RU2002102232A - Conjugates of erythropoietin and polyethylene glycol (second name "Derivatives of erythropoietin") - Google Patents

Conjugates of erythropoietin and polyethylene glycol (second name "Derivatives of erythropoietin")

Info

Publication number
RU2002102232A
RU2002102232A RU2002102232/04A RU2002102232A RU2002102232A RU 2002102232 A RU2002102232 A RU 2002102232A RU 2002102232/04 A RU2002102232/04 A RU 2002102232/04A RU 2002102232 A RU2002102232 A RU 2002102232A RU 2002102232 A RU2002102232 A RU 2002102232A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
thr
asn
conjugate
glycoprotein
sequence
Prior art date
Application number
RU2002102232/04A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2232163C2 (en
Inventor
Йозеф БУРГ
Бернд ХИЛЬГЕР
Ханс-Петер ЙОЗЕЛЬ
Original Assignee
Ф.Хоффманн - Ля Рош АГ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ф.Хоффманн - Ля Рош АГ filed Critical Ф.Хоффманн - Ля Рош АГ
Publication of RU2002102232A publication Critical patent/RU2002102232A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2232163C2 publication Critical patent/RU2232163C2/en

Links

Claims (40)

1. Конъюгат, который включает гликопротеин эритропоэтин, который имеет по меньшей мере одну свободную аминогруппу и обладает биологической активностью in vivo, обусловливающей увеличение производства ретикулоцитов и эритроцитов клетками костного мозга, и который выбирают из группы, включающей человеческий эритропоэтин и его аналоги, которые имеют последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную добавлением от 1 до 6 сайтов гликозилирования или перегруппировкой по меньшей мере одного сайта гликозилирования; этот гликопротеин ковалентно связан с 1-3 (низш.)алкоксиполи(этиленгликольными) группами, каждая поли(этиленгликольная) группа ковалентно связана с гликопротеином через линкер формулы -C(O)-X-S-Y, при этом С(O)-группа линкера образует амидную связь с одной из этих аминогрупп,1. The conjugate, which includes the erythropoietin glycoprotein, which has at least one free amino group and has an in vivo biological activity that causes an increase in the production of reticulocytes and red blood cells by bone marrow cells, and which is selected from the group comprising human erythropoietin and its analogues, which have the sequence human erythropoietin, modified by adding from 1 to 6 glycosylation sites or rearrangement of at least one glycosylation site; this glycoprotein is covalently linked to 1-3 (lower) alkoxypoly (ethylene glycol) groups, each poly (ethylene glycol) group is covalently linked to a glycoprotein via a linker of the formula -C (O) -XSY, while the C (O) -group of the linker forms an amide bond with one of these amino groups, Х обозначает -(CH2)k или -CH2(O-CH2-CH2)k-,X is - (CH 2 ) k or —CH 2 (O — CH 2 —CH 2 ) k -, k обозначает 1-10,k is 1-10, Y обозначаетY stands for
Figure 00000001
Figure 00000001
Figure 00000002
Figure 00000002
Figure 00000003
Figure 00000003
 илиor
Figure 00000004
Figure 00000004
 средняя молекулярная масса каждого поли(этиленгликольного) фрагмента составлят от примерно 20 до примерно 40 кДа и молекулярная масса конъюгата составляет от примерно 51 до примерно 175 кДа.the average molecular weight of each poly (ethylene glycol) fragment is from about 20 to about 40 kDa and the molecular weight of the conjugate is from about 51 to about 175 kDa. 2. Конъюгат по п.1 формулы2. The conjugate according to claim 1 of the formula P-[NH-CO-X-S-Y-(OCH2CH2)m-OR]n,P- [NH-CO-XSY- (OCH 2 CH 2 ) m -OR] n , где Х и Y имеют значения, указанные в п.1, m равно 450-900; n равно 1-3; R обозначает (низш.)алкил и Р обозначает гликопротеин эритропоэтин без аминогруппы или аминогрупп, которая(ые) образует(ют) амидную связь с X.where X and Y have the meanings indicated in claim 1, m is 450-900; n is 1-3; R is lower alkyl and P is erythropoietin glycoprotein without an amino group or amino groups which (s) form an amide bond with X. 3. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов формулы3. The conjugate according to any one of the preceding claims
Figure 00000005
Figure 00000005
 где Р, R, X, m и п имеют значения, указанные в п.2.where P, R, X, m and n have the meanings indicated in clause 2. 4. Конъюгат по пп.1 или 2 формулы4. The conjugate according to claims 1 or 2 of the formula
Figure 00000006
Figure 00000006
