RU2013445C1

RU2013445C1 - Strain of trichophyton mentagrophytes used for preparation of animal trichophytosis vaccine

Info

Publication number: RU2013445C1
Application number: RU92015463A
Authority: RU
Inventors: Л.М. Яблочник; А.Н. Панин; К.П. Летягин; К.А. Саркисов
Priority date: 1992-12-30
Filing date: 1992-12-30
Publication date: 1994-05-30

Abstract

FIELD: biotechnology. SUBSTANCE: new strain of trichophyton mentagrophytes No. 27 is produced which offers high level of sporogenesis, population homogeneity, decreased residual virulence to increase immunogenic activity of preparation against animal trichphytosis. Offered strain is deposited in collection of microorganism of the VGNKL research institute of veterinary preparation under No 27. EFFECT: vaccine prepared from offered strain ensures stable strong immunity after 20-30 days after application for cattle, sheep, goats and rabbits; immunity duration is not less than 5 years. 2 tbl

Description

Изобретение относится к ветеринарной микологии, в частности к получению штамма Тrichophyton mentagrophytes, используемого для изготовления вакцины против трихофитии животных. The invention relates to veterinary mycology, in particular to the production of Trichophyton mentagrophytes strain used for the manufacture of a vaccine against trichophytosis of animals.

Известен штамм Тrichophyton mentahgrophytes N 135/1963, используемый для изготовления вакцины против трихофитии животных, в частности пушных зверей. Known strain Trichophyton mentahgrophytes N 135/1963, used for the manufacture of a vaccine against trichophytosis of animals, in particular fur animals.

Данный штамм выделен от больной трихофитией лисицы в 1963 г и используется длительно для изготовления вакцины Ментавак. Вследствие снижения иммуногенных свойств используемого штамма при производстве вакцины ее эффективность снизилась. Кроме того, вакцина предназначена только для пушных зверей и кроликов и не рекомендовано ее применение другим видам животных. This strain was isolated from a fox trichophytosis patient in 1963 and has been used for a long time for the manufacture of the Mentawak vaccine. Due to the decrease in the immunogenic properties of the strain used in vaccine production, its effectiveness decreased. In addition, the vaccine is intended only for fur animals and rabbits and its use is not recommended for other species of animals.

Целью изобретения является получение штамма гриба Тrichophyton mentagrophytes, обладающего высоким уровнем спорогенеза и иммуногенной активности, однородностью состава популяции и возможностью изготовления вакцины против трихофитии разных видов животных. The aim of the invention is to obtain a strain of the fungus Trichophyton mentagrophytes, which has a high level of sporogenesis and immunogenic activity, uniform population composition and the possibility of manufacturing a vaccine against trichophytosis of various animal species.

Штамм гриба Тrichophyton mentagrophytes получен из эпизоотического, выделенного от белой мыши, методом ступенчатого отбора по признаку спорообразования наиболее быстрорастущих колоний с активным накоплением микроконидий. Штамм Тrichophyton mentagrophytes депонирован в коллекции Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и имеет регистрационный N 27. The strain of the fungus Trichophyton mentagrophytes was obtained from an epizootic isolated from a white mouse by the method of stepwise selection on the basis of spore formation of the fastest growing colonies with active accumulation of microconidia. The strain Trichophyton mentagrophytes is deposited in the collection of the All-Russian State Research Institute for Control, Standardization and Certification of Veterinary Medicines and has a registration number N 27.

Штамм Тrichophyton mentagrophytes ВГНКИ N 27 характеризуется следующими признаками и свойствами. The strain Trichophyton mentagrophytes VGNKI N 27 is characterized by the following features and properties.

