Claims (52)
1. Изолированный полинуклеотид, включающий последовательность, изображенную в SEQ ID NO:33.1. An isolated polynucleotide comprising the sequence depicted in SEQ ID NO: 33.
2. Полинуклеотид, кодирующий EPSPS, за исключением кДНК, кодирующей EPSPS риса и кукурузы, причем данный полинуклеотид комплементарен полинуклеотиду, который при инкубировании при температуре 65 - 70°С в забуференном цитратом солевом растворе 0,1-концентрации, содержащем 0,1% ДСН, с последующим промыванием при той же самой температуре забуференным цитратом солевым раствором 0,1-концентрации, содержащим 0,1% ДСН, все еще гибридизуется с последовательностью, изображенной в SEQ ID NO:33.2. Polynucleotide encoding EPSPS, with the exception of cDNA encoding EPSPS of rice and corn, and this polynucleotide is complementary to polynucleotide, which when incubated at a temperature of 65 - 70 ° C in 0.1-concentration citrate buffered saline containing 0.1% SDS , followed by washing at the same temperature with a citrate-buffered saline of 0.1 concentration containing 0.1% SDS, still hybridizes to the sequence shown in SEQ ID NO: 33.
3. Полинуклеотид, кодирующий EPSPS, иной чем EPSPS кукурузы, получаемый скринингом библиотек растительных геномных ДНК полинуклеотидом, составляющим интрон в последовательности SEQ ID NO:33.3. Polynucleotide encoding EPSPS other than EPSPS of maize obtained by screening plant genomic DNA libraries with a polynucleotide constituting an intron in the sequence of SEQ ID NO: 33.
4. Изолированный полинуклеотид, включающий район, кодирующий хлоропластный транзитный пептид и устойчивую к глифозату 5-енолпирувилшикиматфосфатсинтазу (EPSPS) 3' от данного пептида, причем указанный район находится под экспрессионным контролем функционального в растениях промотора, при условии, что указанный промотор не является гетерологичным относительно указанного района, а хлоропластный транзитный пептид не является гетерологичным относительно указанной синтазы.4. An isolated polynucleotide comprising a region encoding a chloroplast transit peptide and glyphosate resistant 5-enolpyruvyl chymate phosphate synthase (EPSPS) 3 'from the peptide, said region being under the expression control of a plant functional promoter, provided that the promoter is not heterologous with respect to the specified region, and the chloroplast transit peptide is not heterologous with respect to the specified synthase.
5. Полинуклеотид по любому из пп.1-4, включающий следующие компоненты в направлении транскрипции от 5' к 3': (i) по меньшей мере один энхансер транскрипции, являющийся усиливающим транскрипцию районом, который находится выше по ходу транскрипции от старта транскрипции последовательности, из которой получен данный энхансер, причем данный энхансер per se не функционирует в качестве промотора ни в последовательности, в которой он эндогенно содержится, ни в том случае, когда он присутствует гетерологично в качестве части конструкции; (ii) промотор из гена EPSPS риса; (iii) геномную последовательность риса, которая кодирует хлоропластный транзитный пептид EPSPS риса; (iv) геномную последовательность, которая кодирует EPSPS риса; (v) терминатор транскрипции, где кодирующая EPSPS риса последовательность модифицирована таким образом, что первое положение мутировано так, что остаток в этом положении является Ile, а не Thr, а второе положение мутировано так, что остаток в этом положении является Ser, а не Pro, причем данные мутации введены в последовательности EPSPS, которые содержат следующий консервативный район GNAGTAMRPLTAAV в ферменте дикого типа, так что модифицированная последовательность читается как GNAGIAMRSLTAAV.5. A polynucleotide according to any one of claims 1 to 4, comprising the following components in the direction of transcription from 5 ′ to 3 ′: (i) at least one transcription enhancer, which is a transcription enhancing region that is upstream from the start of transcription of the sequence from which this enhancer is derived, and this enhancer per se does not function as a promoter either in the sequence in which it is endogenously contained, or when it is heterologically present as part of the construct; (ii) a promoter from the EPSPS gene of rice; (iii) a rice genomic sequence that encodes a rice EPSPS chloroplast transit peptide; (iv) a genomic sequence that encodes rice EPSPS; (v) a transcription terminator, where the EPSPS-encoding rice sequence is modified so that the first position is mutated so that the residue in this position is Ile rather than Thr, and the second position is mutated so that the residue in this position is Ser and not Pro moreover, these mutations are introduced in the EPSPS sequences, which contain the following conserved region of GNAGTAMRPLTAAV in the wild-type enzyme, so that the modified sequence reads as GNAGIAMRSLTAAV.
