Claims (19)
1. Способ ex vivo лечения бета-талассемии (β-талассемии) у субъекта, нуждающегося в этом, при этом указанный способ включает:1. An ex vivo method for treating beta-thalassemia (β-thalassemia) in a subject in need thereof, said method comprising:
введение указанному субъекту композиции, содержащей генетически модифицированную клетку и клетки, происходящие из нее, таким образом, чтобы выработка фетального гемоглобина (HbF) у указанного субъекта увеличивалась, и происходило уменьшение интенсивности, ослабление или устранение одного или более клинических симптомов β-талассемии, при этомadministering to said subject a composition comprising a genetically modified cell and cells derived therefrom such that fetal hemoglobin (HbF) production in said subject is increased and there is a reduction in intensity, amelioration or elimination of one or more clinical symptoms of β-thalassemia, wherein
указанная генетически модифицированная клетка содержит клетку-предшественник эритроцита (RBC), содержащую мРНК SB-mRENH1 и мРНК SB-mRENH2, при этом указанные мРНК кодируют пару ZFN; иsaid genetically modified cell comprises an erythrocyte progenitor cell (RBC) comprising SB-mRENH1 mRNA and SB-mRENH2 mRNA, said mRNAs encoding a ZFN pair; And
геномную модификацию, произведенную после расщепления парой ZFN, и при этом указанная модификация находится в эндогенной энхансерной последовательности BCL11A, так что ген BCL11A инактивирован в указанной клетке.a genomic modification made after cleavage with a ZFN pair, said modification being in the endogenous BCL11A enhancer sequence such that the BCL11A gene is inactivated in said cell.
2. Способ ex vivo по п.1, где β-талассемия представляет собой трансфузионно-зависимую β-талассемию.2. The ex vivo method of claim 1, wherein the β-thalassemia is transfusion dependent β-thalassemia.
3. Способ ex vivo по п.1 или 2, где у указанного субъекта достигается изменение фракций гемоглобина A и F по данным клинических лабораторных исследований относительно исходного уровня и/или процентной доли HbF от общего гемоглобина (Hb).3. An ex vivo method according to claim 1 or 2, wherein said subject achieves a change in hemoglobin A and F fractions according to clinical laboratory studies relative to baseline and/or percentage of HbF of total hemoglobin (Hb).
4. Способ ex vivo по любому из пп.1-3, где указанный субъект является β0/β0 или β0/β+.4. An ex vivo method according to any one of claims 1 to 3, wherein said subject is β 0 /β 0 or β 0 /β + .
5. Способ ex vivo по любому из пп. 1-4, где метаболизм железа и/или изменения уровней эритропоэтина, гаптоглобина и/или гепсидина изменены у указанного субъекта после лечения. 5. The ex vivo method according to any one of paragraphs. 1-4, wherein iron metabolism and/or changes in erythropoietin, haptoglobin and/or hepcidin levels are altered in said subject after treatment.
6. Способ ex vivo по любому из пп.1-5, где клинические симптомы, ассоциированные с перегрузкой железом или ассоциированные с базисной трансфузионной терапией, ослабляются или устраняются.6. An ex vivo method according to any one of claims 1 to 5, wherein the clinical symptoms associated with iron overload or associated with basic transfusion therapy are alleviated or eliminated.
7. Способ ex vivo по любому из пп.1-6, где указанные генетически модифицированные клетки представляют собой гемопоэтические стволовые клетки, выделенные из субъекта. 7. An ex vivo method according to any one of claims 1 to 6, wherein said genetically modified cells are hematopoietic stem cells isolated from a subject.
8. Способ ex vivo по п.7, где указанные гемопоэтические стволовые клетки представляют собой CD34+ гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники (HSC/PC), и при этом мобилизацию CD34+ HSC/PC у указанного субъекта обеспечивают посредством лечения с помощью одной или более доз G-CSF и/или одной или более доз плериксафора перед выделением.8. The ex vivo method according to claim 7, wherein said hematopoietic stem cells are CD34+ hematopoietic stem or progenitor cells (HSC/PC), and wherein CD34+ HSC/PC is mobilized in said subject by treatment with one or more doses of G-CSF and/or one or more doses of plerixaphor prior to isolation.
9. Способ ex vivo по п.8, где у указанного субъекта обеспечивают мобилизацию по меньшей мере 25 x 106 CD34+ HSPC/кг, и мобилизованные клетки собирают посредством одного или более циклов афереза.9. The ex vivo method of claim 8, wherein said subject is provided with a mobilization of at least 25 x 10 6 CD34+ HSPC/kg and the mobilized cells are harvested by one or more rounds of apheresis.
10. Способ ex vivo по любому из пп.1-9, дополнительно включающий введение указанному субъекту средства для миелоаблативного кондиционирования перед введением композиции, содержащей генетически модифицированные клетки.10. An ex vivo method according to any one of claims 1 to 9, further comprising administering to said subject a myeloablative conditioning agent prior to administering the composition comprising the genetically modified cells.
11. Способ ex vivo по любому из пп.1-10, где доза генетически модифицированных клеток, вводимая указанному субъекту, составляет от 3×106 клеток/кг до 20×106 клеток/кг. 11. An ex vivo method according to any one of claims 1 to 10, wherein the dose of genetically modified cells administered to said subject is from 3x10 6 cells/kg to 20x10 6 cells/kg.
12. Способ ex vivo по любому из пп.1-11, где указанные генетически модифицированные клетки, вводимые субъекту, составлены при приблизительно 1,0-2,0×108 клеток на мешок в концентрации приблизительно 1×107 клеток/мл.12. An ex vivo method according to any one of claims 1-11, wherein said genetically modified cells administered to the subject are formulated at about 1.0-2.0 x 10 8 cells per bag at a concentration of about 1 x 10 7 cells/ml.
13. Способ ex vivo по любому из пп.1-12, дополнительно включающий оценку уровней гемоглобина, нейтрофилов и/или тромбоцитов у указанного субъекта перед введением указанной композиции для определения исходных уровней гемоглобина у субъекта. 13. An ex vivo method according to any one of claims 1 to 12, further comprising assessing the levels of hemoglobin, neutrophils and/or platelets in said subject before administering said composition to determine baseline hemoglobin levels in the subject.
14. Способ ex vivo по п.13, где уровни гемоглобина, нейтрофилов и/или тромбоцитов у указанного субъекта после введения генетически модифицированных клеток увеличиваются или остаются стабильными по сравнению с исходными уровнями.14. The ex vivo method according to claim 13, wherein the levels of hemoglobin, neutrophils and/or platelets in said subject after administration of the genetically modified cells increase or remain stable compared to baseline levels.
15. Способ ex vivo по любому из пп.1-14, где указанный субъект получает одну или более трансфузий эритроцитарной массы (PRBC) до и/или после введения указанной композиции.15. An ex vivo method according to any one of claims 1-14, wherein said subject receives one or more red blood cell (PRBC) transfusions before and/or after administration of said composition.
16. Способ ex vivo по любому из пп.1-15, где потребность указанного субъекта в дополнительных видах терапии, таких как трансплантация костного мозга, трансфузии компонентов крови и/или PRBC с терапией хелаторами железа, снижается или устраняется.16. An ex vivo method according to any one of claims 1 to 15, wherein said subject's need for additional therapies, such as bone marrow transplantation, transfusion of blood components, and/or PRBC with iron chelator therapy, is reduced or eliminated.