Морфологические признаки. Мицелий не окрашен, ровный, ветвистый, септированный, может распадаться на фрагменты, терминальные гифы не всегда образуют спирали (обычно 3-5 завитков), диаметр мицелия 2,0-3,0 мкм. Микроконидии многочисленные, округлые, грушевидные, удлиненные, близкие к палочковидной форме, располагаются на поверхности мицелия гроздьями, чаще отдельно, размер 1,5-5,2 мкм. Макроконидии единичные, количество перегородок 1-5, чаще 1-2, размер 10-30 х 3-8 мкм. В культурах 20-30-дневного возраста могут наблюдаться хламидоспоры, округлой формы с двуконтурной оболочкой, всегда единичные, 3-5 мкм в диаметре. Артроспоры возникают на отдельных участках мицелия, тонкостенные, по форме напоминают овальные или палочковидные микроконидии, размером 3-9 мкм в диаметре. Morphological signs. The mycelium is not colored, even, branched, septate, can decompose into fragments, terminal hyphae do not always form spirals (usually 3-5 curls), the diameter of the mycelium is 2.0-3.0 microns. Microconidia are numerous, rounded, pear-shaped, elongated, close to rod-shaped, located on the surface of the mycelium in clusters, often separately, the size of 1.5-5.2 microns. Single macroconidia, the number of partitions 1-5, often 1-2, the size of 10-30 x 3-8 microns. In cultures of 20-30 days of age, chlamydospores can be observed, round in shape with a bypass shell, always single, 3-5 microns in diameter. Arthrospores occur in separate sections of the mycelium, thin-walled, in shape resemble oval or rod-shaped microconidia, 3–9 μm in diameter.

Культуральные свойства. На сусло-агаре растет в виде плоской, белой, бархатистой колонии с незначительным возвышением в центре, растущий край ровный, реверс красновато-коричневый, диаметр колонии 50-90 мм (15-20-дневная культура). Cultural properties. On wort agar, it grows in the form of a flat, white, velvety colony with a slight elevation in the center, the growing edge is smooth, reddish-brown, the diameter of the colony is 50-90 mm (15-20 day old culture).

На агаре Сабуро растет в виде плоской, белой, бархатистой с кремовым оттенком колонии с небольшим возвышением в центре, растущий край ровный, реверс бледно-желтый, иногда более темный в центре, диаметр колонии 50-90 мм (15-20-дневная культура). На среде Геннеберга растет в виде белой, бархатистой, радиально складчатой колонии, растущий край паутинистый, реверс красновато-фиолетовый. Спорообразование: максимальный уровень спорогенеза на сусло-агаре 198,4-259,2 млн/см³.On agar, Saburo grows in the form of a flat, white, velvety, cream-colored colony with a slight elevation in the center, the growing edge is even, the reverse is pale yellow, sometimes darker in the center, the diameter of the colony is 50-90 mm (15-20 day culture) . On the environment, Genneberg grows in the form of a white, velvety, radially folded colony, the growing edge is a cobwebby, reddish-purple reverse. Spore formation: the maximum level of sporogenesis on wort agar is 198.4-259.2 million / cm ³ .

Вирулентные свойства. При внутримышечном введении культуры штамма Тrichophyton mentagrophytes N 27 у морских свинок, кроликов, овец, коз, телят, спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфический локализованный поверхностный трихофитийный очажок диаметром 2,0-2,5 см, который самопроизвольно излечивается в течение 15-20 дней. Микологически выделить возбудитель не удается. При нанесении культуры штамма неиммунным животным на скарифицированную кожу в дозе 0,25 млн/см³ микроконидий на месте аппликации развивается в течение 10-20 дней типичный трихофитийный очаг, при этом у животных отмечают повышение температуры на месте введения, припухлость и общее повышение температуры тела. Выделенный из патологического материала штамм по своим свойствам соответствует исходному.Virulent properties. With intramuscular administration of the culture of the strain Trichophyton mentagrophytes N 27 in guinea pigs, rabbits, sheep, goats, calves, after 2-3 weeks a specific localized trichophytosis foci with a diameter of 2.0-2.5 cm develops at the injection site, which spontaneously heals within 15-20 days. Mycological isolation of the pathogen fails. When the strain culture is applied to non-immune animals on scarified skin at a dose of 0.25 million / cm ^{3 of} microconidia at the site of application, a typical trichophytosis focus develops within 10-20 days, while animals show an increase in temperature at the injection site, swelling and a general increase in body temperature . The strain isolated from the pathological material corresponds in its properties to the initial one.

Антигенные свойства. На введение культуры штамма в организме телят, овец, кроликов образуются специфические агглютинины в титрах 1: 40-1: 1280. Antigenic properties. On the introduction of the strain culture in the body of calves, sheep, rabbits, specific agglutinins are formed in titers of 1: 40-1: 1280.

