Claims (71)
1. Агент для аналит-зависимой доставки к клеточной мишени, включающий в себя:1. An agent for analyte-dependent delivery to a cellular target, including:
наночастицу и одноцепочечный распознающий олигонуклеотид,nanoparticle and single-stranded recognition oligonucleotide,
упомянутая наночастица связана с первым концом упомянутого распознающего олигонуклеотида,said nanoparticle is linked to the first end of said recognition oligonucleotide,
упомянутый распознающий олигонуклеотид способен специфически связываться с упомянутым аналитом,said recognition oligonucleotide is capable of specifically binding to said analyte,
второй конец упомянутого распознающего олигонуклеотида ковалентно связан с сигнальным рецептором,the second end of said recognition oligonucleotide is covalently linked to a signaling receptor,
причем упомянутый сигнальный рецептор выбран так, что он не способен специфически связываться с упомянутым аналитом,wherein said signal receptor is selected so that it is not capable of specifically binding to said analyte,
упомянутый сигнальный рецептор выбран так, что он способен специфически связываться с сигнальным лигандом,said signaling receptor is selected so that it is able to specifically bind to a signaling ligand,
упомянутый сигнальный лиганд связан с упомянутой клеточной мишенью.said signaling ligand is associated with said cellular target.
2. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид имеет вторичную структуру в молекулярной форме без шпилек.2. The agent of claim 1, wherein said recognition oligonucleotide has a secondary structure in molecular form without hairpins.
3. Агент по п. 1, в котором каждая шпилька во вторичной структуре упомянутого распознающего олигонуклеотида в молекулярной форме имеет менее 8 пар комплементарных олигонуклеотидов.3. The agent of claim 1, wherein each hairpin in the secondary structure of said recognition oligonucleotide in molecular form has less than 8 pairs of complementary oligonucleotides.
4. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид в молекулярной форме не имеет шпилек, включающих в себя более чем 7 пар комплементарных нуклеотидов.4. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide in molecular form does not have hairpins comprising more than 7 pairs of complementary nucleotides.
5. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид в молекулярной форме не имеет шпилек, включающих в себя более чем 5 пар комплементарных нуклеотидов.5. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide in molecular form does not have hairpins comprising more than 5 pairs of complementary nucleotides.
6. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид в молекулярной форме не имеет шпилек, включающих в себя более чем 3 пар комплементарных нуклеотидов.6. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide in molecular form does not have hairpins comprising more than 3 pairs of complementary nucleotides.
7. Агент по п. 1, в котором упомянутый аналит является водорастворимым веществом.7. An agent according to claim 1, wherein said analyte is a water-soluble substance.
8. Агент по п. 1, в котором присутствие упомянутого аналита увеличивает связывание агента с мишенью.8. The agent of claim 1, wherein the presence of said analyte increases the binding of the agent to the target.
9. Агент по п. 1, в котором упомянутая клеточная мишень - раковая клетка.9. An agent according to claim 1, wherein said cellular target is a cancer cell.
10. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид в молекулярной форме имеет структуру с энергией образования менее энергетическую чем 8 ккал/моль.10. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide in molecular form has a structure with an energy of formation less than 8 kcal / mol.
11. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид в молекулярной форме имеет структуру с энергией образования менее энергетическую чем 5 ккал/моль.11. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide in molecular form has a structure with an energy of formation less than 5 kcal / mol.
12. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид в молекулярной форме имеет структуру с энергией образования менее энергетическую чем 3 ккал/моль.12. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide in molecular form has a structure with an energy of formation less than 3 kcal / mol.
13. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид в молекулярной форме имеет структуру с энергией образования менее энергетическую чем 1 ккал/моль.13. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide in molecular form has a structure with an energy of formation less than 1 kcal / mol.
14. Агент по п. 1, в котором упомянутая наночастица связана с первым концом упомянутого распознающего олигонуклеотида за счет SH-группы упомянутого распознающего олигонуклеотида, причем связывание упомянутой частицы с упомянутым одноцепочечным распознающим олигонуклеотидом производят из раствора, не содержащего веществ, имеющих SH-группы, кроме олигонуклеотидов.14. An agent according to claim 1, in which said nanoparticle is linked to the first end of said recognition oligonucleotide due to the SH-group of said recognition oligonucleotide, and the binding of said particle to said single-stranded recognition oligonucleotide is performed from a solution that does not contain substances having SH-groups, except for oligonucleotides.
15. Агент по п. 1, в котором упомянутая наночастица связана с первым концом упомянутого распознающего олигонуклеотида за счет SH-группы упомянутого распознающего олигонуклеотида, причем связывание упомянутой частицы с упомянутым одноцепочечным распознающим олигонуклеотидом производят из раствора, не содержащего меркапто-углеводородов (тиолов).15. An agent according to claim 1, wherein said nanoparticle is linked to the first end of said recognition oligonucleotide by the SH group of said recognition oligonucleotide, wherein said particle is bound to said single-stranded recognition oligonucleotide from a solution free of mercapto hydrocarbons (thiols).
