RU1792330C - Method of obtaining chicken colibacillosis vaccine - Google Patents
Method of obtaining chicken colibacillosis vaccineInfo
- Publication number
- RU1792330C RU1792330C SU904801734A SU4801734A RU1792330C RU 1792330 C RU1792330 C RU 1792330C SU 904801734 A SU904801734 A SU 904801734A SU 4801734 A SU4801734 A SU 4801734A RU 1792330 C RU1792330 C RU 1792330C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gost
- vaccine
- culture
- cells
- growing
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: микробиологическа промышленность, ветеринари , иммунопрофилактика колибактериоза цыпл т. Сущность изобретени : выращивание Е. coli ведут глубинным способом при посто нной аэрации, перемешивании и автоматическим регулированием рН после 5 ч роста в пределах 7,0-7,2. Инактивацию и осаждение клеток провод т двум объемами ацетона с последующим центрифугированием, высушиванием и измельчением осадка. 2 табл.Usage: microbiological industry, veterinarians, immunoprophylaxis of colibacteriosis of chickens. Summary of the invention: E. coli is grown in a deep way with constant aeration, stirring and automatic pH adjustment after 5 h of growth in the range of 7.0-7.2. Inactivation and deposition of cells is carried out in two volumes of acetone, followed by centrifugation, drying and grinding of the pellet. 2 tab.
Description
Изобретение относитс к микробиологической промышленности, а именно к разработке технологии получени коливэкцины, котора может быть использована в ветеринарии дл иммунопрофилактики колибактериоза цыпл т.The invention relates to the microbiological industry, in particular to the development of a technology for the production of colivectin, which can be used in veterinary medicine for the immunoprophylaxis of colibacillosis of chickens.
Известен способ получени коливакцины при выращивании Escherlchla coli на питательной среде следующего состава, мае. %: агар-агар 1,0-2,0, пептон 0,1-0,5, глюкоза 0,1-0,5, асперагинова кислота 0-0,4, де- зоксихолат натри 0-0,2, дрожжевой экстракт 0-0,1, минеральные соли (MgS04, MnCl2, FeCI, CaCl2) 0,001-0,00001.A known method for the preparation of coli vaccine by growing Escherlchla coli in culture medium of the following composition, May. %: agar-agar 1.0-2.0, peptone 0.1-0.5, glucose 0.1-0.5, aspartic acid 0-0.4, sodium desoxycholate 0-0.2, yeast extract 0-0.1, mineral salts (MgS04, MnCl2, FeCl, CaCl2) 0.001-0.00001.
Колибактерии выращивают поверхностным способом при температуре 37°С, после бактерии смывают буферным раствором с поверхности агара до концентрации клеток от 109 до 1010/мл. Следующим этапом получени вакцины вл етс инактиваци бактериальных клеток при помощи химических и физических средств. Как химическое средство примен етс формальдегид, а в качестве физического фактора примен етс облучение гамма лучами с добавкой окисиColibacilli are grown by surface method at a temperature of 37 ° C, after the bacteria are washed off with a buffer solution from the surface of the agar to a cell concentration of 109 to 1010 / ml. The next step in the preparation of the vaccine is the inactivation of bacterial cells by chemical and physical means. Formaldehyde is used as a chemical agent, and gamma irradiation with an additive of oxide is used as a physical factor.
алюмини или сапонина. После инактивации клеток проводитс сепарирование.aluminum or saponin. After inactivation of the cells, separation is carried out.
