Claims (36)
1. Клетка, морула или бластоциста отличного от человека животного, у которой геном несет мутацию в обоих аллелях гена NKX2-5, гена HANDII, гена ТВХ5 или их комбинации такую, чтобы у клетки или бластоцисты отличного от человека животного отсутствовал функциональный белок NKX2-5, белок HANDII, белок ТВХ5 или их комбинация.1. A cell, morula or blastocyst of a non-human animal in which the genome carries a mutation in both alleles of the NKX2-5 gene, HANDII gene, TBX5 gene, or a combination thereof such that the cell or blastocyst of a non-human animal does not have a functional protein NKX2-5 , HANDII protein, TBX5 protein, or a combination thereof.
2. Клетка, морула или бластоциста отличного от человека животного по п. 1, у которой мутация представляет собой делецию гена NKX2-5, гена HANDII, гена ТВХ5 или их комбинации.2. A cell, morula, or blastocyst of a non-human animal according to claim 1, wherein the mutation is a deletion of the NKX2-5 gene, HANDII gene, TBX5 gene, or a combination thereof.
3. Клетка, морула или бластоциста отличного от человека животного по п. 1 или п. 2, причем клетка или бластоциста отличного от человека животного является свиной, бычьей, лошадиной или козьей.3. A cell, morula or blastocyst of a non-human animal according to claim 1 or claim 2, wherein the cell or blastocyst of a non-human animal is pork, bovine, horse or goat.
4. Химерное отличное от человека животное, морула или бластоциста, экспрессирующие NKX2-5, HANDII, ТВХ5 человека или их комбинацию и лишенные экспрессии NKX2-5, HANDII, ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации.4. Chimeric non-human animal, morula or blastocyst expressing NKX2-5, HANDII, human TBX5 or a combination thereof and lacking the expression of NKX2-5, HANDII, TBX5 non-human animal or a combination thereof.
5. Химерное отличное от человека животное по п. 4, причем химерное отличное от человека животное производит гуманизированные сердечные клетки и/или гуманизированную сердечную ткань.5. A chimeric non-human animal according to claim 4, wherein the chimeric non-human animal produces humanized heart cells and / or humanized heart tissue.
6. Химерная свинья, экспрессирующая экзогенный NKX2-5, HANDII, ТВХ5 свиньи или их комбинацию и лишенная экспрессии эндогенного NKX2-5, HANDII, ТВХ5 свиньи или их комбинации (химера свинья-свинья).6. Chimeric pig expressing exogenous NKX2-5, HANDII, TBX5 pigs or a combination thereof and lacking expression of endogenous NKX2-5, HANDII, TBX5 pigs or a combination thereof (pig-chimera pig).
7. Химерное отличное от человека животное по п. 4 или п. 5, причем отличное от человека животное относится к свиньим, бычьим, лошадиным или козьим.7. Chimeric non-human animal according to claim 4 or claim 5, wherein the non-human animal refers to pig, bovine, equine or goat.