6. Полинуклеотид по п.5, где указанный энхансер содержит последовательность, 3'-конец которой находится по меньшей мере на 40 нуклеотидов выше по ходу транскрипции от ближайшего старта транскрипции последовательности, из которой получен данный энхансер.6. The polynucleotide according to claim 5, where the specified enhancer contains a sequence, the 3'-end of which is at least 40 nucleotides higher in the course of transcription from the nearest start of transcription of the sequence from which this enhancer is obtained.
7. Полинуклеотид по любому из п.5 или 6, где энхансер содержит район, 3'-конец которого находится по меньшей мере на 60 нуклеотидов выше по ходу транскрипции от указанного ближайшего старта.7. The polynucleotide according to any one of claims 5 or 6, wherein the enhancer comprises a region, the 3 ′ end of which is at least 60 nucleotides upstream of the indicated nearest start.
8. Полинуклеотид по п.5, где указанный энхансер содержит последовательность, 3'-конец которой находится по меньшей мере на 10 нуклеотидов выше по ходу транскрипции от первого нуклеотида ТАТА-консенсуса последовательности, из которой получен данный энхансер.8. The polynucleotide according to claim 5, where the specified enhancer contains a sequence, the 3'-end of which is at least 10 nucleotides higher in the course of transcription from the first nucleotide of the TATA consensus of the sequence from which this enhancer is obtained.
9. Полинуклеотид по любому из пп.1-8, содержащий первый и второй энхансеры транскрипции.9. Polynucleotide according to any one of claims 1 to 8, containing the first and second transcription enhancers.
10. Полинуклеотид по п.9, где первый и второй энхансеры тандемно присутствуют в данном полинуклеотиде.10. The polynucleotide of claim 9, wherein the first and second enhancers are tandemly present in the polynucleotide.
11. Полинуклеотид по любому из пп.5-10, где 3'-конец энхансера, или первого энхансера, находится между приблизительно 100 и приблизительно 1000 нуклеотидами выше по ходу транскрипции от кодона, соответствующего старту трансляции транзитного пептида EPSPS, или от первого нуклеотида интрона в 5'-нетранслируемом районе.11. The polynucleotide according to any one of claims 5 to 10, where the 3'-end of the enhancer, or the first enhancer, is between approximately 100 and approximately 1000 nucleotides upstream from the codon corresponding to the start of translation of the EPSPS transit peptide, or from the first nucleotide of the intron in a 5'-untranslated area.
12. Полинуклеотид по любому из пп.5-11, где 3'-конец энхансера, или первого энхансера, находится между приблизительно 150 и приблизительно 1000 нуклеотидами выше по ходу транскрипции от кодона, соответствующего старту трансляции транзитного пептида EPSPS, или от первого нуклеотида интрона в 5'-нетранслируемом районе.12. The polynucleotide according to any one of claims 5-11, wherein the 3 ′ end of the enhancer, or the first enhancer, is between about 150 and about 1000 nucleotides upstream from the codon corresponding to the translation start of the EPSPS transit peptide, or from the first nucleotide of the intron in a 5'-untranslated area.
