Claims (96)
1. Нуклеиновая кислота, кодирующая кислую α-глюкозидазу (GAA), где указанная нуклеиновая кислота имеет более 86% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-5.1. A nucleic acid encoding acid α-glucosidase (GAA), wherein said nucleic acid has more than 86% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 1-5.
2. Нуклеиновая кислота по п.1, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 87% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-5.2. Nucleic acid according to claim 1, wherein said nucleic acid has more than 87% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 1-5.
3. Нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 87% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15.3. Nucleic acid encoding GAA, where the specified nucleic acid has more than 87% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NO: 6-15.
4. Нуклеиновая кислота по п.3, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 88% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15.4. Nucleic acid according to claim 3, where the specified nucleic acid has more than 88% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NO: 6-15.
5. Нуклеиновая кислота по п.3, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 89% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15.5. Nucleic acid according to claim 3, wherein said nucleic acid has more than 89% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 6-15.
6. Нуклеиновая кислота по п.3, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 90% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15.6. Nucleic acid according to claim 3, wherein said nucleic acid has more than 90% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 6-15.
7. Нуклеиновая кислота по п.3, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 91% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 6-15.7. Nucleic acid according to claim 3, wherein said nucleic acid has more than 91% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 6-15.
8. Нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 91% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 16-24.8. A nucleic acid encoding GAA, wherein said nucleic acid has more than 91% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 16-24.
9. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-8, где указанная нуклеиновая кислота содержит менее 127 динуклеотидов CpG.9. A nucleic acid according to any one of claims 1 to 8, wherein said nucleic acid contains less than 127 CpG dinucleotides.
10. Нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, где указанная нуклеиновая кислота содержит менее 127 динуклеотидов CpG.10. Nucleic acid encoding GAA, wherein said nucleic acid contains less than 127 CpG dinucleotides.
11. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит менее 126 динуклеотидов CpG.11. A nucleic acid according to any one of claims 1 to 10, wherein said nucleic acid contains less than 126 CpG dinucleotides.
12. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 126-120 динуклеотидов CpG.12. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 126-120 CpG dinucleotides.
13. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 120-110 динуклеотидов CpG.13. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 120-110 CpG dinucleotides.
14. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 110-100 динуклеотидов CpG.14. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 110-100 CpG dinucleotides.
15. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 100-90 динуклеотидов CpG.15. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 100-90 CpG dinucleotides.
16. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 90-80 динуклеотидов CpG.16. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 90-80 CpG dinucleotides.
17. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 80-70 динуклеотидов CpG.17. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 80-70 CpG dinucleotides.
18. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 70-60 динуклеотидов CpG.18. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 70-60 CpG dinucleotides.
19. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 60-50 динуклеотидов CpG.19. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 60-50 CpG dinucleotides.
20. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 50-40 динуклеотидов CpG.20. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 50-40 CpG dinucleotides.
21. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 40-30 динуклеотидов CpG.21. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 40-30 CpG dinucleotides.
22. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 30-20 динуклеотидов CpG.22. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 30-20 CpG dinucleotides.
23. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит менее 20 динуклеотидов CpG.23. A nucleic acid according to any one of claims 1 to 10, wherein said nucleic acid contains less than 20 CpG dinucleotides.
24. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 20-10 динуклеотидов CpG.24. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 20-10 CpG dinucleotides.
25. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит менее 10 динуклеотидов CpG.25. A nucleic acid according to any one of claims 1 to 10, wherein said nucleic acid contains less than 10 CpG dinucleotides.
26. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит приблизительно 10-5 динуклеотидов CpG.26. A nucleic acid according to any one of claims 1-10, wherein said nucleic acid contains approximately 10-5 CpG dinucleotides.
27. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит 5 динуклеотидов CpG.27. A nucleic acid according to any one of claims 1 to 10, wherein said nucleic acid contains 5 CpG dinucleotides.
28. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит 4 динуклеотида CpG.28. A nucleic acid according to any one of claims 1 to 10, wherein said nucleic acid contains 4 CpG dinucleotides.