8. Способ получения химерного отличного от человека животного, экспрессирующего ген NKX2-5, ген HANDII, ген ТВХ5 человека или их комбинацию, предусматривающий:8. A method of producing a chimeric non-human animal expressing the NKX2-5 gene, the HANDII gene, human TBX5 gene, or a combination thereof, comprising:
а) получение клетки отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII ТВХ5 или их комбинации, где обе копии гена NKX2-5, гена HANDII, гена ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации несут мутацию, которая предотвращает продуцирование функционального белка NKX2-5, белка HANDII, белка ТВХ5 или их комбинации;a) obtaining a cell of a non-human animal that is NKX2-5, HANDII TBX5 zero or a combination thereof, where both copies of the NKX2-5 gene, HANDII gene, TBX5 gene of a non-human animal or a combination thereof carry a mutation that prevents the production of the functional NKX2 protein -5, HANDII protein, TBX5 protein, or a combination thereof;
b) создание морулы или бластоцисты отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, путем переноса ядра соматической клетки, предусматривающего слияние ядра из указанной клетки отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, полученной на этапе а), с энуклеированным ооцитом отличного от человека животного и активацию указанного ооцита к делению таким образом, чтобы формировалась морула или бластоциста отличного от человека животного, нулевая по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации;b) the creation of a morula or blastocyst of a non-human animal, NKX2-5, HANDII, TBX5, or a combination thereof, by transferring a somatic cell nucleus, providing for the fusion of a nucleus from a specified cell of a non-human animal, NKX2-5, HANDII, TBX5 zero or a combination thereof obtained in step a) with an enucleated oocyte of a non-human animal and activating said oocyte by dividing so that a morula or blastocyst of a non-human animal is formed, zero according to NKX2-5, HANDII, TBX5, or a combination thereof;
c) введение стволовых клеток человека в морулу или бластоцисту, нулевую по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации, полученную на этапе b); иc) the introduction of human stem cells into a morula or blastocyst, zero in NKX2-5, HANDII, TBX5 of a non-human animal or a combination thereof, obtained in step b); and
d) имплантацию указанной морулы или бластоцисты, полученной на этапе с), отличному от человека животному, являющемуся псевдобеременной суррогатной матерью, с получением химерного отличного от человека животного, экспрессирующего NKX2-5, HANDII, ТВХ5 человека или их комбинацию.d) implanting the indicated morula or blastocyst obtained in step c) to a non-human animal that is a pseudopregnant surrogate mother, to produce a chimeric non-human animal expressing human NKX2-5, HANDII, TBX5, or a combination thereof.
9. Способ получения химерной свиньи, экспрессирующей экзогенный ген NKX2-5, ген HANDII, ген ТВХ5 или их комбинацию, предусматривающий:9. A method of producing a chimeric pig expressing the exogenous NKX2-5 gene, HANDII gene, TBX5 gene, or a combination thereof, comprising:
a) получение клетки свиньи, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, где обе копии эндогенного гена NKX2-5, гена HANDII, гена ТВХ5 свиньи или их комбинации несут мутацию, которая предотвращает продуцирование функционального эндогенного белка NKX2-5, белка HANDII, белка ТВХ5 или их комбинации;a) obtaining a pig cell NKX2-5, HANDII, TBX5 null or a combination thereof, where both copies of the endogenous NKX2-5 gene, HANDII gene, pig TBX5 gene or combinations thereof carry a mutation that prevents the production of the functional endogenous NKX2-5 protein, HANDII protein, TBX5 protein, or a combination thereof;
b) создание морулы или бластоцисты свиньи, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, путем переноса ядра соматической клетки, предусматривающего слияние ядра из указанной клетки свиньи, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, полученной на этапе а), с энуклеированным ооцитом свиньи и активацию указанного ооцита к делению таким образом, чтобы формировалась морула или бластоциста свиньи, нулевая по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации;b) the creation of a morula or blastocyst of a pig that is NKX2-5, HANDII, TBX5 zero, or a combination thereof, by transferring a somatic cell nucleus providing for nuclear fusion from a specified pig cell, NKX2-5, HANDII, TBX5 or a combination thereof obtained on step a), with enucleated pig oocyte and activation of the indicated oocyte by division in such a way that a pig morula or blastocyst is formed, zero in NKX2-5, HANDII, TBX5, or a combination thereof;
c) введение стволовых клеток свиньи в морулу или бластоцисту, нулевую по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 свиньи или их комбинации, полученную на этапе b); иc) the introduction of pig stem cells into morula or blastocyst, zero according to NKX2-5, HANDII, pig TBX5, or a combination thereof obtained in step b); and
d) имплантацию указанной морулы или бластоцисты, полученной на этапе с), свинье, являющейся псевдобеременной суррогатной матерью, с получением химерной свиньи, экспрессирующей экзогенный NKX2-5, HANDII, ТВХ5 свиньи или их комбинацию.d) implanting said morula or blastocyst obtained in step c) with a pseudo-pregnant surrogate mother pig to produce a chimeric pig expressing exogenous pig NKX2-5, HANDII, TBX5, or a combination thereof.
