Claims (21)
1. Способ получения трансгенного эмбриона, включающий стадии совместного введения экзогенной нуклеиновой кислоты и головки спермия с разрушенной мембраной или головки спермия с удаленной мембраной в неоплодотворенный ооцит с образованием трансгенного оплодотворенного ооцита и предоставления трансгенному оплодотворенному ооциту возможности развиться в трансгенный эмбрион.1. A method for producing a transgenic embryo, comprising the steps of co-administering an exogenous nucleic acid and a sperm head with a destroyed membrane or a sperm head with a removed membrane into an unfertilized oocyte to form a transgenic fertilized oocyte and allowing the transgenic fertilized oocyte to develop into a transgenic embryo.
2. Способ по п.1, в котором стадию совместного введения выполняют пьезоэлектрически возбуждаемой микроинъекцией.2. The method according to claim 1, in which the stage of co-administration is performed by piezoelectrically excited microinjection.
3. Способ по п.2, в котором экзогенную нуклеиновую кислоту и головку спермия с разрушенной мембраной совместно инъецируют в цитоплазму неоплодотворенного ооцита.3. The method according to claim 2, in which exogenous nucleic acid and a sperm head with a destroyed membrane are jointly injected into the cytoplasm of an unfertilized oocyte.
4. Способ по п.1, в котором головку спермия с разрушенной мембраной получают от сперматозоида, который был заморожен и разморожен.4. The method according to claim 1, in which the sperm head with a destroyed membrane is obtained from a sperm that has been frozen and thawed.
5. Способ по п.1, в котором головку спермия с разрушенной мембраной получают от регидратированного лиофилизированного сперматозоида.5. The method according to claim 1, in which the sperm head with a destroyed membrane is obtained from rehydrated lyophilized sperm.
6. Способ по п.1, в котором головка спермия является лишенной мембраны головкой, содержащей ядро и перинуклеарные материалы.6. The method according to claim 1, in which the sperm head is a membrane-free head containing a core and perinuclear materials.
7. Способ по п.6, в котором головку спермия с разрушенной мембраной получают от сперматозоида, обработанного детергентом.7. The method according to claim 6, in which the sperm head with a destroyed membrane is obtained from a sperm treated with a detergent.
8. Способ по п.1, в котором неоплодотворенный ооцит является ооцитом на стадии метафазы II.8. The method according to claim 1, in which the unfertilized oocyte is an oocyte at the stage of metaphase II.
9. Способ по п.1, в котором стадия совместного введения включает подстадию преинкубации головки спермия с разрушенной мембраной или удаленной мембраной с экзогенной нуклеиновой кислотой в течение первого промежутка времени.9. The method according to claim 1, wherein the co-administration step comprises the step of preincubating a sperm head with a destroyed membrane or a remote membrane with exogenous nucleic acid for a first time period.
10. Способ по п.9, в котором первый промежуток времени составляет примерно от 30 с до, примерно, 5 мин.10. The method according to claim 9, in which the first period of time is from about 30 s to about 5 minutes
11. Способ по п.10, в котором первый промежуток времени составляет примерно от 45 с до, примерно, 3 мин.11. The method according to claim 10, in which the first period of time is from about 45 s to about 3 minutes
12. Способ по п.11, в котором первый промежуток времени составляет примерно от 1 до, примерно, 3 мин.12. The method according to claim 11, in which the first period of time is from about 1 to about 3 minutes
13. Способ по п.1, в котором экзогенная нуклеиновая кислота содержит более одного трансгена.13. The method according to claim 1, in which the exogenous nucleic acid contains more than one transgene.
14. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию предоставления возможности трансгенному эмбриону развиться в живого потомка.14. The method of claim 1, further comprising the step of allowing the transgenic embryo to develop into a living descendant.
15. Способ по п.14, в котором стадия предоставления возможности включает подстадию пересадки трансгенного эмбриона в суррогатную мать.15. The method of claim 14, wherein the step of enabling comprises the step of transplanting a transgenic embryo into a surrogate mother.
16. Способ по п.1, в котором ооцит и головка спермия получены от млекопитающего.16. The method according to claim 1, in which the oocyte and sperm head obtained from a mammal.
17. Способ по п.15, в котором млекопитающее выбрано из группы, включающей приматов, овец, быков, свиней, медведей, кошек, собак, лошадей и грызунов.17. The method according to clause 15, in which the mammal is selected from the group comprising primates, sheep, bulls, pigs, bears, cats, dogs, horses and rodents.
18. Способ по п.1, в котором ооцит и головка спермия получены от беспозвоночного.18. The method according to claim 1, in which the oocyte and sperm head obtained from invertebrate.
19. Способ по п.1, в котором ооцит и головка спермия получены от рыбы, амфибии, рептилии или птицы.19. The method according to claim 1, in which the oocyte and sperm head obtained from fish, amphibians, reptiles or birds.
20. Способ по п.1, в котором ооцит и головка спермия получены от морского ежа, лобстера, оболочника, или моллюска.20. The method according to claim 1, in which the oocyte and sperm head are obtained from a sea urchin, lobster, shell, or mollusk.
21. Способ получения трансгенного эмбриона, включающий стадии получения головки спермия с разрушенной мембраной или головки спермия с удаленной мембраной смешивания головки спермия с разрушенной мембраной или головки спермия с удаленной мембраной с экзогенной нуклеиновой кислотой, несущей желаемый ген совместной инъекции смеси в изолированный неоплодотворенный ооцит на стадии метафазы II с образованием трансгенного оплодотворенного ооцита и предоставление трансгенному оплодотворенному ооциту возможности развиться в трансгенный эмбрион.21. A method for producing a transgenic embryo, comprising the steps of producing a sperm head with a destroyed membrane or a sperm head with a removed membrane; mixing a sperm head with a destroyed membrane or a sperm head with a removed membrane with an exogenous nucleic acid carrying the desired gene for joint injection of the mixture into an isolated unfertilized oocyte at the stage metaphase II to form a transgenic fertilized oocyte and enable the transgenic fertilized oocyte to develop into a transgenic em brion.