Claims (84)
1. Антигенсвязывающая молекула, имеющая значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4), определяемое как отношение KD для антигена при рН 5,8 и KD для антигена при рН 7,4, составляющее 2 или выше.1. An antigen-binding molecule having a KD (pH 5.8) / KD (pH 7.4) value, defined as the ratio of KD for antigen at pH 5.8 and KD for antigen at pH 7.4 of 2 or higher.
2. Антигенсвязывающая молекула по п. 1, в которой значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4) составляет 10 или выше.2. The antigen binding molecule according to claim 1, wherein the KD (pH 5.8)/KD (pH 7.4) value is 10 or higher.
3. Антигенсвязывающая молекула по п. 1, в которой значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4) составляет 40 или выше.3. The antigen binding molecule according to claim 1, wherein the KD (pH 5.8)/KD (pH 7.4) value is 40 or higher.
4. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1-3, в которой по меньшей мере одна аминокислота антигенсвязывающей молекулы заменена гистидином или по меньшей мере один гистидин вставлен в антигенсвязывающую молекулу.4. Antigen-binding molecule according to one of paragraphs. 1-3, in which at least one amino acid of the antigen-binding molecule is replaced by histidine or at least one histidine is inserted into the antigen-binding molecule.
5. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1-4, в которой антигенсвязывающая молекула обладает антагонистической активностью.5. Antigen-binding molecule according to one of paragraphs. 1-4, in which the antigen-binding molecule has antagonistic activity.
6. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1-5, в которой антигенсвязывающая молекула связывается с мембранным антигеном или растворимым антигеном.6. Antigen-binding molecule according to one of paragraphs. 1-5, wherein the antigen-binding molecule binds to a membrane antigen or soluble antigen.
7. Антигенсвязывающая молекула по одному из пп. 1-6, в которой антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.7. Antigen-binding molecule according to one of paragraphs. 1-6, wherein the antigen-binding molecule is an antibody.
8. Фармацевтическая композиция, содержащая антигенсвязывающую молекулу по одному из пп. 1-7.8. Pharmaceutical composition containing antigennegative molecule according to one of paragraphs. 1-7.
9. Способ улучшения фармакокинетики антигенсвязывающей молекулы путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.9. A method for improving the pharmacokinetics of an antigen-binding molecule by reducing the antigen-binding activity of an antigen-binding molecule at pH 5.8 compared to pH 7.4.
10. Способ увеличения количества связываний антигена антигенсвязывающей молекулой путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.10. A method for increasing the number of antigen bindings of an antigen-binding molecule by reducing the antigen-binding activity of the antigen-binding molecule at pH 5.8 compared to pH 7.4.
11. Способ увеличения количества антигенов, которые могут связываться антигенсвязывающей молекулой, путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.11. A method for increasing the amount of antigens that can be bound by an antigen-binding molecule by reducing the antigen-binding activity of the antigen-binding molecule at pH 5.8 compared to pH 7.4.
12. Способ диссоциации внутри клетки антигена от внеклеточно связанной антигенсвязывающей молекулы путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.12. A method for intracellular dissociation of an antigen from an extracellularly bound antigen-binding molecule by reducing the antigen-binding activity of the antigen-binding molecule at pH 5.8 compared to pH 7.4.
13. Способ высвобождения антигенсвязывающей молекулы, которая была связана с антигеном и интернализована в клетку, в форму свободную от антигена за пределами клетки путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.13. A method of releasing an antigen-binding molecule that has been bound to an antigen and internalized into a cell into an antigen-free form outside the cell by reducing the antigen-binding activity of the antigen-binding molecule at pH 5.8 compared to pH 7.4.
14. Способ увеличения способности антигенсвязывающей молекулы элиминировать антиген из плазмы путем снижения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН 5,8 по сравнению с рН 7,4.14. A method for increasing the ability of an antigen-binding molecule to eliminate antigen from plasma by reducing the antigen-binding activity of the antigen-binding molecule at pH 5.8 compared to pH 7.4.