16. Агент по п. 1, в котором упомянутая наночастица связана с первым концом упомянутого распознающего олигонуклеотида за счет тиольной группы упомянутого распознающего олигонуклеотида, причем связывание упомянутой частицы с упомянутым одноцепочечным распознающим олигонуклеотидом производят из раствора, не содержащего веществ, имеющих SH-группы, кроме упомянутого одноцепочечного распознающего олигонуклеотида.16. An agent according to claim 1, wherein said nanoparticle is linked to the first end of said recognition oligonucleotide due to the thiol group of said recognition oligonucleotide, and the binding of said particle to said single-stranded recognition oligonucleotide is performed from a solution that does not contain substances having SH groups, except said single-stranded recognition oligonucleotide.
17. Агент по п. 1, в котором упомянутая наночастица имеет золотую поверхность, а последними нуклеотидами на упомянутом втором конце упомянутого одноцепочечного распознающего олигонуклеотида является не менее 2 аденозинов, которые за счет сродства к золоту приближают упомянутый сигнальный рецептор к поверхности упомянутой наночастицы в отсутствие аналита, что снижает связывание сигнального рецептора с сигнальным лигандом, причем связывание аналита с упомянутым одноцепочечным распознающим олигонуклеотидом вызывает пространственное распрямление упомянутого одноцепочечного распознающего олигонуклеотида и отдаление упомянутого сигнального рецептора от поверхности упомянутой наночастицы, что увеличивает связывание сигнального рецептора с сигнальным лигандом.17. An agent according to claim 1, in which said nanoparticle has a gold surface, and the last nucleotides at said second end of said single-stranded recognition oligonucleotide are at least 2 adenosines, which, due to their affinity for gold, bring said signal receptor closer to the surface of said nanoparticle in the absence of an analyte , which reduces the binding of the signaling receptor to the signaling ligand, and the binding of the analyte to the said single-stranded recognition oligonucleotide causes spatial straightening of the said single-stranded recognition oligonucleotide and the distance of the said signaling receptor from the surface of the said nanoparticle, which increases the binding of the signaling receptor to the signaling ligand.
18. Агент по п. 1, в котором упомянутая наночастица имеет золотую поверхность, а последними нуклеотидами на упомянутом втором конце упомянутого одноцепочечного распознающего олигонуклеотида является не менее 3 аденозинов, которые за счет сродства к золоту приближают упомянутый сигнальный рецептор к поверхности упомянутой наночастицы в отсутствие аналита, что снижает связывание сигнального рецептора с сигнальным лигандом, причем связывание аналита с упомянутым одноцепочечным распознающим олигонуклеотидом вызывает пространственное распрямление упомянутого одноцепочечного распознающего олигонуклеотида и отдаление упомянутого сигнального рецептора от поверхности упомянутой наночастицы, что увеличивает связывание сигнального рецептора с сигнальным лигандом.18. An agent according to claim 1, wherein said nanoparticle has a gold surface, and the last nucleotides at said second end of said single-stranded recognition oligonucleotide are at least 3 adenosines, which, due to their affinity for gold, bring said signal receptor closer to the surface of said nanoparticle in the absence of an analyte , which reduces the binding of the signaling receptor to the signaling ligand, and the binding of the analyte to the said single-stranded recognition oligonucleotide causes spatial straightening of the said single-stranded recognition oligonucleotide and the distance of the said signaling receptor from the surface of the said nanoparticle, which increases the binding of the signaling receptor to the signaling ligand.
19. Агент по п. 1, в котором упомянутый сигнальный рецептор связан на упомянутом втором конце упомянутого распознающего олигонуклеотида с аденозином, который за счет сродства к золоту приближает упомянутый сигнальный рецептор к поверхности упомянутой наночастицы в отсутствие аналита, причем связывание аналита с упомянутым одноцепочечным распознающим олигонуклеотидом вызывает пространственное распрямление упомянутого одноцепочечного распознающего олигонуклеотида и отдаление упомянутого сигнального рецептора от поверхности упомянутой наночастицы, что увеличивает связывание сигнального рецептора с сигнальным лигандом.19. An agent according to claim 1, wherein said signal receptor is linked at said second end of said recognition oligonucleotide to adenosine, which, due to its affinity for gold, brings said signal receptor to the surface of said nanoparticle in the absence of an analyte, wherein the binding of the analyte to said single-stranded recognition oligonucleotide causes spatial straightening of said single-stranded recognition oligonucleotide and distance of said signaling receptor from the surface of said nanoparticle, which increases the binding of the signaling receptor to the signaling ligand.