13. Полинуклеотид по любому из пп.5-12, где 3'-конец энхансера, или первого энхансера, находится между приблизительно 300 и приблизительно 950 нуклеотидами выше по ходу транскрипции от кодона, соответствующего старту трансляции транзитного пептида EPSPS, или от первого нуклеотида интрона в 5'-нетранслируемом районе.13. The polynucleotide according to any one of claims 5-12, wherein the 3 ′ end of the enhancer, or the first enhancer, is between about 300 and about 950 nucleotides upstream from the codon corresponding to the translation start of the EPSPS transit peptide, or from the first nucleotide of the intron in a 5'-untranslated area.
14. Полинуклеотид по любому из пп.5-13, где 3'-конец энхансера, или первого энхансера, находится между приблизительно 770 и приблизительно 790 нуклеотидами выше по ходу транскрипции от кодона, соответствующего старту трансляции транзитного пептида EPSPS, или от первого нуклеотида интрона в 5'-нетранслируемом районе.14. The polynucleotide according to any one of claims 5 to 13, where the 3'-end of the enhancer, or the first enhancer, is between approximately 770 and approximately 790 nucleotides upstream from the codon corresponding to the start of translation of the EPSPS transit peptide, or from the first nucleotide of the intron in a 5'-untranslated area.
15. Полинуклеотид по любому из пп.5-13, где 3'-конец энхансера, или первого энхансера, находится между приблизительно 300 и приблизительно 380 нуклеотидами выше по ходу транскрипции от кодона, соответствующего старту трансляции транзитного пептида EPSPS, или от первого нуклеотида интрона в 5'-нетранслируемом районе.15. The polynucleotide according to any one of claims 5 to 13, where the 3'-end of the enhancer, or the first enhancer, is between approximately 300 and approximately 380 nucleotides upstream from the codon corresponding to the start of translation of the EPSPS transit peptide, or from the first nucleotide of the intron in a 5'-untranslated area.
16. Полинуклеотид по любому из пп.5-13 и 15, где 3'-конец энхансера, или первого энхансера, находится между приблизительно 320 и приблизительно 350 нуклеотидами выше по ходу транскрипции от кодона, соответствующего старту трансляции транзитного пептида EPSPS, или от первого нуклеотида интрона в 5'-нетранслируемом районе.16. The polynucleotide according to any one of claims 5 to 13 and 15, where the 3'-end of the enhancer, or the first enhancer, is between approximately 320 and approximately 350 nucleotides upstream from the codon corresponding to the start of translation of the EPSPS transit peptide, or from the first intron nucleotide in a 5'-untranslated region.
17. Полинуклеотид по любому из пп.5-16, где район выше по ходу транскрипции от промотора гена EPSPS риса содержит по меньшей мере один энхансер, происходящий из последовательности, которая находится выше по ходу транскрипции от старта транскрипции либо промотора пластоцианина ячменя, либо промотора GOS2.17. A polynucleotide according to any one of claims 5-16, wherein the region upstream of the EPSPS gene promoter of rice contains at least one enhancer derived from a sequence upstream from the start of transcription of either the barley plastocyanin promoter or the promoter GOS2.
18. Полинуклеотид по п.17, включающий в направлении от 5' к 3' первый энхансер, содержащий усиливающий транскрипцию район, происходящий из последовательности, которая находится выше по ходу транскрипции от старта транскрипции промотора пластоцианина ячменя, и второй энхансер, содержащий усиливающий транскрипцию район, происходящий из последовательности, которая находится выше по ходу транскрипции от старта транскрипции промотора GOS2.18. The polynucleotide according to claim 17, comprising in the direction from 5 'to 3' a first enhancer containing a transcription enhancing region originating from a sequence that is upstream from the start of transcription of a barley plastocyanin promoter and a second enhancer containing a transcription enhancing region originating from the sequence upstream of the start of transcription of the GOS2 promoter.
