Claims (66)
1. Невирусный бескапсидный ДНК-вектор с ковалентно замкнутыми концами (зкДНК-вектор), причем указанный зкДНК-вектор содержит по меньшей мере одну гетерологичную нуклеотидную последовательность, функционально расположенную между двумя фланкирующими последовательностями симметричных инвертированных концевых повторов (симметричных ITR), при этом указанные симметричные ITR не являются ITR дикого типа и каждый фланкирующий ITR содержит одинаковую симметричную модификацию.1. A non-viral capsid-free DNA vector with covalently closed ends (scDNA vector), wherein said scDNA vector contains at least one heterologous nucleotide sequence functionally located between two flanking sequences of symmetrical inverted terminal repeats (symmetrical ITRs), while these are symmetrical ITRs are not wild-type ITRs and each flanking ITR contains the same symmetrical modification.
2. ЗкДНК-вектор по п. 1, отличающийся тем, что указанные последовательности симметричных ITR являются синтетическими.2. ZcDNA vector according to claim 1, characterized in that said symmetrical ITR sequences are synthetic.
3. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что указанные ITR выбраны из любых перечисленных в таблице 4.3. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 1 and 2, characterized in that said ITRs are selected from any of those listed in Table 4.
4. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что каждый из указанных симметричных ITR модифицирован делецией, инсерцией и/или заменой по меньшей мере в одной из областей ITR выбранных из А, А', В, В', С, С', D и D'.4. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 1-3, characterized in that each of these symmetrical ITRs is modified by deletion, insertion and/or replacement in at least one of the ITR regions selected from A, A', B, B', C, C', D and D' .
5. ЗкДНК-вектор по п. 4, отличающийся тем, что указанная делеция, инсерция и/или замена приводит к делеции всей структуры «петля-на-стебле» или ее части, обычно образуемой областями А, А', В, В' С или С'.5. ZcDNA vector according to claim. 4, characterized in that the specified deletion, insertion and / or replacement leads to the deletion of the entire loop-on-stem structure or part of it, usually formed by regions A, A', B, B' C or C'.
6. ЗкДНК-вектор по п. 4 или 5, отличающийся тем, что симметричный ITR модифицирован делецией, инсерцией и/или заменой, которая приводит к делеции всей структуры «петля-на-стебле» или ее части, обычно образуемой областями В и В'.6. ZcDNA vector according to claim 4 or 5, characterized in that the symmetrical ITR is modified by a deletion, insertion and/or substitution, which leads to the deletion of all or part of the "loop-on-stem" structure, usually formed by regions B and B '.
7. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 4-6, отличающийся тем, что симметричный ITR модифицирован делецией, инсерцией и/или заменой, которая приводит к делеции всей структуры «петля-на-стебле» или ее части, обычно образуемой областями С и С'.7. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 4-6, characterized in that the symmetrical ITR is modified by a deletion, insertion and/or substitution that results in the deletion of all or part of the loop-on-stem structure, usually formed by the C and C' regions.
8. ЗкДНК-вектор по п. 6 или 7, отличающийся тем, что симметричный ITR модифицирован делецией, инсерцией и/или заменой, которая приводит к делеции части структуры «петля-на-стебле», обычно образуемой областями В и В', и/или части структуры «петля-на-стебле», обычно образуемой областями С и С.8. ZcDNA vector according to claim 6 or 7, characterized in that the symmetrical ITR is modified by a deletion, insertion and/or substitution that results in the deletion of a part of the loop-on-stem structure, usually formed by regions B and B', and /or parts of the "loop-on-stem" structure, usually formed by regions C and C.
9. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что симметричный ITR содержит единственную структуру «петля-на-стебле» в области, которая обычно содержит первую структуру «петля-на-стебле», образуемую областями В и В', и вторую структуру «петля-на-стебле», образуемую областями С и С'.9. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 1-8, characterized in that the symmetrical ITR contains a single loop-on-stem structure in a region that typically contains a first loop-on-stem structure formed by regions B and B' and a second loop-on-stem structure. -stem" formed by regions C and C'.
