RU2012153566A

RU2012153566A - METHOD FOR PRODUCING NUCLEAR PROTEINASES FROM NEGON AND HISTONE PLANT PROTEINS

Info

Publication number: RU2012153566A
Application number: RU2012153566/04A
Authority: RU
Inventors: Эвилина Алексеевна Иванова; Гюльнар Хамидовна Вафина
Priority date: 2012-12-11
Filing date: 2012-12-11
Publication date: 2014-06-20
Also published as: RU2518115C1

Abstract

Способ получения ядерных протеиназ из негистоновых и гистоновых белков растений, включающий отделение в определенные интервалы времени от начала замачивания 0 ч, 3 ч, 6 ч, 9 ч, 12 ч, 15 ч, 18 ч, 21 ч зародышей от эндосперма с последующей консервацией зародышей в забуференном 80-90% глицерине при минус 25°С, выделение клеточных ядер, экстракцию ядерных супраструктур возрастающими концентрациями 0,14 М, 0,35 М, 2 М хлористого натрия и 6 М гуанидин гидрохлорида с 0,1% β-меркаптоэтанолом, выделение из вышеперечисленных фракций негистоновых и гистоновых белков с помощью ионообменной хроматографии с амберлитом ИРЦ-50 в прерывистом градиенте гуанидин гидрохлорида: 6%, 8,9%, 10,6%, 13%, 40% на 0,1 М калий-фосфатном буфере рН 6,8, выделение ядерных протеиназ с помощью метода аффинной хроматографии через колонку с сефарозой 4В с иммобилизованным ингибитором трипсина с последующей оценкой протеолитической активности.A method for producing nuclear proteinases from non-histone and histone plant proteins, comprising separating at specific intervals from the start of soaking 0 h, 3 h, 6 h, 9 h, 12 h, 15 h, 18 h, 21 h of embryos from the endosperm, followed by preservation of the embryos in buffered 80-90% glycerol at minus 25 ° C, the isolation of cell nuclei, the extraction of nuclear superstructures with increasing concentrations of 0.14 M, 0.35 M, 2 M sodium chloride and 6 M guanidine hydrochloride with 0.1% β-mercaptoethanol, isolation from the above fractions of non-histone and histone proteins with p using ion-exchange chromatography with IRC-50 amberlite in an intermittent gradient of guanidine hydrochloride: 6%, 8.9%, 10.6%, 13%, 40% in 0.1 M potassium phosphate buffer pH 6.8, isolation of nuclear proteinases with using the method of affinity chromatography through a column of Sepharose 4B with an immobilized trypsin inhibitor, followed by assessment of proteolytic activity.

Claims

A method for producing nuclear proteinases from non-histone and histone plant proteins, comprising separating at specific intervals from the start of soaking 0 h, 3 h, 6 h, 9 h, 12 h, 15 h, 18 h, 21 h of embryos from the endosperm, followed by preservation of the embryos in buffered 80-90% glycerol at minus 25 ° C, the isolation of cell nuclei, the extraction of nuclear superstructures with increasing concentrations of 0.14 M, 0.35 M, 2 M sodium chloride and 6 M guanidine hydrochloride with 0.1% β-mercaptoethanol, isolation from the above fractions of non-histone and histone proteins with p using ion-exchange chromatography with IRC-50 amberlite in an intermittent gradient of guanidine hydrochloride: 6%, 8.9%, 10.6%, 13%, 40% in 0.1 M potassium phosphate buffer pH 6.8, isolation of nuclear proteinases with using the method of affinity chromatography through a column of Sepharose 4B with an immobilized trypsin inhibitor, followed by assessment of proteolytic activity.