15. Способ по одному из пп. 9-14, в котором значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4), определяемое как отношение KD для антигена при рН 5,8 и KD для антигена при рН 7,4, составляет 2 или выше.15. The method according to one of paragraphs. 9-14, in which the value of KD (pH 5.8) / KD (pH 7.4), defined as the ratio of KD for antigen at pH 5.8 and KD for antigen at pH 7.4, is 2 or higher.
16. Способ по одному из пп. 9-14, в котором значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4) составляет 10 или выше.16. The method according to one of paragraphs. 9-14, in which the value of KD (pH 5.8) / KD (pH 7.4) is 10 or higher.
17. Способ по одному из пп. 9-14, в котором значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4) составляет 40 или выше.17. The method according to one of paragraphs. 9-14, in which the value of KD (pH 5.8) / KD (pH 7.4) is 40 or higher.
18. Способ улучшения фармакокинетики антигенсвязывающей молекулы путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.18. A method for improving the pharmacokinetics of an antigen-binding molecule by replacing at least one amino acid of an antigen-binding molecule with histidine or inserting at least one histidine into an antigen-binding molecule.
19. Способ увеличения количества связываний антигена антигенсвязывающей молекулой путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.19. A method of increasing the number of antigen bindings of an antigen binding molecule by replacing at least one amino acid of the antigen binding molecule with histidine or by inserting at least one histidine into the antigen binding molecule.
20. Способ увеличения количества антигенов, которые могут быть связаны антигенсвязывающей молекулой, путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.20. A method for increasing the number of antigens that can be bound by an antigen-binding molecule by replacing at least one amino acid of the antigen-binding molecule with histidine or by inserting at least one histidine into the antigen-binding molecule.
21. Способ диссоциации внутри клетки антигена от внеклеточно связанной антигенсвязывающей молекулы путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.21. A method for intracellular dissociation of an antigen from an extracellularly bound antigen binding molecule by replacing at least one amino acid of the antigen binding molecule with histidine or inserting at least one histidine into the antigen binding molecule.
22. Способ высвобождения антигенсвязывающей молекулы, которая была связана с антигеном и интернализована в клетку, в форму свободную от антигена за пределами клетки, путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином, или вставка по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.22. A method of releasing an antigen-binding molecule that has been bound to an antigen and internalized into a cell to an antigen-free form outside the cell by replacing at least one amino acid of the antigen-binding molecule with histidine, or by inserting at least one histidine into the antigen-binding molecule.
23. Способ увеличения способности антигенсвязывающей молекулы элиминировать антиген из плазмы путем замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.23. A method for increasing the ability of an antigen-binding molecule to eliminate an antigen from plasma by replacing at least one amino acid of the antigen-binding molecule with histidine or inserting at least one histidine into the antigen-binding molecule.
24. Способ по одному из пп. 18-23, в котором замена или вставка гистидина увеличивает значение KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4), определяемое как соотношение антигенсвязывающей активности при рН 5,8 и антигенсвязывающая активность при рН 7,4, по сравнению со значением KD (рН 5,8) / KD (рН 7,4) до замены или вставки гистидина.24. The method according to one of paragraphs. 18-23, in which the replacement or insertion of histidine increases the value of KD (pH 5.8) / KD (pH 7.4), defined as the ratio of antigen-binding activity at pH 5.8 and antigen-binding activity at pH 7.4, compared with KD (pH 5.8) / KD (pH 7.4) value prior to replacement or insertion of histidine.
25. Способ по одному из пп. 9-24, в котором антигенсвязывающая молекула обладает антагонистической активностью.25. The method according to one of paragraphs. 9-24, wherein the antigen-binding molecule has antagonistic activity.
26. Способ по одному из пп. 9-25, в котором антигенсвязывающая молекула связывается с мембранным антигеном или растворимым антигеном.26. The method according to one of paragraphs. 9-25, wherein the antigen-binding molecule binds to a membrane antigen or soluble antigen.
27. Способ по одному из пп. 9-26, в котором антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.27. The method according to one of paragraphs. 9-26, wherein the antigen binding molecule is an antibody.
