Claims (52)
1. Полинуклеотид, включающий открытую рамку считывания для CLN5 человека или овцы, причем открытая рамка считывания для CLN5 человека или овцы оптимизирована в отношении частоты использования кодонов для экспрессии в клетке человека или овцы.1. A polynucleotide comprising a human or ovine CLN5 open reading frame, wherein the human or ovine CLN5 open reading frame is optimized for codon usage for expression in a human or ovine cell.
2. Полинуклеотид по п. 1, в котором открытая рамка считывания человека с оптимизацией в отношении частоты использования кодонов начинается с третьего стартового сайта (т.е. инициирующего кодона ATG) CLN5 человека дикого типа.2. The polynucleotide of claim 1, wherein the codon-optimized human open reading frame begins at the third start site (ie, ATG start codon) of wild-type human CLN5.
3. Полинуклеотид по п. 1 или 2, в котором открытая рамка считывания для CLN5 человека или овцы включает нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1 или нуклеотидную последовательность, идентичную ей на по крайней приблизительно 90%.3. A polynucleotide according to claim 1 or 2, wherein the open reading frame for human or ovine CLN5 comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1 or a nucleotide sequence that is at least about 90% identical thereto.
4. Полинуклеотид по п. 1 или 2, в котором открытая рамка считывания для CLN5 человека или овцы включает нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:2 или нуклеотидную последовательность, идентичную ей на по крайней приблизительно 90%.4. A polynucleotide according to claim 1 or 2, wherein the open reading frame for human or ovine CLN5 comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO:2 or a nucleotide sequence that is at least about 90% identical thereto.
5. Экспрессионная кассета, содержащая полинуклеотид, включающий открытую рамку считывания для CLN5 человека или овцы.5. An expression cassette containing a polynucleotide comprising an open reading frame for human or ovine CLN5.
6. Экспрессионная кассета по п. 5, в которой полинуклеотид представляет собой полинуклеотид по любому из пп. 1-4.6. The expression cassette according to claim 5, in which the polynucleotide is a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4.
7. Экспрессионная кассета по п. 5 или 6, в которой открытая рамка считывания для CLN5 человека или овцы функционально связана с промотором.7. An expression cassette according to claim 5 or 6, wherein the human or ovine CLN5 open reading frame is operably linked to a promoter.
8. Экспрессионная кассета по п. 7, в которой промотор представляет собой промотор бета-актина кур.8. The expression cassette of claim 7 wherein the promoter is the chicken beta actin promoter.
9. Экспрессионная кассета по любому из пп. 5-8, в которой открытая рамка считывания для CLN5 человека или овцы функционально связана с сигналом полиаденилирования.9. Expression cassette according to any one of paragraphs. 5-8 in which the open reading frame for human or ovine CLN5 is operably linked to a polyadenylation signal.
10. Экспрессионная кассета по п. 9, в которой сигнал полиаденилирования представляет собой сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста (BGH).10. The expression cassette of claim 9 wherein the polyadenylation signal is a bovine growth hormone (BGH) polyadenylation signal.
11. Экспрессионная кассета по любому из пп. 5-10, в которой открытая рамка считывания для CLN5 человека или овцы функционально связана с энхансером.11. Expression cassette according to any one of paragraphs. 5-10 in which the human or ovine CLN5 open reading frame is operably linked to an enhancer.
12. Экспрессионная кассета по п. 11, в которой энхансер представляет собой энхансер цитомегаловируса (CMV).12. The expression cassette of claim 11 wherein the enhancer is a cytomegalovirus (CMV) enhancer.
13. Экспрессионная кассета по любому из пп. 5-12, содержащая, кроме того, по крайней мере один инвертированный концевой повтор (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV).13. Expression cassette according to any one of paragraphs. 5-12, further comprising at least one adeno-associated virus (AAV) inverted terminal repeat (ITR).
14. Экспрессионная кассета по п. 13, которая содержит два ITR AAV.14. Expression cassette according to claim 13, which contains two AAV ITRs.
15. Экспрессионная кассета по любому из пп. 13, 14, в которой ITR AAV представляют собой ITR AAV2.15. Expression cassette according to any one of paragraphs. 13, 14, in which the AAV ITRs are the AAV2 ITRs.
16. Экспрессионная кассета по любому из пп. 5-15, которая представляет собой геном самокомплементарного AAV.16. Expression cassette according to any one of paragraphs. 5-15, which is a self-complementary AAV genome.