19. Полинуклеотид по п.17, содержащий в направлении от 5' к 3' первый энхансер, содержащий усиливающий транскрипцию район, происходящий из последовательности, которая находится выше по ходу транскрипции от старта транскрипции промотора GOS2, и второй энхансер, содержащий усиливающий транскрипцию район, происходящий из последовательности, которая находится выше по ходу транскрипции от старта транскрипции промотора пластоцианина ячменя.19. The polynucleotide according to claim 17, comprising in the direction from 5 'to 3' a first enhancer containing a transcription enhancing region originating from a sequence that is upstream from the start of transcription of the GOS2 promoter, and a second enhancer containing a transcription enhancing region, derived from the sequence that is upstream from the start of transcription of the barley plastocyanin promoter.
20. Полинуклеотид по любому из пп.4-19, где нуклеотиды, расположенные 5' от кодона, который составляет старт трансляции хлоропластного транзитного пептида EPSPS риса, могут быть Козак-предпочтительными.20. The polynucleotide according to any one of claims 4-19, wherein nucleotides located 5 ′ from the codon, which is the start of translation of the rice EPSPS chloroplast transit peptide, may be Kozak-preferred.
21. Полинуклеотид по любому из пп.4-20, где 5' от геномной последовательности риса, кодирующей хлоропластный транзитный пептид EPSPS риса, расположен нетранслируемый район, который содержит последовательность, функционирующую в качестве интрона.21. The polynucleotide according to any one of claims 4 to 20, wherein 5 ′ from the rice genomic sequence encoding the EPSPS chloroplast transit peptide of rice is an untranslated region that contains a sequence that functions as an intron.
22. Полинуклеотид по п.21, где нетранслируемый район содержит интрон, где данный интрон является интроном ADHI кукурузы.22. The polynucleotide according to item 21, where the untranslated region contains an intron, where this intron is an ADHI maize intron.
23. Полинуклеотид по любому из п.21 или 22, где нетранслируемый район содержит последовательность, изображенную в SEQ ID N0:40.23. The polynucleotide according to any one of p. 21 or 22, where the untranslated region contains the sequence depicted in SEQ ID N0: 40.
24. Полинуклеотид по любому из пп.4-23, который содержит энхансер трансляции вирусного происхождения или другой невирусный энхансер трансляции, расположенный в нетранслируемом районе 5' от геномной последовательности риса, кодирующей хлоропластный транзитный пептид EPSPS риса.24. A polynucleotide according to any one of claims 4 to 23, which comprises a translational enhancer of viral origin or another non-viral translational enhancer located in the untranslated region 5 ′ from the rice genomic sequence encoding the rice EPSPS chloroplast transit peptide.
25. Полинуклеотид по любому из пп.4-24, дополнительно содержащий районы, кодирующие белки, способные придавать растительному материалу, содержащему их, по меньшей мере один из следующих агрономически желательных признаков: устойчивость к насекомым, грибкам, вирусам, бактериям, нематодам, стрессу, десикации и гербицидам.25. The polynucleotide according to any one of claims 4-24, further comprising regions encoding proteins capable of imparting to plant material containing at least one of the following agronomically desirable features: resistance to insects, fungi, viruses, bacteria, nematodes, stress desiccation and herbicides.
26. Полинуклеотид по п.25, где гербицид является иным, чем глифозат.26. The polynucleotide of claim 25, wherein the herbicide is other than glyphosate.
