Claims (48)
1. Способ сохранения свойств полипептида, включающий:1. The method of preserving the properties of the polypeptide, including:
(i) получение водного раствора, состоящего из одного или нескольких сахаров, полиэтиленимина и указанного полипептида, где концентрация полиэтиленимина составляет 25 мкМ или менее в расчете на среднечисленную молярную массу (Mn) полиэтиленимина, а общая концентрация сахара, если присутствует более чем один сахар, составляет более чем 0,1 М; и(i) obtaining an aqueous solution consisting of one or more sugars, polyethyleneimine and said polypeptide, where the concentration of polyethyleneimine is 25 μM or less based on the number average molar mass (M n ) of polyethyleneimine and the total sugar concentration if more than one sugar is present is more than 0.1 M; and
(ii) сушку раствора с получением аморфной твердой матрицы, содержащей указанный полипептид.(ii) drying the solution to obtain an amorphous solid matrix containing the specified polypeptide.
2. Способ по п.1, где:2. The method according to claim 1, where:
(a) Mn полиэтиленимина составляет от 20 до 1000 кДа, а концентрация полиэтиленимина составляет от 0,001 до 100 нМ в расчете на Mn; и/или(a) M n of polyethyleneimine is from 20 to 1000 kDa, and the concentration of polyethyleneimine is from 0.001 to 100 nM based on M n ; and / or
(b) Mn полиэтиленимина составляет от 1 до 10000 Да, а концентрация полиэтиленимина составляет от 0,0001 до 10 мкМ в расчете на Mn.(b) M n of polyethyleneimine is from 1 to 10,000 Da, and the concentration of polyethyleneimine is from 0.0001 to 10 μM, calculated on M n .
3. Способ по п.1, где указанная концентрация полиэтиленимина составляет (а) 20 мкМ или менее или менее чем 500 нМ, и/или (b) 0,025 нМ или более, или 0,1 нМ или более.3. The method according to claim 1, where the specified concentration of polyethyleneimine is (a) 20 μm or less or less than 500 nm, and / or (b) 0.025 nm or more, or 0.1 nm or more.
4. Способ по п.1, где указанная концентрация полиэтиленимина составляет 0,1 нМ-5 мкМ или 0,1 нМ-200 нМ.4. The method according to claim 1, where the specified concentration of polyethyleneimine is 0.1 nm-5 μm or 0.1 nm-200 nm.
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, где:5. The method according to any one of the preceding paragraphs, where:
(a) концентрация сахара или общая концентрация сахара составляет от 0,5 до 2 М; и/или(a) the sugar concentration or total sugar concentration is from 0.5 to 2 M; and / or
(b) указанны сахаром является сахароза, стахиоза, раффиноза или сахарный спирт.(b) the indicated sugar is sucrose, stachyose, raffinose or sugar alcohol.
6. Способ по п.1, где в указанном водном растворе присутствуют два или более сахаров.6. The method according to claim 1, where two or more sugars are present in said aqueous solution.
7. Способ по п.6, где сахароза присутствует вместе с другим сахаром; соотношение концентрации сахарозы и концентрации указанного другого сахара представляет собой соотношение молярных концентраций и составляет от 3:7 до 9:1; а концентрация полиэтиленимина, в расчете на Mn в стадии (i), составляет от 0,0025 нМ до 5 мкМ.7. The method according to claim 6, where sucrose is present together with another sugar; the ratio of the concentration of sucrose and the concentration of the specified other sugar is the ratio of molar concentrations and ranges from 3: 7 to 9: 1; and the concentration of polyethylenimine, calculated on M n in step (i), is from 0.0025 nM to 5 μM.
8. Способ по п.6 или 7, где указанными сахарами являются сахароза и раффиноза.8. The method according to claim 6 or 7, where the indicated sugars are sucrose and raffinose.
9. Способ по любому из пп.1-4, где указанный раствор подвергают лиофилизации в стадии (ii).9. The method according to any one of claims 1 to 4, where the specified solution is subjected to lyophilization in stage (ii).