10. Способ получения человеческих или гуманизированных сердечных клеток у отличного от человека животного, предусматривающий:10. A method of obtaining human or humanized heart cells in a non-human animal, comprising:
a) получение клетки отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII ТВХ5 или их комбинации, где оба аллеля гена NKX2-5, гена HANDII, гена ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации несут мутацию, которая предотвращает продуцирование функционального белка NKX2-5, белка HANDII, белка ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации;a) obtaining a cell of a non-human animal that is NKX2-5, HANDII TBX5 zero or a combination thereof, where both alleles of the NKX2-5 gene, HANDII gene, TBX5 gene of a non-human animal or combination thereof carry a mutation that prevents the production of the functional NKX2 protein -5, HANDII protein, TBX5 protein, a non-human animal or a combination thereof;
b) создание морулы или бластоцисты отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, путем переноса ядра соматической клетки, предусматривающего слияние ядра из указанной клетки отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, полученной на этапе а), с энуклеированным ооцитом отличного от человека животного и активацию указанного ооцита к делению таким образом, чтобы формировалась бластоциста отличного от человека животного, нулевая по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации;b) the creation of a morula or blastocyst of a non-human animal, NKX2-5, HANDII, TBX5, or a combination thereof, by transferring a somatic cell nucleus, providing for the fusion of a nucleus from a specified cell of a non-human animal, NKX2-5, HANDII, TBX5 zero or a combination thereof obtained in step a) with an enucleated oocyte of a non-human animal and activating said oocyte by division in such a way that a blastocyst of a non-human animal is formed, zero according to NKX2-5, HANDII, TBX5, or a combination thereof;
c) введение стволовых клеток человека в бластоцисту или морулу отличного от человека животного, нулевую по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации, полученную на этапе b); иc) the introduction of human stem cells into a blastocyst or morula of a non-human animal, zero according to NKX2-5, HANDII, TBX5, or a combination thereof, obtained in step b); and
d) имплантацию указанной бластоцисты или морулы, полученной на этапе с), отличному от человека животному, являющемуся псевдобеременной суррогатной матерью, с получением отличного от человека животного, экспрессирующего человеческие или гуманизированные сердечные клетки.d) implanting said blastocyst or morula obtained in step c) to a non-human animal that is a pseudopregnant surrogate mother, to produce a non-human animal expressing human or humanized heart cells.
11. Способ по п. 8 или 10, предусматривающий, что отличное от человека животное относится к свиньим, бычьим, лошадиным или козьим.11. The method according to p. 8 or 10, providing that the non-human animal relates to pig, bovine, equine or goat.
12. Способ по п. 8, 9 или 10, предусматривающий, что стволовая клетка человека представляет собой тканеспецифическую стволовую клетку, плюрипотентную стволовую клетку, мультипотентную взрослую стволовую клетку, индуцированную плюрипотентную стволовую клетку или стволовую клетку пуповинной крови (UCBSC).12. The method of claim 8, 9 or 10, wherein the human stem cell is a tissue-specific stem cell, a pluripotent stem cell, a multipotent adult stem cell, an induced pluripotent stem cell or umbilical cord blood stem cell (UCBSC).
13. Способ по п. 8, 9 или 10, предусматривающий, что индуцированная плюрипотентная клетка получена из фибробласта.13. The method according to p. 8, 9 or 10, providing that the induced pluripotent cell is obtained from fibroblast.
14. Отличное от человека животное, полученное согласно способу по любому из пп. 8-13.14. A non-human animal obtained according to the method according to any one of paragraphs. 8-13.