10. ЗкДНК-вектор по п. 9, отличающийся тем, что симметричный ITR содержит единственный стебель и две петли в области, которая обычно содержит первую структуру «петля-на-стебле», образуемую областями В и В', и вторую структуру «петля-на-стебле», образуемую областями С и С'.10. ZcDNA vector according to claim 9, characterized in that the symmetrical ITR contains a single stem and two loops in the region, which usually contains the first loop-on-stem structure formed by regions B and B', and the second loop structure -on-stem" formed by regions C and C'.
11. ЗкДНК-вектор по п. 9 или 10, отличающийся тем, что симметричный ITR содержит единственный стебель и единственную петлю в области, которая обычно содержит первую структуру «петля-на-стебле», образуемую областями В и В', и вторую структуру «петля-на-стебле», образуемую областями С и С'.11. ZcDNA vector according to claim 9 or 10, characterized in that the symmetrical ITR contains a single stem and a single loop in the region, which usually contains the first loop-on-stem structure formed by regions B and B', and the second structure "loop-on-stem", formed by regions C and C'.
12. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что указанные симметричные ITR представляют собой модифицированные AAV2ITR, содержащие последовательности нуклеотидов, выбранные из: ITR на фиг. 7А-22В или в таблице 4 в настоящем документе, и ITR последовательности которых по меньшей мере на 95% идентичны ITR приведенным в таблице 4 или представленным на фиг. 7А-22В.12. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 1-11, characterized in that said symmetrical ITRs are modified AAV2ITRs containing nucleotide sequences selected from: ITRs in FIG. 7A-22B or Table 4 herein, and whose ITR sequences are at least 95% identical to the ITRs shown in Table 4 or shown in FIG. 7A-22B.
13. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что вся гетерологичная нуклеотидная последовательность или ее часть находится под контролем по меньшей мере одного регуляторного переключателя.13. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 1-12, characterized in that the entire heterologous nucleotide sequence or part thereof is under the control of at least one regulatory switch.
14. Невирусный бескапсидный ДНК-вектор с ковалентно замкнутыми концами (зкДНК-вектор), причем указанный зкДНК-вектор содержит по меньшей мере одну гетерологичную нуклеотидную последовательность, функционально расположенную между двумя фланкирующие последовательностями инвертированных концевых повторов дикого типа (WT-ITR), при этом вся гетерологичная нуклеотидная последовательность или ее часть находится под контролем по меньшей мере одного регуляторного переключателя.14. Non-viral non-capsid DNA vector with covalently closed ends (scDNA vector), wherein said scDNA vector contains at least one heterologous nucleotide sequence functionally located between two flanking sequences of wild-type inverted terminal repeats (WT-ITR), while all or part of the heterologous nucleotide sequence is under the control of at least one regulatory switch.
15. ЗкДНК-вектор по п. 14, отличающийся тем, что указанные последовательности WT-ITR представляют собой симметричные последовательности WT-ITR или по существу симметричные последовательности WT-ITR.15. The zcDNA vector according to claim 14, wherein said WT-ITR sequences are symmetrical WT-ITR sequences or substantially symmetrical WT-ITR sequences.
16. ЗкДНК-вектор по п. 14 или 15, отличающийся тем, что указанные последовательности WT-ITR выбраны из любых комбинаций WT-ITR приведенных в таблице 1.16. ZcDNA vector according to claim 14 or 15, characterized in that said WT-ITR sequences are selected from any combination of WT-ITRs shown in Table 1.
17. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 14-16, отличающийся тем, что последовательность фланкирующего WT-ITR по меньшей мере на 95% идентична ITR, приведенным в таблице 1 или таблице 2, и все замены представляют собой консервативные замены нуклеиновых кислот, не влияющие на структуру WT-ITR.17. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 14-16, characterized in that the sequence of the flanking WT-ITR is at least 95% identical to the ITRs shown in Table 1 or Table 2, and all substitutions are conservative nucleic acid substitutions that do not affect the structure of the WT-ITR.
18. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 13-17, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один регуляторный переключатель выбран из любых регуляторных переключателей или из комбинации регуляторных переключателей, перечисленных в таблице 5, или в разделе с названием «Регуляторные переключатели» в настоящем документе.18. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 13-17, characterized in that said at least one control switch is selected from any of the control switches or from a combination of control switches listed in Table 5 or in the section titled "Regulator Switches" herein.
19. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что указанный зкДНК-вектор при расщеплении рестрикционным ферментом, имеющим единственный сайт распознавания на зкДНК-векторе, и анализе путем нативного и денатурирующего гель- электрофореза демонстрирует характерные полосы линейной и непрерывной ДНК по сравнению с контрольной линейной и прерывистой ДНК.19. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 1-18, characterized in that the specified scDNA vector, when cleaved with a restriction enzyme having a single recognition site on the scDNA vector, and analyzed by native and denaturing gel electrophoresis, demonstrates characteristic bands of linear and continuous DNA compared to control linear and discontinuous DNA .
20. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 1-19, отличающийся тем, что указанные последовательности ITR основаны на последовательностях из вируса, выбранного из парвовируса, депендовируса и аденоассоциированного вируса (AAV).20. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 1-19, characterized in that said ITR sequences are based on sequences from a virus selected from parvovirus, dependdovirus, and adeno-associated virus (AAV).
21. ЗкДНК-вектор по п. 20, отличающийся тем, что указанные ITR основаны на последовательностях из аденоассоциированного вируса (AAV).21. ZcDNA vector according to claim 20, characterized in that said ITRs are based on sequences from adeno-associated virus (AAV).
22. ЗкДНК-вектор по п. 21, отличающийся тем, что указанные ITR основаны на последовательностях из серотипа AAV, выбранного из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 и AAV12.22. The zcDNA vector according to claim 21, wherein said ITRs are based on sequences from an AAV serotype selected from AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 and AAV12.
23. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 1-22, отличающийся тем, что указанный вектор находится в наноносителе.23. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 1-22, characterized in that the specified vector is in the nanocarrier.
24. ЗкДНК-вектор по п. 23, отличающийся тем, что указанный наноноситель содержит липидную наночастицу (ЛНЧ).24. ZcDNA vector according to claim 23, characterized in that said nanocarrier contains a lipid nanoparticle (LNP).
25. ЗкДНК-вектор по любому из пп. 1-24, отличающийся тем, что указанный зкДНК-вектор получен способом, включающим следующие этапы: (а) инкубация популяции клеток насекомых, несущих экспрессионную конструкцию зкДНК в присутствии по меньшей мере одного белка Rep, при этом указанная экспрессионная конструкция зкДНК кодирует указанный зкДНК-вектор, в эффективных условиях и на протяжении времени, достаточного для индукции продуцирования зкДНК-вектора в клетках насекомых; и (b) выделение указанного зкДНК-вектора из клеток насекомых.25. ZcDNA vector according to any one of paragraphs. 1-24, characterized in that said scDNA vector is obtained by a method comprising the following steps: (a) incubation of a population of insect cells carrying the scDNA expression construct in the presence of at least one Rep protein, wherein said scDNA expression construct encodes the specified scDNA- a vector, under effective conditions and for a period of time sufficient to induce production of the scDNA vector in insect cells; and (b) isolating said ccDNA vector from insect cells.
26. ЗкДНК-вектор по п. 25, отличающийся тем, что указанная экспрессионная конструкция зкДНК выбрана из зкДНК-плазмиды, зкДНК-бакмиды и зкДНК-бакуловируса.26. ZcDNA vector according to claim 25, characterized in that said scDNA expression construct is selected from zcDNA plasmid, zcDNA bacmid, and zcDNA baculovirus.
27. ЗкДНК-вектор по п. 25 или 26, отличающийся тем, что указанная клетка насекомого экспрессирует по меньшей мере один белок Rep.27. ZcDNA vector according to claim 25 or 26, characterized in that said insect cell expresses at least one Rep protein.
28. ЗкДНК-вектор по п. 27, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один белок Rep взят из вируса, выбранного из парвовируса, депендовируса и аденоассоциированного вируса (AAV).28. ZcDNA vector according to claim 27, characterized in that said at least one Rep protein is taken from a virus selected from parvovirus, dependdovirus and adeno-associated virus (AAV).
29. ЗкДНК-вектор по п. 28, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один белок Rep взят из серотипа AAV, выбранного из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 и AAV12.29. ZcDNA vector according to claim 28, characterized in that said at least one Rep protein is taken from an AAV serotype selected from AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 and AAV12.