10. Способ по любому из пп.1-4, где указанным полипептидом является гормон, фактор роста, пептид или цитокин.10. The method according to any one of claims 1 to 4, where the specified polypeptide is a hormone, growth factor, peptide or cytokine.
11. Способ по любому из пп.1-4, где указанным полипептидом является тахикининовый пептид, вазоактивный кишечный пептид, пептид, родственный панкреатическому полипептиду, опиоидный пептид или пептид кальцитонина.11. The method according to any one of claims 1 to 4, wherein said polypeptide is a tachykinin peptide, a vasoactive intestinal peptide, a pancreatic polypeptide-related peptide, an opioid peptide or calcitonin peptide.
12. Способ по п.1, где указанным полипептидом является антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.12. The method according to claim 1, where the specified polypeptide is an antibody or its antigennegative fragment.
13. Способ по п.12, где указанным антителом или антигенсвязывающим фрагментом являются моноклональное антитело или его фрагмент.13. The method of claim 12, wherein said antibody or antigen binding fragment is a monoclonal antibody or fragment thereof.
14. Способ по п.12, где указанным антителом или антигенсвязывающим фрагментом являются химерное, гуманизированное или человеческое антитело или их фрагмент.14. The method according to item 12, where the specified antibody or antigennegative fragment are a chimeric, humanized or human antibody or fragment thereof.
15. Способ по п.14, где указанным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом являются IgG1, IgG2 или IgG4 или их антигенсвязывающий фрагмент.15. The method according to 14, where the specified antibody or its antigennegative fragment are IgG1, IgG2 or IgG4 or their antigennegative fragment.
16. Способ по любому из пп.12-15, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент способны связываться:16. The method according to any one of claims 12-15, wherein said antibody or antigen binding fragment thereof is capable of binding:
(a) с фактором некроза опухоли-α (TNF-α), интерлейкином-2 (IL-2), интерлейкином-6 (IL-6), гликопротеином IIb/IIIa, CD33, CD52, CD20, CD11a, CD3, белком RSVF, рецептором HER2/neu (erbB2), васкулярным эндотелиальным фактором роста (VEGF), рецептором эпидермального фактора роста (EGFR), анти-TRAILR2 антителом (против рецептора лиганда 2, индуцирующего апоптоз, ассоциированный с действием фактора некроза опухоли), белком системы комплемента С5, интегрином-α4 или IgE; или(a) with tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-2 (IL-2), interleukin-6 (IL-6), glycoprotein IIb / IIIa, CD33, CD52, CD20, CD11a, CD3, RSVF protein , HER2 / neu receptor (erbB2), vascular endothelial growth factor (VEGF), epidermal growth factor receptor (EGFR), anti-TRAILR2 antibody (against ligand 2 receptor inducing apoptosis associated with the action of tumor necrosis factor), protein of the C5 complement system integrin-α4 or IgE; or
(b) с адгезивной молекулой эпителиальных клеток (ЕрСАМ), с муцином-1 (MUCl/Can-Ag), EGFR, CD20, карциноэмбриональным антигеном (СЕА), HER2, CD22, CD33, с Lewis-Y-сахарами или с мембранным антигеном, специфичным для предстательной железы (PMSA).(b) with an adhesive epithelial cell molecule (EpCAM), with mucin-1 (MUCl / Can-Ag), EGFR, CD20, carcinoembryonic antigen (CEA), HER2, CD22, CD33, with Lewis-Y sugars or with a membrane antigen specific for the prostate gland (PMSA).
17. Способ по п.1, где указанным полипептидом является фермент.17. The method according to claim 1, where the specified polypeptide is an enzyme.
18. Способ по п.17, где указанным ферментом является оксидоредуктаза, трансфераза, гидролаза, лиаза, изомераза или лигаза.18. The method according to 17, where the specified enzyme is oxidoreductase, transferase, hydrolase, lyase, isomerase or ligase.