29.Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит 3 динуклеотида CpG.29. Nucleic acid according to any one of claims 1 to 10, wherein said nucleic acid contains 3 CpG dinucleotides.
30. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит 2динуклеотида CpG.30. A nucleic acid according to any one of claims 1 to 10, wherein said nucleic acid contains 2 CpG dinucleotides.
31. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит 1 динуклеотид CpG.31. A nucleic acid according to any one of claims 1 to 10, wherein said nucleic acid contains 1 CpG dinucleotide.
32. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-10, где указанная нуклеиновая кислота содержит 0 динуклеотидов CpG.32. A nucleic acid according to any one of claims 1 to 10, wherein said nucleic acid contains 0 CpG dinucleotides.
33. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-32, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 92% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.33. A nucleic acid according to any one of claims 1-32, wherein said nucleic acid has more than 92% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 1-24.
34. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-32, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 93% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.34. Nucleic acid according to any one of claims 1-32, wherein said nucleic acid has more than 93% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 1-24.
35. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-32, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 94% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.35. A nucleic acid according to any one of claims 1-32, wherein said nucleic acid has more than 94% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 1-24.
36. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-32, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 95% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.36. A nucleic acid according to any one of claims 1-32, wherein said nucleic acid has more than 95% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 1-24.
37. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-32, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 96% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.37. A nucleic acid according to any one of claims 1-32, wherein said nucleic acid has more than 96% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 1-24.
38. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-32, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 97% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.38. A nucleic acid according to any one of claims 1-32, wherein said nucleic acid has more than 97% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 1-24.
39. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-32, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 98% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.39. A nucleic acid according to any one of claims 1-32, wherein said nucleic acid has more than 98% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 1-24.
40. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-32, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 99% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.40. A nucleic acid according to any one of claims 1-32, wherein said nucleic acid has more than 99% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 1-24.
41. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-32, где указанная нуклеиновая кислота имеет более 99,5% идентичности последовательности в отношении последовательности, выбранной из группы, состоящей из любых из последовательностей, приведенных как SEQ ID NO: 1-24.41. A nucleic acid according to any one of claims 1-32, wherein said nucleic acid has more than 99.5% sequence identity with respect to a sequence selected from the group consisting of any of the sequences shown as SEQ ID NOs: 1-24.
42. Нуклеиновая кислота, кодирующая GAA, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-24.42. Nucleic acid encoding GAA selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1-24.
43. Экспрессирующая кассета, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп.1-7 и 9-42, функционально связанную с элементом контроля экспрессии.43. An expression cassette containing a nucleic acid according to any one of claims 1-7 and 9-42 operably linked to an expression control element.
44. Экспрессирующая кассета по п.43, где указанный элемент контроля экспрессии располагают в 5’-направлении от указанной нуклеиновой кислоты.44. The expression cassette of claim 43, wherein said expression control element is positioned 5' from said nucleic acid.
45. Экспрессирующая кассета по п.44, дополнительно содержащая последовательность полиаденилирования, расположенную в 3’-направлении от указанной нуклеиновой кислоты.45. The expression cassette of claim 44, further comprising a polyadenylation sequence located 3' from said nucleic acid.
46. Экспрессирующая кассета по пп.44 или 45, где указанный элемент контроля экспрессии или последовательность полиаденилирования имеет сниженное содержание CpG по сравнению с элементом контроля экспрессии или последовательностью полиаденилирования дикого типа.46. An expression cassette according to claim 44 or 45, wherein said expression control element or polyadenylation sequence has a reduced CpG content compared to the wild type expression control element or polyadenylation sequence.
47. Экспрессирующая кассета по любому из пп.43-46, где указанный элемент контроля экспрессии содержит последовательность энхансера/промотора ApoE/hAAT.47. An expression cassette according to any one of claims 43-46, wherein said expression control element contains an ApoE/hAAT enhancer/promoter sequence.
