RU2012100085A

RU2012100085A - Recombinant plasmid pAd-SN encoding human SOX2 and NANOG proteins, which is the basis for the production of virulent adenoviruses intended for the production of indurated cuticles

Info

Publication number: RU2012100085A
Application number: RU2012100085/10A
Authority: RU
Inventors: Сергей Петрович Медведев; Александр Игоревич Шевченко; Евгений Анатольевич Покушалов; Сурен Минасович Закиян
Original assignee: Учреждение Российской академии наук Институт цитологии и генетики Сибирского отделения РАН
Priority date: 2012-01-10
Filing date: 2012-01-10
Publication date: 2013-10-27

Abstract

1. Рекомбинантная плазмида pAd-SN, кодирующая белки SOX2 и NANOGчеловека, являющаяся основой для получения вирулентных аденовирусов, предназначенных для получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человекапредставляющая собой генетическую конструкцию, построенную путем гомологичной рекомбинации вектора pAdEasy-1, содержащего основную часть генома аденовируса и плазмиды pAdTrack-CMV, включающей фрагмент SOX2-P2A-NANOG под контролем конститутивного промотора CMV, встроенный в сайт рестрикцииI, размер встройки 1964 пар нуклеотидов, где кДНК генов SOX2 и NANOG, кодирующие белки SOX2 и NANOG человека соединены последовательностью, кодирующей P2A-пептид, и ген, кодирующий флуоресцентный белок EGFP под контролем промотора CMV.2. Рекомбинантная плазмида pAd-SN по п.1, где конструктивная основа вектораpAdEasy-1 обеспечивает получение аденовирусных частиц с одновременной доставкой генов и экспрессию белков SOX2, NANOG и EGFP.3. Рекомбинантная плазмида pAd-SN по п.1, гдефрагмент ДНК, кодирующий белки SOX2 и NANOG человека запускает репрограммированиеклеток для получения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека, а фрагмент ДНК кодирующий флуоресцентный белок EGFP является маркером трансдукции клеток и последующей элиминации вирусной ДНК.1. Recombinant plasmid pAd-SN encoding human SOX2 and NANOG proteins, which is the basis for the production of virulent adenoviruses intended for the production of induced pluripotent human stem cells, which is a genetic construct constructed by homologous recombination of the pAdEasy-1 vector containing the main part of the ad -CMV, including the SOX2-P2A-NANOG fragment under the control of the constitutive CMV promoter, inserted into the restriction site I, insertion size 1964 nucleotide pairs, where cDNA gene in SOX2 and NANOG, SOX2 protein encoding human NANOG and connected sequence encoding P2A-peptide and a gene encoding a fluorescent protein EGFP under control CMV.2 promoter. The recombinant plasmid pAd-SN according to claim 1, where the constructive basis of the vector pAdEasy-1 provides the production of adenoviral particles with simultaneous gene delivery and expression of SOX2, NANOG and EGFP.3 proteins. The recombinant plasmid pAd-SN according to claim 1, wherein the DNA fragment encoding the human SOX2 and NANOG proteins triggers cell reprogramming to produce induced human pluripotent stem cells, and the DNA fragment encoding the EGFP fluorescent protein is a marker for cell transduction and subsequent elimination of viral DNA.

Claims

1. Recombinant plasmid pAd-SN encoding SOX2 and NANOG proteins

human, which is the basis for obtaining virulent adenoviruses intended for the production of induced pluripotent human stem cells , which is a genetic construct constructed by homologous recombination of the pAdEasy-1 vector containing the main part of the adenovirus genome and the pAdTrack-CMV plasmid, including the SOX2-P2A-NAN fragment under the control of the constitutive promoter CMV, built into the Not I restriction site, insertion size of 1964 nucleotides, where the cDNA of the SOX2 and NANOG genes encoding human SOX2 and NANOG proteins are connected a sequence encoding a P2A peptide; and a gene encoding a fluorescent EGFP protein under the control of the CMV promoter.

2. Recombinant plasmid pAd-SN according to claim 1, where the constructive basis of the vector

pAdEasy-1 provides the production of adenoviral particles with simultaneous gene delivery and expression of SOX2, NANOG and EGFP proteins.

3. The recombinant plasmid pAd-SN according to claim 1, where DNA fragment encoding human SOX2 and NANOG proteins triggers reprogramming cells to produce induced human pluripotent stem cells, and the DNA fragment encoding the EGFP fluorescent protein is a marker of cell transduction and subsequent elimination of viral DNA.