19. Способ по п.17 или 18, где указанный фермент выбран из α-галактозидазы, β-галактозидазы, люциферазы, сериновой протеазы, эндопептидазы, каспазы, химазы, химотрипсина, эндопептидазы, гранзима, папаина, панкреатической эластазы, оризина, плазмина, ренина, субтилизина, тромбина, трипсина, триптазы, урокиназы, амилазы, ксиланазы, липазы, трансглутаминазы, фермента, разрушающего клеточную стенку, глюканазы, глюкоамилазы, фермента свертывания крови, гидролизата молочного белка, фермента, разрушающего клеточную стенку, фермента свертывания крови, лизоцима, фермента, разлагающего волокно, фитазы, целлюлазы, гемицеллюлазы, протеазы, маннаназы или глюкоамилазы.19. The method according to 17 or 18, wherein said enzyme is selected from α-galactosidase, β-galactosidase, luciferase, serine protease, endopeptidase, caspase, chymase, chymotrypsin, endopeptidase, granzyme, papain, pancreatic elastase, oryzin, plasmin, renin , subtilisin, thrombin, trypsin, tryptase, urokinase, amylase, xylanase, lipase, transglutaminase, enzyme that destroys the cell wall, glucanase, glucoamylase, coagulation enzyme, milk protein hydrolyzate, enzyme that destroys the cell wall, blood coagulation enzyme lysozyme, an enzyme that decomposes fiber, phytase, cellulase, hemicellulase, protease, mannanase or glucoamylase.
20. Способ по любому из пп.1-4, где указанным полипептидом является вакцинный иммуноген.20. The method according to any one of claims 1 to 4, where the specified polypeptide is a vaccine immunogen.
21. Способ по п.20, где указанным вакцинным иммуногеном является полноразмерный вирусный или бактериальный белок, гликопротеин или липопротеин или их фрагмент.21. The method according to claim 20, where the specified vaccine immunogen is a full-sized viral or bacterial protein, glycoprotein or lipoprotein, or a fragment thereof.
22. Способ сохранения свойств полипептида, включающий:22. A method of preserving the properties of a polypeptide, including:
(i) получение водного раствора, состоящего из одного или нескольких сахаров, полиэтиленимина и указанного полипептида; и(i) obtaining an aqueous solution consisting of one or more sugars, polyethyleneimine and said polypeptide; and
(ii) сушку раствора с образованием аморфной твердой матрицы, содержащей указанный полипептид.(ii) drying the solution to form an amorphous solid matrix containing the specified polypeptide.
23. Способ по п.1 или 22, который также включает получение осушенной аморфной твердой матрицы в виде порошка, упакованного в герметично закрытый сосуд, ампулу или шприц.23. The method according to claim 1 or 22, which also includes obtaining a dried amorphous solid matrix in the form of a powder, packed in a hermetically sealed vessel, ampoule or syringe.
24. Сухой порошок, содержащий стабильный полипептид, полученный способом по любому из пп.1-22.24. A dry powder containing a stable polypeptide obtained by the method according to any one of claims 1 to 22.
25. Стабильный продукт, содержащий полипептид, один или несколько сахаров и полиэтиленимин, где указанный продукт имеет форму аморфного твердого вещества.25. A stable product containing a polypeptide, one or more sugars and polyethyleneimine, wherein said product is in the form of an amorphous solid.
26. Герметично закрытый сосуд, ампула или шприц, содержащие сухой порошок по п.24 или стабильный продукт по п.25.26. A hermetically sealed vessel, ampoule or syringe containing the dry powder according to claim 24 or the stable product according to claim 25.
27. Применение эксципиента, содержащего:27. The use of an excipient containing:
(a) сахарозу, стахиозу или раффинозу или любую их комбинацию; и(a) sucrose, stachyose or raffinose, or any combination thereof; and
(b) полиэтиленимин в концентрации, в расчете на Mn, составляющей 25 мкМ или менее;(b) polyethylenimine at a concentration based on M n of 25 μM or less;
в целях сохранения свойств полипептида.in order to preserve the properties of the polypeptide.
28. Применение по п.27, где концентрация указанного полиэтиленимина составляет 5 мкМ или менее.28. The use of claim 27, wherein the concentration of said polyethyleneimine is 5 μM or less.