27. Полинуклеотид по любому из п.25 или 26, где придающие устойчивость к насекомым районы кодируют кристаллические токсины, происходящих из Bt, в том числе секретируемые Bt токсины; ингибиторы протеаз, лектины, токсины Xenorhabdus/Photorhabdus; придающие устойчивость к грибкам районы выбраны из группы, состоящей из районов, кодирующих известные AFP, дефензины, хитиназы, глюканазы, Avr-Cf9; придающие устойчивость к бактериям районы выбраны из группы, состоящей из районов, кодирующих секропины и техиплезин и их аналоги; районы устойчивости к вирусам выбраны из группы, состоящей из генов, кодирующих белки оболочки вирусов, белки движения, вирусные репликазы и антисмысловые и рибозимные последовательности, которые, как известно, обеспечивают устойчивость к вирусам; районы, придающие устойчивость к стрессу, солеустойчивость и засухоустойчивость, выбраны из районов, кодирующих глутатион-S-трансферазу и пероксидазу, последовательности, которая составляет известную регуляторную последовательность CBF1, и генов, о которых известно, что они обеспечивают накопление трегалозы.27. The polynucleotide according to any one of Claims 25 or 26, wherein the insect resistant regions encode crystalline toxins originating from Bt, including secreted Bt toxins; protease inhibitors, lectins, toxins Xenorhabdus / Photorhabdus; conferring resistance to fungi areas selected from the group consisting of areas encoding known AFP, defensins, chitinases, glucanases, Avr-Cf9; conferring resistance to bacteria areas are selected from the group consisting of areas encoding secropins and tehplezin and their analogues; areas of resistance to viruses are selected from the group consisting of genes encoding envelope proteins of viruses, movement proteins, viral replicases and antisense and ribozyme sequences that are known to provide resistance to viruses; areas conferring stress resistance, salt tolerance and drought tolerance are selected from regions encoding glutathione S-transferase and peroxidase, the sequence that makes up the known regulatory sequence of CBF1, and genes that are known to provide trehalose accumulation.
28. Полинуклеотид по п.27, где придающие устойчивость к насекомым районы выбраны из группы, состоящей из генов cryIAc, cryIAb, cry3А, Vip 1A, Vip 1B, ингибитора цистеиновой протеазы и лектина подснежника снегового.28. The polynucleotide of claim 27, wherein the insect resistance regions are selected from the group consisting of cryIAc, cryIAb, cry3A, Vip 1A, Vip 1B, cysteine protease inhibitor and snowdrop snow lectin genes.
29. Полинуклеотид по любому из предыдущих пунктов, который модифицирован таким образом, что удалены мотивы нестабильности мРНК и/или нежелательные районы сплайсинга, или предпочтительные для культуры кодоны используют таким образом, что экспрессия модифицированного таким образом полинуклеотида в растении дает по существу подобный белок, имеющий по существу подобную активность/функцию относительно активности/функции, получаемой экспрессией кодирующих данный белок районов немодифицированного полинуклеотида в организме, в котором они являются эндогенными.29. The polynucleotide according to any one of the preceding paragraphs, which is modified so that mRNA instability motifs and / or undesired splicing regions are removed, or culture preferred codons are used such that the expression of the polynucleotide so modified in a plant produces a substantially similar protein having essentially similar activity / function relative to the activity / function obtained by expressing regions of an unmodified polynucleotide encoding a given protein in the body in which they are endogenous.
30. Полинуклеотид по предыдущему пункту, где степень идентичности между модифицированным полинуклеотидом и полинуклеотидом, эндогенно содержащимся в указанном растении и кодирующим по существу тот же самый белок, является такой, чтобы предотвращать косупрессию между модифицированной и эндогенной последовательностями.30. The polynucleotide of the preceding paragraph, wherein the degree of identity between the modified polynucleotide and the polynucleotide endogenously contained in said plant and encoding substantially the same protein is such as to prevent co-suppression between the modified and endogenous sequences.
31. Полинуклеотид по предыдущему пункту, где указанная степень является меньшей, чем приблизительно 70%.31. The polynucleotide of the preceding paragraph, wherein said degree is less than about 70%.
32. Вектор, содержащий полинуклеотид по любому предыдущему пункту.32. A vector containing a polynucleotide according to any preceding paragraph.
33. Растительный материал, который был трансформирован полинуклеотидом по любому из пп.1-31 или вектором по п.32.33. Plant material that has been transformed with a polynucleotide according to any one of claims 1 to 31 or a vector according to claim 32.