15. Химерное сердце, ткань химерного сердца и/или клетки химерного сердца, полученные способом, предусматривающим15. Chimeric heart, chimeric heart tissue and / or chimeric heart cells obtained by a method comprising
a) получение клетки отличного от человека животного, нулевой по гену NKX2-5, гену HANDII, гену ТВХ5 или их комбинации, где оба аллеля генов NKX2-5, HANDII, ТВХ5 отличного от человека животного или их комбинации несут мутацию и/или делецию, которая предотвращает продуцирование функционального белка NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации;a) obtaining a cell of a non-human animal that is zero in the NKX2-5 gene, HANDII gene, TBX5 gene, or a combination thereof, where both alleles of the NKX2-5, HANDII, TBX5 genes of a non-human animal or their combination carry a mutation and / or deletion, which prevents the production of the functional protein NKX2-5, HANDII, TBX5, or a combination thereof;
b) создание бластоцисты или морулы отличного от человека животного, нулевой по гену NKX2-5, гену HANDII, гену ТВХ5 или их комбинации, путем переноса ядра соматической клетки, предусматривающего слияние ядра из указанной клетки отличного от человека животного, нулевой по гену NKX2-5, гену HANDII, гену ТВХ5 или их комбинации, полученной на этапе а), с энуклеированным ооцитом отличного от человека животного и активацию указанного ооцита к делению таким образом, чтобы формировалась бластоциста отличного от человека животного, нулевая по гену NKX2-5, гену HANDII, гену ТВХ5 или их комбинации, или применение генного редактирования для получения бластоцисты отличного от человека животного, нулевой по NKX2-5, HANDII, ТВХ5 или их комбинации;b) the creation of a blastocyst or morula of a non-human animal, NKX2-5 gene-neutral, HANDII gene, TBX5 gene, or a combination thereof, by transferring the nucleus of a somatic cell, providing for the fusion of a nucleus from the specified cell of a non-human animal, NKX2-5-gene the HANDII gene, TBX5 gene, or a combination thereof obtained in step a), with an enucleated oocyte of a non-human animal and activating said oocyte to divide in such a way that a blastocyst of a non-human animal is formed, zero in the NKX2-5 gene, HANDII gene, g TVH5 well, or combinations thereof, or the use of gene modify to obtain blastocysts from a nonhuman animal, the zero on NKX2-5, HANDII, TVH5 or combinations thereof;
c) введение донорских стволовых клеток человека в бластоцисту отличного от человека животного, нулевую по гену NKX2-5, гену HANDII, гену ТВХ5 или их комбинации, полученную на этапе b); иc) introducing a human donor stem cell into a blastocyst of a non-human animal, zero in the NKX2-5 gene, HANDII gene, TBX5 gene, or a combination thereof, obtained in step b); and
d) имплантацию указанной бластоцисты, полученной на этапе с), отличному от человека животному, являющемуся псевдобеременной суррогатной матерью, с получением отличного от человека животного, экспрессирующего химерное сердце, ткань химерного сердца и/или клетки химерного сердца.d) implanting said blastocyst obtained in step c) to a non-human animal that is a pseudopregnant surrogate mother, to produce a non-human animal expressing a chimeric heart, chimeric heart tissue and / or chimeric heart cells.
16. Химерное сердце человека/отличного от человека животного.16. Chimeric heart of a person / animal other than a person.
17. Ткань химерного сердца человека/отличного от человека животного.17. The tissue of the chimeric heart of a person / animal other than a person.
18. Клетки химерного сердца человека/отличного от человека животного.18. Cells of the chimeric heart of a person / animal other than a person.
19. Химерное сердце, ткань химерного сердца и/или клетки химерного сердца по любому из пп. 15-18, причем отличным от человека животным является свинья.19. Chimeric heart, chimeric heart tissue and / or chimeric heart cells according to any one of paragraphs. 15-18, and the pig is different from the human animal.
20. Экзогенный орган, полученный путем комплементации бластоцисты, причем бластоциста содержит клетки, которые являются нуль-зиготными по генам NKX2-5, HANDI и ТВХ5 или их комбинации.20. An exogenous organ obtained by complementing a blastocyst, wherein the blastocyst contains cells that are nullzygous for the NKX2-5, HANDI, and TBX5 genes, or a combination thereof.