20. Агент по п. 1, в котором упомянутый сигнальный рецептор связан на упомянутом втором конце упомянутого распознающего олигонуклеотида с полиаденозином, который за счет сродства к золоту приближает упомянутый сигнальный рецептор к поверхности упомянутой наночастицы в отсутствие аналита, причем связывание аналита с упомянутым одноцепочечным распознающим олигонуклеотидом вызывает пространственное распрямление упомянутого одноцепочечного распознающего олигонуклеотида и отдаление упомянутого сигнального рецептора от поверхности упомянутой наночастицы, что увеличивает связывание сигнального рецептора с сигнальным лигандом.20. An agent according to claim 1, wherein said signal receptor is linked at said second end of said recognition oligonucleotide to polyadenosine, which, due to its affinity for gold, brings said signal receptor closer to the surface of said nanoparticle in the absence of an analyte, wherein the binding of the analyte to said single-stranded recognition oligonucleotide causes spatial straightening of said single-stranded recognition oligonucleotide and distance of said signaling receptor from the surface of said nanoparticle, which increases the binding of the signaling receptor to the signaling ligand.
21. Агент по п. 20, в котором упомянутый полиаденозин содержит не менее 2 аденозинов.21. An agent according to claim 20, wherein said polyadenosine contains at least 2 adenosines.
22. Агент по п. 20, в котором упомянутый полиаденозин содержит не менее 3 аденозинов.22. An agent according to claim 20, wherein said polyadenosine contains at least 3 adenosines.
23. Агент по п. 1, в котором упомянутая наночастица выполнена из золота.23. An agent according to claim 1, wherein said nanoparticle is made of gold.
24. Агент по п. 1, в котором упомянутая наночастица имеет структуру ядра из магнитного материала с оболочной из золота.24. An agent according to claim 1, wherein said nanoparticle has a core structure of magnetic material with a shell of gold.
25. Агент по п. 1, в котором упомянутая наночастица выполнена из магнитного материала.25. An agent according to claim 1, wherein said nanoparticle is made of a magnetic material.
26. Агент по п. 1, в котором упомянутый аналит является нуклеиновой кислотой.26. An agent according to claim 1, wherein said analyte is a nucleic acid.
27. Агент по п. 1, в котором упомянутый аналит является малой молекулой.27. The agent of claim 1, wherein said analyte is a small molecule.
28. Агент по п. 1, в котором упомянутый аналит является белковым соединением.28. An agent according to claim 1, wherein said analyte is a protein compound.
29. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид является аптамером.29. The agent of claim 1, wherein said recognition oligonucleotide is an aptamer.
30. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид имеет длину не менее 15 нуклеотидов.30. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide is at least 15 nucleotides in length.
31. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид имеет длину не менее 20 нуклеотидов.31. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide is at least 20 nucleotides in length.
32. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид имеет длину не менее 25 нуклеотидов.32. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide is at least 25 nucleotides in length.
33. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид имеет длину не менее 27 нуклеотидов.33. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide is at least 27 nucleotides in length.
34. Агент по п. 1, в котором упомянутый аналит является малой ДНК или малой РНК.34. An agent according to claim 1, wherein said analyte is small DNA or small RNA.
35. Агент по п. 1, в котором упомянутый аналит является микро ДНК или микро РНК.35. An agent according to claim 1, wherein said analyte is microDNA or microRNA.
36. Агент по п. 1, в котором упомянутый аналит является ДНК или РНК и имеет длину менее 25 нуклеотидов.36. An agent according to claim 1, wherein said analyte is DNA or RNA and is less than 25 nucleotides in length.
37. Агент по п. 1, в котором упомянутый аналит является ДНК или РНК и имеет длину менее 20 нуклеотидов.37. An agent according to claim 1, wherein said analyte is DNA or RNA and is less than 20 nucleotides in length.
38. Агент по п. 1, в котором упомянутый аналит является ДНК или РНК и имеет длину менее 17 нуклеотидов.38. An agent according to claim 1, wherein said analyte is DNA or RNA and is less than 17 nucleotides in length.
39. Агент по п. 1, в котором упомянутый аналит является ДНК или РНК и имеет длину менее 15 нуклеотидов.39. An agent according to claim 1, wherein said analyte is DNA or RNA and is less than 15 nucleotides in length.
40. Агент по п. 1, в котором упомянутый аналит является ДНК или РНК и имеет длину менее 12 нуклеотидов.40. An agent according to claim 1, wherein said analyte is DNA or RNA and is less than 12 nucleotides in length.
41. Агент по п. 1, в котором помимо упомянутого распознающего олигонуклеотида, на наночастице иммобилизуют дополнительное соединение, не способное к специфическому связыванию с аналитом.41. An agent according to claim 1, in which, in addition to said recognition oligonucleotide, an additional compound, incapable of specific binding to the analyte, is immobilized on the nanoparticle.
