RU2020932C1

RU2020932C1 - Agent showing eubiotic properties

Info

Publication number: RU2020932C1
Application number: SU5035386/14A
Authority: RU
Inventors: О.П. Мазитова; А.В. Лыско; Н.И. Мальцев; Н.Г. Фиш; Л.И. Кулинич; Э.Г. Кравцов; А.А. Ленцнер; Х.П. Ленцнер; Б.А. Чернуха; М.В. Далин; А.А. Воробьев; В.А. Быков
Original assignee: Московская медицинская академия им.И.М.Сеченова
Priority date: 1992-04-01
Filing date: 1992-04-01
Publication date: 1994-10-15

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: proposed agent has biomass L. fermentum containing 10⁹ microbe cells in one dose immobilized on calcium alginate, calcium alginate and water taken at definite quantity. EFFECT: conservation of culture viability at lyophilization, protection of bacteria from gastric juice effect, enhanced quiality of agent. 2 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, точнее к микробиологии, и может быть использовано при лечении инфекционных болезней, в гастроэнтерологии и педиатрии. The invention relates to medicine, more specifically to microbiology, and can be used in the treatment of infectious diseases, in gastroenterology and pediatrics.

При дисбактериозах широко используются бактерийные препараты, восстанавливающие эубиоз. Их разработка ведется по пути отбора штаммов, обладающих антагонистическим действием в отношении патогенной флоры. Официальные препараты выпускают в виде заквасок, порошков, желатиновых капсул, таблеток, включающих лиофильно высушенную биомассу эубиотика. Основным условием для указанных лекарственных форм является обеспечение максимальной жизнеспособности входящего в препарат микроорганизма и обеспечение возможности включения его в биоценоз кишечника. With dysbiosis, bacterial preparations that restore eubiosis are widely used. Their development is carried out along the path of selecting strains that have an antagonistic effect against pathogenic flora. Official preparations are produced in the form of starter cultures, powders, gelatin capsules, tablets, including freeze-dried eubiotics biomass. The main condition for these dosage forms is to ensure maximum viability of the microorganism included in the preparation and to ensure its inclusion in the intestinal biocenosis.

Указанные требования могут быть реализованы путем удлинения курса лечения, увеличения разовой дозы или создания композиций, включающих компоненты, препятствующие гибели применяемого штамма в желудочно-кишечном тракте. В качестве таких компонентов предлагались желатин, пектины и т.д. Исследованиями последних лет показано, что используемые протекторы могут блокировать адгезию микробов, тем самым препятствовать их колонизации в кишечнике. Потеря активности лечебного препарата возможна на этапе высушивания биомассы. These requirements can be implemented by lengthening the course of treatment, increasing a single dose or creating compositions that include components that prevent the death of the applied strain in the gastrointestinal tract. Gelatin, pectins, etc. were proposed as such components. Recent studies have shown that used protectors can block the adhesion of microbes, thereby inhibiting their colonization in the intestine. The loss of activity of a medicinal product is possible at the stage of drying the biomass.

Применяемые при лиофилизации стабилизирующие добавки (сахарозо-желатиновая, обрат молока и т.д.) обеспечивают выход не более 80-85% жизнеспособных клеток культуры. Вышеизложенное является основанием для выбора оптимальных протекторных компонентов для создания подобного рода биопрепаратов. The stabilizing additives used during lyophilization (sucrose-gelatin, milk reverse, etc.) provide a yield of not more than 80-85% of viable culture cells. The foregoing is the basis for the selection of the optimal tread components for the creation of this kind of biological products.

Известен препарат на основе L.bulgaricus, представляющий собой закваску для молока. Недостатком его является то, что он не имеет лекарственной формы и может быть дозирован. Known drug based on L.bulgaricus, which is a starter for milk. Its disadvantage is that it does not have a dosage form and can be dosed.

Известен также препарат, представляющий собой композицию, в которую в качестве протективного компонента включен пектин. Недостатком его является то, что пектин вызывает блокирование адгезии, тем самым препятствует колонизации используемого штамма. A preparation is also known, which is a composition in which pectin is included as a protective component. Its disadvantage is that pectin causes blocking of adhesion, thereby preventing the colonization of the strain used.

Известен препарат - сухой лактобактерин, взятый за прототип, выпускаемый в форме порошка и включающий высушенную биомассу L.fermentum 90 TS4. Одна доза препарата содержит 10⁹ клеток лактобацилл. Недостатком его является незащищенность лекарственной формы от переваривающего действия желудочного сока.A well-known drug is dry lactobacterin, taken as a prototype, available in powder form and including dried L.fermentum 90 TS4 biomass. One dose of the drug contains 10 ⁹ lactobacilli cells. Its disadvantage is the insecurity of the dosage form from the digestive effect of gastric juice.

Целью изобретения является сохранение жизнеспособности культуры при лиофилизации, а также защита бактерий от воздействия желудочного сока. The aim of the invention is to maintain the viability of the culture during lyophilization, as well as the protection of bacteria from the effects of gastric juice.