 где Р, R, X, m и n имеют значения, указанные в п.2.where P, R, X, m and n have the meanings specified in clause 2. 5. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где Х обозначает -(CH2)k-.5. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where X denotes - (CH 2 ) k -. 6. Конъюгат по п.5, где k равно 1-4.6. The conjugate according to claim 5, where k is 1-4. 7. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где Х обозначает -СН2-7. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where X is —CH 2 - 8. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где m обозначает целое число от 550 до 800.8. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where m denotes an integer from 550 to 800. 9. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где m обозначает целое число от 650 до 700.9. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where m denotes an integer from 650 to 700. 10. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где n равно 1.10. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where n is 1. 11. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где R обозначает метил.11. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where R is methyl. 12. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где средняя молекулярная масса каждого поли(этиленгликольного) фрагмента составляет от примерно 24 до примерно 35 кДа.12. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where the average molecular weight of each poly (ethylene glycol) fragment is from about 24 to about 35 kDa. 13. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где средняя молекулярная масса каждого поли(этиленгликольного) фрагмента составляет примерно 30 кДа.13. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where the average molecular weight of each poly (ethylene glycol) fragment is approximately 30 kDa. 14. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где гликопротеин ковалентно связан с одним или двумя заблокированными (низш.)алкоксигруппами поли(этиленгликольными) фрагментами.14. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where the glycoprotein is covalently linked to one or two blocked (lower) alkoxy groups of poly (ethylene glycol) fragments. 15. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где поли(этиленгликольные) фрагменты заблокированы метоксигруппой.15. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where the poly (ethylene glycol) fragments are blocked by a methoxy group. 16. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где Х обозначает -СН2-, m обозначает целое число от 650 до 700, п равно 1, R обозначает метил и средняя молекулярная масса каждого поли(этиленгликольного) фрагмента составляет примерно 30 кДа.16. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where X is —CH 2 -, m is an integer from 650 to 700, n is 1, R is methyl, and the average molecular weight of each poly (ethylene glycol) moiety is about 30 kDa. 17. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где гликопротеин эритропоэтин представляет собой человеческий эритропоэтин.17. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where the erythropoietin glycoprotein is human erythropoietin. 18. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где гликопротеин эритропоэтин экспрессируют с помощью эндогенной активации гена.18. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where the erythropoietin glycoprotein is expressed by endogenous gene activation. 19. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где гликопротеин эритропоэтин имеет последовательность, представленную на фиг.1 (SEQ ID NO:1) или на фиг.2 (SEQ ID NO:2).19. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where the erythropoietin glycoprotein has the sequence shown in figure 1 (SEQ ID NO: 1) or in figure 2 (SEQ ID NO: 2). 20. Конъюгат по п.19, где гликопротеин эритропоэтин имеет последовательность, представленную на фиг.1 (SEQ ID NO:l).20. The conjugate according to claim 19, where the erythropoietin glycoprotein has the sequence shown in figure 1 (SEQ ID NO: l). 21. Конъюгат по любому из пп.1-16, где гликопротеин имеет последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную путем добавления от 1 до 6 сайтов гликозилирования.21. The conjugate according to any one of claims 1 to 16, where the glycoprotein has a human erythropoietin sequence modified by adding from 1 to 6 glycosylation sites. 22. Конъюгат по любому из пп.1-6, 8 и 10, где гликопротеин имеет последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную путем модификации, выбранной из группы, включающей:22. The conjugate according to any one of claims 1 to 6, 8 and 10, where the glycoprotein has a human erythropoietin sequence modified by a modification selected from the group including: Asn30Thr32;Asn 30 Thr 32 ; Asn51Thr53;Asn 51 Thr 53 ; Asn57Thr59;Asn 57 Thr 59 ; Asn69;Asn 69 ; Asn69Thr71;Asn 69 Thr 71 ; Ser68Asn69Thr71;Ser 68 Asn 69 Thr 71 ; Val87Asn88Thr90;Val 87 Asn 88 Thr 90 ; Ser87Asn88Thr90;Ser 87 Asn 88 Thr 90 ; Ser87Asn88Gly89Thr90;Ser 87 Asn 88 Gly 89 Thr 90 ; Ser87Asn88Thr90Thr92;Ser 87 Asn 88 Thr 90 Thr 92 ; Ser87Asn88Thr90Ala162;Ser 87 Asn 88 Thr 90 Ala 162 ; Asn69Thr71Ser87Asn88Thr90;Asn 69 Thr 71 Ser 87 Asn 88 Thr 90 ; Asn30Thr32Val87Asn88Thr90;Asn 30 Thr 32 Val 87 Asn 88 Thr 90 ; Asn89Ile90Thr91;Asn 89 Ile 90 Thr 91 ; Ser87Asn89Ile90Thr91;Ser 87 Asn 89 Ile 90 Thr 91 ; Asn136Thr138;Asn 136 Thr 138 ; Asn138Thr140;Asn 138 Thr 140 ; Thr125 иThr 125 and Pro124Thr125.Pro 124 Thr 125 . 