RU2014286C1

RU2014286C1 - Method for water and soil purification of oil products

Info

Publication number: RU2014286C1
Application number: SU904828587A
Authority: RU
Inventors: М.Б. Биттеева; Б.Г. Мурзаков; Г.Н. Морщакова; О.Ж. Хамроев; Л.Н. Капотина; Т.Н. Фадеева; В.А. Помазкова; Ю.Б. Левандовская; Е.И. Демидова; М.Е. Поспелов
Original assignee: Государственный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ
Priority date: 1990-05-24
Filing date: 1990-05-24
Publication date: 1994-06-15

Abstract

FIELD: water and soil purification of oil products. SUBSTANCE: consortia of microorganisms is introduced in the contaminated medium, said consortia comprises yeast : bacteria, bacteria : bacteria of the following species: Candida tropicalis - Mycococcus lactis, or Mycococcus lactis - Mycococcus lactis, or Candida guillermondii - Acinetobacter oleovorum subsp. paraphinicum. EFFECT: increased efficiency of the process.

Description

Изобретение относится к биологической очистке воды и почвы от нефтепродуктов, к охране окружающей среды и может быть использовано в нефтехимической, нефтеперерабатывающей, микробиологической, фармацевтической промышленности с целью очистки от нефтепродуктов; отработанных сточных вод, содержащих промежуточные продукты их окисления, различных емкостей, почв, водных поверхностей рек, озер. The invention relates to the biological treatment of water and soil from oil products, to environmental protection and can be used in the petrochemical, oil refining, microbiological, pharmaceutical industries for the purification of oil products; wastewater containing intermediate products of their oxidation, various containers, soils, water surfaces of rivers, lakes.

Известна способность микроорганизмов усваивать углеводороды жидких и газообразных нефтепродуктов и широко используется в настоящее время в биотехнологии с целью получения белка, различных физиологически активных веществ и т.д. С другой стороны окисление различных нефтепродуктов микроорганизмами в настоящее время стало причиной возникновения существенных проблем в сфере нефтехимии, нефтепереработки, а также при эксплуатации и хранении их на колхозных и совхозных нефтекомплексах, так как такие нефтепродукты как моторные масла, дизельное топливо, образуют осадки, осмоляются, что приводит к усиленному отложению нагара на клапанах, поршнях, в резервуарах хранения и т. д., тем самым приводят к ухудшению режима работы двигателя, либо полному выходу его из строя, загрязнению резервуаров, цистерн и почвы нефтепродуктами. The ability of microorganisms to absorb hydrocarbons of liquid and gaseous oil products is known and is widely used at present in biotechnology with the aim of obtaining protein, various physiologically active substances, etc. On the other hand, the oxidation of various oil products by microorganisms has now caused significant problems in the field of petrochemistry, oil refining, as well as during their operation and storage at collective and state farm oil complexes, since such oil products as motor oils, diesel fuel form precipitates, are tarred, which leads to increased deposition of soot on valves, pistons, in storage tanks, etc., thereby leading to a deterioration of the engine operating mode, or its complete failure, the clarification of reservoirs, tanks and soil with oil products.

