RU1808331C

RU1808331C - Method for obtaining biologically active yeast product

Info

Publication number: RU1808331C
Authority: RU
Inventors: Петр Евгеньевич Игнатов; Александр Вениаминович Горбатов; Андрей Иванович Федоров
Original assignee: Молодежный Центр "Проспект"
Priority date: 1990-10-23
Filing date: 1990-10-23
Publication date: 1993-04-15

Abstract

Использование: биотехнологи , ветеринари , получение иммуностимулирующего препарата. Сущность изобретени ; Сухие дрожжи дел т на две части, одну часть подвергают щелочному гидролизу 1 М раствором щелочи при 100-120&deg;С в течение 1 ч, а другую - кислому гидролизу 1 М раствором HCI в тех же режимах. Полученные гидролизаты смешивают, довод т рН до нейтрального значени и отдел ют целевой продукт в виде нерастворимой фракции. Препарат про вл ет иммуностимулирующую активность . 1 табл.Usage: biotechnology, veterinarians, obtaining an immunostimulating drug. SUMMARY OF THE INVENTION; Dry yeast is divided into two parts, one part is subjected to alkaline hydrolysis with a 1 M alkali solution at 100-120 ° C for 1 hour, and the other is subjected to acid hydrolysis with a 1 M HCI solution in the same modes. The resulting hydrolysates were mixed, adjusted to a neutral pH and the target product was isolated as an insoluble fraction. The drug exhibits immunostimulatory activity. 1 tab.

Description

Изобретение относитс к области биотехнологии , в частности к технологии получени иммуностимулирующего препарата.The invention relates to the field of biotechnology, in particular to a technology for producing an immunostimulating drug.

Сущность предлагаемого изобретени сводитс к тому, что биологически активный препарат получают путем гидролиза дрожжей (пекарских ГОСТ 20085 или кормовых ГОСТ 171-81). Дрожжи раздел ют на две части, одну часть разрушают кислотным гидролизом , а другую, равную, щелочным. После проведени обоих гидролизов, гидролизаты смешивают. Устанавливают нейтральное значение рН, отдел ют осадок, который промывают три-четыре раза дистиллированной водой. Промытый осадок содержит до 90% Сахаров, представленных глюканом. Полученный осадок ресуспенди- руют в физрастворе до концентрации 1 мг/кл и используют в качестве биологически активного вещества.The essence of the invention is that a biologically active preparation is obtained by hydrolysis of yeast (baking GOST 20085 or feed GOST 171-81). The yeast is divided into two parts, one part is destroyed by acid hydrolysis, and the other, equal, alkaline. After carrying out both hydrolyses, the hydrolysates are mixed. The pH is neutral, the precipitate is separated, which is washed three to four times with distilled water. The washed precipitate contains up to 90% of the sugars represented by glucan. The resulting precipitate was resuspended in saline to a concentration of 1 mg / cell and used as a biologically active substance.

Пример. 50 грамм сухих пекарских дрожжей заливают 200 мл дистиллированной воды. Полученную суспензию раздел ют на две равные части, к одной части добавл ют HCI, довод конечную концентрацию кислоты до 0,5 М. Ко второй частиExample. 50 grams of dry baker's yeast pour 200 ml of distilled water. The resulting suspension was divided into two equal parts, HCI was added to one part, adjusting the final acid concentration to 0.5 M. To the second part

приливают NaOH, довод ее концентрацию до 0,5 М. Гидролиз обеих частей провод т в течение одного часа при ЮОоС в емкост х с обратным холодильником. После окончани гидролиза - гидролизаты смешивают, охлаждают до комнатной температуры и устанавливают рН-7,0. Смесь гидролизатов центрифугируют, отдел ют осадок, который промывают 3 раза дистиллированной во-- дои, очища его от растворимых белков и полисахаридов. Полученный препарат сус- пендируют в физиологичеком растворе и стерилизуют и примен ют дл нормализации иммунного статуса животных.NaOH is added, adjusting its concentration to 0.5 M. The hydrolysis of both parts is carried out for one hour at 10C in reflux tanks. After hydrolysis is complete, the hydrolysates are mixed, cooled to room temperature and adjusted to pH-7.0. The mixture of hydrolysates is centrifuged, the precipitate is separated, which is washed 3 times with distilled water, purifying it of soluble proteins and polysaccharides. The resulting preparation is suspended in physiological saline and sterilized and used to normalize the immune status of animals.

П р и м е р 2. Делают две навески кормовых дрожжей по 25 грамм. Одну навеску дрожжей ресуспендируют в 100 мл 1 М HCI, другую в 1 М NaOH. Обе части гидролизуют в колбах с обратным холодильником при 120°С в течение одного часа. После гидролиза , гидролизаты объедин ют, охлаждают, устанавливают нейтральное значение рН, Осадок отдел ют отстаиванием, слива над- осадочную жидкость, далее осадок промывают дистиллированной водой,PRI me R 2. Make two samples of fodder yeast 25 grams. One weighed yeast is resuspended in 100 ml of 1 M HCI, the other in 1 M NaOH. Both parts are hydrolyzed in reflux flasks at 120 ° C for one hour. After hydrolysis, the hydrolysates are combined, cooled, the pH is neutral, the precipitate is separated by settling, draining the supernatant, then the precipitate is washed with distilled water.

0000

оabout

00 W00 W

соwith

стерилизуют и готов т рабочее разведение пропарата.they sterilize and prepare a working dilution of the preparation.

П р и м е р 3. Биологическую активность препаратов исследуют in vivo и in vitro. Общеприн тыми методами определ ют количество антителообразующих клеток селезенки (тест Ерне) и индекс стимул ции, количество макрофагов и фагоцитарный индекс , комплемент фиксирующую активность препарата и лизоцимную активность сыворотки крови. Изучали способность препарата защищать мышей от заражени сальмонеллезом. Мышам вводили препарат , полученный по примеру 1 и 2, а через 48 часов их заражали вирулентным штаммом Salmonella.tlphimyrium 415 в дозе 10 LDso. Учет гибели животных вели в течение 10 дней и рассчитывали процент выживших мышей.PRI me R 3. The biological activity of the drugs investigated in vivo and in vitro. By conventional methods, the number of antibody-forming spleen cells (Erne test) and the stimulation index, the number of macrophages and the phagocytic index, complement fixing activity of the drug and lysozyme activity of blood serum are determined. The ability of the preparation to protect mice from salmonella infection was studied. The mice were injected with the preparation obtained in examples 1 and 2, and after 48 hours they were infected with a virulent strain of Salmonella.tlphimyrium 415 at a dose of 10 LDso. The animals were counted for 10 days and the percentage of surviving mice was calculated.

00

55

Из таблицы следует, что предложенный способ позвол ет получать препарат, про вл ющий высокую биологическую активность , воздейству на разные звень иммунной системы организма.From the table it follows that the proposed method allows to obtain a drug exhibiting high biological activity by acting on different parts of the body's immune system.

Claims

SUMMARY OF THE INVENTION A method for producing a biologically active preparation from yeast, comprising hydrolysis of yeast and separation of the target product, characterized in that the yeast is divided into two equal parts, one part is subjected to acid hydrolysis with 1 M HCI solution and the other alkaline hydrolysis with 1 M NaOH solution, hydrolysis carried out at a temperature of 100-120 ° C for 1 h, then the obtained hydrolysates are mixed, adjusted to a neutral pH and the target product is separated in the form of an insoluble fraction:

The study of the biological activity of drugs in vitro and in vivo