Недостатком этого способа вл етс применение метода поверхностного культивировани колибактерий, небольшой выход количества клеток и получение вакцины в жидком виде.°The disadvantage of this method is the use of the method of surface cultivation of colibacilli, a small yield of the number of cells and the preparation of the vaccine in liquid form. °
Наиболее близким по технической сущности к изобретению вл етс получение вакцины против колибактериоза птиц при выращивании раздельно штаммов Е, coli № 211 и №216 глубинным способом в услови х аэрировани до получени бактериальной массы 20-30 млрд. микробных тел/мл в бульоне Хоттингера с добавкой глюкозы, инактивирование формалином в количестве 0,2-0,4% в течение 3-4 суток при температуре 37-38°С.The closest in technical essence to the invention is to obtain a vaccine against colibacteriosis of birds when separately growing strains E, coli No. 211 and No. 216 by a deep method under aeration conditions to obtain a bacterial mass of 20-30 billion microbial bodies / ml in Hottinger broth with the addition of glucose, formalin inactivation in an amount of 0.2-0.4% for 3-4 days at a temperature of 37-38 ° C.
Бульонные культуры центрифугируют в течение 35-40 мин, надосадочную жидкость сливают, осадок разбавл ют забуференным физологическим раствором рН 7,2-7,9. Полученную взвесь культур штаммов соедин ют в равных объемах (1:1) и консервируютBouillon cultures were centrifuged for 35-40 minutes, the supernatant was drained, the precipitate was diluted with buffered saline pH 7.2-7.9. The resulting suspension of strain cultures is combined in equal volumes (1: 1) and canned
Х|X |
ЧH
юYu
WW
оabout
соwith
раствором тиомерсана в количестве 0,005- 0,01%.a solution of thiomersan in an amount of 0.005-0.01%.
Содержание компонентов в полученной вакцине следующее.The content of the components in the resulting vaccine is as follows.
Компоненты вакцины Содержание в 1 л Антигены эшерихи Минимум, максимумVaccine components Content in 1 L Escherich antigens Minimum, maximum
(клеток): Е. coll №211(cells): E. coll No. 211
Е. coll № 216 Формалин (см Тиомерсан (см3) Забуференный физиологический растворE. coll No. 216 Formalin (see Thiomersan (cm3) Buffered saline
4.10135.10134.10135.1013
2.10132,5.10132.10132.5.1013
2.10132,5.10132.10132.5.1013
22
0,050.05
до 1 лup to 1 l
4 0,14 0.1
Недостатком этого способа вл етс применение дорогой питательной среды - бульона Хотгингера, получение небольшого выхода количества клеток, получение вакцины в жидком виде, сложность и длительность технологического процесса.The disadvantage of this method is the use of an expensive nutrient medium - Hotginger broth, obtaining a small yield of the number of cells, obtaining a vaccine in liquid form, the complexity and duration of the process.
Цель изобретени - повышение выхода вакцины, упрощение и ускорение способа. The purpose of the invention is to increase the yield of the vaccine, simplify and speed up the method.
Это достигаетс путем выращивани Ecsherichia coli глубинным способом при регулировании аэрации и рН среды на питательной среде следующего состава, мае. %: Крахмал осахаренный1,5 Пептон -1,5 Кукурузный экстракт 0,75 Вода водопроводна Остальное Далее проводитс концентрирование культуральной жидкости, инактиваци и осаждение клеток колибактерий двум объемами охлажденного до -10°С ацетона, центрифугирование осадка и высушивание в вакуумной сушилке при 35-40°С.This is achieved by growing Ecsherichia coli in a deep manner by controlling the aeration and pH of the medium in a culture medium of the following composition, May. %: Sugar-dried starch1.5 Peptone -1.5 Corn extract 0.75 Tap water The rest The concentration of the culture fluid, the inactivation and sedimentation of colibacillus cells with two volumes of acetone cooled to -10 ° C, centrifugation of the precipitate and drying in a vacuum dryer at 35- 40 ° C.
Существенным отличием за вл емого способа получени коливакцины вл етс регулирование аэрации и рН среды, что обеспечивает ускорение роста бактерий.A significant difference between the claimed method for producing colivaccine is the regulation of aeration and pH, which ensures the acceleration of bacterial growth.