17. Экспрессионная кассета по любому из пп. 5-16, которая содержит промотор, открытую рамку считывания для CLN5 человека или овцы и сайт полиаденилирования.17. Expression cassette according to any one of paragraphs. 5-16 which contains a promoter, an open reading frame for human or ovine CLN5, and a polyadenylation site.
18. Экспрессионная кассета по любому из пп. 5-17, которая содержит ITR AAV, промотор, открытую рамку считывания для CLN5 человека или овцы, сайт полиаденилирования и ITR AAV.18. Expression cassette according to any one of paragraphs. 5-17 which contains the AAV ITR, promoter, human or ovine CLN5 open reading frame, polyadenylation site, and AAV ITR.
19. Экспрессионная кассета по любому из пп. 5-18, которая содержит ITR AAV, энхансер, промотор, открытую рамку считывания для CLN5 человека или овцы, сайт полиаденилирования и ITR AAV.19. Expression cassette according to any one of paragraphs. 5-18 which contains the AAV ITR, enhancer, promoter, human or ovine CLN5 open reading frame, polyadenylation site, and AAV ITR.
20. Экспрессионная кассета по любому из пп. 5-19, которая содержит энхансер CMV, промотор бета-актина кур, открытую рамку считывания для CLN5 человека или овцы и сайт полиаденилирования BGH.20. Expression cassette according to any one of paragraphs. 5-19 which contains a CMV enhancer, a chicken beta actin promoter, an open reading frame for human or sheep CLN5, and a BGH polyadenylation site.
21. Экспрессионная кассета по любому из пп. 5-20, которая содержит ITR AAV, энхансер CMV, промотор бета-актина кур, открытую рамку считывания для CLN5 человека или овцы, сайт полиаденилирования BGH и ITR AAV.21. Expression cassette according to any one of paragraphs. 5-20 which contains AAV ITR, CMV enhancer, chicken beta actin promoter, human or sheep CLN5 open reading frame, BGH polyadenylation site, and AAV ITR.
22. Экспрессионная кассета по любому из пп. 5-21, которая содержит ITR AAV2, энхансер CMV, промотор бета-актина кур, открытую рамку считывания для CLN5 человека, сайт полиаденилирования BGH и ITR AAV2.22. Expression cassette according to any one of paragraphs. 5-21 which contains AAV2 ITR, CMV enhancer, chicken beta actin promoter, human CLN5 open reading frame, BGH polyadenylation site, and AAV2 ITR.
23. Экспрессионная кассета по любому из пп. 5-21, которая содержит ITR AAV2, энхансер CMV, промотор бета-актина кур, открытую рамку считывания для CLN5 овцы, сайт полиаденилирования BGH и ITR AAV2.23. Expression cassette according to any one of paragraphs. 5-21 which contains AAV2 ITR, CMV enhancer, chicken beta actin promoter, sheep CLN5 open reading frame, BGH polyadenylation site, and AAV2 ITR.
24. Экспрессионная кассета по п. 22, содержащая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:10 или последовательность, идентичную ей на по крайней мере приблизительно 90%.24. An expression cassette according to claim 22 containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO:10 or a sequence identical to it by at least about 90%.
25. Экспрессионная кассета по п. 23, содержащая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:11 или последовательность, идентичную ей на по крайней мере приблизительно 90%.25. An expression cassette according to claim 23 containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO:11 or a sequence identical to it by at least about 90%.
26. Вектор, содержащий полинуклеотид по любому из пп. 1-4 или экспрессионную кассету по любому из пп. 5-25.26. A vector containing a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4 or an expression cassette according to any one of paragraphs. 5-25.
27. Вектор по п. 26, который представляет собой вирусный вектор.27. The vector of claim 26, which is a viral vector.
28. Вектор по п. 26, который представляет собой AAV вектор.28. The vector of claim 26, which is an AAV vector.
29. Вектор по п. 28, причем AAV вектор представляет собой вектор AAV9.29. The vector of claim 28, wherein the AAV vector is an AAV9 vector.
30. Трансформированная клетка, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 1-4, экспрессионную кассету по любому из пп. 5-25 и/или вектор по любому из пп. 26-29.30. Transformed cell containing a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4, an expression cassette according to any one of paragraphs. 5-25 and/or a vector according to any one of paragraphs. 26-29.
