at least one miRNA binding site is miR-122 binding site.
17. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 14 или 15, в которой по меньшей мере один сайт связывания микроРНК представляет собой сайт связывания иммуноассоциированной микроРНК.17. An isolated nucleic acid according to claim 14 or 15, wherein at least one miRNA binding site is an immunoassociated miRNA binding site.
18. Выделенная нуклеиновая кислота по п. 17, в которой иммуноассоциированная микроРНК представляет собой miR-142, необязательно при этом один или более сайтов связывания содержат последовательность, представленную в SEQ ID NO: 16.18. An isolated nucleic acid according to claim 17, wherein the immunoassociated microRNA is miR-142, optionally one or more binding sites contain the sequence shown in SEQ ID NO: 16.
19. Выделенная нуклеиновая кислота по любому из пп. 1-18, в которой трансген фланкирован инвертированными концевыми повторами (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV).19. Selected nucleic acid according to any one of paragraphs. 1-18, in which the transgene is flanked by adeno-associated virus (AAV) inverted terminal repeats (ITR).
20. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 5-8.20. An isolated nucleic acid containing the sequence shown in any of SEQ ID NOs: 5-8.
21. Вектор, содержащий выделенную нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-20.21. The vector containing the selected nucleic acid according to any one of paragraphs. 1-20.
22. Вектор по п. 21, причем вектор представляет собой плазмиду или вирусный вектор.22. The vector of claim 21, wherein the vector is a plasmid or a viral vector.
23. Вектор по п. 22, причем вирусный вектор представляет собой аденовирусный вектор, аденоассоциированный вирусный вектор, лентивирусный вектор, ретровирусный вектор или бакуловирусный вектор.23. The vector of claim 22, wherein the viral vector is an adenoviral vector, an adeno-associated viral vector, a lentiviral vector, a retroviral vector, or a baculovirus vector.
24. Композиция, содержащая выделенную нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-20 или вектор по любому из пп. 21-23.24. Composition containing selected nucleic acid according to any one of paragraphs. 1-20 or a vector according to any one of paragraphs. 21-23.
25. Композиция по п. 24, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.25. Composition according to claim 24, additionally containing a pharmaceutically acceptable excipient.
26. Клетка-хозяин, содержащая выделенную нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-20 или вектор по любому из пп. 21-23.26. The host cell containing the selected nucleic acid according to any one of paragraphs. 1-20 or a vector according to any one of paragraphs. 21-23.
27. Клетка-хозяин по п. 26, причем клетка-хозяин представляет собой клетку млекопитающего, дрожжевую клетку, бактериальную клетку или клетку насекомого.27. A host cell according to claim 26, wherein the host cell is a mammalian cell, a yeast cell, a bacterial cell, or an insect cell.
28. Рекомбинантный аденоассоциированный вирус (rAAV), содержащий:28. Recombinant adeno-associated virus (rAAV) containing:
(i) выделенную нуклеиновую кислоту по любому из пп. 1-20; и(i) an isolated nucleic acid according to any one of paragraphs. 1-20; And
(ii) капсидный белок аденоассоциированного вируса (AAV).(ii) an adeno-associated virus (AAV) capsid protein.
29. rAAV по п. 28, в котором капсидный белок обладает тропизмом к мышечной ткани.29. The rAAV of claim 28, wherein the capsid protein has a tropism for muscle tissue.
30. rAAV по п. 28, в котором капсидный белок обладает тропизмом к ткани глаза.30. rAAV according to claim 28, wherein the capsid protein has a tropism for ocular tissue.
31. rAAV по любому из пп. 28-30, в котором капсидный белок относится к серотипу, выбранному из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9 и варианта любого из вышеперечисленных.31. rAAV according to any one of paragraphs. 28-30, wherein the capsid protein is of a serotype selected from AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, and a variant of any of the above.