Известны способы утилизации и очистки трудноокисляемых углеводородов, промежуточных продуктов окисления н-алканов бактериями, дрожжами, грибами с целью увеличения выхода от сырья, снижения загрязнений на очистные сооружения (авт.св. СССР N 944335, кл. С 12 N 1/26, N 1156354, кл. С 02 F 33/34). Известны микроорганизмы, окисляющие различные нефтепродукты на конструктивный обмен для получения белково-витаминных концентратов с одной стороны и снижения загрязнений на очистные сооружения с другой стороны, например н-алканы С₁₀-С₄₀ (см. авт.св. СССР N 525751, кл. С 12 K 3/00, N 558535, кл. С 12 К 1/00);
- дизельное топливо (см. авт.св. СССР N 772226 кл. С 12 11/08, N 925114 кл. С 12 N 1/00, N 538566, С 12 К 3/00;
- кубовый остаток (см.авт.св. СССР N 501581, кл. С 12 К 3/00; N 558535, кл. С 12 К 1/00; N 843468 кл. С 12 N 1/26;
- сырую нефть (см.авт.св. СССР N 803482, кл. С 12 N 15/00; N 558535, кл. С 12 К 1/00).Known methods for the utilization and purification of difficultly oxidized hydrocarbons, intermediate products of the oxidation of n-alkanes by bacteria, yeast, fungi in order to increase the yield of raw materials, reduce pollution to wastewater treatment plants (ed. St. USSR N 944335, class 12 N 1/26, N 1156354, class C 02 F 33/34). Microorganisms are known that oxidize various petroleum products for constructive metabolism in order to obtain protein-vitamin concentrates on the one hand and reduce pollution at wastewater treatment plants on the other hand, for example, n-alkanes C ₁₀ -C ₄₀ (see ed. St. USSR N 525751, cl. C 12 K 3/00, N 558535, class C 12 K 1/00);
- diesel fuel (see Autost. of the USSR N 772226 class. C 12 11/08, N 925114 class. C 12 N 1/00, N 538566, C 12 K 3/00;
- vat residue (see aut.St. USSR N 501581, class C 12 K 3/00; N 558535, class C 12 K 1/00; N 843468 class C 12 N 1/26;
- Crude oil (see the auth. St. USSR N 803482, class C 12 N 15/00; N 558535, class C 12 K 1/00).

Известен способ разложения нефти и нефтепродуктов с использованием грибов рода Aсtinomucor elegans (E. oliam) штамм N ТС-405, АТСС 20613, Gcotrichum marium, Thirumalachar sp. nov АТСС 20614 патенты США N 4415662, кл. C 12 N 11/14, 1/26, C 10 O 32/00, N 4415661, кл. С 12 N 11/00, 11/26, 1/14 C 10 32/10. A known method of decomposition of oil and oil products using fungi of the genus Аtinomucor elegans (E. oliam) strain N TC-405, ATCC 20613, Gcotrichum marium, Thirumalachar sp. nov ATCC 20614 U.S. Patent Nos. 4,415,662, cl. C 12 N 11/14, 1/26, C 10 O 32/00, N 4415661, CL C 12 N 11/00, 11/26, 1/14 C 10 32/10.

Недостатком этих способов является низкая скорость роста предлагаемых штаммов грибов и более сложная питательная среда, содержащая биостимуляторы роста грибов, более длительный период адаптации к нефтепродуктам. The disadvantage of these methods is the low growth rate of the proposed fungal strains and a more complex nutrient medium containing biostimulants of mushroom growth, a longer period of adaptation to petroleum products.

Известен способ очистки нефтяного дистиллята, полученного микробиологической депарафинизацией нефти, от продуктов метаболизма реагентной обработкой. В качестве реагентов используют ионообменные высокомолекулярные соединения, а перемешивание осуществляют в псевдоожиженном слое ферромагнитной насадки воздействием неоднородного вращающегося электромагнитного поля (см. авт.св. СССР N 1474099, кл. С 02 F 1/48). A known method of purification of petroleum distillate obtained by microbiological dewaxing of oil from metabolic products by reagent treatment. Ion exchange high-molecular compounds are used as reagents, and mixing is carried out in a fluidized bed of a ferromagnetic nozzle by the action of an inhomogeneous rotating electromagnetic field (see ed. St. USSR N 1474099, class 02 F 1/48).

Недостатком данного способа очистки нефтяного дистиллята является применение дорогостоящих ионообменных соединений, а также сложного оборудования. The disadvantage of this method of refining petroleum distillate is the use of expensive ion-exchange compounds, as well as sophisticated equipment.

Известен способ селекции ассоциаций микроорганизмов-деструкторов для очистки токсических веществ, например, анилино-формальдегидных смол, содержащих 2,4% фенола, 3,6% метанола и 2,3% формальдегида, бензол, крезол, ароматические амины в том числе анилин, в процессе периодического и непрерывного культивирования микроорганизмов на носителе (см.авт. св. СССР N 1409657, кл. С 12 N 15/00, C 02 F 3/34). A known method of selection of associations of microorganisms-destructors for the purification of toxic substances, for example, aniline-formaldehyde resins containing 2.4% phenol, 3.6% methanol and 2.3% formaldehyde, benzene, cresol, aromatic amines including aniline, the process of periodic and continuous cultivation of microorganisms on a carrier (see aut. St. USSR N 1409657, class C 12 N 15/00, C 02 F 3/34).

