RO131850A2 - Procedeu de obţinere a unui produs carcino-embrionar cu aplicabilitate în imunoprofilaxia cancerului pancreatic şi colonic - Google Patents
Procedeu de obţinere a unui produs carcino-embrionar cu aplicabilitate în imunoprofilaxia cancerului pancreatic şi colonic Download PDFInfo
- Publication number
- RO131850A2 RO131850A2 ROA201500903A RO201500903A RO131850A2 RO 131850 A2 RO131850 A2 RO 131850A2 RO A201500903 A ROA201500903 A RO A201500903A RO 201500903 A RO201500903 A RO 201500903A RO 131850 A2 RO131850 A2 RO 131850A2
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- cea
- mwcnt
- carbon nanotubes
- minutes
- added
- Prior art date
Links
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 7
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 7
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 7
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 7
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 title abstract description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 title abstract 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 title abstract 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000002041 carbon nanotube Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229910021393 carbon nanotube Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- 239000002048 multi walled nanotube Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000010517 secondary reaction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 6
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 4
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000002071 nanotube Substances 0.000 claims description 3
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 claims description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102100022019 Pregnancy-specific beta-1-glycoprotein 2 Human genes 0.000 claims 4
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims 1
- 102000012406 Carcinoembryonic Antigen Human genes 0.000 abstract description 12
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 abstract description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 5
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 abstract 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 abstract 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 4
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 4
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 3
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004630 atomic force microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 1
- 230000008073 immune recognition Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la un procedeu de obţinere a unui produs carcino-embrionar cu aplicabilitate în imunoprofilaxia cancerului pancreatic şi colonic. Procedeul conform invenţiei constă în aceea că, în prima etapă, se obţin nanotuburi de carbon de tip MWCNT carboxilate, după care acestea se funcţionalizează prin legare covalentă cu antigenul carcino-embrionar, nanostructurile astfel funcţionalizate se supun unor etape succesive de centrifugare şi redispersare prin ultrasonare în apă bidistilată, pentru eliminarea produşilor de reacţie secundari.
Description
Procedeu de obținere a unui produs carcino-embrionar cu aplicabilitate in imunoprofilaxia cancerului pancreatic si colonie
Invenția se refera la un procedeu de obținere a unui produs format din nanotuburi de carbon functionalizate cu antigen carcinoembrionar cu aplicabilitate in imunoprofilaxia cancerului pancreatic si colonie.
Este cunoscut faptul ca identificarea antigenelor tumorale pentru diferitele tipuri de neoplazii a permis imunizarea pacientilor direct împotriva acestor antigene. Primele studii au utilizat antigene tumorale derivate din membrane celulare. Acestea au demonstrat capacitatea vaccinurilor antitumorale bazate pe antigene specifice isolate din tumora de a activa sinteza de anticorpi in cazul carcinoamelor scuamoase cu localizare pulmonara sau glioamelor (1). Totuși, la pacienții cu adenocarcinom pancreatic sau colonie, datorită expresiei modificate de proteine implicate în prelucrarea antigenului și prezentare, celulele tumorale sunt capabile să evite recunoașterea de către sistemul imunitar, și activarea insuficientă a imunității antitumorale conduce la răspunsuri proiective insuficiente(2).
Antigenul carcino-embrionar(CEA) este o glicoproteină oncofetala folosita pentru a confirma diagnosticul și pentru monitorizarea efectelor tratamentului in diferite tipuri de neoplazii(3). Acesta a fost testat, cu obținerea unor rezultate promițătoare, alaturi de alti markeri pentru detecția si monitorizarea cancerului pancreatic(4), si colonic(5), (6). Antigenul carcino-embrionar este prezent din abundenta in țesuturile neoplazice, in special la nivel colonie si absent de la nivelul structurilor celular normale. De aceea servește ca o tinta ideala pentru distructia celulelor neoplazice fara atingerea celor normale. Totuși s-a demonstrat ca datorita prezentei sale in timpul dezvoltării fetale, sistemul imunitar prezintă un nivel important de toleranta (7).
Pentru a oferi acestui antigen proprietăți imunogenice crescute, s-a optat pentru atașarea sa la nanotuburi de carbon cu pereți multipli (MWCNT). Experimente deja publicate in literatura demonstrează capacitatea nanotuburilor de carbon de a se constitui, singular sau alaturi de alte elemente (e.g. celule stern) in agenți imunoprofilactici cu eficienta antineoplazica(8).
Soluțiile cunoscute prezintă următoarele dezavantaje: capacitate imunostimulatorie scăzută pentru prevenția adenocarcinomului pancreatic si colonie datorita apariției fenomenului de toleranta imunitara.
a 2015 00903
26/11/2015
Problema pe care o rezolva invenția este apariția, in cazul adenocarcinoamelor de cu localizare pancreatica/colonica, a tolerantei imunitare pentru antigenul CEA. Prin structura propusa se asigura un efect sumativ al moleculelor componente, care sa impiedice/diminueze rata de apariție a tolerantei imunitare. Astfel, proteina CEA selectata prezintă o structura ușor modificata (anti-idiotip) pentru a permite recunoașterea imunitara dar destul de apropiata de modelul uman pentru a induce distrugerea celulelor neoplazice, iar nanotuburile de carbon vor adauga un element de “non-self’ produsului, capabil sa genereze o stimulare imunitara eficienta.