Иммуногенные свойства. Введение вакцины против трихофитии животных из штамма Тrichophyton mentagrophytes N 27 крупному рогатому скоту, овцам, козам, кроликам индуцирует у 98-100% животных спустя 20-30 дней образование стойкого напряженного иммунитета. Продолжительность иммунитета не менее 5 лет (срок наблюдения). Immunogenic properties. Administration of the trichophytosis vaccine of animals from the strain Trichophyton mentagrophytes N 27 to cattle, sheep, goats, rabbits induces the formation of persistent intense immunity in 98-100% of the animals after 20-30 days. The duration of immunity is at least 5 years (observation period).

П р и м е р 1. Штамм Тrichophyton mentagrophytes N 27 ВГНКИ используют для изготовления вакцины против трихофитии животных. Для этого берут приготовленную 12-20-дневную взвесь культуры штамма гриба Тr. mentagrophytes ВГНКИ N 27, которой засевают матрицы с сусло-агаром и культивируют в термостате при 26-28^оС в течение 12-20 дней. Грибную массу снимают с поверхности питательной среды специальными скребками в банки, соблюдая условия стерильности. Полученную массу гомогенизируют в коллоидной мельнице, добавляя стерильную воду и антибиотики из расчета 100 ЕД на 1 см³. После проверки грибной суспензии на чистоту (при наличии посторонней микрофлоры автоклавируют) тщательно смешивают с равным количеством сахарозо-желатинового стабилизатора, разливают во флаконы и лиофильно высушивают. Готовый препарат представляет собой высушенную пористую массу в виде серой таблетки, сохраняющей свои иммуногенные свойства в течение от 12 до 18 месяцев. Вакцина высокоэффективна против трихофитии сельскохозяйственных животных, предохраняет от заражения и проявления клинических признаков заболевания.PRI me R 1. The strain Trichophyton mentagrophytes N 27 VGNKI used for the manufacture of vaccines against trichophytosis of animals. To do this, take the prepared 12-20-day suspension of the culture of the strain of the fungus Tr. mentagrophytes N VGNKI 27, wherein the matrix is seeded with wort agar and cultured in an incubator at 26-28 ^{° C} for 12-20 days. The mushroom mass is removed from the surface of the nutrient medium with special scrapers in jars, observing the sterility conditions. The resulting mass is homogenized in a colloidal mill, adding sterile water and antibiotics at the rate of 100 PIECES per 1 cm ³ . After checking the mushroom suspension for cleanliness (in the presence of extraneous microflora, it is autoclaved), it is thoroughly mixed with an equal amount of sucrose-gelatin stabilizer, poured into vials and freeze-dried. The finished product is a dried porous mass in the form of a gray tablet that retains its immunogenic properties for 12 to 18 months. The vaccine is highly effective against trichophytosis of farm animals, protects against infection and the manifestation of clinical signs of the disease.

П р и м е р 2. Приготовленную по примеру 1 вакцину против трихофитии животных из штамма Тr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 (ТМ-27) используют для иммунизации кроликов. Кроликов вакцинируют вакциной с концентрацией микроконидий 5-20 млн/см^3, которую вводят внутримышечно двукратно в объеме 1 см. В качестве контроля для вакцинации кроликов используют известную вакцину из штамма Тrichophyton mentagophytes N 135 (ТМ-135). Через 30 дней кроликов заражают накожно вирулентными культурами штаммов Тr. mentagrophytes ТМ-251 и ТМ-18. В течение 25 дней учитывают результаты заражения.PRI me R 2. Prepared according to example 1, a vaccine against trichophytosis of animals from strain Tr. mentagrophytes VGNKI N 27 (TM-27) is used to immunize rabbits. Rabbits are vaccinated with a vaccine with a concentration of microconidia of 5-20 million / cm ^3, which is administered intramuscularly twice in a volume of 1 cm. As a control, a well-known vaccine from the strain Trichophyton mentagophytes N 135 (TM-135) is used to vaccinate rabbits. After 30 days, rabbits are cutaneously infected with virulent cultures of Tr. mentagrophytes TM-251 and TM-18. Within 25 days take into account the results of infection.

Результаты экспериментального заражения представлены в табл. 1. The results of experimental infection are presented in table. 1.