Недостатком способа является срок адаптации 2 мес и неспособность окислять нефть. The disadvantage of this method is the adaptation period of 2 months and the inability to oxidize oil.

Известен химический способ очистки резервуаров от смолистых веществ, остатков нефтепродуктов с помощью моющего средства Лабомид-203 при температуре 75-80^о и концентрации его до 40 г/л и напоре струи моющего раствора Р - 4 Кгс/см³ (см. диссертацию Логинова В.А. Разработка и исследование показателей и технических средств в целях совершенствования системы обслуживания на нефтекомплексах колхозов и совхозов).There is a chemical method for cleaning reservoirs of resinous substances, oil product residues with the help of Labomid-203 detergent at a temperature of 75-80 ^о and its concentration up to 40 g / l and the pressure of the washing solution P - 4 Kgs / cm ³ (see Loginova Thesis .A. Development and research of indicators and technical means in order to improve the service system at oil complexes of collective farms and state farms).

Наиболее близким к предложенному является способ применения микроорганизмов в комбинации с ПАВ для синергического диспергирования пролитой на воду нефти, с целью диспергировать в морской воде слой углеводородного масла - сырой нефти - его обрабатывают химическим диспергатором, который содержит (в мас.%) моноолеата сорбитана-9; водного диоктилсульфосукцината натрия-15; аддукта моноолеата сорбитана с окисью этилена-15; изопарафинового растворителя-61 в комбинации с микроорганизмами микрококкус церификанс. Массовое отношение диспергатор: культура микроорганизма : нефть- 1:1:100. Closest to the proposed one is a method of using microorganisms in combination with a surfactant to synergistically disperse oil spilled onto water in order to disperse a layer of hydrocarbon oil — crude oil — in a sea water; it is treated with a chemical dispersant that contains (in wt.%) Sorbitan-9 monooleate ; aqueous sodium dioctyl sulfosuccinate-15; adduct of sorbitan monooleate with ethylene oxide-15; isoparaffin solvent-61 in combination with microorganisms micrococcus cerificans. The mass ratio of dispersant: culture of the microorganism: oil - 1: 1: 100.

Недостатком известного способа является дороговизна диспергаторов и их отсутствие для промышленных условий применения (см.патент США N 4146470, кл. С 12 В 1/00). The disadvantage of this method is the high cost of dispersants and their absence for industrial conditions of use (see US patent N 4146470, CL 12 V 1/00).

Целью изобретения является упрощение способа, а также охрана окружающей среды. The aim of the invention is to simplify the method, as well as environmental protection.

Цель достигается тем, что в предлагаемом способе очистки воды и почвы от нефтепродуктов, включающем культивирование микроорганизмов на минеральной питательной среде, содержащей в качестве источника углерода различные нефтепродукты, согласно изобретению осуществляют культивированием ассоциативных культур. В качестве ассоциативных микроорганизмов использованы Candida tropicalis ВСБ-637 и Mycococcus lactis ВСБ-Д-5, ВСБ-574, Acinetobacter oleovorum subsp. paraphinicum ВСБ-576 и Candida guilliermonolii ВСБ-638. Наиболее активные подобранные ассоциативные культуры утилизируют депарафинизаты дизельного топлива, моторные масла, нефтепродукты с осмоленными осадками. Степень утилизации при оптимальных условиях для каждой подобранной ассоциации выражена в % от исходного сырья. The goal is achieved by the fact that in the proposed method for purifying water and soil from oil products, including the cultivation of microorganisms on a mineral nutrient medium containing various oil products as a carbon source, according to the invention is carried out by cultivation of associative cultures. Candida tropicalis VSB-637 and Mycococcus lactis VSB-D-5, VSB-574, Acinetobacter oleovorum subsp. Were used as associative microorganisms. paraphinicum VSB-576 and Candida guilliermonolii VSB-638. The most active selected associative cultures utilize diesel dewaxing oils, motor oils, and petroleum products with tarred sediments. The degree of utilization under optimal conditions for each selected association is expressed in% of the feedstock.

