RU1775405C - Способ получени 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-(1-тио)трифосфатов - Google Patents

Способ получени 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-(1-тио)трифосфатов

Info

Publication number
RU1775405C
RU1775405C SU874322727A SU4322727A RU1775405C RU 1775405 C RU1775405 C RU 1775405C SU 874322727 A SU874322727 A SU 874322727A SU 4322727 A SU4322727 A SU 4322727A RU 1775405 C RU1775405 C RU 1775405C
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
yield
thio
triphosphates
solution
increase
Prior art date
Application number
SU874322727A
Other languages
English (en)
Inventor
Виктор Семенович Богачев
Original Assignee
Институт цитологии и генетики СО АН СССР
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт цитологии и генетики СО АН СССР filed Critical Институт цитологии и генетики СО АН СССР
Priority to SU874322727A priority Critical patent/RU1775405C/ru
Priority to SU874322727D priority patent/RU1775406C/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU1775405C publication Critical patent/RU1775405C/ru

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относитс  к химии нуклео- зидов, в частности к получению 2 -дезокси- рибонуклеозид-5-0-(1-тио)трифосфатов общей формулы Ое-Р(0)(Ое)-0-Р(0)(Ое)-0P (SXO 0-CH2-CH-0-CHB-CH2-CH 9H, где В-аденин-9-ил или тимин-1-ил, используемых в генетической инженерии и молекул рной биологии. Цель - повышение выхода и упрощение процесса. Синтез ведут из 2 -де- зоксирибонуклеозидов последовательной обработкой их тиохлорокисью фосфора в триэтилфосфате в присутствии пиридина при 0-5°С 10-45 мин, раствором трибути- ламмони  тетрафосфата в ацетонитриле (4- 10 мин) и водой (15-20 мин) с последующим выделением целевых веществ на ионнооб- менных колонках. Выход, %; брутто-ф-ла: а) 92; CioHi3Ll4N2Oi3 РзЗ: б) 92, CgHrcLMNsOnPaS. Способ позвол ет повысить выход, более чем вдвое, при уменьшении времени синтеза и расхода реагентов. Ј