28. Способ скрининга антигенсвязывающей молекулы, который включает следующие стадии:28. A method for screening an antigen-binding molecule, which includes the following steps:
(a) определения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН от 6,7 до рН 10,0;(a) determining the antigen-binding activity of the antigen-binding molecule at pH 6.7 to pH 10.0;
(b) определения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН от 4,0 до рН 6,5; и(b) determining the antigen-binding activity of the antigen-binding molecule at pH 4.0 to pH 6.5; And
(c) отбора антигенсвязывающей молекулы, антигенсвязывающая активность которой при рН от 6,7 до рН 10,0 превышает антигенсвязывающую активность при рН от 4,0 до рН 6,5.(c) selecting an antigen-binding molecule whose antigen-binding activity at pH 6.7 to pH 10.0 exceeds antigen-binding activity at pH 4.0 to pH 6.5.
29. Способ скрининга по п. 28, который включает стадию отбора антитела, антигенсвязывающая активность которого при рН от 6,7 до рН 10,0 вдвое или выше, чем антигенсвязывающая активность при рН от 4,0 до рН 6,5.29. The screening method of claim 28, which comprises the step of selecting an antibody whose antigen-binding activity at pH 6.7 to pH 10.0 is twice or greater than the antigen-binding activity at pH 4.0 to pH 6.5.
30. Способ скрининга антигенсвязывающей молекулы, который включает следующие стадии:30. A method for screening an antigen-binding molecule, which includes the following steps:
(a) связывания антигенсвязывающей молекулы с антигеном в условиях от рН 6,7 до рН 10,0;(a) binding the antigen-binding molecule to an antigen under conditions of pH 6.7 to pH 10.0;
(b) помещения антигенсвязывающей молекулы, которая связана с антигеном из (а), в условия от рН 4,0 до рН 5,5; и(b) placing the antigen-binding molecule that is associated with the antigen of (a) under conditions of pH 4.0 to pH 5.5; And
(c) получения антигенсвязывающей молекулы, которая диссоциирует в условиях от рН 4,0 до рН 6,5.(c) obtaining an antigen-binding molecule that dissociates under conditions of pH 4.0 to pH 6.5.
31. Способ скрининга антигенсвязывающей молекулы, связывающая активность которой при первом рН больше, чем при втором рН, который включает стадии:31. A method for screening an antigen-binding molecule whose binding activity at a first pH is greater than at a second pH, which includes the steps of:
(a) связывания антигенсвязывающей молекулы с иммобилизованным антигеном на колонке в условиях первого рН;(a) binding the antigen-binding molecule to the immobilized antigen on the column under first pH conditions;
(b) элюирования антигенсвязывающей молекулы, которая связалась на колонке, при первом рН с колонки в условиях второго рН; ип(b) eluting the antigen-binding molecule that has bound to the column at a first pH from the column under second pH conditions; un
(c) сбора элюированной антигенсвязывающей молекулы.(c) collecting the eluted antigen-binding molecule.
32. Способ скрининга антигенсвязывающей молекулы, связывающая активность которой при первом рН выше, чем при втором рН, который включает стадии:32. A method for screening an antigen-binding molecule whose binding activity at a first pH is higher than at a second pH, which includes the steps of:
(a) связывания библиотеки антигенсвязывающих молекул с иммобилизованным антигеном на колонке в условиях первого рН;(a) linking the library of antigen-binding molecules to the immobilized antigen on the column under first pH conditions;
(b) элюирования антигенсвязывающей молекулы с колонки в условиях второго рН;(b) eluting the antigen-binding molecule from the column under second pH conditions;
(c) амплификации гена, кодирующего элюированную антигенсвязывающую молекулу; и(c) amplifying the gene encoding the eluted antigen-binding molecule; And
(d) получения элюированной антигенсвязывающей молекулы.(d) obtaining an eluted antigen-binding molecule.
33. Способ скрининга по п. 31 или 32, в котором первый рН составляет от 6,7 до 10,0, а второй рН составляет от 4,0 до 6,5.33. The screening method according to claim 31 or 32, wherein the first pH is 6.7 to 10.0 and the second pH is 4.0 to 6.5.