23. Конъюгат по любому из предыдущих пунктов, где гликопротеин имеет последовательность, включающую последовательность человеческого эритропоэтина и вторую последовательность на карбоксильном конце последовательности человеческого эритропоэтина, причем вторая последовательность содержит по меньшей мере один сайт гликозилирования.23. The conjugate according to any one of the preceding paragraphs, where the glycoprotein has a sequence comprising a sequence of human erythropoietin and a second sequence at the carboxyl end of the sequence of human erythropoietin, and the second sequence contains at least one glycosylation site. 24. Конъюгат по п.23, где вторая последовательность включает последовательность. происходящую из последовательности карбоксильного конца человеческого относящегося к хориону гонадотропина.24. The conjugate of claim 23, wherein the second sequence comprises the sequence. derived from the sequence of the carboxyl end of the human chorion of gonadotropin. 25. Конъюгат по п.24, где гликопротеин имеет последовательность, выбранную из группы, включающей25. The conjugate according to paragraph 24, where the glycoprotein has a sequence selected from the group including (а) человеческий эритропоэтин, имеющий аминокислотную последовательность(a) human erythropoietin having an amino acid sequence SerSerSerSerLysAlaProProProSerLeuProSerProSerArgLeuProGlyProSerAspThrProIle LeuProGIn (SEQ ID NO:3), простирающуюся от карбоксильного конца;SerSerSerSerLysAlaProProProSerLeuProSerProSerArgLeuProGlyProSerAspThrProIle LeuProGIn (SEQ ID NO: 3), extending from the carboxyl end; (б) последовательность, указанную в (а), модифицированную с помощью Ser87Asn88Thr90; и(b) the sequence specified in (a), modified using Ser 87 Asn 88 Thr 90 ; and (в) последовательность, указанную в (а), модифицированную с помощью Asn30Thr32Va87Asr88Thr90.(c) the sequence indicated in (a) modified with Asn 30 Thr 32 Va 87 Asr 88 Thr 90 . 26. Конъюгат по любому из пп.1-16, где гликопротеин имеет последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную путем перегруппировки по меньшей мере одного сайта гликозилирования.26. The conjugate according to any one of claims 1 to 16, where the glycoprotein has a human erythropoietin sequence modified by rearrangement of at least one glycosylation site. 27. Конъюгат по п.25, где перегруппировка включает делецию любого из N-связанных углеводных сайтов в человеческом эритропоэтине и добавление N-связанного углеводного сайта в положение 88 последовательности человеческого эритропоэтина.27. The conjugate of claim 25, wherein the rearrangement comprises a deletion of any of the N-linked carbohydrate sites in human erythropoietin and the addition of an N-linked carbohydrate site at position 88 of the human erythropoietin sequence. 28. Конъюгат по п.14, где гликопротеин имеет последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную путем модификации, выбранной из группы, включающей:28. The conjugate of claim 14, wherein the glycoprotein has a human erythropoietin sequence modified by a modification selected from the group consisting of: GIn24Ser87Asn88Thr90 EPO;GIn 24 Ser 87 Asn 88 Thr 90 EPO; GIn38Ser87Asn88Thr90 EPO; иGIn 38 Ser 87 Asn 88 Thr 90 EPO; and GIn83Ser87Asn88Thr90 EPO.GIn 83 Ser 87 Asn 88 Thr 90 EPO. 29. Композиция, включающая конъюгаты, где каждый из конъюгатов включает гликопротеин эритропоэтин, имеющий по меньшей мере одну свободную аминогруппу и обладающий биологической активностью in vivo, обусловливающей увеличение производства ретикулоцитов и эритроцитов клетками костного мозга, и выбранный из группы, включающей человеческий эритропоэтин и его аналоги, которые имеют последовательность человеческого эритропоэтина, модифицированную добавлением от 1 до 6 сайтов гликозилнрования или перегруппировкой по меньшей мере одного сайта гликозилирования; этот гликопротеин ковалентно связан с 1-3 (низш.)алкоксиполи(этиленгликольными) группами, каждая поли(этиленгликольная) группа ковалентно связана с гликопротеином через линкер формулы -C(O)-X-S-Y, при этом С(O)-группа линкера образует амидную связь с одной из этих аминогрупп,29. A composition comprising conjugates, where each of the conjugates includes an erythropoietin glycoprotein having at least one free amino group and having in vivo biological activity that causes an increase in the production of reticulocytes and red blood cells by bone marrow cells and selected from the group comprising human erythropoietin and its analogues that have a human erythropoietin sequence modified by adding from 1 to 6 glycosylation sites or rearrangement of at least one site glycosylation; this glycoprotein is covalently linked to 1-3 (lower) alkoxypoly (ethylene glycol) groups, each poly (ethylene glycol) group is covalently linked to a glycoprotein via a linker of the formula -C (O) -XSY, while the C (O) -group of the linker forms an amide bond with one of these amino groups, Х обозначает -(CH2)kили -CH2(O-CH2-CH2)k,X is - (CH 2 ) k or —CH 2 (O — CH 2 —CH 2 ) k , k обозначает 1-10,k is 1-10, Y обозначаетY stands for
Figure 00000007
Figure 00000007
Figure 00000008
Figure 00000008
Figure 00000009
Figure 00000009
 илиor
Figure 00000010
Figure 00000010