31. Трансформированная клетка по п. 30, в геном которой стабильно включен полинуклеотид, экспрессионная кассета и/или вектор.31. A transformed cell according to claim 30, in whose genome a polynucleotide, an expression cassette and/or a vector is stably included.
32. Трансгенное животное, содержащее полинуклеотид по любому из пп. 1-4, экспрессионную кассету по любому из пп. 5-25, вектор по любому из пп. 26-29 и/или трансформированную клетку по п. 30 или 31.32. A transgenic animal containing a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4, an expression cassette according to any one of paragraphs. 5-25, the vector according to any one of paragraphs. 26-29 and/or a transformed cell according to claim 30 or 31.
33. Фармацевтическая композиция, содержащая полинуклеотид по любому из пп. 1-4, экспрессионную кассету по любому из пп. 5-25, вектор по любому из пп. 26-29 и/или трансформированную клетку по п. 30 или 31 в фармацевтически приемлемом носителе.33. A pharmaceutical composition containing a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4, an expression cassette according to any one of paragraphs. 5-25, the vector according to any one of paragraphs. 26-29 and/or a transformed cell according to claim 30 or 31 in a pharmaceutically acceptable carrier.
34. Способ экспрессии открытой рамки считывания для CLN5 в клетке, включающий приведение клетки в контакт с полинуклеотидом по любому из пп. 1-4, экспрессионной кассетой по любому из пп. 5-25 и/или вектором по любому из пп. 26-29, тем самым экспрессируя открытую рамку считывания для CLN5 в этой клетке.34. A method for expressing an open reading frame for CLN5 in a cell, comprising bringing the cell into contact with a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4, an expression cassette according to any one of paragraphs. 5-25 and/or a vector according to any one of paragraphs. 26-29, thereby expressing the open reading frame for CLN5 in this cell.
35. Способ экспрессии открытой рамки считывания для CLN5 у субъекта, включающий доставку субъекту полинуклеотида по любому из пп. 1-4, экспрессионной кассеты по любому из пп. 5-25, вектора по любому из пп. 26-29 и/или трансформированной клетки по п. 30 или 31, тем самым экспрессируя открытую рамку считывания для CLN5 у этого субъекта.35. A method for expressing an open reading frame for CLN5 in a subject, comprising delivering to the subject a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4, the expression cassette according to any one of paragraphs. 5-25, a vector according to any one of paragraphs. 26-29 and/or a transformed cell according to claim 30 or 31, thereby expressing an open reading frame for CLN5 in that subject.
36. Способ лечения нарушения, связанного с аберрантной экспрессией гена CLN5 или аберрантной активностью продукта гена CLN5 у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотида по любому из пп. 1-4, экспрессионной кассеты по любому из пп. 5-25, вектора по любому из пп. 26-29 и/или трансформированной клетки по п. 30 или 31 так, что открытая рамка считывания для CLN5 экспрессируется у этого субъекта.36. A method of treating a disorder associated with aberrant CLN5 gene expression or aberrant activity of a CLN5 gene product in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4, the expression cassette according to any one of paragraphs. 5-25, a vector according to any one of paragraphs. 26-29 and/or a transformed cell according to claim 30 or 31 such that the open reading frame for CLN5 is expressed in that subject.
37. Способ по п. 36, в котором нарушением, связанным с аберрантной экспрессией гена CLN5, является болезнь CLN5.37. The method of claim 36 wherein the disorder associated with aberrant CLN5 gene expression is CLN5 disease.
38. Способ по п. 36, в котором нарушением, связанным с аберрантной экспрессией гена CLN5, является болезнь накопления цероидов.38. The method of claim 36 wherein the disorder associated with aberrant CLN5 gene expression is ceroid storage disease.
39. Способ по п. 36, в котором нарушением, связанным с аберрантной экспрессией гена CLN5, является болезни Янского-Бильшовского.39. The method of claim 36, wherein the disorder associated with aberrant expression of the CLN5 gene is Jansky-Bilshovsky disease.
40. Способ по п. 36, в котором нарушением, связанным с аберрантной экспрессией гена CLN5, является вариант восковидного (цероидного) липофусциноза нейронов в позднем детском возрасте.40. The method of claim 36 wherein the disorder associated with aberrant CLN5 gene expression is a variant of late childhood waxy (ceroid) lipofuscinosis of neurons.