На прот жении 8 часов воздух подают из расчета 10 м3 в час на 1 м3 культуральной жидкости, затем подачу воздуха увеличивают до 15 м3/час,For 8 hours, air is supplied at a rate of 10 m3 per hour per 1 m3 of culture fluid, then the air supply is increased to 15 m3 / hour,
Суть регулировани рН среды в пределах 7,0-7,2 заключаетс в том, что при выращивании колибактерий без регулировани рН питательна среда подкисл етс до 4,5- 4,0, что вл етс причиной замедлени роста . Число клеток составл ет 5-10 млрд./мл. Подача аммиака в ферментер после 5 часов роста и поддержание рН на одном уровне резко увеличивает число клеток до 30-40 млрд,/мл.The essence of adjusting the pH of the medium in the range of 7.0–7.2 is that when colibacteria are grown without pH adjustment, the culture medium is acidified to 4.5–4.0, which causes a slowdown in growth. The number of cells is 5-10 billion / ml. The supply of ammonia to the fermenter after 5 hours of growth and maintaining the pH at the same level dramatically increases the number of cells to 30-40 billion, / ml.
На 12-том часу роста рН в ферментере самопроизвольно подщелачиваетс до 7,6- 7,8, после чего выращивание прекращают. At the 12th hour of growth, the pH in the fermenter spontaneously alkalizes to 7.6-7.8, after which the cultivation is stopped.
00
55
0 0
55
0 5 0 5
0 0
5 5
0 5 0 5
Другим отличием вл етс уровень технологического процесса, включающий применение двух объемов ацетона в качестве инактиватора и осадител клеток колибактерий , что обеспечивает получение (после центрифугировани и сушки) сухого препарата коливакцины и упрощает применение ее в широких масштабах в ветеринарии.Another difference is the level of the technological process, which includes the use of two volumes of acetone as an inactivator and precipitator of colibacillus cells, which provides (after centrifugation and drying) a dry colivaccine preparation and simplifies its widespread use in veterinary medicine.
Пример. Дл глубинного культивировани колибактерий использовали питательную среду следующего состава, мае. %: Крахмал осахаренный1,5 Пептон 1,5 Кукурузный экстракт 0,75 Водопроводна вода 96,25 1. Приготовление питательной среды.Example. For the deep cultivation of colibacilli, the following medium was used, May. %: Candy starch1.5 Peptone 1.5 Corn extract 0.75 Tap water 96.25 1. Preparation of a nutrient medium.
а) осахаривание крахмалаa) saccharification of starch
75 кг нерастворимого крахмала кукурузного заливают 1 м водопроводной воды, подогревают до 40°С, добавл ют 375 г ами- лосубтилина ГЗх, рН довод т до 6,6, подогревают до 85°С и выдерживают при перемешивании в течение 30 минут. Далее кип т т в течение часа, охлаждают до 75°С, добавл ют 175 г амилосубтилина ГЗх, провер ют качество осахаривани с йодом (не должен дать синего окрашивани ), рН довод т до 5,0 при помощи ортофосфорной кислоты , охлаждают до 58°С, прибавл ют 12,5 л глюкаваморина Гх с активностью 50 ед/мл и выдерживают при температуре 58°С в течение 6 часов. Таким образом приготовленный осахаренный крахмал стерилизуют при температуре 120°С в течение 30 минут.75 kg of insoluble corn starch is poured with 1 m of tap water, heated to 40 ° C, 375 g of amylosubtiline GXx are added, the pH is adjusted to 6.6, heated to 85 ° C and kept under stirring for 30 minutes. Then it is boiled for one hour, cooled to 75 ° C, 175 g of amylosubtiline GXx are added, the quality of saccharification with iodine is checked (should not give a blue color), the pH is adjusted to 5.0 with phosphoric acid, cooled to 58 ° C, 12.5 L of glucavamorin Gx with an activity of 50 U / ml was added and kept at 58 ° C for 6 hours. Thus prepared saccharified starch is sterilized at a temperature of 120 ° C for 30 minutes.