Invenția prezintă următoarele avantaje: prin stimularea imunitara obtinuta prin utilizarea de nanotuburi de carbon functionalizate cu antigenul carcino-embrionar scade incidența apariției adenocarcinomului de pancreas/colon sau se reduce rata de progresie tumorala in cazul adenocarcinoamelor pancreatice/colonice deja instalate.
Scopul invenției este de a sintetiza un nou produs format prin atașarea antigenului carcinoembrionar de nanotuburi de carbon cu pereți multipli, cu stimularea semnificativ imbunatatita a limfocitelor T si potențial efect proiectiv imunoprofi lactic antitumoral (cancer pancreas, colon).
Procedura conform invenției consta din aceea ca nanotuburile de carbon cu pereți multipli (MWCNT) sunt supuse unei etape de oxidare in vederea ‘grefării’ de grupări carboxilice pe suprafața acestora. Functionalizarea nanotuburilor carboxilate se face prin legarea covalenta a acestora de proteina CEA cu ajutorul l-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimidei (EDC) si al N-hidroxisuccinimidei (NHS). Reacția de cuplare are loc la temperatura camerei si sub agitare continua timp de 15 de minute. Nanotuburile de carbon astfel functionalizate se supun unor etape successive de centrifugare si redispersare prin ultrasonare in H2O bidist. in vederea înlăturării produșilor de reacție secundari. Acest nou tip de nanostructura obtinuta prezintă aplicabilitate in imunoprofilaxia cancerului pancreatic si colonie.
Menționam ca nu am identificat in literatura cercetări dedicate sintezei sau efectelor nanostructurii propuse.
Se da in continuare un exemplu de realizare conform invenției:
Nanotuburile de carbon de tip ‘multiwall’ (Sigma-Aldrich 724769) 50mg sunt dispersate cu ajutorul unui ultrasonicator in 5mL amestec sulfonitric (F^SO^HNOs 2:1 v/v) a 2015 00903
26/11/2015 timp de 10 minute. Apoi se adauga un volum suplimentar de 45mL amestec sulfonitric si soluția se aduce la 95°C timp de 15 minute, după care soluția este adaugata peste 150g de gheata. Nanotuburile de carbon carboxilate obținute sunt supuse unei etape de centrifugare (3000RPM/10min.), se înlătură supematatntul, se redisperseaza in 50mL H2O dist. si se ajusteaza pH-ul la ~8.5. Pentru functionalizare nanotuburilor carboxilate cu proteina CEA la 9mL sol. MWCNT se adauga 2mL sol. EDC/NHS [30mg:30mg/mL] si se lașa sub agitare 10 minute la temperatura camerei, apoi se adauga 150pL mercaptoetanol si 3mL sol CEA 5μΜ. Reacția este lasata la perfectat timp de 120minute, sub agitare si la temperatura camerei.Nanotuburile de carbon functionalizate cu proteina CEA (MWCNT-CEA) sunt supuse unor etape de centrifugare (15 000 RPM/20 min.) si redispersare prin ultrasonare in H2O bidist. in vederea înlăturării produsilor de reacție secundari. Soluția de MWCNT-CEA este supusa caracterizării prin metode metode de microscopie de forța atomica (AFM). Dimensiunea nanoparticulelor a fost calculata pe baza profilelor extrase din imagini, MWCNT-CEA au prezentat dimensiuni cuprinse intre 33 si 61nm.
Aplicații pe subiecți umani sau animale. Produsul propus spre brevetare nu a fost inca testat pe animale sau subiecți umani, fiind inca in faza de testare prealabila in vitro a citotoxicitatii. Intr-o etapa ulterioara se vor evalua efectele in vivo ale acestuia.