29. Способ сохранения свойств вакцинного иммуногена, включающий:29. A method of preserving the properties of a vaccine immunogen, including:
(i) получение водного раствора, состоящего из одного или нескольких сахаров, полиэтиленимина и указанного вакцинного иммуногена, где концентрация полиэтиленимина составляет 25 мкМ или менее в расчете на среднечисленную молярную массу (Mn) полиэтиленимина, а общая концентрация сахара, если присутствует более чем один сахар, составляет более чем 0,1 М; и(i) obtaining an aqueous solution consisting of one or more sugars, polyethyleneimine and the indicated vaccine immunogen, where the concentration of polyethyleneimine is 25 μM or less based on the number average molar mass (M n ) of polyethyleneimine and the total sugar concentration, if more than one sugar is more than 0.1 M; and
(ii) сушку раствора с получением аморфной твердой матрицы, содержащей указанный вакцинный иммуноген.(ii) drying the solution to obtain an amorphous solid matrix containing the indicated vaccine immunogen.
30. Способ по п.29, где:30. The method according to clause 29, where:
(a) Mn полиэтиленимина составляет от 20 до 1000 кДа, а концентрация полиэтиленимина составляет от 0,001 до 100 нМ в расчете на Mn; и/или(a) M n of polyethyleneimine is from 20 to 1000 kDa, and the concentration of polyethyleneimine is from 0.001 to 100 nM based on M n ; and / or
(b) Mn полиэтиленимина составляет от 1 до 10000 Да, а концентрация полиэтиленимина составляет от 0,0001 до 10 мкМ в расчете на Mn.(b) M n of polyethyleneimine is from 1 to 10,000 Da, and the concentration of polyethyleneimine is from 0.0001 to 10 μM, calculated on M n .
31. Способ по п.29, где указанная концентрация полиэтиленимина составляет (а) 20 мкМ или менее или менее чем 500 нМ, и/или (b) 0,025 нМ или более, или 0,1 нМ или более.31. The method according to clause 29, where the specified concentration of polyethyleneimine is (a) 20 μm or less or less than 500 nm, and / or (b) 0.025 nm or more, or 0.1 nm or more.
32. Способ по п.29, где указанная концентрация полиэтиленимина составляет 0,1 нМ-5 мкМ или 0,1 нМ-200 нМ.32. The method according to clause 29, where the specified concentration of polyethyleneimine is 0.1 nm-5 μm or 0.1 nm-200 nm.
33. Способ по любому из пп.29-32, где:33. The method according to any one of paragraphs.29-32, where:
(a) концентрация сахара или общая концентрация сахара составляет от 0,5 до 2 М; и/или(a) the sugar concentration or total sugar concentration is from 0.5 to 2 M; and / or
(b) указанным сахаром является сахароза, стахиоза, раффиноза или сахарный спирт.(b) said sugar is sucrose, stachyose, raffinose or sugar alcohol.
34. Способ по п.29, где в указанном водном растворе присутствуют два или более сахаров.34. The method according to clause 29, where in the specified aqueous solution there are two or more sugars.
35. Способ по п.34, где сахароза присутствует вместе с другим сахаром; соотношение концентрации сахарозы и концентрации указанного другого сахара представляет собой соотношение молярных концентраций и составляет от 3:7 до 9:1; а концентрация полиэтиленимина, в расчете на Mn в стадии (i), составляет от 0,0025 нМ до 5 мкМ.35. The method according to clause 34, where sucrose is present together with another sugar; the ratio of the concentration of sucrose and the concentration of the specified other sugar is the ratio of molar concentrations and ranges from 3: 7 to 9: 1; and the concentration of polyethylenimine, calculated on M n in step (i), is from 0.0025 nM to 5 μM.
36. Способ по п.34 или 35, где указанными сахарами являются сахароза и раффиноза.36. The method according to clause 34 or 35, where these sugars are sucrose and raffinose.
37. Способ по любому из пп.29-32, где указанный раствор подвергают лиофилизации в стадии (ii).37. The method according to any one of paragraphs.29-32, where the specified solution is subjected to lyophilization in stage (ii).
38. Способ по п.29, где указанным вакцинным иммуногеном является субъединичная вакцина, конъюгированная вакцина или токсоид.38. The method according to clause 29, where the specified vaccine immunogen is a subunit vaccine, conjugate vaccine or toxoid.
