Claims (13)
1. Способ продуцирования рекомбинантного вектора вируса Mononegavirales, содержащего дополнительную транскрипционную единицу, включающую чужеродный ген, операбельно связанный с последовательностью старта гена (GS) начальной части вируса Mononegavirales и последовательностью конца гена (GE) конечной части вируса Mononegavirales, характеризующуюся тем, что последовательность чужеродного гена кодирует белок, который содержит участок удлинения, состоящий, по крайней мере, из трех основных аминокислот, где указанный участок удлинения состоит из остатков аргинина (Arg) и/или лизина (Lys) и содержит, по крайней мере, один лизин, причем последовательность нуклеотидов чужеродного гена выбрана таким образом, что она не содержит последовательности, которая может узнаваться вирусной полимеразой вируса Mononegavirales как последовательность конца гена (GE).1. A method of producing a recombinant vector of the Mononegavirales virus containing an additional transcriptional unit comprising a foreign gene operably linked to the start sequence of the Mononegavirales virus initial part (GS) of the Mononegavirales virus end gene sequence (GE) of the final part of the Mononegavirales virus, characterized in that the sequence of the foreign gene encodes a protein that contains an extension section consisting of at least three basic amino acids, wherein said extension section consists of arginine residues (Arg) and / or lysine (Lys) and contains at least one lysine, the nucleotide sequence of a foreign gene being selected so that it does not contain a sequence that can be recognized by Mononegavirales virus polymerase as the gene end sequence (GE).
2. Способ по п.1, характеризуется тем, что для создания модифицированной последовательности чужеродного гена, часть последовательности чужеродного гена дикого типа, кодирующая указанный участок удлинения, состоящий, по крайней мере, из трех основных аминокислот, модифицирована с помощью сайт-направленного мутагенеза для устранения любой последовательности, которая может быть узнана вирусной полимеразой вируса Mononegavirales как последовательность конца гена (GE).2. The method according to claim 1, characterized in that to create a modified sequence of the foreign gene of the gene, part of the sequence of the foreign gene of the wild type encoding the specified stretch of extension, consisting of at least three basic amino acids, modified using site-directed mutagenesis for eliminating any sequence that can be recognized by the Mononegavirales virus polymerase virus as a gene end sequence (GE).
3. Способ по п.2, характеризующийся тем, что внутри последовательности t/aGAAAA, изначально представленной в последовательности чужеродного гена дикого типа, по крайней мере, одна мутация внесена так, что “A” участка удлинения, включающего аденин, замещается другим нуклеотидом.3. The method according to claim 2, characterized in that within the t / aGAAAA sequence, originally represented in the sequence of a foreign wild-type gene, at least one mutation is introduced so that the “A” of the extension section comprising adenine is replaced by another nucleotide.
4. Способ по п.3, характеризующийся тем, что эта мутация (ции) являются молчащими.4. The method according to claim 3, characterized in that this mutation (s) are silent.
5. Способ по п.3 или 4, характеризующийся тем, что, по крайней мере, один кодон aaa замещен на кодон aag.5. The method according to claim 3 or 4, characterized in that at least one aaa codon is replaced by aag codon.
6. Способ по пп.3 и 4, характеризующийся тем, что внесены, по крайней мере, две точечные мутации.6. The method according to claims 3 and 4, characterized in that at least two point mutations are introduced.
7. Способ по пп.3 и 4, характеризующийся тем, что, по крайней мере, два кодона aaa замещены на кодон aag.7. The method according to claims 3 and 4, characterized in that at least two aaa codons are replaced by aag codon.
8. Способ по пп.3 и 4, характеризующийся тем, что кодирующая последовательность aga aga aaa aaa замещается на кодирующую последовательность agg agg aag aag.8. The method according to claims 3 and 4, characterized in that the coding sequence aga aga aaa aaa is replaced by the coding sequence agg agg aag aag.
9. Способ по пп.1-4, характеризующийся тем, что вектор вируса Mononegavirales является вектором вируса болезни Ньюкастла (NDV), а чужеродный ген кодирует белок HA патогенного вируса H5 птичьего гриппа.9. The method according to claims 1 to 4, characterized in that the Mononegavirales virus vector is a Newcastle disease virus (NDV) vector, and the foreign gene encodes the HA protein of the pathogenic avian influenza H5 virus.
10. Рекомбинантный вектор вируса Mononegavirales, содержащий дополнительную транскрипционную единицу, включающую чужеродный ген, операбельно связанный с последовательностью старта гена (GS) начальной части вируса Mononegavirales и последовательностью конца гена (GE) конечной части вируса Mononegavirales, характеризующуюся тем, что последовательность чужеродного гена кодирует белок, который содержит участок удлинения, состоящий, по крайней мере, из трех основных аминокислот, где указанный участок удлинения, состоит из остатков аргинина (Arg) и/или лизина (Lys) и содержит, по крайней мере, один лизин, причем последовательность нуклеотидов чужеродного гена выбрана таким образом, что она не содержит последовательности, которая может узнаваться вирусной полимеразой вируса Mononegavirales как последовательность конца гена.10. A recombinant Mononegavirales virus vector containing an additional transcriptional unit including a foreign gene operably linked to the Mononegavirales virus start gene sequence (GS) and the Mononegavirales virus end gene sequence (GE) of the end part of the Mononegavirales virus, characterized in that the foreign gene sequence encodes a protein , which contains an extension section consisting of at least three basic amino acids, wherein said extension section consists of arginine (Arg) and / or lysine (Lys) residues and soda rzhit at least one lysine, wherein the nucleotide sequence of a foreign gene is chosen so that it does not contain sequence which can be recognized by the viral polymerase Mononegavirales virus gene end of the sequence.
11. Рекомбинантный вектор вируса Mononegavirales по п.10, характеризующийся тем, что чужеродный ген кодирует белок гемагглютинин (HA) патогенного вируса птичьего гриппа, в котором участок удлинения из основных аминокислот содержит, по крайней мере, два лизина в ряд, и в котором, по крайней мере, один из этих лизинов кодируется кодоном aag.11. The recombinant Mononegavirales virus vector of claim 10, characterized in that the foreign gene encodes a hemagglutinin (HA) protein of the pathogenic avian influenza virus, in which the extension section of the main amino acids contains at least two lysines in a row, and in which at least one of these lysines is encoded by the aag codon.
12. Рекомбинантный вектор вируса Mononegavirales по пп.10 и 11, характеризующийся тем, что участок удлинения основных аминокислот содержит последовательность аминокислот Arg Lys Lys, кодируемую последовательностью нуклеотидов aggaagaag.12. The recombinant vector of the Mononegavirales virus according to claims 10 and 11, characterized in that the extension section of the basic amino acids contains the amino acid sequence Arg Lys Lys encoded by the aggaagaag nucleotide sequence.
13. Вакцина против микробиологического патогена, содержащая рекомбинантный вектор вируса MV по любому из пп.10-12 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
13. A vaccine against a microbiological pathogen containing the recombinant vector of the MV virus according to any one of paragraphs.10-12 and a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.