34. Способ скрининга по одному из пп. 28-33, в котором по меньшей мере одна или несколько аминокислот антигенсвязывающей молекулы заменены гистидином или по меньшей мере один гистидин встроен в антигенсвязывающую молекулу.34. The method of screening according to one of paragraphs. 28-33, wherein at least one or more amino acids of the antigen-binding molecule are replaced with histidine or at least one histidine is inserted into the antigen-binding molecule.
35. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая лучше удерживается в плазме.35. The method of screening according to one of paragraphs. 28-33 to obtain an antigen-binding molecule that is better retained in plasma.
36. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая способна связываться с антигеном два или более раз.36. The method of screening according to one of paragraphs. 28-33 to provide an antigen-binding molecule that is capable of binding to an antigen two or more times.
37. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая способна связываться с большим количеством антигенов по сравнению с количеством ее антигенсвязывающих сайтов.37. The method of screening according to one of paragraphs. 28-33 to provide an antigen-binding molecule that is capable of binding to a large number of antigens relative to the number of its antigen-binding sites.
38. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая диссоциирует внеклеточно связанный антиген внутри клетки.38. The screening method according to one of paragraphs. 28-33 to provide an antigen-binding molecule that dissociates an extracellularly bound antigen within a cell.
39. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая связана с антигеном и интернализована в клетку, а высвобождается за пределами клетки в форме свободного антигена.39. The screening method according to one of paragraphs. 28-33 to provide an antigen-binding molecule that is bound to an antigen and internalized into a cell and released outside the cell as free antigen.
40. Способ скрининга по одному из пп. 28-33 для получения антигенсвязывающей молекулы, которая обладает повышенной способностью элиминировать антиген в плазме.40. The method of screening according to one of paragraphs. 28-33 to obtain an antigen-binding molecule that has an increased ability to eliminate antigen in plasma.
41. Способ скрининга по одному из пп. 28-40, в котором антигенсвязывающая молекула используется в качестве фармацевтической композиции.41. The screening method according to one of paragraphs. 28-40, in which the antigen-binding molecule is used as a pharmaceutical composition.
42. Способ скрининга по одному из пп. 28-41, в котором антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.42. The method of screening according to one of paragraphs. 28-41, wherein the antigen binding molecule is an antibody.
43. Способ получения антигенсвязывающей молекулы, который включает стадии:43. A method for producing an antigen-binding molecule, which includes the steps:
(a) определения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН от 6,7 до рН 10,0;(a) determining the antigen-binding activity of the antigen-binding molecule at pH 6.7 to pH 10.0;
(b) определения антигенсвязывающей активности антигенсвязывающей молекулы при рН от 4,0 до рН 6,5;(b) determining the antigen-binding activity of the antigen-binding molecule at pH 4.0 to pH 6.5;
(c) отбора антигенсвязывающей молекулы, антигенсвязывающая активность которой при рН от 6,7 до рН 10,0 выше, чем при рН от 4,0 до рН 6,5;(c) selecting an antigen-binding molecule whose antigen-binding activity is greater at pH 6.7 to pH 10.0 than at pH 4.0 to pH 6.5;
(d) получения гена, кодирующего антигенсвязывающую молекулу, отобранную в (с); (d) obtaining a gene encoding the antigen-binding molecule selected in (c);
(e) получения антигенсвязывающей молекулы с использованием гена, полученного в (d).(e) obtaining an antigen-binding molecule using the gene obtained in (d).
44. Способ получения антигенсвязывающей молекулы, который включает стадии:44. A method for producing an antigen-binding molecule, which includes the steps:
(a) связывания антигенсвязывающей молекулы с антигеном в условиях от рН 6,7 до рН 10,0;(a) binding the antigen-binding molecule to an antigen under conditions of pH 6.7 to pH 10.0;
(b) выдерживания антигенсвязывающей молекулы, связанной с антигеном из (а), в условиях от рН 4,0 до рН 6,5;(b) maintaining the antigen-binding molecule associated with the antigen of (a) under conditions of pH 4.0 to pH 6.5;
(c) сбора антигенсвязывающей молекулы, которая диссоциировала в условиях от рН 4,0 до рН 6,5;(c) collecting an antigen-binding molecule that has dissociated under conditions of pH 4.0 to pH 6.5;
(d) получения гена, кодирующего антигенсвязывающую молекулу, полученную в (с); (d) obtaining a gene encoding the antigen-binding molecule obtained in (c);
а также (e) получения антигенсвязывающей молекулы с использованием гена, полученного в (d).and (e) obtaining an antigen-binding molecule using the gene obtained in (d).