39. Способ по п.38, где указанный иммуноген субъединичной вакцины происходит от белка вирусной поверхности или вирусного капсидного белка.39. The method of claim 38, wherein said subunit vaccine immunogen is derived from a viral surface protein or a viral capsid protein.
40. Способ сохранения свойств вакцинного иммуногена, включающий:40. A method of preserving the properties of a vaccine immunogen, including:
(i) получение водного раствора, состоящего из одного или нескольких сахаров, полиэтиленимина и указанного вакцинного иммуногена; и(i) obtaining an aqueous solution consisting of one or more sugars, polyethyleneimine and said vaccine immunogen; and
(ii) сушку раствора с образованием аморфной твердой матрицы, содержащей указанный вакцинный иммуноген.(ii) drying the solution to form an amorphous solid matrix containing the indicated vaccine immunogen.
41. Способ по п.29 или 40, который также включает получение осушенной аморфной твердой матрицы в виде порошка, упакованного в герметично закрытый сосуд, ампулу или шприц.41. The method according to clause 29 or 40, which also includes obtaining a dried amorphous solid matrix in the form of a powder, packed in a hermetically sealed vessel, ampoule or syringe.
42. Сухой порошок, содержащий стабильный вакцинный иммуноген, полученный способом по любому из пп.29-40.42. A dry powder containing a stable vaccine immunogen obtained by the method according to any one of claims 29-40.
43. Стабильный продукт, содержащий вакцинный иммуноген, один или несколько сахаров и полиэтиленимин, где указанный продукт имеет форму аморфного твердого вещества.43. A stable product containing a vaccine immunogen, one or more sugars and polyethyleneimine, wherein said product is in the form of an amorphous solid.
44. Герметично закрытый сосуд, ампула или шприц, содержащие сухой порошок по п.42 или стабильный продукт по п.43.44. A hermetically sealed vessel, ampoule or syringe containing the dry powder according to item 42 or a stable product according to item 43.
45. Вакцина, содержащая стабильный продукт по п.42 и необязательно адъювант.45. A vaccine containing the stable product of claim 42 and optionally an adjuvant.
46. Применение эксципиента, содержащего:46. The use of an excipient containing:
(a) сахарозу, стахиозу или раффинозу или любую их комбинацию; и(a) sucrose, stachyose or raffinose, or any combination thereof; and
(b) полиэтиленимин в концентрации, в расчете на Mn, составляющей 25 мкМ или менее;(b) polyethylenimine at a concentration based on M n of 25 μM or less;
в целях стабилизации вакцинного иммуногена.in order to stabilize the vaccine immunogen.
47. Применение по п.46, где концентрация указанного полиэтиленимина составляет 5 мкМ или менее.47. The use of claim 46, wherein the concentration of said polyethyleneimine is 5 μM or less.
48. Способ получения вакцины, содержащей вакцинный иммуноген, где указанный способ включает:48. A method of obtaining a vaccine containing a vaccine immunogen, where the specified method includes:
(a) получение водного раствора, состоящего из одного или нескольких сахаров, полиэтиленимина и указанного вакцинного иммуногена, где концентрация полиэтиленимина составляет 15 мкМ или менее в расчете на среднечисленную молярную массу (Mn) полиэтиленимина, а общая концентрация сахара, если присутствует более чем один сахар, составляет более чем 0,1 М;(a) obtaining an aqueous solution consisting of one or more sugars, polyethyleneimine and the indicated vaccine immunogen, where the concentration of polyethyleneimine is 15 μM or less, based on the number average molar mass (M n ) of polyethyleneimine, and the total sugar concentration, if more than one sugar is more than 0.1 M;
(b) добавление, но необязательно, адъюванта, буфера, антибиотика и/или добавки к указанной смеси; и(b) adding, but not necessarily, an adjuvant, buffer, antibiotic and / or additive to said mixture; and
(c) сушку раствора с получением аморфной твердой матрицы, содержащей указанный вакцинный иммуноген.
(c) drying the solution to obtain an amorphous solid matrix containing the specified vaccine immunogen.