Description

Изобретение относитс  к усовершенствованному способу получени  2-дезокси- нуклеозид-5 -0-(1-тио)трифосфатов общей формулы I
о о н и
0-Р-О-Р-О-Ро о о
очв
-Опр
он
где В-аденин-9-ил- или тимин-1-ил, и может быть использовано в генетической инженерии и молекул рной биологии.
Цель изобретени  - увеличение выхода целевых продуктов и упрощение процесса, - достигаетс  вы влением условий и параметров реакций: времени, реагентов, реакционной среды, присутствием дополнительных реагентов.
П р и м е р 1. 2-Дезоксиаденозин-5 -0- (1-тио)трифосфат (ATRe(S), тетралитиева  соль. Дезоксиаденозин 10 мг (40 мкмоль). высушенный при 110°С, 12 мм рт.ст. над PaOs в течение 8 ч, раствор ют при перемешивании и нагревании до 110°С (1 мин) в 0,16 мл ТЭФ, охлаждают , прибавл ют пиридин (6,6 мкл, 82 мкмоль), охлаждают до 0°С, прибавл ют свежеперегнанную PSCIa (4,5 мкл, 45 мкмоль), встр хивают и выдерживают 10 мин при 0°С. Затем к реакционной смеси добавл ют раствор пиро- фосфата три-н-бутиламмони  (66 мг. 120 мкмоль) в безводном ацетонитриле (0.6 мл), содержащем три-н-бутиламин (22 мкл, 90 мкмоль), встр хивают, выдерживают раствор при температурел 250С в течение 10 мин, прибавл ют 2 мл воды, выдерживают 45 мин и раствор нанос т на колонку (0, см) с ДЭАЭ-сефадексом А-25 (НСО з). КоVI VJ
СП
4 О (Л
лонкуэлюируют водой (20 мл) и затем линейным градиентом 0,1-1,0 М МНЦНСОз (рН 8,5), 100 мл. Продукт элюируетс  при концентрации соли 0,70-0,75 М 560 о.е,260 (92%). После упаривани  воды и удалени  МНзНСОз в вакууме остаток раствор ют в воде (5 мл),.титруют раствор 0,1 М 1 ОН до рН 8,5, пропускают через колонку (0,8-2 см. содержащую в нижней части смолу Chelex 100 (LI4) (1 мл), а в верхней - Дауэкс 50W- 2(Li, 1 мл), злюируют продукт водой (20 мл), раствор упаривают в вакууме до объема 0,1 мл и продукт осаждают 0,5%-ным раствором LICI04 в ацетоне (ОСЧ, 1,5 мл). Осадок центрифугируют, промывают ацетоном (2-1 мл), эфиром (1«1 мл) и высушивают в вакууме над PaOs. Получают 20 мг бесцветного порошка тетралитиевой соли . ЗН20. Продукт гомогенен при высокоэффективной хроматографии на Llchrosorb NH26 5 мкм в градиенте 0-0,3 М фосфат кали  (рН 6,5) в 30%-ном водном ацетонитриле, дает два равных по площади пика Rp и Sp-диастере- оизомеров при обращенно-фазовой хроматографии на Nucleos 1 С18, 5 мкм в градиенте 0-40% водный метанол, 0,05 М LICI04, 0.02М, LlOAc (рН 5.0) УФ-спектр (Н20, рН 7, Specord UVVIS, ГДР): Я max (Б) 259 нм (15200), Я min (е) 230 нм (4700). 31Р- ЯМР-спектр (прибор BruKer HX-90, частота 36,43 МГц. внешний стандарт 85% НзР04, Д20/ЭДТА, рН 8.5, 30°С, м.д.): &, 43,30(д) и 42.80(д); ,71(ДД); Ј -5,92(д).
П р и м е р 2. 2 -Дезокситимидин-5 -0-{1-тио)-трифосфат#ГПЗс5), тетралитиева  соль. Дезокситимидин (9,6 мг, 40 мкмоль), после осушки раствор ют в 0,08 мл ТЭФ (100°С, 0.5 мин), охлаждают , прибавл ют пиридин (6,6 мкл, 83 мкмоль), охлаждают до 0°С, добавл ют свежеперегнанную Р5С1з (4,5 Мкл, 45 мкмоль) и выдерживают при той же температуре 45 мин. Далее обработку, выделение и идентификацию продукта провод т, как описано в примере 1. Выход TTPxS 368 о.е.267 (96%). Осаждением (см. выше) получено 18 мг тетралитиевой соли.
Таким образом, выход по данному способу повышаетс  более, чем в 2 раза при уменьшении (примерно четырехкратном) продолжительности процесса.

Claims (1)

  1. Формула изобретени  Способ получени  2 -дезоксинуклеозид- б -0-(1-тио)трифосфатов общей формулы
    О о S
    О-Р-О-Р-О-Р-О-/° i | i V О о- о- он
    где В-аденин-9-ил- или тимин-1-ил, путем обработки дезоксинуклеозидов тиохлоро- кисью фосфора в триэтилфосфате в присутствии основани  при температуре 0-5°С с последующим добавлением раствора пиро- фосфата и гидролизом реакционной смеси, отличающийс  тем, что, с целью увеличени  выхода целевого продукта, и упрощени  процесса, обработку дезоксинуклеозидов тиохлорокисью фосфора провод т в присутствии пиридина в течение 10-45 мин, пирофосфат добавл ют в виде раствора его три-н-бутиламмониевой соли в ацето- нитриле и выдерживают 4-10 мин, а гидролиз реакционной смеси осуществл ют водой в течение 15-50 мин.
SU874322727A 1987-10-29 1987-10-29 Способ получени 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-(1-тио)трифосфатов RU1775405C (ru)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU874322727A RU1775405C (ru) 1987-10-29 1987-10-29 Способ получени 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-(1-тио)трифосфатов
SU874322727D RU1775406C (ru) 1987-10-29 1987-10-29 Способ получени 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-/1-тио/трифосфатов

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU874322727A RU1775405C (ru) 1987-10-29 1987-10-29 Способ получени 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-(1-тио)трифосфатов

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU1775405C true RU1775405C (ru) 1992-11-15