П р и м е р 1. Ассоциативные штаммы бактерий Mycococcus lactis ВСБ-Д-5 и дрожжей Candida tropicalis ВСБ-637 (авт.св. СССР N 538566 и N 525761) выращивали в периодических условиях при температуре 30-34^о, рН среды 5,5-6,0 на минеральной среде N 9, где на 1 л воды используется 10 г аммония фосфорнокислого однозамещенного, 10 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 0,7 г магния сернокислого, по 12,5 мг микроэлементов сернокислых солей: железа, цинка, марганца и 3 мг меди. В качестве источника углерода использовали такие вещества, как моторное масло, нефтепродукт с осмоленным осадком в концентрации 0,5 об.%, депарафинизат дизельного топлива в концентрации 10 об. % . Засевной односуточный материал выращивали на сусло-агаре дрожжи и бактерии на МПА, смывали стерильной водой и задавали в качалочные колбы по 0,1 г сухого вещества на 1 л минеральной среды или по оптической плотности 0,1 единиц для дрожжей и 0,05 единиц для бактерий.PRI me R 1. Associative strains of bacteria Mycococcus lactis VSB-D-5 and yeast Candida tropicalis VSB-637 (ed. St. USSR N 538566 and N 525761) were grown under periodic conditions at a temperature of 30-34 ^about , pH 5.5-6.0 on mineral medium N 9, where 10 g of ammonium phosphate monosubstituted, 10 g of potassium phosphate disubstituted, 0.7 g of magnesium sulfate, 12.5 mg of trace elements of sulfate salts: iron, zinc are used per 1 liter of water , manganese and 3 mg of copper. As a carbon source, we used substances such as motor oil, petroleum product with tarred sediment at a concentration of 0.5 vol.%, Diesel dewaxing at a concentration of 10 vol. % Inoculum one-day material was grown on yeast and bacteria on wort agar on MPA, washed with sterile water, and 0.1 g of dry matter per 1 liter of mineral medium or optical density of 0.1 units for yeast and 0.05 units for bacteria.

В результате ферментации получили концентрацию биомассы за трое суток культивирования соответственно 1,7-3,7-5,6 г АСВ/л, что равно утилизации нефтепродуктов на 34, 74 и 70%. Соотношение дрожжей и бактерий в колбах определяли подсчетом выросших колоний %, посев производили по 0,1 мл на твердые среды: сусло-агар со стрептомицином 400 мкг/мл, чтобы подавить рост бактерий и на МПА с нистатином 50 мкг/мл, чтобы подавить рост дрожжей. Соотношение в периодическом режиме культивирования составило 40% дрожжей и 60% бактерий. Увеличение выхода составило на 18,4% по сравнению с монокультурой. Это позволило слить культуральную жидкость практически без масляной эмульсии, что предопределяет в практическом плане очистку различных емкостей и водной поверхности от нефтепродуктов, а также окисление их в почве. As a result of fermentation, the biomass concentration was obtained for three days of cultivation, respectively 1.7-3.7-5.6 g of ASB / l, which is equal to the utilization of oil products by 34, 74 and 70%. The ratio of yeast and bacteria in the flasks was determined by counting the grown colonies%, sowing was done in 0.1 ml of solid media: wort agar with streptomycin 400 μg / ml to inhibit bacterial growth and MPA with nystatin 50 μg / ml to suppress growth yeast. The ratio in the periodic mode of cultivation was 40% yeast and 60% bacteria. The increase in output was 18.4% compared with monoculture. This made it possible to merge the culture fluid with virtually no oil emulsion, which practically determines the cleaning of various containers and the water surface from oil products, as well as their oxidation in the soil.

