Claims (79)
1. Выделенный полинуклеотид, включающий последовательность, кодирующую полипептид, где указанный полипептид включает:1. An isolated polynucleotide comprising a sequence encoding a polypeptide, where the specified polypeptide includes:
(1) один или более из OX40-специфического лиганда, 4-1BB-специфического лиганда, CD40L-специфического лиганда или их функциональных производных; который функционально связан с(1) one or more of an OX40 specific ligand, a 4-1BB specific ligand, a CD40L specific ligand, or functional derivatives thereof; which is functionally related to
(2) сигнальным доменом, промотирующим T-клеточную активацию.(2) a signaling domain that promotes T-cell activation.
2. Полинуклеотид по п. 1, где полипептид включает OX40-специфический лиганд.2. A polynucleotide according to claim 1, wherein the polypeptide comprises an OX40-specific ligand.
3. Полинуклеотид по п. 1, где полипептид включает 4-1BB-специфический лиганд.3. The polynucleotide of claim 1, wherein the polypeptide comprises a 4-1BB specific ligand.
4. Полинуклеотид по п. 1, где полипептид включает CD40L-специфический лиганд.4. The polynucleotide of claim 1, wherein the polypeptide comprises a CD40L-specific ligand.
5. Полинуклеотид по любому из пп. 1, 2, где OX40-специфический лиганд представляет собой OX40L, антитело, которое таргетирует OX40, OX40L-Fc слияние или их комбинацию.5. Polynucleotide according to any one of paragraphs. 1, 2, where the OX40-specific ligand is OX40L, an antibody that targets OX40, an OX40L-Fc fusion, or a combination thereof.
6. Полинуклеотид по любому из пп. 1 и 3, где 4-1BB-специфический лиганд представляет собой 4-1BBL, антитело, которое таргетирует 4-1BB, 4-1BBL-Fc слияние или их комбинацию.6. Polynucleotide according to any one of paragraphs. 1 and 3, where the 4-1BB-specific ligand is 4-1BBL, an antibody that targets the 4-1BB, 4-1BBL-Fc fusion, or a combination thereof.
7. Полинуклеотид по любому из пп. 1 и 4, где CD40L-специфический лиганд представляет собой CD40, антитело, которое таргетирует CD40L, CD40-Fc слияние или любой другой сконструированный белок, способный специфически связываться с CD40L.7. Polynucleotide according to any one of paragraphs. 1 and 4, wherein the CD40L-specific ligand is CD40, an antibody that targets CD40L, a CD40-Fc fusion, or any other engineered protein capable of specifically binding to CD40L.
8. Полинуклеотид по любому из пп. 1-7, где полипептид также включает 1, 2 или более костимулирующих доменов.8. Polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-7, where the polypeptide also includes 1, 2 or more co-stimulatory domains.
9. Полинуклеотид по любому из пп. 1-8, где полинуклеотид также включает последовательность, которая кодирует спейсер между (1) и (2).9. Polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-8, where the polynucleotide also includes a sequence that encodes a spacer between (1) and (2).
10. Полинуклеотид по п. 9, где спейсер имеет длину от 10 до 220 аминокислот.10. A polynucleotide according to claim 9, wherein the spacer is 10 to 220 amino acids in length.
11. Полинуклеотид по п. 10, где спейсер имеет последовательность, которая способствует детекции на поверхности антителом.11. The polynucleotide of claim 10, wherein the spacer has a sequence that facilitates surface detection by the antibody.
12. Полинуклеотид по п. 11, где спейсер может детектироваться анти-Fc Ab.12. A polynucleotide according to claim 11, wherein the spacer can be detected by an anti-Fc Ab.
13. Полинуклеотид по п. 12, где спейсер включает IgG Fc часть.13. The polynucleotide of claim 12, wherein the spacer includes an IgG Fc moiety.
14. Полинуклеотид по любому из пп. 1-13, где полинуклеотид также кодирует химерный антигенный рецептор, T-клеточный рецептор или оба.14. Polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-13, wherein the polynucleotide also encodes a chimeric antigen receptor, a T cell receptor, or both.