б) приготовление раствора пептона 75 кг пептона раствор ют при перемешивании в 1 м водопроводной воды.b) preparation of a peptone solution 75 kg of peptone are dissolved with stirring in 1 m of tap water.
в) приготовление полной питательной средыc) preparation of a complete nutrient medium
К 1 м водопроводной воды при перемешивании прибэвл ют37,5 кг кукурузного экстракта и 1 м пептонного раствора. Общий объем воды довод т до 4 м3 (с учетом 20% конденсата). Растворы кукурузного экстракта и пептона стерилизуют при температуре 130°С в течение 30 минут.37.5 kg of corn extract and 1 m of peptone solution are added to 1 m of tap water with stirring. The total volume of water was adjusted to 4 m3 (taking into account 20% condensate). Solutions of corn extract and peptone are sterilized at a temperature of 130 ° C for 30 minutes.
После стерилизации компоненты питательной среды, то есть кукурузный экстракт, пептон и осахаренный крахмал объедин ют, охлаждают до 38°С, довод т рН до 7,6 и засевают односуточной культурой Escherichia coli в количестве 0,1% по обье- му.After sterilization, the components of the nutrient medium, that is, the corn extract, peptone and saccharified starch are combined, cooled to 38 ° C, adjusted to pH 7.6 and seeded with 0.1% volume culture of Escherichia coli.
2. Получение биомассы колибактерий.2. Obtaining biomass of colibacilli.
Выраа(ивание Е. cofi провод т в ферментере емкостью 10 м3с рабочим объемом питательной среды 5 м глубинным способом при температуре 38°С в течение 12 часов при посто нном перемешивании и аэрации, причем в первые 8 часов воздухThe formation of E. cofi is carried out in a fermenter with a capacity of 10 m3 with a working volume of the nutrient medium 5 m in a deep way at 38 ° C for 12 hours with constant stirring and aeration, and in the first 8 hours
подают из расчета 10 м3 в час йа 1 м3 куль- туральной жидкости, затем подачу воздуха увеличивают до 15 м3/час. После 5 часов роста рН резко падает до 7,0. Дл поддержки рН в пределах 7,0-7,2, автоматически включают подачу аммиака. На 12-том часу роста рН в ферментере самопроизвольно подщелачиваетс до 7,6, после чего выращивание прекращают.supplied at the rate of 10 m3 per hour and 1 m3 of culture fluid, then the air supply is increased to 15 m3 / hour. After 5 hours of growth, the pH drops sharply to 7.0. To maintain a pH between 7.0 and 7.2, an ammonia feed is automatically turned on. At the 12th hour of growth, the pH in the fermenter spontaneously alkalizes to 7.6, after which the cultivation is stopped.
С 5-часового возраста каждый час определ ют попул цию и количество клеток в одном мл культуральной жидкости при помощи отраслевого стандартного образца мутности (ОСО 42-28-85-86).From 5 hours of age, the population and number of cells in one ml of culture fluid are determined every hour using an industry standard turbidity sample (TOC 42-28-85-86).
3. Получение целевого продукта.3. Getting the target product.
После прекращени выращивани куль- туральную жидкость концентрируют, охлаждают до 4°С и осаждают 2-м объемами охлажденного до -10°С ацетона. Ацетон добавл ют небольшими порци ми при непрерывном перемешивании. Полученный осадок центрифугируют, высушивают в вакуумной сушилке при и измельчают ,After stopping the growth, the culture fluid is concentrated, cooled to 4 ° C and precipitated with 2 volumes of acetone cooled to -10 ° C. Acetone is added in small portions with continuous stirring. The resulting precipitate is centrifuged, dried in a vacuum dryer at and crushed,
В полученной по такому способу сухой вакцине определ ют количество клеток, которое составл ет 3-Ю12 в грамме (средние данные 5-ти опытов).The dry vaccine obtained by this method determines the number of cells, which is 3-10 10 per gram (average data from 5 experiments).