48. Экспрессирующая кассета по любому из пп.45-47, где указанная последовательность полиаденилирования содержит последовательность полиаденилирования бычьего гормона роста (bGH).48. An expression cassette according to any one of claims 45-47, wherein said polyadenylation sequence comprises a bovine growth hormone (bGH) polyadenylation sequence.
49. Экспрессирующая кассета по пп.47 или 48, где указанная последовательность энхансера/промотора ApoE/hAAT или последовательность полиаденилирования bGH имеет сниженное содержание CpG по сравнению с последовательностью энхансера/промотора ApoE/hAAT или последовательностью полиаденилирования bGH дикого типа.49. An expression cassette according to claim 47 or 48, wherein said ApoE/hAAT enhancer/promoter sequence or bGH polyadenylation sequence has a reduced CpG content compared to the ApoE/hAAT enhancer/promoter sequence or wild-type bGH polyadenylation sequence.
50. Экспрессирующая кассета по п.49, где указанная последовательность полиаденилирования bGH дикого типа содержит последовательность SEQ ID NO: 27.50. The expression cassette of claim 49, wherein said wild-type bGH polyadenylation sequence comprises the sequence of SEQ ID NO: 27.
51. Экспрессирующая кассета по п.49, где указанная последовательность энхансера/промотора ApoE/hAAT дикого типа содержит последовательность SEQ ID NO: 28 или 29.51. The expression cassette of claim 49, wherein said wild-type ApoE/hAAT enhancer/promoter sequence comprises SEQ ID NO: 28 or 29.
52. Экспрессирующая кассета по п.49, где указанная последовательность полиаденилирования bGH со сниженным содержанием CpG содержит последовательность SEQ ID NO: 26.52. The expression cassette of claim 49, wherein said CpG-reduced bGH polyadenylation sequence comprises SEQ ID NO: 26.
53. Экспрессирующая кассета по любому из пп.43-52, дополнительно содержащая интрон, расположенный между 3'-концом указанного элемента контроля экспрессии и 5'-концом указанной нуклеиновой кислоты.53. An expression cassette according to any one of claims 43-52, further comprising an intron located between the 3' end of said expression control element and the 5' end of said nucleic acid.
54. Последовательность нуклеиновой кислоты или экспрессирующая кассета по любому из пп.1-53, где указанная GAA содержит последовательность, приведенную как SEQ ID NO: 25.54. A nucleic acid sequence or expression cassette according to any one of claims 1-53, wherein said GAA contains the sequence shown as SEQ ID NO: 25.
55. Вектор аденоассоциированного вируса (AAV), содержащий нуклеиновую кислоту или экспрессирующую кассету по любому из пп.1-54.55. An adeno-associated virus (AAV) vector containing a nucleic acid or an expression cassette according to any one of claims 1-54.
56. Вектор AAV по п.55, где указанный вектор AAV содержит:56. The AAV vector according to claim 55, where the specified AAV vector contains:
a) один или более капсидов AAV иa) one or more AAV capsids and
b) один или более инвертированных концевых повторов (ITR) AAV, где указанные ITR AAV фланкируют 5’- или 3’-конец указанной нуклеиновой кислоты или указанной экспрессирующей кассеты.b) one or more AAV inverted terminal repeats (ITRs), wherein said AAV ITRs flank the 5' or 3' end of said nucleic acid or said expression cassette.
57. Вектор AAV по п.56, дополнительно содержащий интрон, расположенный в 5’- или 3’-направлении от указанного одного или более ITR.57. The AAV vector of claim 56, further comprising an intron located 5' or 3' from said one or more ITRs.
58. Вектор AAV по п.56 или 57, где по меньшей мере один или более из указанных ITR или указанных интронов модифицирован для снижения содержания CpG.58. An AAV vector according to claim 56 or 57, wherein at least one or more of said ITRs or said introns is modified to reduce CpG content.