41. Способ лечения болезни CLN5 у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотида по любому из пп. 1-4, экспрессионной кассеты по любому из пп. 5-25, вектора по любому из пп. 26-29 и/или трансформированной клетки по п. 30 или 31 так, что открытая рамка считывания для CLN5 экспрессируется у этого субъекта41. A method of treating CLN5 disease in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4, the expression cassette according to any one of paragraphs. 5-25, a vector according to any one of paragraphs. 26-29 and/or a transformed cell according to claim 30 or 31 such that the open reading frame for CLN5 is expressed in that subject
42. Способ лечения болезни накопления цероидов у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотида по любому из пп. 1-4, экспрессионной кассеты по любому из пп. 5-25, вектора по любому из пп. 26-29 и/или трансформированной клетки по п. 30 или 31 так, что открытая рамка считывания для CLN5 экспрессируется у этого субъекта.42. A method of treating ceroid storage disease in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4, the expression cassette according to any one of paragraphs. 5-25, a vector according to any one of paragraphs. 26-29 and/or a transformed cell according to claim 30 or 31 such that the open reading frame for CLN5 is expressed in that subject.
43. Способ лечения болезни Янского-Бильшовского у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотида по любому из пп. 1-4, экспрессионной кассеты по любому из пп. 5-25, вектора по любому из пп. 26-29 и/или трансформированной клетки по п. 30 или 31 так, что открытая рамка считывания для CLN5 экспрессируется у этого субъекта.43. A method of treating Jansky-Bilshovsky disease in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4, the expression cassette according to any one of paragraphs. 5-25, a vector according to any one of paragraphs. 26-29 and/or a transformed cell according to claim 30 or 31 such that the open reading frame for CLN5 is expressed in that subject.
44. Способ лечения варианта восковидного липофусциноза нейронов в позднем детском возрасте (vLINCL) у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотида по любому из пп. 1-4, экспрессионной кассеты по любому из пп. 5-25, вектора по любому из пп. 26-29 и/или трансформированной клетки по п. 30 или 31 так, что открытая рамка считывания для CLN5 экспрессируется у этого субъекта.44. A method of treating a variant of waxy neuronal lipofuscinosis in late childhood (vLINCL) in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-4, the expression cassette according to any one of paragraphs. 5-25, a vector according to any one of paragraphs. 26-29 and/or a transformed cell according to claim 30 or 31 such that the open reading frame for CLN5 is expressed in that subject.
45. Способ по любому из пп. 36-44, в котором субъект проявляются симптомы заболевания до доставки вектора.45. The method according to any one of paragraphs. 36-44, in which the subject exhibits symptoms of the disease prior to delivery of the vector.
46. Способ по любому из пп. 36-45, в котором субъектом является человек.46. The method according to any one of paragraphs. 36-45, in which the subject is a human.
47. Способ по любому из пп. 36-45, в котором субъектом является овца.47. The method according to any one of paragraphs. 36-45, in which the subject is a sheep.
48. Способ по любому из пп. 35-47, в котором полинуклеотид, экспрессионную кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют в нервную систему субъекта.48. The method according to any one of paragraphs. 35-47, wherein the polynucleotide, expression cassette, vector, and/or transformed cell is delivered to the subject's nervous system.
49. Способ по пп. 45-48, в котором полинуклеотид, экспрессионную кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют внутривенно.49. The method according to paragraphs. 45-48, wherein the polynucleotide, expression cassette, vector, and/or transformed cell is delivered intravenously.
50. Способ по п. 48, в котором полинуклеотид, экспрессионную кассету, вектор и/или трансформированную клетка доставляют с помощью интратекальной, интрацеребральной, интрапаренхимной, интрацеребровентрикулярной, интраназальной, внутриушной, внутриглазной или периокулярной доставки, или любой их комбинация.50. The method of claim 48, wherein the polynucleotide, expression cassette, vector, and/or transformed cell is delivered by intrathecal, intracerebral, intraparenchymal, intracerebroventricular, intranasal, intra-auricular, intraocular, or periocular delivery, or any combination thereof.
51. Способ по п. 50, в котором полинуклеотид, экспрессионную кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют интрапаренхимно.51. The method of claim 50, wherein the polynucleotide, expression cassette, vector, and/or transformed cell is delivered intraparenchymally.
52. Способ по п. 50, в котором полинуклеотид, экспрессионную кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют интрацеребровентрикулярно.52. The method of claim 50, wherein the polynucleotide, expression cassette, vector, and/or transformed cell is delivered intracerebroventricularly.