RO107684B1 - Procedeu de obținere a invertazei fungice - Google Patents
Procedeu de obținere a invertazei fungice Download PDFInfo
- Publication number
- RO107684B1 RO107684B1 RO14664191A RO14664191A RO107684B1 RO 107684 B1 RO107684 B1 RO 107684B1 RO 14664191 A RO14664191 A RO 14664191A RO 14664191 A RO14664191 A RO 14664191A RO 107684 B1 RO107684 B1 RO 107684B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- invertase
- fungal
- fungi
- aspergillus niger
- enzyme
- Prior art date
Links
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 title claims abstract description 30
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 title claims abstract description 29
- 239000001573 invertase Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims abstract description 7
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000012225 czapek media Substances 0.000 claims description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 5
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 abstract 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 abstract 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 12
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Inorganic materials [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 229960004903 invert sugar Drugs 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000020374 simple syrup Nutrition 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241000582914 Saccharomyces uvarum Species 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000009341 apiculture Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L magnesium sulphate Substances [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Invenția se referă la un procedeu de
obținere a invertazei extraceluare, cu ajutorul unei
tulpini selecționate, de Aspergillus niger, prin
cultivare pe mediu cu săruri minerale și 3%
amidon, în culturi statice, 6 zile, la 28°C.
Invertaza fungică este activă la pH= 4,6° și 45°C;
prezintă o bună termostabilitate, fiind inactivată în
proporție de 22%, prin păstrare la 35°C, timp de
120 h, proprietăți care o recomandă pentru utilizare
în industria alimentară, în scopul obținerii zahărului
invert și în biotehnologia imobilizării enzimelor.
Description
Prezenta invenție se referă la un procedeu microbiologic, de obținere a invetazei fungice, cu ajutorul mucegaiurilor selecționate în acest scop.
Este cunoscut că invertaza (B-ffuctofuranozidaza E.C.3.2. 1.26), enzimă frecvent sintetizată, de plante și microorganisme, se întâlnește sub forme multiple, diferențiate prin caractere biochimice. In timp ce plantele superioare sintetizează invertaze alcaline și acide, cu temperaturi optime de activitate, la 35 ... 40°C, microorganismele produc invertaze active, în domeniul acid al />H-ului, termostabile, proprietăți care fac din microorganisme sursa principală de obținere industrială, a invertazei. In acest scop, se folosește drojdia comprimată (Saccharomuces cerevîsiae), drojdia de bere (Saccharomyces uvarum), drojdia furajeră (Candida utilis), pentru obținere de invertază cu multiple utilizări în industria alimentară, pentru obținerea zahărului invertit, a mierii artificiale, a produselor zaharoase, în apicultură, terapeutică, chimia analitică (Jerebțov N.A - Prikladnaia biochimia i microbiologhia nr.2, 1977, p 289 ... 292; Dobrolinskaia G.M. - Prikladnaia biohimia i microbiologhia nr.3, 1966, p 372 ... 375; Woodward J. - Imobilised cells and Enzymes IRL Press, 1988).
Este cunoscut că drojdiile conțin invertaze intracelulare, diferențiate între ele, prin specificitate față de substrat și alte proprietăți dependente de specie și condițiile de purificare a enzimei. In același timp, tehnologia de prelucrare a biomasei de celule, în scopul eliberării invertazei intracelulare, probabil reținută în plasa peptido-glicanică a peretelui celular și purificarea enzimei din drojdii, este mai dificilă decât în cazul purificării invertazelor extracelulare, produse de către mucegaiuri.
Este cunoscut că invertazele din drojdii au pH optim de activitate la pH= 3,6, în timp ce mucegaiurile produc invertaze active, la un pH mai mare de 4,5, la valori care se pretează mai bine, pentru utilizări în industria alimentară. De asemenea, în timp ce invertazele din drojdii se inactivează, prin păstrare la 70°C, în 15 min, în proporție de 82% (pentru Saccharomyces cerevîsiae), invertazele fungice sunt mult mai termostabile (Dan Valentina - Studiu comparativ al proprietăților p-fructofuranozidazei din Aspergillus niger și levuri). In plus, drojdiile de importanță industrială, ce pot fi folosite ca sursă de invertaze, nu reprezintă produse excedentare și nu pot fi scoase din circuitul productiv, în scopul obținerii de invertază.
Procedeul conform prezentei invenții înlătură dezavantajele menționate, prin aceea că, prin metode de screening, din 63 tulpini de mucegaiuri ale genului Aspergillus din colecția Laboratorului de Microbiologie industrială a Universității din Galați (MIUG) s-a selecționat tulpina Aspergillus niger MIUG-15, care, prin cultivare în mediu Czapek cu 3% amidon, în condiții staționare la 28 °C, timp de 6 zile, produce invertază activă (750 UA/100 cm3 mediu), extracelulară, cu un optim de activitate la pH= 4,6 și temperatura 45°C, cu o afinitate bună față de substrat, termostabilă.
