RU2001628C1

RU2001628C1 - Способ стерилизации лидазы

Info

Publication number: RU2001628C1
Authority: RU
Inventors: Леонид Ильич Стекольников; Игорь Иннокентьевич Самойленко; Владимир Валентинович Рыльцев; Риама Борисовна Вирник
Original assignee: Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи РАМН
Priority date: 1991-05-22
Filing date: 1991-05-22
Publication date: 1993-10-30

Description

Выбор этою соединени объ сн етс его известными радиозащитными свойствами и высокой реакционной способностью. Можно полагать, что при взаимодействии лида- зы с мексамином в водном растворе образуетс новое комплексное соединение возможно за счет реакции аминогрупп мек- самина с карбоксильными или другими фун- кциональными группами молекулы фермента.

При этом не исключено, что происходит блокирование наиболее у звимых фрагментов макромолекул фермента радиопротектором и преграждаетс доступ к его каталитическим центрам молекул рного кислорода, оказывающего повреждающее действие.

Факт образовани такого комплекса был подтвержден в результате хроматогра- фического и спектрального излучени растворов лидазы и мексамина (см. фиг. 1 и 2), где было зарегистрировано изменение величин Pf и абсорбционных кривых в УФ-об- ласти спектра.

При стерилизации водных растворов лидазы в отсутствии радиопротектора происходит прогрессирующа потер активности фермента в зависимости от дозы излучени . При использовании дозы 25 кГр активность лидазы снижаетс на 30% от исходной величины, а при снижении дозы до 10 кГр- на 15-20 %. Оптимальное действие мексамина в качестве протектора имеет место при его концентрации 1-5 % к массе лидазы. В этом случае особенно отчетливо про вл ютс не только радиозащитные свойства мексамина, но и вы вл етс сине- ргическое бактериостатическое или бактерицидное действие комплекса лидаза - мексамин в отношении Е. coli и Ps. aeruginosa (см. фиг. 3 и 4).

Пример 1. 100 г ацетонированного порошка субстанции лидазы активностью 256 усл. ед/100 мг раствор ют в 4 л воды из расчета 64 усл. ед/мл, раствор фильтруют дл удалени механических примесей и к фильтрату (степень контаминации 3,8 -10 кол/мл), добавл ют 1 г (1 % к массе лидазы) мексамина. Смесь перемешивают до полного растворени мексамина и подвергают об- лучению на изотопной облучательной установке (Со) мощностью дозы 10 кГр/ч при дозе радиации 5 кГр. Препарат лидазы после радиационной обработки сохран ет активность 64 усл. ед/мл.

Контроль стерильности облученных препаратов проводили путем посева на плотную питательную среду (МПА) и в стандартную жидкую тиогликолевую среду. Установлено отсутствие микробной

контаминации обработанного препарата как на плотных, так и на жидких питательных средах. Стерльный препарат разливают в асептических услови х по 1 мл и сублими- руют. Полученный препарат удовлетвор ет требовани м фармакопейной статьи на ли- дазу(Ф С 42-2 606-88).

Пример 2. 100 г ацетонированного порошка субстанции лидазы активностью

256 усл. ед/100 мг раствор ют в 4 л воды из расчета 64 усл. ед/мл, раствор фильтруют дл удалени механических примесей и к фильтрату (степень контаминации 3,4- 108 кл/мл) добавл ют 2,5 г (2,5 % к массе лидазы ) мексамина. Смесь перемешивают до полного растворени мексамина и подвергают облучению на изотопной облучательной установке Со) с мощностью дозы 10 кГр/ч при дозе радиации 7,5 кГр. Получают

полностью стерильный раствор лидазы активностью 64 усл. ед/мл, который разливают в асептических услови х во флаконы по 1 мл и сублимируют. Полученный препарат удовлетвор ет требовани м фармакопейной статьи на лидазу (ФС 42-2606-88).

П р и м е р 3. 100 г ацетонированного порошка субстанции лидазы активностью 256 усл. ед/100 мг раствор ют в 4 л воды из расчета 64 усл. ед/мл, раствор фильтруют

дл удалени механических примесей и к фильтрату (степень контаминации 3,1 10 кл/мл) добавл ют 5 г (5 % к массе лидазы) мексамина. Смесь перемешивают до полного растворени мексамина и подвергают облучению на изотопной облучательной установке (Со) с мощностью дозы 10 кГр/час при дозе радиации 10 кГр. Получают полностью стерильный раствор лидазы активностью 64 ед/мл, который разливают

в асептических услови х во флаконы по 1 мл и сублимируют. Полученный препарат удовлетвор ет требовани м фармакопейной статьи на лидазу (ФС 42 2606-88).

При изменении за вленной совокупности существенных признаков положительный эффект не достигаетс , что подтверждаетс сравнительными примерами 4-9.

П р и м е р 4. 100 г ацетонированного

порошка субстанции лидазы активностью 256 усл. ед/100 мг раствор ют в 4 л воды и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что перед стерилизацией мексамин не добавл ют. Получают раствор

лидазы, в котором уровень контаминации составл ет 2,4 -10 кл/мл, а активность фермента 54 усл. ед/мл.

П р и м е р 5. 100 г ацетонированного порошка субстанции лидазы активностью

256 усл. ед/100 мг раствор ют в 4 л воды и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что вместо мексамина добавл ют 1 г хлоргидрата цистеамина (HSCH2CH2NH2 HCI). Получают раствор лидазы, в котором уровень контаминации составл ет 0,4 10 кол/мл, а активность фермента 56 усл. ед/мл.

П р и м е р 6. 100 г ацетонированного порошка субстанции лидазы с активностью 256 усл. ед/100 мг раствор ют в 4 л воды и далее поступают как в примере 1, за исключением того, что добавл ют 0,5 г мексамина (0,5 % к массе лидазы). Получают раствор, в котором уровень контаминации составл ет 0,2 102 кол/мл, а активность лидазы - 50 усл. ед/мл.

Пример. 100 г ацетонированного порошка субстанции лидазы активностью 256 усл. ед/100 мг раствор ют в 4 л воды и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что добавл ют 6 г мексамина (6 % к массе лидазы). Получают полностью стерильный раствор лидазы активностью 64

Claims

Формула изобретени

СПОСОБ СТЕРИЛИЗАЦИИ ЛИДАЗЫ путем растворени фермента в воде, добавлени к раствору радиопротектора и стерилизации раствора ионизирующей раусл/ед/мл , что свидетельствует о нецелесообразности повышени концентрации мексамина в растворе.

Примерб. 100 г ацетонированного

порошка субстанции лидазы активностью 256 усл. ед/100 мг раствор ют в 4 л воды и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что доза радиации составл ет 2,5 кГр, Получают раствор лидазы с уровнем

контаминации, близким к исходному (5,Ох хЮ7 кол/мл).

Пример 9. 100 г ацетонированного порошка субстанции лидазы активностью 25 усл. ед/100 мг раствор ют в 4 л воды и

далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что доза радиации составл ет 15 кГр. Получают полностью стерильный раствор лидазы с расчетной активностью (64 усл. ед/мл), что свидетельствует о нецелесообразности повышени дозы радиации .

кл

(56) За вка Великобритании N 2222081, А 61 К 41/00,1990.

диацией, отличающийс тем, что, с целью сохранени активности фермента, в качестве радиопротектора используют мекса- мин в процентном отношении 1 - 5 к массе лидазы, а стерилизацию осуществл ют радиацией при дозе 5-10 кГр,

Фиг. 7

ZtO Zfff Z SO jffff 320 j tw 0i/e.2

2001628

о

а