 средняя молекулярная масса каждого поли(этиленгликольного) фрагмента составляет от примерно 20 до примерно 40 кДа и молекулярная масса конъюгата составляет от примерно 51 до примерно 175 кДа; и процентное содержание конъюгатов, в которых n равно 1, составляет по меньшей мере 90%.the average molecular weight of each poly (ethylene glycol) fragment is from about 20 to about 40 kDa and the molecular weight of the conjugate is from about 51 to about 175 kDa; and the percentage of conjugates in which n is 1 is at least 90%. 30. Композиция, включающая конъюгат по любому из пп.1-27, где процентное содержание конъюгатов, в которых п равно 1, составляет по меньшей мере 90%.30. A composition comprising a conjugate according to any one of claims 1 to 27, wherein the percentage of conjugates in which n is 1 is at least 90%. 31. Композиция по п.28 или 29, где процентное содержание конъюгатов, в которых n равно 1, составляет по меньшей мере 92%.31. The composition according to p. 28 or 29, where the percentage of conjugates in which n is 1 is at least 92%. 32. Композиция по п.30, где процентное содержание конъюгатов, в которых п равно 1, составляет по меньшей мере 96%.32. The composition according to p. 30, where the percentage of conjugates in which n is 1 is at least 96%. 33. Композиция по п.29 или 32, где процентное содержание конъюгатов, в которых n равно 1, составляет от 90 до 96%.33. The composition according to clause 29 or 32, where the percentage of conjugates in which n is 1 is from 90 to 96%. 34. Фармацевтическая композиция, включающая конъюгат или композицию по любому из пп.1-33 и фармацевтически приемлемый эксципиент.34. A pharmaceutical composition comprising the conjugate or composition according to any one of claims 1 to 33 and a pharmaceutically acceptable excipient. 35. Применение конъюгата или композиции по любому из пп.1-33 для приготовления лекарственных средств, предназначенных для лечения или профилактики болезней, связанных с анемией у пациентов с хронической почечной недостаточностью (ХПН), больных СПИДом и для лечения раковых больных, подвергающихся химиотерапии.35. The use of the conjugate or composition according to any one of claims 1 to 33 for the preparation of drugs for the treatment or prevention of diseases associated with anemia in patients with chronic renal failure (CRF), AIDS patients and for the treatment of cancer patients undergoing chemotherapy. 36. Способ профилактического и/или терапевтического лечения нарушений, включающих анемию у пациентов с хронической почечной недостаточностью (ХПН), больных СПИДом и раковых больных, подвергающихся химиотерапии, предусматривающий стадию введения пациенту конъюгата или композиции по любому из пп.1-33.36. A method for the prophylactic and / or therapeutic treatment of disorders including anemia in patients with chronic renal failure (CRF), AIDS patients and cancer patients undergoing chemotherapy, comprising the step of administering to the patient a conjugate or composition according to any one of claims 1 to 33. 37. Способ получения конъюгата или композиции по любому из пп.1-33, который предусматривает ковалентное связывание тиольных групп с гликопротеином эритропоэтином и сочетание образовавшегося активированного гликопротеина эритропоэтина с поли(этиленгликольным) (ПЭГ) производным.37. A method for producing a conjugate or composition according to any one of claims 1 to 33, which comprises covalently linking thiol groups to erythropoietin glycoprotein and combining the resulting activated erythropoietin glycoprotein with a poly (ethylene glycol) (PEG) derivative. 38. Конъюгаты и композиции по любому из пп.1-33, полученные согласно способу по п.36.38. Conjugates and compositions according to any one of claims 1 to 33, obtained according to the method according to clause 36. 39. Конъюгаты и композиции по любому из пп.1-33, предназначенные для лечения болезней, связанных с анемией у пациентов с хронической почечной недостаточностью (ХПН), больных СПИДом и для лечения раковых больных, подвергающихся химиотерапии.39. The conjugates and compositions according to any one of claims 1 to 33, intended for the treatment of diseases associated with anemia in patients with chronic renal failure (CRF), AIDS patients and for the treatment of cancer patients undergoing chemotherapy. 40. Новые соединения, процессы и способы, а также применение указанных соединений в основном так, как это представлено в настоящем описании.40. New compounds, processes and methods, as well as the use of these compounds, mainly as described in the present description.
RU2002102232/04A 1999-07-02 2000-06-28 Conjugates of erythropoietin and polyethylene glycol, pharmaceutical compositions (variants), method for prophylactic and/or therapeutic treatment of disturbances and method for preparing conjugate or composition RU2232163C2 (en)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14224399P 1999-07-02 1999-07-02
US60/142,243 1999-07-02
US14745299P 1999-08-05 1999-08-05
US60/147,452 1999-08-05
US60/151,454 1999-08-30