Поставленная цель достигается тем, что в композицию входят лактобациллы штамма L.fermentum 90 TS4 1 - 7% (1х10⁹ до 1х10¹⁰ живых клеток в 1 мл регидратированной композиции), алгинат кальция 90 - 96% и вода - до 3%.This goal is achieved in that the composition includes lactobacilli of the strain L.fermentum 90 TS4 1 - 7% (1x10 ⁹ to 1x10 ¹⁰ living cells in 1 ml of rehydrated composition), calcium alginate 90 - 96% and water - up to 3%.

Препарат готовится следующим образом. Нативную биомассу лактобацилл получают согласно лабораторному регламенту, разводят до концентрации от 5х10⁹ до 5х10¹⁰ в 1 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия. К 1 объему суспензии добавляют 4 объема 4% алгината натрия после перемешивания смесь гранулируется (5). Полученные гранулы отмывают водой трижды и переносят во флаконы с изотоническим раствором (80 гранул в 1 флакон), после чего лиофильно высушивают. Перед использованием гранулы регидратируют в 2 мл кипяченой водопроводной воды. Приготовленная композиция имеет следующий состав: L.fermentum 1 - 7% (5х10⁹ до 5х10¹⁰ живых клеток в 1 мл регидратированной композиции), алгинат кальция 90-96% и вода - до 3%.The drug is prepared as follows. The native biomass of lactobacilli is obtained according to laboratory regulations, diluted to a concentration of 5x10 ⁹ to 5x10 ¹⁰ in 1 ml of sterile isotonic sodium chloride solution. 4 volumes of 4% sodium alginate are added to 1 volume of suspension after mixing, the mixture is granulated (5). The obtained granules are washed three times with water and transferred to vials with isotonic solution (80 granules in 1 vial), and then freeze-dried. Before use, the granules are rehydrated in 2 ml of boiled tap water. The prepared composition has the following composition: L.fermentum 1 - 7% (5x10 ⁹ to 5x10 ¹⁰ living cells in 1 ml of rehydrated composition), calcium alginate 90-96% and water - up to 3%.

П р и м е р. Была исследована устойчивость гранул в среде приближенной к условиям нахождения их в различных отделах желудочно-кишечного тракта. Гранулы инкубировали 24 ч при 37^оС в среде с различными значениями рН в диапазоне от 1 до 12. При рН - 1-7 гранулы алгината не изменялись, а при рН от 8 и выше наблюдалось их набухание и полное растворение.PRI me R. The stability of granules in an environment close to the conditions of their presence in various parts of the gastrointestinal tract was investigated. The pellets were incubated for 24 hours at 37 ^{° C} in a medium with different pH values in the range from 1 to 12. When the pH - 1-7 alginate beads did not change, and at a pH of 8 and above their swelling was observed and the complete dissolution.

Из этого следует, что при попадании препарата в желудок, где рН имеет значение ниже 7 включенные в гранулы микроорганизмы остаются иммобилизированными, а при прохождении через кишечник рН выше 8) они высвобождаются из гранул. From this it follows that when the drug enters the stomach, where the pH is below 7, the microorganisms included in the granules remain immobilized, and when passing through the intestines a pH above 8) they are released from the granules.

Было исследовано влияние различных веществ, представляющих интерес с точки зрения протективных компонентов, включаемых в эубиотические препараты, на адгезию микробов. The effect of various substances of interest in terms of the protective components included in eubiotic preparations on the adhesion of microbes has been investigated.

Определяли процент блокирования адгезии лактобацилл на эритроцитах под воздействием алгинатов, пектинов, декстрана. The percentage of blocking the adhesion of lactobacilli on red blood cells under the influence of alginates, pectins, dextran was determined.

Результаты опытов приведены в табл.1, 2. Из них следует, что из всех исследованных веществ алгинаты не вызывают ингибицию прикрепления бактерий к клеткам-мишеням. Именно это их свойство было использовано при выборе протективного компонента в предлагаемой композиции. The experimental results are given in Tables 1, 2. It follows from them that of all the investigated substances, alginates do not cause inhibition of bacterial attachment to target cells. This is their property that was used when choosing a protective component in the proposed composition.

Были изучены защитные свойства алгината при лиофильной сушке биомассы. Проведены сравнительные опыты высушивания нативной биомассы с использованием традиционных стабилизаторов (сахарозо-желатиновая добавка) и высушивание бактерий иммобилизованных в алгинате. Установлено, что после лиофилизации традиционным методом в биомассе остается от 80 до 85% жизнеспособных бактерий, в то же время при высушивании в гранулах сохраняется от 90 до 95% живых организмов. The protective properties of alginate during freeze drying of biomass were studied. Comparative experiments were conducted on drying native biomass using traditional stabilizers (sucrose-gelatin supplement) and drying bacteria immobilized in alginate. It was established that after lyophilization by the traditional method, from 80 to 85% of viable bacteria remain in the biomass, while at the same time, from 90 to 95% of living organisms remain in the granules when dried.

Claims

EUBIOTIC PROPERTIES, containing the biomass of L. fermentum containing 10 ⁹ microbial cells in one dose and water, characterized in that it additionally contains calcium alganate, and the biomass is immobilized on calcium alginate in the following ratio of components, wt.%:
L. fermentum biomass immobilized on calcium alginate 1 - 7
Calcium Alginate 90 - 96
Water 3