П р и м е р 2. Термотолерантные ассоциативные штаммы бактерий одного рода Mycococcus lactis ВСБ-574 и ВСБ-Д-5 (см.авт.свид. СССР N 511742 и N 558535) выращивали в течение двух суток периодическим способом при 40-42^о, рН среды 6,8-7,0, на минеральной среде N 9, описанной в примере 1. Засевной односуточный материал выращивали на МПА и смывали стерильной водой, засев производился по 0,1 г сухого вещества на 1 л среды или по оптической плотности 0,05 единиц. В качестве единственного источника углерода использовали те же вещества, описанные в примере 1. Соотношение ассоциативных культур бактерий определяли высевом на МПА с различными концентрациями антибиотиков (см. таблицу).PRI me R 2. Thermo-tolerant associative strains of bacteria of the same genus Mycococcus lactis VSB-574 and VSB-D-5 (see. Automat. USSR. N 511742 and N 558535) were grown for two days in a batch manner at 40-42 ^o , pH of the medium 6.8-7.0, on the mineral medium No. 9 described in Example 1. Inoculum one-day material was grown on MPA and washed with sterile water, inoculation was carried out in 0.1 g of dry matter per 1 liter of medium or in optical density of 0.05 units. The same substances described in Example 1 were used as the sole carbon source. The ratio of bacterial associative cultures was determined by inoculation on MPA with different concentrations of antibiotics (see table).

В результате культивирования получили концентрацию биомассы соответственно 1.0-3,7-5,0 г АСВ/л, утилизация при этом составила 25, 74, 62,5%. Это также позволило слить культуральную жидкость без нефтяной эмульсии и данная ассоциация может быть применена для очистки водной поверхности и емкостей от нефтепродуктов, а также сточных вод, содержащих нефтепродукты. As a result of cultivation, a biomass concentration of 1.0–3.7–5.0 g of ASB / L, respectively, was obtained, while utilization amounted to 25, 74, 62.5%. It also allowed to drain the culture fluid without an oil emulsion, and this association can be used to clean oil surfaces and tanks from oil products, as well as wastewater containing oil products.

П р и м е р 3. Ассоциативные культуры Candida guilliermonolii subsp. paraphinicum ВСБ-638 и Acinetobacter oleovorum subsp. paraphinicum ВСБ-567 выращивали периодическим способом в течение 72 ч на минеральной среде и источниках углерода, описанных в примере 1, при температуре культивирования 34-36^о, рН среды 5,5-6,0. Засевной материал односуточный выращивали на сусло-агаре и на МПА, смывали стерильной водой, засев производился по 0,1 г сухого вещества на 1 л среды или по оптической плотности 0,1-0,05 единиц. В качестве единственного источника углерода использовали те же вещества, описанные в примере 1. В результате ферментации получили концентрацию биомассы соответственно 1,4-3.9 и 8,4 г АСВ/л, выход от заданного сырья составил 28, 78, 93%. Соотношение дрожжей и бактерий в колбах определяли подсчетом выросших колоний в %, а также высевом на МПА с различными антибиотиками для учета бактерий и сусло-агар для дрожжей. Соотношение в периодическом режиме культивирования составило 50% дрожжей и 50% бактерий. Увеличение концентрации биомассы у смешанных культур составляет 12%. Отработанная жидкость не содержала масляной и нефтяной эмульсии, что позволяет предложить данную ассоциацию использовать в практических целях для очистки от нефтепродуктов водных и почвенных поверхностей.PRI me R 3. Associative cultures of Candida guilliermonolii subsp. paraphinicum VSB-638 and Acinetobacter oleovorum subsp. paraphinicum VSB-567 was grown batchwise for 72 hours in a mineral medium and a carbon source as described in Example 1, at a temperature of ^about 34-36 cultivation, pH 5.5-6.0. One-day sowing material was grown on wort agar and MPA, washed off with sterile water, sowing was carried out in 0.1 g of dry matter per 1 liter of medium or in optical density of 0.1-0.05 units. The same substances as described in Example 1 were used as the sole carbon source. As a result of fermentation, a biomass concentration of 1.4–3.9 and 8.4 g of ASB / L, respectively, was obtained; the yield from the given raw material was 28, 78, 93%. The ratio of yeast and bacteria in the flasks was determined by counting the grown colonies in%, as well as plating on MPA with various antibiotics to account for bacteria and wort agar for yeast. The ratio in the periodic mode of cultivation was 50% yeast and 50% bacteria. The increase in biomass concentration in mixed crops is 12%. The spent liquid did not contain oil and oil emulsions, which allows us to propose this association to be used for practical purposes for cleaning water and soil surfaces from oil products.

