RU1561227C

RU1561227C - Aqueous solution for platelet cryoconservation

Info

Publication number: RU1561227C
Authority: RU
Inventors: Е.П. Сведенцов; О.М. Селезнева; Д.С. Симкин; В.М. Новосадов
Original assignee: Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови
Priority date: 1988-02-01
Filing date: 1988-02-01
Publication date: 1994-11-15

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: solution for cryoconservation of platelets contains hexamethylenebistetrahydroxyethylurea, citric acid and ethylenediaminetetraacetic acid disodiun salt at the following ratio of components, wt. -% : hexamethylenebistetrahydroxyethylurea 5-15; citric acid 0.9-1.3; ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt 0.1-1.0, and water for injection - the rest. Solution is used for blood cells conservation. EFFECT: decreased death of platelets, increased platelet quantity in functionally active state, decreased toxicity of cryoprotective solution. 3 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к консервированию клеток крови. The invention relates to medicine, in particular to the preservation of blood cells.

Цель изобретения - сохранение тромбоцитов в функционально полноценном состоянии после замораживания до -196^оС и уменьшение токсичности.The purpose of the invention - the preservation of platelets in the full functional status after freezing to -196 ^{° C} and decrease toxicity.

Данная цель достигается тем, что раствор для криоконсервирования тромбоцитов содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, лимонную кислоту и динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты при следующем соотношении компонентов, мас.%: Гексаметиленбистетра- оксиэтилмочевина 5,0-15,0 Лимонная кислота 0,9-1,3 Динатриевая соль эти- лендиаминтетрауксус- ной кислоты 0,1-0,1 Вода для инъекций Остальное
Оптимальная рецептура ограждающего раствора для замораживания тромбоцитов следующая, г: гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 10; лимонная кислота 1,1; ЭДТА Na₂ 0,1; вода до 100 мл.This goal is achieved by the fact that the solution for cryopreservation of platelets contains hexamethylene bistetraoxyethylurea, citric acid and disodium salt of ethylenediaminetetraacetic acid in the following ratio, wt.%: Hexamethylene bistetra-hydroxyethylurea 5.0-15.0 Citric acid 0.9-1.3 ethylenediaminetetraacetic acid 0.1-0.1 Water for injection Else
The optimal formulation of the enclosing solution for platelet freezing is as follows, g: hexamethylene bistetraoxyethylurea 10; citric acid 1.1; EDTA Na ₂ 0.1; water up to 100 ml.

П р и м е р 1. К 10 мл тромбоцитарной взвеси добавляют по стенке 10 мл раствора для криоконсервирования при постоянном перемешивании (соотношение 1: 1), эквилибрируют 20 мин с этим раствором при температуре +4^оС разливают по 10 мл в металлические контейнеры из нержавеющей стали объемом 12 мл, замораживают по двухэтапной программе на аппарате для программного замораживания УОП 000.000: на первом этапе охлаждают со скоростью 1^оС/мин до -7^оС, на втором 20^oC/мин до -140оС с последующим переносом контейнеров в жидкий азот. Содержание форменных элементов в 1 мкл тромбоцитовзвеси, подготовленной к замораживанию, составляло 900˙ 10³. Размораживание тромбоцитной взвеси через 17 дней после замораживания до -196^оС производят в 20-литровой водяной ванне при +39^оС в течение 20 с. Число тромбоцитов в 1 мкл равно 800˙ 10³. Их адгезивность составила 23,7%, агрегация с АДФ на 2 мин 7,14%, на 10 мин 7,14%.EXAMPLES EXAMPLE 1 To 10 ml of platelet suspension was added 10 ml wall cryopreservation solution under constant stirring (ratio 1: 1), ekvilibriruyut 20 minutes with the solution at a temperature of 4 ^{° C} is poured into 10 ml in metal containers stainless steel 12 ml, frozen at-step application software on the unit to freeze OPS 000.000: the first stage is cooled at a rate of 1 ° ^C / min to -7 ^{° C,} followed by 20 ^o C / min to -140oS followed by transfer of containers into liquid nitrogen. The content of the formed elements in 1 μl of platelet suspension prepared for freezing was 900 10 ³ . Thawing platelet suspension 17 days after freezing to -196 ^{° C} is carried out in a 20 liter water bath at 39 ^{° C} for 20 seconds. The number of platelets in 1 μl is equal to 800˙ 10 ³ . Their adhesiveness was 23.7%, aggregation with ADP for 2 min 7.14%, for 10 min 7.14%.