15. Полинуклеотид по п. 14, где присутствует 2A элемент или IRES элемент на полинуклеотиде, который кодирует полипептид по п. 1, и полинуклеотиде, который кодирует химерный антигенный рецептор, T-клеточный рецептор или оба.15. The polynucleotide of claim 14, wherein the 2A element or the IRES element is present on the polynucleotide that encodes the polypeptide of claim 1 and the polynucleotide that encodes a chimeric antigen receptor, a T-cell receptor, or both.
16. Полинуклеотид по п. 15, где химерный антигенный рецептор включает 1, 2 или более костимулирующих доменов.16. The polynucleotide of claim 15 wherein the chimeric antigen receptor comprises 1, 2 or more co-stimulatory domains.
17. Полинуклеотид по любому из пп. 1-16, где полинуклеотид присутствует на векторе.17. Polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-16, where the polynucleotide is present on the vector.
18. Полинуклеотид по п. 17, где вектор представляет собой вирусный вектор или невирусный вектор.18. The polynucleotide of claim 17, wherein the vector is a viral vector or a non-viral vector.
19. Полинуклеотид по п. 18, где вирусный вектор представляет собой ретровирусный вектор, лентивирусный вектор, аденовирусный вектор или аденоассоциированный вирусный вектор.19. The polynucleotide of claim 18, wherein the viral vector is a retroviral vector, a lentiviral vector, an adenoviral vector, or an adeno-associated viral vector.
20. Полинуклеотид по любому из пп. 1-19, где полинуклеотид присутствует в клетке.20. Polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-19, where the polynucleotide is present in the cell.
21. Полинуклеотид по п. 20, где клетка представляет собой эукариотическую клетку или бактериальную клетку.21. The polynucleotide of claim 20, wherein the cell is a eukaryotic cell or a bacterial cell.
22. Полинуклеотид по п. 20 или 21, где клетка представляет собой иммунную клетку.22. A polynucleotide according to claim 20 or 21, wherein the cell is an immune cell.
23. Полинуклеотид по любому из пп. 20-22, где клетка является сконструированной.23. Polynucleotide according to any one of paragraphs. 20-22 where the cage is engineered.
24. Полинуклеотид по п. 22, где иммунная клетка представляет собой T-клетку.24. The polynucleotide of claim 22, wherein the immune cell is a T cell.
25. Полинуклеотид по п. 24, где T-клетка включает один или более химерных антигенных рецепторов.25. The polynucleotide of claim 24, wherein the T cell includes one or more chimeric antigen receptors.
26. Полинуклеотид по п. 25, где химерный антигенный рецептор включает 1, 2 или более костимулирующих доменов.26. The polynucleotide of claim 25 wherein the chimeric antigen receptor comprises 1, 2 or more co-stimulatory domains.
27. Полинуклеотид по п. 24, где T-клетка включает один или более сконструированных T-клеточных рецепторов (TCR).27. The polynucleotide of claim 24, wherein the T cell includes one or more engineered T cell receptors (TCRs).
28. Полипептид, экспрессируемый полинуклеотидом по любому из пп. 1-27.28. The polypeptide expressed by the polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-27.
29. Полипептид, включающий:29. A polypeptide comprising:
(1) один или более из OX40-специфического лиганда, 4-1BB-специфического лиганда и CD40; который функционально связан с(1) one or more of an OX40 specific ligand, a 4-1BB specific ligand, and CD40; which is functionally related to
(2) сигнальным доменом, промотирующим T-клеточную активацию.(2) a signaling domain that promotes T-cell activation.
30. Полипептид по п. 29, где сигнальный домен, промотирующий T-клеточную активацию, происходит из CD3 зета субъединицы, DAP12, Fc рецептора или их комбинации.30. The polypeptide of claim 29, wherein the signal domain promoting T-cell activation is derived from the CD3 zeta subunit, DAP12, Fc receptor, or a combination thereof.