П р и м е р 4. Ассоциативные штаммы бактерий рода Acinetobacter oleovorum ВСБ-567, Mycococcus lactis ВСБ-574 и ВСБ-Д-5 выращивали в периодических условиях при температуре 40-42^о, рН среды 6,8-7,0, на минеральной среде N 9, указанной в примере 1. Засевной односуточный материал выращивали на МПА, смывали стерильной водой и засевали в колбы по 0,1 г сухого вещества на 1 л или по оптической плотности 0,05 единиц. В качестве единственного источника углерода использовали те же вещества, описанные в примере 1. В результате ферментации получили концентрацию биомассы соответственно 1,7-3,7-7,4 г АСВ/л от заданного сырья выход составил 34, 74, 82%. Соотношение ассоциативных культур определяли высевом на МПА с различными антибиотиками (см. таблицу). Это также позволило слить жидкость без нефтяной эмульсии.PRI me R 4. Associative strains of bacteria of the genus Acinetobacter oleovorum VSB-567, Mycococcus lactis VSB-574 and VSB-D-5 were grown under periodic conditions at a temperature of 40-42 ^about , a pH of 6.8-7.0, on mineral medium No. 9, indicated in example 1. Inoculum one-day material was grown on MPA, washed with sterile water and inoculated into flasks of 0.1 g of dry matter per 1 liter or optical density of 0.05 units. The same substances as described in Example 1 were used as the sole carbon source. As a result of fermentation, a biomass concentration of 1.7–3.7–7.4 g of ASB / L, respectively, from the specified feed was obtained, the yield was 34, 74, 82%. The ratio of associative cultures was determined by seeding on MPA with various antibiotics (see table). It also allowed to drain the liquid without oil emulsion.

П р и м е р 5. Ассоциативные штаммы бактерий рода Acinetobacter oleovorum subsp. paraphinicum ВСБ-567, Mycococcus lactis ВСБ-574, ВСБ-Д-5, и штамм дрожжей С. tropicalis ВСБ-637 выpащивали на минеральной среде N 9, указанной в примере 1 при температуре культивирования 38-40^о, рН среды 6,0-6,5. Засевной материал выращивали на МПА бактерии и на сусло-агаре дрожжи, задавали в колбы в концентрации 0,1 г сухого вещества или по оптической плотности 0,05 единиц бактерии и 0,1 единиц дрожжи. В качестве единственного источника углерода использовали те же вещества, описанные в примере 1. Соотношение ассоциативных культур определяли высевом на МПА с различными концентрациями антибиотиков (см. таблицу) и для дрожжей использовали сусло-агар со стрептомицином в концентрации 400 мкг/мл.PRI me R 5. Associative strains of bacteria of the genus Acinetobacter oleovorum subsp. paraphinicum VSB-567, Mycococcus lactis VSB-574, VSB-D-5, and the strain of yeast C. tropicalis VSB-637 were grown on mineral medium N 9 specified in example 1 at a temperature of cultivation 38-40 ^about pH of 6.0 -6.5. Inoculum was grown on MPA bacteria and on wort-agar yeast, placed in flasks at a concentration of 0.1 g of dry matter or optical density of 0.05 units of bacteria and 0.1 units of yeast. The same substances described in Example 1 were used as the sole carbon source. The ratio of associative cultures was determined by inoculation on MPA with different concentrations of antibiotics (see table), and wort agar with streptomycin at a concentration of 400 μg / ml was used for yeast.

В результате культивирования получили концентрацию биомассы соответственно 1,7-4,8-8,5 г АСВ/л, утилизация при этом составила 34, 98, 94%. Это также позволило слить культуральную жидкость без нефтяной эмульсии и данная ассоциация может быть применена для очистки водной поверхности и емкостей от нефтепродуктов. As a result of cultivation, a biomass concentration of 1.7–4.8–8.5 g of ASB / L, respectively, was obtained, and utilization was 34, 98, 94%. It also allowed to drain the culture fluid without oil emulsion, and this association can be used to clean oil surfaces and tanks.