34. Растительный материал, который был трансформирован полинуклеотидом по любому из пп.1-31 или вектором по п.32 и который был дополнительно трансформирован или является дополнительно трансформированным полинуклеотидом, содержащим районы, кодирующие белки, способные придавать растительному материалу, содержащему их, по меньшей мере один из следующих агрономически желательных признаков: устойчивость к насекомым, грибкам, вирусам, бактериям, нематодам, стрессу, десикации и гербицидам.34. Plant material that has been transformed with a polynucleotide according to any one of claims 1 to 31 or a vector according to claim 32 and which has been further transformed or is an additionally transformed polynucleotide containing regions encoding proteins capable of imparting at least a plant material containing them at least one of the following agronomically desirable traits: resistance to insects, fungi, viruses, bacteria, nematodes, stress, desiccation and herbicides.
35. Морфологически нормальные, фертильные целые растения, которые были регенерированы из материала по любому из п.33 или 34, их потомство в виде семян и частей растений.35. Morphologically normal, fertile whole plants that have been regenerated from the material according to any one of p. 33 or 34, their offspring in the form of seeds and parts of plants.
36. Морфологически нормальные фертильные целые растения, которые содержат полинуклеотид по любому из пп.1-31 и которые происходят из скрещивания растений, которые были регенерированы из материала, трансформированного полинуклеотидом по любому из пп.1-31 или вектором по п.32, и растений, которые были трансформированы полинуклеотидом, содержащим районы, кодирующие белки, способные придавать содержащему их растительному материалу по меньшей мере один из следующих агрономически желательных признаков: устойчивость к насекомым, грибкам, вирусам, бактериям, нематодам, стрессу, десикации и гербицидам, потомство полученных растений, их семена и части.36. Morphologically normal fertile whole plants that contain a polynucleotide according to any one of claims 1 to 31 and which result from crossing plants that have been regenerated from material transformed by a polynucleotide according to any one of claims 1 to 31 or the vector according to claim 32, and plants that have been transformed with a polynucleotide containing regions encoding proteins capable of imparting at least one of the following agronomically desirable characteristics to the plant material containing them: resistance to insects, fungi, viruses, bacteria, nematodes, stress, desiccation and herbicides, the offspring of the resulting plants, their seeds and parts.
37. Растения по любому из п.35 или 36, выбранные из группы, состоящей из полевых культур, фруктовых и овощных культур, таких как канола (брюква), подсолнечник, табак, сахарная свекла, хлопчатник, кукуруза, пшеница, ячмень, рис, сорго, томат, манго, персик, яблоня, груша, земляника, банан, дыня, картофель, морковь, латук, капуста, лук, виды сои, сахарный тростник, горох, кормовые (конские) бобы, тополь, виноград, цитрусовое растение, люцерна, рожь, овсы, газонные и кормовые травы, лен и масличный рапс и продуцирующие семянку растения, которые не были уже названы, их потомства, семян и частей.37. Plants according to any one of claims 35 or 36, selected from the group consisting of field crops, fruit and vegetable crops, such as canola (rutabaga), sunflower, tobacco, sugar beets, cotton, corn, wheat, barley, rice, sorghum, tomato, mango, peach, apple tree, pear, strawberry, banana, melon, potato, carrot, lettuce, cabbage, onion, soybean species, sugarcane, peas, fodder (horse) beans, poplar, grapes, citrus plant, alfalfa , rye, oats, lawn and forage grasses, flax and oilseed rape and seed-producing plants that were not already named Ans, their offspring, seeds and parts.
38. Растения кукурузы, пшеницы и риса по любому из пп.35-37.38. Plants of corn, wheat and rice according to any one of paragraphs.35-37.
39. Способ селективной борьбы с сорняками в поле, причем данное поле содержит сорняки и растения или их потомство по любому из пп.35-38, предусматривающий применение к данному полю гербицида типа глифозата в количестве, достаточном для уничтожения сорняков по существу без влияния на указанные растения.39. A method for selective weed control in a field, the field containing weeds and plants or their offspring according to any one of claims 35-38, comprising applying a glyphosate type herbicide to the field in an amount sufficient to kill the weeds essentially without affecting said plants.