30. Экспрессионная конструкция зкДНК, которая кодирует зкДНК-вектор по любому из пп. 1-29.30. Expression design zkDNA, which encodes zkDNA vector according to any one of paragraphs. 1-29.
31. Экспрессионная конструкция зкДНК по п. 30, которая представляет собой зкДНК-плазмиду, зкДНК-бакмиду или зкДНК бакуловирус.31. The scDNA expression construct according to claim 30, which is a scDNA plasmid, scDNA bacmid, or scDNA baculovirus.
32. Клетка-хозяин, содержащая экспрессионную конструкцию зкДНК по п. 30 или 31.32. Host cell containing the scDNA expression construct according to claim 30 or 31.
33. Клетка-хозяин по п. 32, которая экспрессирует по меньшей мере один белок Rep.33. A host cell according to claim 32 that expresses at least one Rep protein.
34. Клетка-хозяин по п. 33, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один белок Rep взят из вируса, выбранного из парвовируса, депендовируса и аденоассоциированного вируса (AAV).34. The host cell of claim 33, wherein said at least one Rep protein is from a virus selected from parvovirus, dependdovirus, and adeno-associated virus (AAV).
35. Клетка-хозяин по п. 34, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один белок Rep взят из серотипа AAV, выбранного из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 и AAV12.35. The host cell according to claim 34, characterized in that said at least one Rep protein is taken from an AAV serotype selected from AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 and AAV12.
36. Клетка-хозяин по любому из пп. 32-35, которая представляет собой клетку насекомого.36. The host cell according to any one of paragraphs. 32-35, which is an insect cell.
37. Клетка-хозяин по п. 36, отличающаяся тем, что указанная клетка насекомого представляет собой клетку Sf9.37. A host cell according to claim 36, wherein said insect cell is an Sf9 cell.
38. Способ получения зкДНК-вектора, включающий (а) инкубацию клетки-хозяина по любому из пп. 32-37 в эффективных условиях и на протяжении времени, достаточного для индукции продуцирования зкДНК-вектора; и (b) выделение указанной зкДНК из клеток-хозяев.38. The method of obtaining zkDNA vector, including (a) incubation of the host cell according to any one of paragraphs. 32-37 under effective conditions and for a period of time sufficient to induce production of the scDNA vector; and (b) isolating said ccDNA from host cells.
39. Способ лечения, предотвращения, облегчения, мониторинга или диагностики заболевания или расстройства у субъекта, при этом указанный способ включает: введение нуждающемуся в этом субъекту композиции, содержащей зкДНК-вектор по любому из пп. 1-29, причем указанная по меньшей мере одна гетерологичная нуклеотидная последовательность выбрана для лечения, предотвращения, облегчения, диагностики или мониторинга заболевания или расстройства.39. A method of treating, preventing, alleviating, monitoring or diagnosing a disease or disorder in a subject, said method comprising: administering to a subject in need thereof a composition containing an scDNA vector according to any one of paragraphs. 1-29, wherein said at least one heterologous nucleotide sequence is selected to treat, prevent, alleviate, diagnose, or monitor a disease or disorder.
40. Способ по п. 39, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна гетерологичная нуклеотидная последовательность, при ее транскрипции или трансляции, корректирует аномальное количество эндогенного белка у субъекта.40. The method of claim 39, wherein said at least one heterologous nucleotide sequence, when transcribed or translated, corrects for an abnormal amount of endogenous protein in the subject.
41. Способ по п. 39, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна гетерологичная нуклеотидная последовательность, при ее транскрипции или трансляции, корректирует аномальную функцию или активность эндогенного белка или пути у субъекта.41. The method of claim 39, wherein said at least one heterologous nucleotide sequence, when transcribed or translated, corrects the abnormal function or activity of an endogenous protein or pathway in the subject.
42. Способ по любому из пп. 39-41, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна гетерологичная нуклеотидная последовательность кодирует или содержит нуклеотидную молекулу, выбранную из группы, состоящей из РНКи, киРНК, миРНК, днкРНК и антисмыслового олиго- или полинуклеотида.42. The method according to any one of paragraphs. 39-41, characterized in that said at least one heterologous nucleotide sequence encodes or contains a nucleotide molecule selected from the group consisting of RNAi, siRNA, miRNA, dncRNA, and an antisense oligo or polynucleotide.