Па физико-химическим показател м ко- ливакцина должна соответствовать требовани м , представленным в табл. 1.The physico-chemical characteristics of colivacin should correspond to the requirements presented in table. 1.
Целесообразность применени двух объемов ацетона дл получени коливакци- ны показана в табл. 2,The appropriateness of using two volumes of acetone to produce colivaccine is shown in Table. 2
Как видно из данных, представленных в табл. 2, оптимальный выход целевого продукта получен при осаждении двум объемами ацетона.As can be seen from the data presented in table. 2, the optimal yield of the target product was obtained by precipitation with two volumes of acetone.
00
55
00
55
00
55
00
Применение предлагаемого технологического процесса обеспечивает возможность в 100 раз увеличить выход .количества клеток колибактерий и сократить технологический процесс.The application of the proposed technological process provides an opportunity to increase the yield by 100 times. The number of colibacillus cells and reduce the technological process.
Получение коливакцины в виде сухого, препарата упрощает применение ее в широких масштабах в ветеринарии дл иммунопрофилактики колибактериоза цыпл т.The preparation of a coli vaccine as a dry preparation simplifies its widespread use in veterinary medicine for the immunoprophylaxis of colibacillosis of chickens.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904801734A RU1792330C (en) | 1990-03-12 | 1990-03-12 | Method of obtaining chicken colibacillosis vaccine |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904801734A RU1792330C (en) | 1990-03-12 | 1990-03-12 | Method of obtaining chicken colibacillosis vaccine |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU1792330C true RU1792330C (en) | 1993-01-30 |
Family
ID=21501593
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU904801734A RU1792330C (en) | 1990-03-12 | 1990-03-12 | Method of obtaining chicken colibacillosis vaccine |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU1792330C (en) |
-
1990
- 1990-03-12 RU SU904801734A patent/RU1792330C/en active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Патент US № 4343792, кл.А 61 К 39/00,1982. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SU943282A1 (en) | Process for producing l-treonine | |
KR970009295B1 (en) | Process for preparing trehalulose and isomaltulose | |
SU1512489A3 (en) | Method of producing isomaltulose | |
US2576932A (en) | Fermentation process for production of vitamin b12 | |
EP1070136B1 (en) | Strain of the microorganism penicillium oxalicum var. armeniaca and its application | |
SU1090262A3 (en) | Process for preparing alpha-galactozidiase | |
RU1792330C (en) | Method of obtaining chicken colibacillosis vaccine | |
SU469266A3 (en) | The method of obtaining 7-amino-deacetoxycephalosporanic acid | |
US2803586A (en) | ph control in production of fumagillin | |
SU974817A1 (en) | Method of producing l-treonin | |
SU1731809A1 (en) | Method of preparing protein-vitamin food products | |
El-Sayed et al. | Continuous penicillin production by Penicillium chrysogenum immobilized in calcium alginate beads | |
US2816856A (en) | Improvement in production of vitamin b12 products by propionibacterium freudenreichii | |
CN111574390A (en) | Efficient green production and extraction process of amino acid | |
DE2363285B2 (en) | Process for the production of 1-malic acid from fumaric acid | |
US2143360A (en) | Fermentation process for producing lactic acid and lactates | |
US2886490A (en) | Process of producing cobalamines by fermenting culture media with nocardia rugosa | |
RU2053294C1 (en) | Method of cultivation of bifidobacteria | |
US2775540A (en) | Production of dextran | |
US2817624A (en) | Preparation of ergosterol containing yeast | |
CN116555369B (en) | Method for producing prodigiosin by fermentation of waste corn steep liquor | |
SU908092A1 (en) | Method of obtaining riboflavin | |
CN86102773A (en) | Produce the method for L-sorbose | |
SU911765A1 (en) | Method of cultivating entomopathogenic bacteria | |
SU707326A1 (en) | Method of preparing culture medium for culturing typhus-paratyphus-type bacterria |