59. Вектор AAV по любому из пп.55-58, где указанный вектор AAV имеет серотип капсида, содержащий модифицированный капсид VP1, VP2 и/или VP3 AAV или вариант капсида VP1, VP2 и/или VP3 AAV, имеющий 90% или более идентичности последовательности в отношении AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8 или последовательности VP1, VP2 и/или VP3 SEQ ID NO: 30, 31 или 32, или капсид, имеющий 95% или более идентичности последовательности в отношении AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8, или последовательности VP1, VP2 и/или VP3 SEQ ID NO: 30, 31 или 32, или капсид, имеющий 100% идентичности последовательности в отношении AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8 или последовательности VP1, VP2 и/или VP3 SEQ ID NO: 30, 31 или 32.59. An AAV vector according to any one of claims 55-58, wherein said AAV vector has a capsid serotype containing a modified AAV VP1, VP2 and/or VP3 capsid or a VP1, VP2 and/or VP3 AAV capsid variant having 90% or more identity sequences against AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8 or VP1, VP2 and/or VP3 sequences SEQ ID NO: 30, 31 or 32, or a capsid having 95% or more sequence identity with respect to AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8, or VP1, VP2 and/or VP3 sequences SEQ ID NO: 30, 31 or 32, or a capsid having 100% sequence identity with respect to AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74, AAV3B, AAV-2i8 or VP1, VP2 and/or VP3 sequences SEQ ID NO: 30, 31 or 32.
60. Вектор AAV по любому из пп.56-59, где указанные ITR содержат один или более ITR из любого из: AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 или AAV3B, серотипов AAV или их комбинации.60. An AAV vector according to any one of claims 56-59, wherein said ITRs comprise one or more ITRs from any of: AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, Rh10, Rh74 or AAV3B, AAV serotypes, or combinations thereof.
61. Фармацевтическая композиция, содержащая множество векторов AAV по любому из пп.55-60 в биологически совместимом носителе или эксципиенте.61. A pharmaceutical composition comprising a plurality of AAV vectors according to any one of claims 55-60 in a biocompatible carrier or excipient.
62. Фармацевтическая композиция по п.61, дополнительно содержащая пустые капсиды AAV.62. The pharmaceutical composition of claim 61 further comprising empty AAV capsids.
63. Фармацевтическая композиция по п.62, где соотношение указанных пустых капсидов AAV и указанного вектора AAV составляет в пределах или приблизительно 100:1-50:1, приблизительно 50:1-25:1, приблизительно 25:1-10:1, приблизительно 10:1-1:1, приблизительно 1:1-1:10, приблизительно 1:10-1:25, приблизительно 1:25-1:50 или приблизительно 1:50-1:100.63. The pharmaceutical composition of claim 62, wherein the ratio of said AAV empty capsids to said AAV vector is within or about 100:1-50:1, about 50:1-25:1, about 25:1-10:1, about 10:1-1:1, about 1:1-1:10, about 1:10-1:25, about 1:25-1:50, or about 1:50-1:100.
64. Фармацевтическая композиция по п.62, где соотношение указанных пустых капсидов AAV и указанного вектора AAV составляет приблизительно 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 или 10:1.64. The pharmaceutical composition of claim 62, wherein the ratio of said AAV empty capsids to said AAV vector is approximately 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9 :1 or 10:1.
65. Фармацевтическая композиция по любому из пп.62-64, дополнительно содержащая поверхностно-активное вещество.65. Pharmaceutical composition according to any one of claims 62-64, additionally containing a surfactant.
66. Способ лечения человека, нуждающегося в кислой α-глюкозидазе (GAA), включающий:66. A method of treating a person in need of acid α-glucosidase (GAA), including:
(a) получение нуклеиновой кислоты или экспрессирующей кассеты по любому из пп.1-54, или вектора AAV по любому из пп.55-60, или фармацевтической композиции по любому из пп.61-65; и(a) obtaining a nucleic acid or an expression cassette according to any one of paragraphs 1-54, or an AAV vector according to any one of paragraphs 55-60, or a pharmaceutical composition according to any one of paragraphs 61-65; and
(b) введение количества указанной нуклеиновой кислоты, экспрессирующей кассеты, вектора AAV или фармацевтической композиции указанному человеку, где указанная GAA экспрессируется в указанном человеке.(b) administering an amount of said nucleic acid, expression cassette, AAV vector or pharmaceutical composition to said person, wherein said GAA is expressed in said person.