40. Способ по предыдущему пункту, дополнительно предусматривающий применение к данному полю либо до, либо после применения глифозатного гербицида одного или нескольких из следующих агентов: гербицида, инсектицида, фунгицида, нематоцида, бактерицида и антивирусного агента.40. The method according to the preceding paragraph, further comprising applying to the field either before or after applying the glyphosate herbicide one or more of the following agents: a herbicide, insecticide, fungicide, nematicide, bactericide and antiviral agent.
41. Способ получения растений, которые являются по существу толерантными или по существу устойчивыми к глифозатному гербициду, предусматривающий стадии: (i) трансформации растительного материала полинуклеотидом по любому из пп.1-31 или вектором по п.32; (ii) отбора трансформированного таким образом материала и (iii) регенерации отобранного таким образом материала в морфологически нормальные фертильные целые растения.41. A method for producing plants that are substantially tolerant or substantially resistant to glyphosate herbicide, comprising the steps of: (i) transforming the plant material with a polynucleotide according to any one of claims 1 to 31 or a vector according to claim 32; (ii) selecting the material thus transformed; and (iii) regenerating the material thus selected into morphologically normal fertile whole plants.
42. Способ по предыдущему пункту, где трансформация включает в себя введение полинуклеотида в указанный материал: (i) баллистической бомбардировкой данного материала частицами, покрытыми данным полинуклеотидом; или (ii) насаживанием данного материала на карборундовые волокна, которые покрыты раствором, содержащим данный полинуклеотид; или (iii) введением полинуклеотида или вектора в Agrobacterium и культивированием трансформированного таким образом Agrobacterium с растительным материалом, который таким образом трансформируется и впоследствии регенерируется.42. The method according to the preceding paragraph, where the transformation includes the introduction of a polynucleotide in the specified material: (i) ballistic bombardment of this material by particles coated with this polynucleotide; or (ii) depositing this material on carborundum fibers that are coated with a solution containing the polynucleotide; or (iii) introducing a polynucleotide or vector into Agrobacterium and culturing the Agrobacterium thus transformed with plant material, which is thus transformed and subsequently regenerated.
43. Способ по предыдущему пункту, где трансформированный материал отбирают по его устойчивости к глифозату.43. The method according to the preceding paragraph, where the transformed material is selected for its resistance to glyphosate.
44. Применение полинуклеотида по любому из пп.1-31 или вектора по п.32 для получения тканей растений и/или морфологически нормальных фертильных целых растений, которые по существу толерантны или по существу устойчивы к глифозатному гербициду.44. The use of a polynucleotide according to any one of claims 1 to 31 or a vector according to claim 32 for the production of plant tissues and / or morphologically normal fertile whole plants that are essentially tolerant or essentially resistant to glyphosate herbicide.
45. Применение полинуклеотида по любому из пп.1-31 или вектора по п.32 для получения гербицидной мишени для высокопроизводительного скрининга потенциальных гербицидов.45. The use of a polynucleotide according to any one of claims 1 to 31 or a vector according to claim 32 for producing a herbicidal target for high throughput screening of potential herbicides.
46. Способ отбора биологического материала, трансформированного таким образом, что он экспрессирует представляющий интерес ген, где трансформированный материал содержит полинуклеотид по любому из пп.1-31 или вектор по п.32 и где отбор предусматривает экспонирование трансформированного материала глифозату или его соли и отбор выжившего материала.46. A method for selecting biological material transformed in such a way that it expresses a gene of interest, wherein the transformed material contains a polynucleotide according to any one of claims 1 to 31 or a vector according to claim 32, and wherein the selection comprises exposing the transformed material to glyphosate or its salt and selecting surviving material.
47. Способ по предыдущему пункту, где данный биологический материал происходит из растения.47. The method according to the preceding paragraph, where the biological material comes from a plant.
48. Способ по предыдущему пункту, где растение является однодольным растением.48. The method according to the preceding paragraph, where the plant is a monocotyledonous plant.