Из табл. 1 видно, что вакцина из штамма Тr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 превосходит по иммуногенной активности известную из штамма Тr. mentagrophytes N 135 и создает у кроликов при концентрации микроконидий 10-20 млн/см³ напряженный иммунитет. Все контрольные кролики, неиммунизированные, заболели.From the table. 1 shows that the vaccine from strain Tr. mentagrophytes VGNKI N 27 is superior in immunogenic activity known from strain Tr. mentagrophytes N 135 and creates in rabbits at a concentration of microconidia of 10-20 million / cm ³ intense immunity. All control rabbits, non-immunized, became ill.

П р и м е р 3. Приготовленную по примеру 1 вакцину против трихофитии животных из штамма Тr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 (ТМ-27) с концентрацией микроконидий 20 млн/см³ используют для иммунизации телят. Вакцину животным 1-2-месячного возраста применяют внутримышечно двукратно в дозе 2 см³. В качестве контроля испытывают аналогично известную вакцину из штамма Тr. mentagrophytes N 135 (ТМ-135). Через 35 дней после второй иммунизации телят заражают вирулентными культурами. Тr. mentagrophytes N 251 (ТМ-251) и Тr. sarkisovii N 724 (ТС-724).PRI me R 3. Prepared according to example 1, a vaccine against trichophytosis of animals from strain Tr. mentagrophytes VGNKI N 27 (TM-27) with a concentration of microconidia of 20 million / cm ³ used for immunization of calves. The vaccine for animals of 1-2 months of age is administered intramuscularly twice at a dose of 2 cm ³ . As a control, a similarly known vaccine from strain Tr is tested. mentagrophytes N 135 (TM-135). 35 days after the second immunization, calves are infected with virulent cultures. Tr. mentagrophytes N 251 (TM-251) and Tr. sarkisovii N 724 (TC-724).

Результаты экспериментального заражения телят представлены в табл. 2. The results of experimental infection of calves are presented in table. 2.

Из табл. 2 следует что вакцина из штамма Тr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 индуцирует у телят образование надежного иммунитета. From the table. 2 it follows that the vaccine from strain Tr. mentagrophytes VGNKI N 27 induces the formation of reliable immunity in calves.

П р и м е р 4. Для иммунизации телят 1-2-месячного возраста используют вакцину из штамма Тr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 с концентрацией микроконидий 10 млн/см³, которую вводят животным внутримышечно двукратно в дозе 2 см³. Аналогично примеру 3 проводят заражение животных культурами вирулентных штаммов. Через 3, 6, 9 и 12 месяцев после иммунизации все животные не заболели, что говорит об эффективности используемой дозы при концентрации микроконидий 10 млн/см³. Проведенные испытания показали, что полученный штамм Тrichophyton mentagrophytes ВГНКИ N 27 обладает высокоиммуногенной активностью, стабильностью, низкой остаточной вирулентностью, что позволяет рекомендовать его для изготовления эффективного биопрепарата против трихофитии животных.PRI me R 4. For immunization of calves 1-2 months of age using a vaccine from strain Tr. mentagrophytes VGNKI N 27 with a concentration of microconidia of 10 million / cm ³ , which is administered to animals intramuscularly twice at a dose of 2 cm ³ . Analogously to example 3, the animals are infected with cultures of virulent strains. After 3, 6, 9 and 12 months after immunization, all animals did not become ill, which indicates the effectiveness of the dose used at a concentration of microconidia of 10 million / cm ³ . The tests showed that the obtained strain Trichophyton mentagrophytes VGNKI N 27 has a highly immunogenic activity, stability, low residual virulence, which allows us to recommend it for the manufacture of an effective biological product against trichophytosis of animals.

Экономический эффект от использования штамма для получения вакцины против трихофитии животных будет складываться за счет повышения эффективности вакцины, снижения затрат на проведение профилактических мероприятий. The economic effect of using the strain to obtain a vaccine against trichophytosis of animals will be due to an increase in the effectiveness of the vaccine and a reduction in the cost of preventive measures.

Claims

The strain of the fungus Trichophyton mentagrophytes VGNKI N 27-DEPT used for the manufacture of vaccines against trichophytosis of animals.