43. Способ по любому из пп. 39-41, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна гетерологичная нуклеотидная последовательность кодирует белок.43. The method according to any one of paragraphs. 39-41, characterized in that said at least one heterologous nucleotide sequence encodes a protein.
44. Способ по п. 43, отличающийся тем, что указанный белок представляет собой маркерный белок (например, репортерный белок).44. The method of claim 43, wherein said protein is a marker protein (eg, a reporter protein).
45. Способ по любому из пп. 39-44, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна гетерологичная нуклеотидная последовательность кодирует агонист или антагонист эндогенного белка или пути, ассоциированного с указанным заболеванием или расстройством.45. The method according to any one of paragraphs. 39-44, characterized in that said at least one heterologous nucleotide sequence encodes an agonist or antagonist of an endogenous protein or pathway associated with said disease or disorder.
46. Способ по любому из пп. 39-45, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна гетерологичная нуклеотидная последовательность кодирует антитело.46. The method according to any one of paragraphs. 39-45, characterized in that said at least one heterologous nucleotide sequence encodes an antibody.
47. Способ по любому из пп. 39-46, отличающийся тем, что указанное заболевание или расстройство выбрано из группы, состоящей из: метаболического заболевания или расстройства, заболевания или расстройства ЦНС, заболевания или расстройства глаз, заболевания или расстройства крови, заболевания или расстройства печени, иммунного заболевания или расстройства, инфекционного заболевания, заболевания или расстройства мышц, рака; и заболевания или расстройства, основанного на аномальном уровне и/или функции генного продукта.47. The method according to any one of paragraphs. 39-46, characterized in that said disease or disorder is selected from the group consisting of: metabolic disease or disorder, CNS disease or disorder, eye disease or disorder, blood disease or disorder, liver disease or disorder, immune disease or disorder, infectious diseases, diseases or disorders of the muscles, cancer; and a disease or disorder based on an abnormal level and/or function of a gene product.
48. Способ по п. 47, отличающийся тем, что указанное метаболическое заболевание или расстройство выбрано из группы, состоящей из диабета, расстройства лизосомального накопления, мукополисахаридного расстройства, заболевания или нарушения цикла мочевины; и болезни или расстройства накопления гликогена.48. The method of claim 47, wherein said metabolic disease or disorder is selected from the group consisting of diabetes, lysosomal storage disorder, mucopolysaccharide disorder, urea cycle disease or disorder; and glycogen storage diseases or disorders.
49. Способ по п. 48, отличающийся тем, что указанное расстройство лизосомального накопления выбрано из группы, состоящей из болезни Гоше, болезни Помпе, метахроматической лейкодистрофии (MLD), фенилкетонурии (PKU) и болезни Фабри.49. The method of claim 48 wherein said lysosomal storage disorder is selected from the group consisting of Gaucher disease, Pompe disease, metachromatic leukodystrophy (MLD), phenylketonuria (PKU), and Fabry disease.
50. Способ по п. 48, отличающийся тем, что указанное заболевание или нарушение цикла мочевины представляет собой дефицит орнитинтранскарбамилазы (ОТС).50. The method of claim 48 wherein said disease or urea cycle disorder is ornithine transcarbamylase (OTC) deficiency.
51. Способ по п. 48, отличающийся тем, что указанное мукополисахаридное расстройство выбрано из группы, состоящей из синдрома Слая, синдрома Гурлер, синдрома Шейе, синдрома Гурлер-Шейе, синдрома Хантера, синдрома Санфилиппо, синдрома Моркио и синдрома Марото-Лами.51. The method according to claim 48, wherein said mucopolysaccharide disorder is selected from the group consisting of Sly's syndrome, Hurler's syndrome, Scheye's syndrome, Hurler-Scheye's syndrome, Hunter's syndrome, Sanfilippo's syndrome, Morquio's syndrome, and Maroto-Lami's syndrome.