42. Агент по п. 41, в котором в качестве упомянутого дополнительного соединения используют тиолированные олигонуклеотиды.42. An agent according to claim 41, wherein thiolated oligonucleotides are used as said additional compound.
43. Агент по п. 41, в котором в качестве упомянутого дополнительного соединения используют молекулы тиолированных ДНК-олигонуклеотидов.43. An agent according to claim 41, wherein molecules of thiolated DNA oligonucleotides are used as said additional compound.
44. Агент по п. 1, в котором упомянутым сигнальным рецептором является низкомолекулярный рецептор.44. An agent according to claim 1, wherein said signaling receptor is a low molecular weight receptor.
45. Агент по п. 1, в котором упомянутым низкомолекулярным сигнальным рецептором является биотин.45. An agent according to claim 1, wherein said low molecular weight signaling receptor is biotin.
46. Агент по п. 1, в котором упомянутым низкомолекулярным сигнальным рецептором является флуоресцеин.46. An agent according to claim 1, wherein said low molecular weight signaling receptor is fluorescein.
47. Агент по п. 1, в котором упомянутым лигандом сигнального рецептора является авидин, стрептавидин или нейтравидин.47. An agent according to claim 1, wherein said signaling receptor ligand is avidin, streptavidin, or neutravidin.
48. Агент по п. 1, в котором упомянутым лигандом сигнального рецептора является антитело.48. The agent of claim 1, wherein said signaling receptor ligand is an antibody.
49. Агент по п. 48, в котором упомянутое антитело специфично взаимодействует с упомянутым сигнальным рецептором.49. The agent of claim 48, wherein said antibody specifically interacts with said signaling receptor.
50. Агент по п. 49, в котором упомянутое антитело специфично связывается с биотином.50. The agent of claim 49, wherein said antibody specifically binds to biotin.
51. Агент по п. 1, в котором доля аденозиновых остатков в структуре упомянутого распознающего олигонуклеотида не превышает 25%.51. An agent according to claim 1, wherein the proportion of adenosine residues in the structure of said recognition oligonucleotide does not exceed 25%.
52. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид крепится на поверхности упомянутой наночастицы за свой 3'-конец, а сигнальный рецептор - за 5'-конец.52. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide is attached to the surface of said nanoparticle at its 3'-end, and a signaling receptor at its 5'-end.
53. Агент по п. 1, в котором упомянутый распознающий олигонуклеотид крепится на поверхности упомянутой наночастицы за свой 5'-конец, а сигнальный рецептор - за 3'-конец.53. An agent according to claim 1, wherein said recognition oligonucleotide is attached to the surface of said nanoparticle at its 5'-end, and a signaling receptor at its 3'-end.
54. Агент по п. 1, в котором упомянутый сигнальный рецептор крепится на упомянутом распознающем олигонуклеотиде в любом месте цепи, за исключением крайнего нуклеотида.54. An agent according to claim 1, wherein said signaling receptor is attached to said recognition oligonucleotide anywhere in the chain, except for the terminal nucleotide.
55. Агент по п. 1, в котором упомянутая частица несет диагностическую функцию.55. An agent according to claim 1, wherein said particle has a diagnostic function.
56. Агент по п. 1, в котором упомянутая частица несет терапевтическую функцию.56. An agent according to claim 1, wherein said particle has a therapeutic function.
57. Агент по п. 1, в котором упомянутая частица является диагностическим средством.57. An agent according to claim 1, wherein said particle is a diagnostic agent.
58. Агент по п. 1, в котором упомянутая частица является терапевтическим средством.58. An agent according to claim 1, wherein said particle is a therapeutic agent.
59. Агент по п. 1, в котором упомянутая частица включает в себя диагностическое средство.59. The agent of claim 1, wherein said particle includes a diagnostic agent.
60. Агент по п. 1, в котором упомянутая частица включает в себя терапевтическое средство.60. An agent according to claim 1, wherein said particle comprises a therapeutic agent.
61. Способ доставки физиологически-активного соединения к клетке, включающий приведение в контакт упомянутой клетки с агентом по п. 1, в котором упомянутая частица включает в себя упомянутое физиологически-активное соединение.61. A method of delivering a physiologically active compound to a cell, comprising contacting said cell with an agent according to claim 1, wherein said particle includes said physiologically active compound.
62. Способ по п. 61, в котором упомянутое физиологически-активное соединение является диагностическим средством.62. The method of claim 61, wherein said physiologically active compound is a diagnostic agent.
63. Способ по п. 61, в котором упомянутое физиологически-активное соединение является терапевтическим средством.63. The method of claim 61, wherein said physiologically active compound is a therapeutic agent.
64. Способ по п. 61, в котором упомянутое физиологически-активное соединение является контрастирующим средством.64. The method of claim 61, wherein said physiologically active compound is a contrast agent.