Claims (1)
- Prin prezenta invenție se revendica procedeul de obținere a nanostructuri lor funcțional izate de tip MWCNT-CEA cu aplicabilitate in imunoprofilaxia cancerului pancreatic si colonie, caracterizat prin aceea ca, in scopul stimulării semnificativ imbunatatita a limfocitelor T si a potențialului efect proiectiv imunoprofilactic antitumoral antigenul carcino-embrionar (CEA) este cuplat covalent de nanotuburi de carbon de tip MWCNT.Nanotuburile de carbon de tip ‘multiwall’ (Sigma-Aldrich 724769) 50mg sunt dispersate cu ajutorul unui ultrasonicator in 5mL amestec sulfonitric (fhSO^HNCb 2:1 v/v) timp de 10 minute. Apoi se adauga un volum suplimentar de 45mL amestec sulfonitric si soluția se aduce la 95°C timp de 15 minute, după care soluția este adaugata peste 150g de gheata. Nanotuburile de carbon carboxilate obținute sunt supuse unei etape de centrifugare (3000RPM/10min.), se înlătură supematatntul, se redisperseaza in 50mL H2O dist. si se ajusteaza pH-ul la ~8.5. Pentru functionalizare nanotuburilor carboxilate cu proteina CEA la 9mL sol. MWCNT se adauga 2mL sol. EDC/NHS [30tng:30tng/mL] si se lașa sub agitare 10 minute la temperatura camerei, apoi se adauga 150pL mercaptoetanol si 3mL sol CEA 5μΜ. Reacția este lasata la perfectat timp de 120minute, sub agitare si la temperatura camerei.Nanotuburile de carbon funcțional izate cu proteina CEA (MWCNT-CEA) sunt supuse unor etape de centrifugare (15 000 RPM/20 min.) si redispersare prin ultrasonare in H2O bidist. in vederea înlăturării produșilor de reacție secundari.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201500903A RO131850B1 (ro) | 2015-11-26 | 2015-11-26 | Procedeu de obţinere de nanostructuri funcţionalizate pentru imunoprofilaxia cancerului pancreatic şi de colon |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201500903A RO131850B1 (ro) | 2015-11-26 | 2015-11-26 | Procedeu de obţinere de nanostructuri funcţionalizate pentru imunoprofilaxia cancerului pancreatic şi de colon |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO131850A2 true RO131850A2 (ro) | 2017-05-30 |
| RO131850B1 RO131850B1 (ro) | 2020-04-30 |
Family
ID=58746781
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA201500903A RO131850B1 (ro) | 2015-11-26 | 2015-11-26 | Procedeu de obţinere de nanostructuri funcţionalizate pentru imunoprofilaxia cancerului pancreatic şi de colon |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RO (1) | RO131850B1 (ro) |
-
2015
- 2015-11-26 RO ROA201500903A patent/RO131850B1/ro unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RO131850B1 (ro) | 2020-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Cancer cell membrane cloaking nanoparticles for targeted co-delivery of doxorubicin and PD-L1 siRNA | |
| Wang et al. | Tumour sensitization via the extended intratumoural release of a STING agonist and camptothecin from a self-assembled hydrogel | |
| US12174181B2 (en) | Nanocomposites and methods of making same | |
| Hassan et al. | Dual stimulation of antigen presenting cells using carbon nanotube-based vaccine delivery system for cancer immunotherapy | |
| Villa et al. | Single-walled carbon nanotubes deliver peptide antigen into dendritic cells and enhance IgG responses to tumor-associated antigens | |
| Cao et al. | Photothermally controlled MHC class I restricted CD8+ T‐cell responses elicited by hyaluronic acid decorated gold nanoparticles as a vaccine for cancer immunotherapy | |
| Kumar et al. | Covalently dye-linked, surface-controlled, and bioconjugated organically modified silica nanoparticles as targeted probes for optical imaging | |
| Reichardt et al. | Glyconanotechnology | |
| Quarta et al. | Polymer coated inorganic nanoparticles: tailoring the nanocrystal surface for designing nanoprobes with biological implications | |
| Battigelli et al. | Carbon nanomaterials as new tools for immunotherapeutic applications | |
| Meka et al. | Shikimoyl-ligand decorated gold nanoparticles for use in ex vivo engineered dendritic cell based DNA vaccination | |
| Seydoux et al. | Pulmonary delivery of cationic gold nanoparticles boost antigen-specific CD4+ T cell proliferation | |
| WO2011149909A3 (en) | Class i mhc phosphopeptides for cancer immunotherapy and diagnosis | |
| Wilkerson et al. | Nanoparticle systems modulating myeloid-derived suppressor cells for cancer immunotherapy | |
| Lin et al. | Chitosan nanoparticles strengthen Vγ9Vδ2 T-cell cytotoxicity through upregulation of killing molecules and cytoskeleton polarization | |
| Obayemi et al. | Adhesion of ligand-conjugated biosynthesized magnetite nanoparticles to triple negative breast cancer cells | |
| Zhao et al. | Physicochemical Cues Steering Spiky Mn/MoOx Nanocarriers to Mimic Oncolytic Virus for Potentiating Cancer Immunotherapy | |
| Zhao et al. | A co-formulated vaccine of irradiated cancer cells and cowpea mosaic virus improves ovarian cancer rejection | |
| Bicho et al. | Anti-CD8 conjugated nanoparticles to target mammalian cells expressing CD8 | |
| Zhang et al. | A dual-functional nanovehicle with fluorescent tracking and its targeted killing effects on hepatocellular carcinoma cells | |
| Galli et al. | A new catechol-functionalized polyamidoamine as an effective SPION stabilizer | |
| RO131850A2 (ro) | Procedeu de obţinere a unui produs carcino-embrionar cu aplicabilitate în imunoprofilaxia cancerului pancreatic şi colonic | |
| Bhirde et al. | Nuclear mapping of nanodrug delivery systems in dynamic cellular environments | |
| Guzmán-Mendoza et al. | Noncytotoxic Carbon Nanotubes Bioconjugated with Fucosyltransferase 4-Derived Peptides Modulate Macrophage Polarization In Vitro | |
| Morani et al. | Review on Multifunctional Nanotherapeutics for Drug Delivery, Tumor Imaging, and Selective Tumor Targeting by Hyaluronic Acid Coupled Graphene Quantum Dots |