49. Способ по предыдущему пункту, где однодольное растение выбрано из группы, состоящей из ячменя, пшеницы, кукурузы, риса, овсов, ржи, сорго, ананаса, сахарного тростника, банана, лука, спаржи и лука-порея.49. The method according to the preceding paragraph, where the monocotyledonous plant is selected from the group consisting of barley, wheat, corn, rice, oats, rye, sorghum, pineapple, sugarcane, banana, onion, asparagus and leek.
50. Способ регенерации фертильного трансформированного растения, содержащего чужеродную ДНК, предусматривающий стадии:50. A method of regenerating a fertile transformed plant containing foreign DNA, comprising the steps of:
(a) получения регенерируемой ткани из указанного подлежащего трансформации растения;(a) obtaining a regenerable tissue from said plant to be transformed;
(b) трансформации указанной рененерируемой ткани указанной чужеродной ДНК, причем указанная чужеродная ДНК содержит селектируемую ДНК-последовательность, где указанная последовательность функционирует в регенерируемой ткани в качестве инструмента отбора;(b) transforming said regenerated tissue of said foreign DNA, said foreign DNA comprising a selectable DNA sequence, wherein said sequence functions in the regenerated tissue as a selection tool;
(c) помещения, между приблизительно одним днем - приблизительно 60 днями после стадии (b), указанной регенерируемой ткани из стадии (b) в среду, способную вызывать образование ростков из указанной ткани, причем указанная среда дополнительно содержит соединение, используемое для отбора регенерируемой ткани, содержащей указанную селектируемую ДНК-последовательность, для создания возможности идентификации или отбора трансформированной регенерируемой ткани;(c) placing, between approximately one day — approximately 60 days after step (b), the regenerated tissue from step (b) to an environment capable of causing the formation of sprouts from said tissue, said medium further comprising a compound used to select the regenerated tissue containing said breeding DNA sequence to enable identification or selection of transformed regenerated tissue;
(d) после того как по меньшей мере один росток образовался из селектируемой ткани стадии (с), перенесение указанного ростка на вторую среду, способную вызывать образование корней из указанного ростка для получения всхода, причем вторая среда необязательно содержит указанное соединение; и(d) after at least one germ has been formed from the selectable tissue of step (c), transferring said germ to a second medium capable of causing formation of roots from said germ to produce a shoot, the second medium optionally containing said compound; and
(e) выращивание указанного всхода в фертильное трансгенное растение, причем чужеродная ДНК передается растениям-потомкам по менделевскому типу, где между стадией (b) и стадией (с) имеется необязательная стадия помещения трансформированного материала на индуцирующую каллус среду, отличающийся тем, что чужеродная ДНК представляет собой, или селектируемая ДНК-последовательность, содержащаяся в чужеродной ДНК, содержит полинуклеотид по любому из пп.1-31 или вектор по п.32, а указанное соединение является глифозатом или его солью.(e) growing said seedling in a fertile transgenic plant, the foreign DNA being transmitted to descendant plants according to the Mendelian type, where between stage (b) and stage (c) there is an optional stage of placing the transformed material on a callus-inducing medium, characterized in that the foreign DNA represents, or a selectable DNA sequence contained in a foreign DNA contains the polynucleotide according to any one of claims 1 to 31 or the vector according to claim 32, and the specified compound is glyphosate or its salt.
51. Способ по предыдущему пункту, где растение является однодольным растением, выбранным из банана, пшеницы, риса, кукурузы и ячменя.51. The method according to the preceding paragraph, where the plant is a monocotyledonous plant selected from banana, wheat, rice, corn and barley.
52. Способ по любому из п.50 или 51, где указанная регенерируемая ткань выбрана из группы, состоящей из эмбриогенных каллусов, соматических зародышей, незрелых зародышей и т.д.52. The method according to any one of p. 50 or 51, wherein said regenerated tissue is selected from the group consisting of embryogenic calli, somatic embryos, immature embryos, etc.