31. Полипептид по п. 29 или 30, где полипептид также включает 1, 2 или более костимулирующих доменов.31. A polypeptide according to claim 29 or 30, wherein the polypeptide also includes 1, 2 or more co-stimulatory domains.
32. Экспрессирующая химерный рецептор клетка, включающая полинуклеотид по любому из пп. 1-27 или полипептид по любому из пп. 29-31.32. Expressing a chimeric receptor cell, comprising a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-27 or a polypeptide according to any one of paragraphs. 29-31.
33. Клетка по п. 32, где клетка представляет собой иммунную клетку.33. The cell of claim 32, wherein the cell is an immune cell.
34. Клетка по п. 32 или 33, где клетка является сконструированной.34. The cage according to claim 32 or 33, where the cage is engineered.
35. Клетка по п. 33, где иммунная клетка представляет собой T-клетку.35. The cell of claim 33, wherein the immune cell is a T cell.
36. Клетка по п. 35, где T-клета представляет собой CAR-трансдуцированную T-клетку.36. The cell of claim 35, wherein the T cell is a CAR transduced T cell.
37. Клетка по п. 35, где T-клетка представляет собой T-клеточный рецептор (TCR)-трансдуцированную T-клетку.37. The cell of claim 35, wherein the T cell is a T cell receptor (TCR) transduced T cell.
38. Клетка по любому из пп. 32-37, где клетка сконструирована так, чтобы отсутствовала эндогенная экспрессия одного или более генов.38. Cell according to any one of paragraphs. 32-37, where the cell is designed so that there is no endogenous expression of one or more genes.
39. Клетка по п. 38, где клетка сконструирована так, чтобы отсутствовала эндогенная экспрессия 4-1BB, OX40 и/или CD40L.39. The cell of claim 38, wherein the cell is engineered to lack endogenous expression of 4-1BB, OX40 and/or CD40L.
40. Клетка по п. 38 или 39, где клетка сконструирована с использованием CRISPR/Cas9, нуклеаз “цинковые пальцы”, TALE нуклеаз или мегануклеаз.40. The cell of claim 38 or 39, wherein the cell is engineered using CRISPR/Cas9, zinc finger nucleases, TALE nucleases, or meganucleases.
41. Клетка по любому из пп. 32-40, где клетка помещена в клеточный депозитарий.41. Cell according to any one of paragraphs. 32-40 where the cell is placed in the cell depository.
42. Способ получения клеток для клеточной терапии, включающий стадию трансфекции иммунных эффекторных клеток полинуклеотидом по любому из пп. 1-27.42. A method of obtaining cells for cell therapy, comprising the step of transfecting immune effector cells with a polynucleotide according to any one of paragraphs. 1-27.
43. Способ по п. 42, дополнительно включающий стадию депонирования клеток в клеточном депозитарии.43. The method of claim 42, further comprising the step of depositing cells in a cell depository.
44. Способ по п. 42 или 43, дополнительно включающий стадию модификации клеток для экспрессии одного или более химерных антигенных рецепторов и/или одного или более рекомбинантных T-клеточных рецепторов.44. The method of claim 42 or 43, further comprising the step of modifying cells to express one or more chimeric antigen receptors and/or one or more recombinant T cell receptors.
45. Способ по любому из пп. 42-44, дополнительно включающий стадию доставки эффективного количества клеток субъекту, нуждающемуся в этом.45. The method according to any one of paragraphs. 42-44, further comprising the step of delivering an effective amount of cells to a subject in need thereof.
46. Способ по п. 45, где клетки являются аллогенными по отношению к субъекту.46. The method of claim 45, wherein the cells are allogeneic to the subject.