П р и м е р 6. Ассоциативные штаммы дрожжей С.tropicalis ВСБ-637. С.guilliermonolii ВСБ-638 и бактерий ВСБ-567, ВСБ-574, ВСБ-Д-5, Acinetobacter oleovorum subsp. paraphinicum, Mycococcus lactis, Mycococcus lactis выращивали в периодических условиях при температуре 38-40^о, рН среды 6,0-6,5. Засевной материал выращивали сутки на МПА бактерии и на сусло-агаре дрожжи, смывали стерильной водой и засевали в колбы по 0,1 г сухого вещества на 1 л среды, или по оптической плотности 0,05 ед. для бактерий и 0,1 ед. для дрожжей. В качестве единственного источника углерода использовали те же вещества, описанные в примере 1. В результате ферментации получили концентрацию биомассы соответственно 2,0-5,0-9,1 г АСВ/л, выход от заданного сырья составил 50, 99, 99%. Соотношение ассоциативных культур определяли высевом на МПА с антибиотиками для разделения бактерий и на сусло-агар со стрептомицином 400 мкг/мл для дрожжей. Для определения соотношения дрожжей вида Сandida tropicalis и C. guilliermonolii в присутствии бактерий использовали сусло-агар с трифенилтетрозолием хлористым (ТТХ) 25-50 мкг/мл плюс стрептомицин 400 мкг/мл для подавления роста бактерий, при этом дрожжи С. tropicalis окрашиваются в малиновый цвет, а дрожжи С.guilliermonolii не окрашиваются или имеют светло-розовый цвет (см.авт.св. СССР N 1381993, кл. С 12 N 1/16). Данная ассоциация может быть применена для очистки водной поверхности и емкостей от нефтепродуктов.PRI me R 6. Associative strains of yeast C. tropicalis VSB-637. C. guilliermonolii VSB-638 and bacteria VSB-567, VSB-574, VSB-D-5, Acinetobacter oleovorum subsp. paraphinicum, Mycococcus lactis, Mycococcus lactis was grown in batch conditions at a temperature ^of 38-40, pH 6.0-6.5. Inoculum was grown daily on MPA bacteria and on yeast wort agar, washed with sterile water and inoculated into flasks of 0.1 g of dry matter per 1 liter of medium, or 0.05 unit optical density. for bacteria and 0.1 units for yeast. The same substances as described in Example 1 were used as the sole carbon source. As a result of fermentation, a biomass concentration of 2.0-5.0-9.1 g ACB / L, respectively, was obtained; the yield from a given raw material was 50, 99, 99%. The ratio of associative cultures was determined by seeding on MPA with antibiotics for separation of bacteria and on wort agar with streptomycin 400 μg / ml for yeast. To determine the ratio of yeast species Candida tropicalis and C. guilliermonolii in the presence of bacteria, wort agar with triphenyltetrosol chloride (TTX) 25-50 μg / ml plus streptomycin 400 μg / ml was used to inhibit bacterial growth, while C. tropicalis yeast stained with raspberry color, and C. guilliermonolii yeast does not stain or have a light pink color (see auth. St. USSR N 1381993, class C 12 N 1/16). This association can be used to clean oil surfaces and tanks.

Таким образом, для решения важнейшей проблемы защиты окружающей среды обитания любого живого организма и возвращения в народное хозяйство водных, земельных и металлоемких ресурсов использование предлагаемого способа позволит окислить различные продукты нефтяного происхождения, продуктов их окисления в широком диапазоне температур культивирования и рН среды. Thus, to solve the most important problem of protecting the living environment of any living organism and returning water, land and metal-intensive resources to the national economy, the use of the proposed method will allow oxidizing various products of petroleum origin, their oxidation products in a wide range of cultivation temperatures and pH.

Предлагаемый способ экономически более рентабелен, не требует дорогостоящих сорбентов, оборудования, не требует длительного периода адаптации в отличие от ранее предложенных способов очистки. The proposed method is economically more cost-effective, does not require expensive sorbents, equipment, does not require a long adaptation period, in contrast to the previously proposed cleaning methods.

Claims

METHOD FOR WATER AND SOIL CLEANING FROM OIL PRODUCTS, which involves introducing microorganisms with a nutrient medium into the medium to be cleaned, characterized in that, in order to simplify and reduce the cost of the method, yeast consortia are used as microorganisms: bacteria or bacteria: bacteria with the following species composition: Candidaidal and Mycococcus lactis, or Mycococcus lactis and Myccoccus lactis, or Candida guillermondii and Acinetobacter oleovorum subsp. paraphinicum.