67. Способ по п.66, где указанный человек имеет болезнь Помпе.67. The method of claim 66, wherein said person has Pompe disease.
68. Способ по п.66, где указанный человек имеет инфантильную форму болезни Помпе.68. The method of claim 66 wherein said individual has infantile Pompe disease.
69. Способ по п.66, где указанный человек имеет болезнь Помпе с поздним началом.69. The method of claim 66 wherein said individual has late onset Pompe disease.
70. Способ по п.66, где указанный человек имеет гликогеноз (GSD).70. The method of claim 66 wherein said individual has glycogenosis (GSD).
71. Способ по п.70, где указанный GSD выбран из: GSD типа I (болезни Гирке), GSD типа III (болезни Форбса), GSD типа IV (болезни Андерсен, амилопектиноза), GSD типа V (болезни Мак-Ардла), GSD типа VI (болезни Герса), GSD типа VII (болезни Таруи) и летального врожденного GSD сердца.71. The method of claim 70, wherein said GSD is selected from: GSD type I (Girke's disease), GSD type III (Forbes' disease), GSD type IV (Andersen's disease, amylopectinosis), GSD type V (McArdle's disease), GSD type VI (Hers disease), GSD type VII (Tarui disease) and lethal congenital heart GSD.
72. Способ по любому из пп.66-71, где указанный вектор AAV вводят указанному человеку внутривенно, внутриартериально, внутриполостно, внутрислизисто или через катетер.72. The method according to any one of claims 66-71, wherein said AAV vector is administered to said person intravenously, intra-arterially, intracavitary, intramucosally, or via a catheter.
73. Способ по любому из пп.66-72, где указанная GAA экспрессируется на повышенных уровнях, необязательно, выше 1% уровней GAA, обнаруживаемых у человека, ненуждающегося в GAA.73. The method of any one of claims 66-72, wherein said GAA is expressed at elevated levels, optionally above 1% of the GAA levels found in a GAA deficient human.
74. Способ по любому из пп.66-73, где указанный вектор AAV вводят в диапазоне от приблизительно 1×108 до приблизительно 1×1014 векторных геномов на килограмм (ВГ/кг) массы указанного человека.74. The method of any one of claims 66-73, wherein said AAV vector is administered in the range of from about 1x10 8 to about 1x10 14 vector genomes per kilogram (SH/kg) of said person's body weight.
75. Способ по любому из пп.66-74, где указанным способом снижают, уменьшают или ингибируют один или более симптомов указанной потребности в GAA или указанного заболевания; или предотвращают или снижают прогрессирование или ухудшение одного или более симптомов указанной потребности в GAA или указанного заболевания; или стабилизируют один или более симптомов указанной потребности в GAA или указанного заболевания; или улучшают один или более симптомов указанной потребности в GAA или указанного заболевания.75. The method according to any one of paragraphs 66-74, where the specified method reduces, reduces or inhibits one or more symptoms of the specified need for GAA or the specified disease; or prevent or reduce the progression or worsening of one or more symptoms of said GAA requirement or said disease; or stabilize one or more symptoms of said GAA requirement or said disease; or improve one or more symptoms of said GAA requirement or said disease.