52. Способ по п. 47, отличающийся тем, что указанное заболевание или расстройство ЦНС выбрано из группы, состоящей из болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, болезни Гентингтона, болезни Канавана, синдрома Лея, болезни Рефсума, синдрома Туретта, первичного бокового склероза, амиотрофического бокового склероза, прогрессирующей мышечной атрофии, болезни Пика, мышечной дистрофии, рассеянного склероза, тяжелой миастении, болезни Бинсвангера, травмы, обусловленной повреждением спинного мозга или головы, болезни Тея-Сакса, болезни Леша-Нихена, эпилепсии, церебрального инфаркта, психических расстройств, шизофрении, лекарственной или наркотической зависимости, неврозов, психозов, деменции, паранойи, расстройства дефицита внимания, расстройств сна, болевых расстройств, расстройств пищевого поведения или массы тела, а также рака и опухолей ЦНС.52. The method according to claim 47, characterized in that said CNS disease or disorder is selected from the group consisting of Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, Canavan's disease, Leigh's syndrome, Refsum's disease, Tourette's syndrome, primary lateral sclerosis, amyotrophic lateral sclerosis, progressive muscular atrophy, Pick's disease, muscular dystrophy, multiple sclerosis, myasthenia gravis, Binswanger's disease, spinal cord or head injury, Tay-Sachs disease, Lesch-Nychen disease, epilepsy, cerebral infarction, mental disorders, schizophrenia, drug or drug addiction, neurosis, psychosis, dementia, paranoia, attention deficit disorder, sleep disorders, pain disorders, eating disorders or body weight disorders, as well as cancer and tumors of the central nervous system.
53. Способ по п. 47, отличающийся тем, что указанное заболевание или расстройство глаз выбрано из группы, состоящей из офтальмологического расстройства, затрагивающего сетчатку, задний путь и/или зрительный нерв.53. The method of claim 47, wherein said eye disease or disorder is selected from the group consisting of an ophthalmic disorder affecting the retina, posterior tract, and/or optic nerve.
54. Способ по п. 53, отличающийся тем, что указанное офтальмологическое расстройство, затрагивающее сетчатку, задний путь и/или зрительный нерв, выбрано из группы, состоящей из диабетической ретинопатии, макулярной дегенерации, в том числе возрастной макулярной дегенерации, географической атрофии и сосудистой или «влажной» формы макулярной дегенерации, глаукомы, увеита, пигментного ретинита, болезни Штаргардта, врожденного амавроза Лебера (LCA), синдрома Ушера, эластической псевдоксантомы (РХЕ), х-хромосомного пигментного ретинита (XLRP), х-хромосомного расслоения сетчатки (XLRS), хороидеремии, врожденной нейропатии зрительного нерва Лебера (LHON), ахроматопсии, палочко-колбочковой дистрофии, эндотелиальной дистрофии роговицы Фукса, диабетического макулярного отека; и рака и опухолей глаз.54. The method of claim. 53, characterized in that said ophthalmic disorder affecting the retina, posterior pathway and/or optic nerve is selected from the group consisting of diabetic retinopathy, macular degeneration, including age-related macular degeneration, geographic atrophy and vascular or "wet" form of macular degeneration, glaucoma, uveitis, retinitis pigmentosa, Stargardt's disease, Leber's congenital amaurosis (LCA), Usher's syndrome, pseudoxanthoma elasticum (PXE), x-linked retinitis pigmentosa (XLRP), x-linked retinal dissection (XLRS) ), choroideremia, Leber's congenital optic neuropathy (LHON), achromatopsia, rod-cone dystrophy, Fuchs endothelial corneal dystrophy, diabetic macular edema; and eye cancers and tumors.
55. Способ по п. 47, отличающийся тем, что указанное заболевание или расстройство крови выбрано из группы, состоящей из гемофилии А, гемофилии В, талассемии, анемии и рака крови.55. The method of claim 47, wherein said blood disease or disorder is selected from the group consisting of hemophilia A, hemophilia B, thalassemia, anemia, and blood cancer.
56. Способ по п. 47, отличающийся тем, что указанное заболевание или расстройство печени выбрано из группы, состоящей из прогрессирующего семейного внутрипеченочного холестаза (PFIC) и рака печени, а также опухолей.56. The method of claim 47 wherein said liver disease or disorder is selected from the group consisting of progressive familial intrahepatic cholestasis (PFIC) and liver cancer and tumors.