47. Способ лечения медицинского состояния у субъекта с использованием аллогенных терапевтических клеток, включающий стадию доставки субъекту терапевтически эффективного количества аллогенных клеток, где указанные клетки экспрессируют полипептид, включающий (1) один или более из OX40-специфического лиганда, 4-1BB-специфического лиганда, CD40L-специфического лиганда или их функциональных производных; который функционально связан с (2) сигнальным доменом, промотирующим T-клеточную активацию.47. A method of treating a medical condition in a subject using allogeneic therapeutic cells, comprising the step of delivering to the subject a therapeutically effective amount of allogeneic cells, wherein said cells express a polypeptide comprising (1) one or more of an OX40-specific ligand, a 4-1BB-specific ligand, CD40L-specific ligand or functional derivatives thereof; which is operably linked to (2) a signaling domain that promotes T-cell activation.
48. Способ по п. 47, где клетки получены из клеточного депозитария.48. The method of claim 47, wherein the cells are obtained from a cell depository.
49. Способ по п. 47 или 48, где клетки экспрессируют один или более химерных антигенных рецепторов и/или один или более рекомбинантных T-клеточных рецепторов.49. The method of claim 47 or 48, wherein the cells express one or more chimeric antigen receptors and/or one or more recombinant T cell receptors.
50. Способ предотвращения отторжения аллогенных клеток, ткани или органов у субъекта, включающий стадию доставки субъекту эффективного количества аллогенных иммунных клеток, экспрессирующих сконструированный химерный рецептор, который включает внеклеточный домен, который нацелен на соединения, которые селективно присутствуют на активированных T-клетках, и который включает CD3 зета,50. A method for preventing rejection of allogeneic cells, tissue, or organs in a subject, comprising the step of delivering to the subject an effective amount of allogeneic immune cells expressing an engineered chimeric receptor that includes an extracellular domain that targets compounds that are selectively present on activated T cells, and that includes CD3 zeta,
где стадия доставки приводит к следующему у субъекта:where the delivery stage results in the following in the subject:
(1) ингибирование эндогенных аллореактивных T-клеток у субъекта; и/или(1) inhibition of endogenous alloreactive T cells in a subject; and/or
(2) супрессия активации NK-клеток у субъекта.(2) suppression of NK cell activation in a subject.
51. Способ по п. 50, где аллогенные клетки представляют собой аллогенные иммунные клетки, экспрессирующие химерный рецептор.51. The method of claim 50 wherein the allogeneic cells are allogeneic immune cells expressing the chimeric receptor.
52. Способ по п. 50 или 51, где аллогенные клетки экспрессируют химерный антигенный рецептор или сконструированный T-клеточный рецептор.52. The method of claim 50 or 51, wherein the allogeneic cells express the chimeric antigen receptor or engineered T-cell receptor.
53. Способ по п. 50, где аллогенные иммунные клетки доставляются субъекту до, во время и/или после трансплантаци ткани и/или органа у субъекта.53. The method of claim 50 wherein the allogeneic immune cells are delivered to the subject before, during and/or after tissue and/or organ transplantation in the subject.
54. Способ по любому из пп. 50-53, где активированные T-клетки являются патогенными T-клетками.54. The method according to any one of paragraphs. 50-53, where activated T cells are pathogenic T cells.
55. Способ селективного таргетирования активированных T-клеток у субъекта, включающий стадию доставки субъекту эффективного количества иммунных клеток, экспрессирующих сконструированный химерный рецептор, где указанный химерный рецептор включает:55. A method for selectively targeting activated T cells in a subject, comprising the step of delivering to the subject an effective amount of immune cells expressing the engineered chimeric receptor, wherein said chimeric receptor comprises:
(1) внеклеточный домен, который нацелен на соединения, которые селективно присутствуют на активированных T-клетках; и(1) an extracellular domain that targets compounds that are selectively present on activated T cells; and
(2) сигнальный домен, промотирующий T-клеточную активацию.(2) a signaling domain that promotes T-cell activation.
56. Способ по п. 55, где сигнальный домен, промотирующий T-клеточную активацию, получен из CD3 зета субъединицы, DAP12, Fc рецептора или их комбинации.56. The method of claim 55, wherein the signaling domain promoting T-cell activation is derived from the CD3 zeta subunit, DAP12, Fc receptor, or a combination thereof.