45. Способ получения антигенсвязывающей молекулы, связывающая активность которой при первом рН больше, чем при втором рН, который включает стадии:45. A method for producing an antigen-binding molecule, the binding activity of which at a first pH is greater than at a second pH, which includes the steps:
(a) связывания антигенсвязывающей молекулы с иммобилизованным антигеном на колонке при первом условии рН;(a) binding the antigen-binding molecule to the immobilized antigen on the column under a first pH condition;
(b) элюирования антигенсвязывающей молекулы, которая связана на колонке при первом рН, с колонки при втором условии рН;(b) eluting the antigen-binding molecule that is bound to the column at a first pH from the column at a second pH condition;
(c) сбора элюированной антигенсвязывающей молекулы;(c) collecting the eluted antigen-binding molecule;
(d) получения гена, кодирующего антигенсвязывающую молекулу, полученную в (с); и(d) obtaining a gene encoding the antigen-binding molecule obtained in (c); And
(e) получения антигенсвязывающей молекулы с использованием гена, полученного в (d).(e) obtaining an antigen-binding molecule using the gene obtained in (d).
46. Способ получения антигенсвязывающей молекулы, связывающая активность которой при первом рН выше, чем при втором рН, который включает стадии:46. A method for producing an antigen-binding molecule, the binding activity of which at a first pH is higher than at a second pH, which includes the steps:
(a) связывания библиотеки антигенсвязывающих молекул с иммобилизованным антигеном на колонке при первом условии рН;(a) linking the library of antigen-binding molecules to the immobilized antigen on the column under a first pH condition;
(b) элюирования антигенсвязывающей молекулы с колонки при втором условии рН;(b) eluting the antigen-binding molecule from the column under a second pH condition;
(c) амплификации гена, кодирующего элюированную антигенсвязывающую молекулу;(c) amplifying the gene encoding the eluted antigen-binding molecule;
(d) сбора элюированной антигенсвязывающей молекулы;(d) collecting the eluted antigen-binding molecule;
(e) получения гена, кодирующего антигенсвязывающую молекулу, собранную в (d); (e) obtaining a gene encoding the antigen-binding molecule assembled in (d);
(f) получения антигенсвязывающей молекулы с использованием гена, полученного в (е).(f) obtaining an antigen-binding molecule using the gene obtained in (e).
47. Способ получения по п. 45 или 46, в котором первый рН составляет от 6,7 до 10,0, а второй рН составляет от 4,0 до 6,5.47. The production method according to claim 45 or 46, wherein the first pH is from 6.7 to 10.0 and the second pH is from 4.0 to 6.5.
48. Способ получения по одному из пп. 43-47, который дополнительно включает стадию замены по меньшей мере одной аминокислоты антигенсвязывающей молекулы гистидином или вставки по меньшей мере одного гистидина в антигенсвязывающую молекулу.48. The method of obtaining according to one of paragraphs. 43-47, which further includes the step of replacing at least one amino acid of the antigen-binding molecule with histidine or inserting at least one histidine into the antigen-binding molecule.
49. Способ получения по одному из пп. 43-48, в котором антигенсвязывающая молекула представляет собой антитело.49. The method of obtaining according to one of paragraphs. 43-48, wherein the antigen binding molecule is an antibody.
50. Фармацевтическая композиция, содержащая антигенсвязывающую молекулу, полученную способом получения по одному из пп. 43-49.50. A pharmaceutical composition containing an antigen-binding molecule obtained by the method of obtaining according to one of paragraphs. 43-49.