57. Способ по п. 39, отличающийся тем, что указанное заболевание или расстройство представляет собой кистозный фиброз.57. The method of claim 39 wherein said disease or disorder is cystic fibrosis.
58. Способ по любому из пп. 39-57, отличающийся тем, что указанный зкДНК-вектор вводят в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.58. The method according to any one of paragraphs. 39-57, characterized in that said scDNA vector is administered in combination with a pharmaceutically acceptable carrier.
59. Способ доставки терапевтического белка субъекту, причем указанный способ включает введение указанному субъекту композиции, содержащей зкДНК-вектор по любому из пп. 1-29, причем указанная по меньшей мере одна гетерологичная нуклеотидная последовательность кодирует терапевтический белок.59. A method for delivering a therapeutic protein to a subject, said method comprising administering to said subject a composition containing the scDNA vector according to any one of paragraphs. 1-29, wherein said at least one heterologous nucleotide sequence encodes a therapeutic protein.
60. Способ по п. 59, отличающийся тем, что указанный терапевтический белок представляет собой терапевтическое антитело.60. The method of claim 59, wherein said therapeutic protein is a therapeutic antibody.
61. Способ по п. 59, отличающийся тем, что указанный терапевтический белок выбран из группы, состоящей из фермента, эритропоэтина, ангиостатина, эндостатина, супероксиддисмутазы, глобина, лептина, каталазы, тирозингидроксилазы, цитокина, регулятора трансмембранной проводимости при кистозном фиброзе (CFTR), пептидного фактора роста и гормона.61. The method of claim 59, wherein said therapeutic protein is selected from the group consisting of enzyme, erythropoietin, angiostatin, endostatin, superoxide dismutase, globin, leptin, catalase, tyrosine hydroxylase, cytokine, cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) , peptide growth factor and hormone.
62. Набор, содержащий зкДНК-вектор по любому из пп. 1-29 и наноноситель, упакованные в контейнер с вкладышем в упаковку.62. A set containing zkDNA vector according to any one of paragraphs. 1-29 and nanocarrier packaged in a container with a package insert.
63. Набор для получения зкДНК-вектора, причем указанный набор содержит экспрессионную конструкцию, содержащую по меньшей мере один сайт рестрикции для инсерции по меньшей мере одной гетерологичной нуклеотидной последовательности или регуляторного переключателя, или и первого, и второго, причем указанный по меньшей мере один сайт рестрикции, функционально расположенный либо между (i) последовательностями симметричных инвертированных концевых повторов (симметричных ITR), при этом указанные симметричные ITR не являются ITR дикого типа, либо между (ii) двумя последовательностями инвертированных концевых повторов дикого типа (WT-ITR).63. A kit for obtaining a scDNA vector, said kit containing an expression construct containing at least one restriction site for insertion of at least one heterologous nucleotide sequence or a regulatory switch, or both the first and second, moreover, the specified at least one site a restriction operatively located either between (i) sequences of symmetrical inverted terminal repeats (symmetrical ITRs), wherein said symmetrical ITRs are not wild-type ITRs, or between (ii) two sequences of wild-type inverted terminal repeats (WT-ITRs).
64. Набор по п. 63, подходящий для получения зкДНК-вектора по любому из пп. 1-21.64. Set according to p. 63, suitable for obtaining zkDNA vector according to any one of paragraphs. 1-21.
65. Набор по п. 63 или 64, дополнительно содержащий популяцию клеток насекомых, которая не содержит последовательностей, кодирующих вирусный капсид, которые в присутствии белка Rep могут индуцировать продуцирование зкДНК-вектора.65. The kit according to claim 63 or 64, further comprising a population of insect cells that does not contain viral capsid coding sequences that, in the presence of the Rep protein, can induce the production of the scDNA vector.
66. Набор по любому из пп. 63-65, дополнительно содержащий вектор, содержащий полинуклеотидную последовательность, которая кодирует по меньшей мере один белок Rep, при этом указанный вектор подходит для экспрессии указанного по меньшей мере одного белка Rep в клетке насекомого.66. Set according to any one of paragraphs. 63-65, further comprising a vector containing a polynucleotide sequence that encodes at least one Rep protein, said vector being suitable for expressing said at least one Rep protein in an insect cell.