57. Способ по п. 55 или 56, где активированные T-клетки являются патогенными T-клетками.57. The method of claim 55 or 56, wherein the activated T cells are pathogenic T cells.
58. Способ профилактики или лечения медицинского состояния, связанного с активированными T-клетками, у субъекта, включающий стадию доставки субъекту эффективного количества иммунных клеток, экспрессирующих сконструированный химерный рецептор, который селективно таргетирует указанные активированные T-клетки, где указанный химерный рецептор включает:58. A method for preventing or treating a medical condition associated with activated T cells in a subject, comprising the step of delivering to the subject an effective amount of immune cells expressing an engineered chimeric receptor that selectively targets said activated T cells, wherein said chimeric receptor comprises:
(1) внеклеточный домен, который нацелен на соединения, которые селективно присутствуют на активированных T-клетках; и(1) an extracellular domain that targets compounds that are selectively present on activated T cells; and
(2) сигнальный домен, промотирующий T-клеточную активацию.(2) a signaling domain that promotes T-cell activation.
59. Способ по п. 58, где химерный рецептор также включает 1, 2 или более костимулирующих доменов.59. The method of claim 58 wherein the chimeric receptor also includes 1, 2 or more co-stimulatory domains.
60. Способ по п. 58 или 59, где медицинское состояние представляет собой аутоиммунное расстройство.60. The method of claim 58 or 59, wherein the medical condition is an autoimmune disorder.
61. Способ по любому из пп. 58-60, где медицинское состояние включает отторжение трансплантата, болезнь трансплантат против хозяина, диабет I типа, рассеянный склероз, аутоиммунный колит или их комбинацию.61. The method according to any one of paragraphs. 58-60, wherein the medical condition includes graft rejection, graft versus host disease, type I diabetes, multiple sclerosis, autoimmune colitis, or a combination thereof.
62. Способ предотвращения NK-клеточно-опосредованного отторжения хозяином аллогенных T-клеток, тканей или органов у субъекта, включающий стадию доставки субъекту эффективного количества иммунных клеток, экспрессирующих сконструированный химерный рецептор, который включает внеклеточный домен, который нацелен на соединения, которые селективно присутствуют на активированных T-клетках, и который также включает сигнальный домен, промотирующий T-клеточную активацию.62. A method of preventing NK cell-mediated host rejection of allogeneic T cells, tissues, or organs in a subject, comprising the step of delivering to the subject an effective amount of immune cells expressing an engineered chimeric receptor that includes an extracellular domain that targets compounds that are selectively present on activated T cells, and which also includes a signaling domain that promotes T cell activation.
63. Способ по п. 62, где иммунные клетки, экспрессирующие сконструированный химерный рецептор, представляют собой аллогенные T-клетки.63. The method of claim 62, wherein the immune cells expressing the engineered chimeric receptor are allogeneic T cells.
64. Способ по п. 62 или 63, где иммунные клетки экспрессируют химерный антигенный рецептор или сконструированный T-клеточный рецептор.64. The method of claim 62 or 63, wherein the immune cells express the chimeric antigen receptor or engineered T-cell receptor.
65. Способ по любому из пп. 62-64, где количество иммунных клеток, экспрессирующих сконструированный химерный рецептор, которые доставляются субъекту, находится в пределах 102-1012 на м2.65. The method according to any one of paragraphs. 62-64, wherein the number of immune cells expressing the engineered chimeric receptor delivered to the subject is in the range of 10 2 -10 12 per m 2 .
66. Способ по любому из пп. 47-65, где клетки, экспрессирующие химерный рецептор, доставляются субъекту системно или местно.66. The method according to any one of paragraphs. 47-65, wherein the cells expressing the chimeric receptor are delivered systemically or topically to the subject.
67. Способ по любому из пп. 47-66, где иммунные клетки являются T-клетками.67. The method according to any one of paragraphs. 47-66, where the immune cells are T cells.
68. Способ по любому из пп. 47-67, где иммунные клетки доставляют субъекту один или более раз.68. The method according to any one of paragraphs. 47-67 wherein the immune cells deliver to the subject one or more times.