Family

ID=21334152

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU874322727A RU1775405C (ru) 1987-10-29 1987-10-29 Способ получени 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-(1-тио)трифосфатов
SU874322727D RU1775406C (ru) 1987-10-29 1987-10-29 Способ получени 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-/1-тио/трифосфатов

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU874322727D RU1775406C (ru) 1987-10-29 1987-10-29 Способ получени 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-/1-тио/трифосфатов

Country Status (1)

Country Link
RU (2) RU1775405C (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999055857A3 (en) * 1998-04-29 2000-02-24 Ribozyme Pharm Inc Nucleoside triphosphates and their incorporation into ribozymes

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Goody R.S., Isakov M. Simple synthesis and Separation of the Liasfereomers of«cthio analogs of rlbo- and deoxyrtbo- di and trlphosphate. Tetrah. Lett. 1986, v.27. № 31, p.3599-3602. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999055857A3 (en) * 1998-04-29 2000-02-24 Ribozyme Pharm Inc Nucleoside triphosphates and their incorporation into ribozymes

Also Published As

Publication number Publication date
RU1775406C (ru) 1992-11-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lohrmann et al. Prebiotic activation processes
Letsinger et al. Nucleotide chemistry. XX. Phosphite coupling procedure for generating internucleotide links
Hulshof et al. Prebiotic condensation reactions in an aqueous medium: a review of condensing agents
Bednarski et al. Aldolase-catalyzed synthesis of complex C8 and C9 monosaccharides.
JPS6245596A (ja) ７−デスアザ−２′−デスオキシグアノシン−ヌクレオチド、その製法
Hassett et al. Pyruvate kinase: is the mechanism of phospho transfer associative or dissociative?
RU1775405C (ru) Способ получени 2 @ -дезоксинуклеозид-5 @ -0-(1-тио)трифосфатов
Williams-Ashman et al. Oxidative phosphorylation catalyzed by cytoplasmic particles isolated from malignant tissues
Maryanoff et al. Stereoselective synthesis and biological activity of. beta.-and. alpha.-D-arabinose 1, 5-diphosphate: analogs of a potent metabolic regulator
Mehdi et al. Syntheses and configurational analyses of thymidine 4-nitrophenyl [17O, 18O] phosphates and the stereochemical course of a reaction catalyzed by bovine pancreatic deoxyribonuclease I
Salo et al. Synthesis of 2-acetamido-2-deoxy-α-D-mannopyranosyl phosphate and uridine 5'-(2-acetamido-2-deoxy-α-D-mannopyranosyl dipotassium pyrophosphate
Fuertes et al. Synthesis and enzymic activity of 1, 2, 4-triazole-3-carboxamide 6'-deoxyhomoribonucleoside-6'-phosphonic acid and related compounds
ABIKO et al. Investigations on Pantothenic Acid and Its Related CompoundsXI. Biochemical Studies (6). A Final Stage in the Biosynthesis of CoA
Richard et al. Stereochemical course of phosphoanhydride synthesis
US2718523A (en) Preparation of phytic acid and soluble salts thereof by cation exchange
Tomalin et al. A search for an intermediate in carboxypeptidase A catalyzed ester hydrolyses
US3437652A (en) Process for preparing phosphate esters of carbohydrates
US3375244A (en) Production of 5'-nucleotides
Mungall et al. Use of phosphorus oxychloride in synthesizing nucleotides and ollgonucleotides
Kenner et al. 104. Nucleotides. Part XLIII. The use of cyanamide derivatives in pyrophosphate synthesis. Syntheses of P 1-adenosine-5′ P 2-uridine-5′ pyrophosphate and of cytidine-5′ pyrophosphate
NEGISHI et al. An improved synthesis of N4-aminocytidine
Visser et al. Synthesis of 3′‐amino‐3′‐deoxyadenosine 5′‐triphosphate
Hampton et al. Design of substrate-site-directed irreversible inhibitors of adenosine 5'-phosphate aminohydrolase. Effect of substrate substituents on affinity for the substrate site
Tono-Oka et al. Enzymatic synthesis of clitidine
Hawley et al. Activity of polynucleotide phosphorylase with nucleoside diphosphates containing sugar ring modifications