Влияние криоконсервирования на морфологические особенности тромбоцитов изучают с помощью световой и электронной микроскопии, а их функцию исследованием адгезивности и агрегации. The effect of cryopreservation on the morphological features of platelets is studied using light and electron microscopy, and their function is studied by adhesion and aggregation.

При оценке ультраструктуры проведен анализ содержания альфа-гранул и митохондрий на срез тромбоцита и величины площади среза. Полученные данные сравнивают с аналогичными показателями интактных тромбоцитов,
Как видно из табл. 1, средняя площадь среза тромбоцитов, хранившихся в жидком азоте с использованием растворов 1, 2, 3, значимо не отличается от средней площади интактных тромбоцитов. Содержание альфа-гранул на срез оказалось значимо сниженным, однако при использовании раствора 2 это снижение менее выражено.When evaluating the ultrastructure, an analysis was made of the content of alpha granules and mitochondria per platelet slice and the size of the cut area. The data obtained are compared with similar indicators of intact platelets,
As can be seen from the table. 1, the average cut-off area of platelets stored in liquid nitrogen using solutions 1, 2, 3 does not significantly differ from the average area of intact platelets. The content of alpha granules per section was significantly reduced, however, when using solution 2, this decrease is less pronounced.

В табл. 2 представлены преимущества предложенного раствора (2), содержащего криопротектор - гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину в 5%-ной конечной концентрации по сравнению с прототипом (1, 2, 3), содержащим криофилактик - диметилацетамид. In the table. 2 presents the advantages of the proposed solution (2) containing a cryoprotectant - hexamethylene bistetraoxyethylurea in a 5% final concentration compared to the prototype (1, 2, 3) containing cryophylactic - dimethylacetamide.

Как видно из представленных данных, гибель тромбоцитов, криоконсервированных с предложенным раствором, меньше чем при замораживании с аналогом, а количество форменных элементов в функционально полноценном состоянии больше, так как предложенный раствор имеет в 3 раза меньшую токсичность. Он так же, как и прототип, не требует отмывания криопротектора после размораживания биообъекта. As can be seen from the data presented, the death of platelets cryopreserved with the proposed solution is less than when freezing with an analog, and the number of formed elements in a functionally full state is greater, since the proposed solution has 3 times less toxicity. It, like the prototype, does not require washing the cryoprotectant after thawing the bioobject.

Сохранность функциональных свойств тромбоцитов представлена в табл. 3. Preservation of the functional properties of platelets is presented in table. 3.

Как видно из табл. 3, предлагаемый раствор обладает таким же криозащитным действием, что и прототип, но токсичность заявляемого раствора по сравнению с прототипом в 3 раза ниже. As can be seen from the table. 3, the proposed solution has the same cryoprotective effect as the prototype, but the toxicity of the claimed solution is 3 times lower than the prototype.

Claims

An aqueous solution for cryopreservation of platelets, characterized in that, in order to keep the platelets in a functionally full state after freezing to -196 ^o C, as well as to reduce the toxicity of the solution, it contains hexamethylene bistetraoxyethylurea, citric acid and disodium salt of ethylenediamine diamine, .%:
Hexamethylene bistetraoxyethylurea 5.0 - 15.0
Citric acid 0.9 - 1.3
Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt 0.1 - 0.1
Water for injection Else