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2002102232A true RU2002102232A (en) 2003-09-20
RU2232163C2 RU2232163C2 (en) 2004-07-10

Family

ID=33422483

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2002102232/04A RU2232163C2 (en) 1999-07-02 2000-06-28 Conjugates of erythropoietin and polyethylene glycol, pharmaceutical compositions (variants), method for prophylactic and/or therapeutic treatment of disturbances and method for preparing conjugate or composition

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2232163C2 (en)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102497877B (en) * 2009-09-15 2015-03-18 株式会社钟化 Modified erythropoietin to which water-soluble long-chain molecule is added
EA018116B1 (en) * 2011-06-06 2013-05-30 Общество С Ограниченной Ответственностью "Форт" (Ооо "Форт") Process for preparing polyethyleneglycol covalent conjugate with erythropoietin

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2859105B2 (en) Interferon conjugate
RU2324494C2 (en) New application of erythropoietin in heart diseases
AU725195B2 (en) Interferon conjugates
EP2459226B1 (en) Glycopolysialylation of proteins other than blood coagulation proteins
JP4745664B2 (en) Polymer derivatives of camptothecins
EP1121155B1 (en) Site-directed dual pegylation of proteins
JP5334347B2 (en) Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods
DE69925830T2 (en) PEG-LHRH ANALOG CONJUGATE
KR100930606B1 (en) Mixtures of calcitonin drug-oligomeric conjugates comprising polyalkylene glycols, uses thereof and methods for their preparation
EP2233504B1 (en) An erythropoietin mimetic peptide derivatives and its pharmaceutical salt, the preparation and uses thereof
JP2004525097A5 (en)
RU2002133236A (en) NEW PHARMACEUTICAL COMPOSITION
US20020058611A1 (en) Carrier for in vivo delivery of a therapeutic agent
HU228478B1 (en) Erythropoietin conjugates with polyethylenglycol
JP2003155299A (en) N-terminally chemically modified protein composition and method
JP2015512368A (en) C1 inhibitor polymer conjugates
KR0184858B1 (en) Polymyxin conjugates
US6914121B2 (en) PEG-LHRH analog conjugates
AU2008340058A1 (en) PEG-interferon-beta formulations
RU2010136327A (en) GROWTH HORMONE, MODIFIED BY TWO-STAGE ARCH POLYETHYLENE GLYCOL, ITS METHOD FOR PRODUCING AND APPLICATION
RU2002102232A (en) Conjugates of erythropoietin and polyethylene glycol (second name "Derivatives of erythropoietin")
KR101467076B1 (en) A pharmaceutical composition for preventing or treating arthritis comprising hyaluronic acid-methotrexate conjugate and a method for preparation thereof
JP2005281302A (en) Modified interleukin-11 and medicinal preparation containing the same
EP3822292A1 (en) Polymer compound and promoter for introducing compound into cells using same
WO2005085283A1 (en) Modified interleukin-11 and medicinal composition containing the same