76. Способ по п.75, где указанный один или более симптомов выбраны из группы, состоящей из: проблемы с приемом пищи; отсутствие набора веса; плохой контроль головы; плохой контроль шеи; проблемы с дыханием; легочные инфекции; увеличенное сердце; утолщение сердца; пороки сердца; увеличение языка; проблемы с глотанием; увеличение печени; низкой мышечной силы; низкого мышечного тонуса; слабости в ногах; слабости в области талии; слабости в руках; одышку; проблемы с выполнением физических упражнений; трудности с дыханием во время сна; искривление позвоночника и анкилоз.76. The method according to item 75, where the specified one or more symptoms are selected from the group consisting of: problems with eating; lack of weight gain; poor head control; poor neck control; breathing problems; lung infections; enlarged heart; thickening of the heart; heart defects; tongue enlargement; problems with swallowing; liver enlargement; low muscle strength; low muscle tone; weakness in the legs; weakness in the waist; weakness in the arms; shortness of breath problems with exercise; difficulty breathing during sleep; curvature of the spine and ankylosis.
77. Клетка, содержащая нуклеиновую кислоту или экспрессирующую кассету по любому из пп.1-54.77. A cell containing a nucleic acid or an expression cassette according to any one of claims 1-54.
78. Клетка, продуцирующая вектор AAV по любому из пп.55-60.78. A cell producing an AAV vector according to any one of claims 55-60.
79. Способ получения вектора AAV по любому из пп.55-60, включающий79. A method for obtaining an AAV vector according to any one of claims 55-60, including
a. встраивание векторного генома AAV, содержащего указанную нуклеиновую кислоту или экспрессирующую кассету по любому из пп.1-54, в упаковывающую хелперную клетку; иa. inserting an AAV vector genome containing said nucleic acid or expression cassette according to any one of claims 1 to 54 into a packaging helper cell; and
b. культивирование указанной хелперной клетки в условиях для получения указанного вектора AAV.b. culturing said helper cell under conditions to obtain said AAV vector.
80. Способ получения вектора AAV по любому из пп.55-60, включающий80. A method for obtaining an AAV vector according to any one of claims 55-60, including
a. встраивание указанной нуклеиновой кислоты или экспрессирующей кассеты по пп.1-54 в упаковывающую хелперную клетку; иa. inserting said nucleic acid or expression cassette according to claims 1 to 54 into a packaging helper cell; and
b. культивирование указанных хелперных клеток в условиях для получения указанного вектора AAV.b. culturing said helper cells under conditions to obtain said AAV vector.
81. Клетка или способ по любому из пп.77-80, где указанная клетка включает клетки млекопитающих.81. A cell or method according to any one of claims 77-80, wherein said cell includes mammalian cells.
82. Клетка или способ по любому из пп.77-80, где указанная клетка выполняет хелперные функции по упаковке указанного вектора в вирусную частицу.82. A cell or method according to any one of claims 77-80, wherein said cell performs helper functions to package said vector into a viral particle.
83. Клетка или способ по любому из пп.77-80, где указанная клетка выполняет AAV-хелперные функции.83. A cell or method according to any one of claims 77-80, wherein said cell performs AAV helper functions.
84. Клетка или способ по любому из пп.77-80, где указанная клетка предоставляет белки Rep и/или Cap AAV.84. A cell or method according to any one of claims 77-80, wherein said cell provides Rep and/or Cap AAV proteins.
85. Клетка или способ по любому из пп.77-80, где указанную клетку стабильно или транзиторно трансфицируют с использованием полинуклеотидов, кодирующих последовательности белков Rep и/или Cap.85. A cell or method according to any one of claims 77-80, wherein said cell is stably or transiently transfected using polynucleotides encoding Rep and/or Cap protein sequences.
86. Клетка или способ по любому из пп.77-80, где указанная клетка предоставляет белки Rep78 и/или Rep68.86. A cell or method according to any one of claims 77-80, wherein said cell provides Rep78 and/or Rep68 proteins.
87. Клетка или способ по любому из пп.77-80, где указанную клетку стабильно или транзиторно трансфицируют с использованием последовательностей, кодирующих белки Rep78 и/или Rep68.87. A cell or method according to any one of claims 77-80, wherein said cell is stably or transiently transfected using sequences encoding Rep78 and/or Rep68 proteins.
88. Клетка или способ по любому из пп.77-80, где указанная клетка включает клетки HEK-293. 88. A cell or method according to any one of claims 77-80, wherein said cell comprises HEK-293 cells.