Invenția prezintă următoarele avantaje:
- invertaza produsă de mucegaiul selecționat, Aspergillus niger MIUG-15, este extracelulară și deci, tehnologia de concentrare/purificare este simplificată față de cea a enzimelor intracelulare, din drojdii la care extracția poate denatura enzima;
- invertaza fungică se poate obține în cantități nelimitate, compoziția mediului fiind simplă și independentă de o anumită materie primă;
- prezintă un optim de activitate la un /?H= 4,6 similar cu cel al alimentelor acide, fără să mai necesite adaos de substanțe pentru scăderea acidității, după hidroliza zaharozei în mediu acid, la valori acceptate senzorial;
- invertaza fungică are o afinitate bună, făță de substrat, în sensul că în siropuri de zaharoză 70%, activitatea relativă a invertazei este egală cu 46%, față de activitatea maximă stabilită la concentrații de 10 ... 20% zaharoză, proprietate avantajoasă la obținerea zahărului invertit, când se poate lucra cu siropuri concentrate în zahăr;
- enzima obținută conform procedeului are o termostabilitate superioară invertazei din drojdie, prin aceea că, prin menținere la 70°C, timp de lh, reducerea relativă a activității enzimatice față de cea mazimă este de 53% (constantă de inactivare K = 0,742 h'1), iar prin păstrarea filtratului enzimatic, la 35°C, timp de 120 h, reducerea în activitate inver107684 tazică a fost de numai 22% (K = 0,002 h ’), proprietate importantă pentru invertirea continuă a siropului de zahăr, cu invertază imobilizată.
Obținerea invertazei fungice, conform 5 procedeului ce face obiectul prezentei invenții și utilizarea sa, în industria alimentară, înlătură dezavantajul consumului de drojdie comprimată, destinată industriei de panificație, ca sursă de invertază. io
Se dă, mai jos, un exemplu de realizare a procesului de obținere a invertazei fungice.
Se prepară inoculul sporifer, prin cultivarea în cultura pură a tulpinii selecționate 15 de Aspergillus niger MIUG-15, pe mediul de must de malț-agar înclinat în eprubete, care se termostatează la 25°C, timp de 5 ... 7 zile, pentru formarea conidiosporilor. Se prepară mediul Czapek cu 3% amidon, cu următoarea 20 compoziție:
- Amidon de cartofi 30 g
- NaNO3 (azotat de sodiu) 2 g
- Fosfat dipotasic (K2HPO4) 1 g
- Clorură de potasiu KCl) 0,5 g 25
- Sulfat de magneziu (SO4Mg.7 H2O 0,5 g
- Sulfat feros (FeSO4) 0,01 g
- Apă până la 1000 ml
După obținere, se face repartizarea în vase Roux sau vase Erlenmayer cu gât larg, în volume care să asigure o înălțime a stratului de lichid nutritiv, de aproximativ 2 cm, se obtu4 rează cu dopuri de vată și se face sterilizarea la 121 °C, timp de 15 min. După răcire, se inoculează cu inocul sporifer antrenat în ser fiziologic de pe suprafața mediului de must malț agar înclinat, în concentrație de aproximativ 105 spori/cm3 mediu de cultură. Vasele se termostatează, 6 zile, la 25 ... 28°C și în filtrat, se determină activitatea invertazică. In aceste condiții Aspergillus niger MIUG-15 produce 750 UA/100 cm3 mediu din care 93% din enzimă este extracelulară.( O unitate de activitate reprezintă cantitatea de enzimă care catalizează hidroliza unui umol de zaharoză, după 1 min, la pH= 4,6 și temperatura de 30°C, dintr-o soluție de zaharoză 10%, cu formarea de zahăr reducător determinat prin metoda Schaffer Shomogy). (Methods of Analysis AOAC, 1965, p. 499 500).
Claims (1)
- Procedeu de obținere a invertazei fungice, caracterizat prin aceea că tulpina de Aspergillus niger MIUG-15 se cultivă în mediu Czapek cu 3% amidon, la 28°C, în condiții staționare, timp de 6 zile, după care enzimă este purificată, prin metode clasice, din mediul de cultură.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RO14664191A RO107684B1 (ro) | 1991-01-03 | 1991-01-03 | Procedeu de obținere a invertazei fungice |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RO14664191A RO107684B1 (ro) | 1991-01-03 | 1991-01-03 | Procedeu de obținere a invertazei fungice |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO107684B1 true RO107684B1 (ro) | 1993-12-30 |
Family
ID=20127971
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RO14664191A RO107684B1 (ro) | 1991-01-03 | 1991-01-03 | Procedeu de obținere a invertazei fungice |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RO (1) | RO107684B1 (ro) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998042828A3 (en) * | 1997-03-25 | 1998-12-23 | Usina Da Barra S A Acucar E Al | A process for preparing beta-fructofuranosidase and use in the synthesis of fructooligosaccharides |
-
1991
- 1991-01-03 RO RO14664191A patent/RO107684B1/ro unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998042828A3 (en) * | 1997-03-25 | 1998-12-23 | Usina Da Barra S A Acucar E Al | A process for preparing beta-fructofuranosidase and use in the synthesis of fructooligosaccharides |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4247637A (en) | Highly thermostable glucoamylase and process for its production | |
| Rattanakit et al. | Utilization of shrimp shellfish waste as a substrate for solid-state cultivation of Aspergillus sp. S1-13: evaluation of a culture based on chitinase formation which is necessary for chitin-assimilation | |
| Uma et al. | Production and properties of invertase from a Cladosporium cladosporioides in SmF using pomegranate peel waste as substrate | |
| Siqueira et al. | Pycnoporus sanguineus: a novel source of α-amylase | |
| Guilloux-Benatier et al. | Lysis of yeast cells by Oenococcus oeni enzymes | |
| Chowdhury et al. | PRODUCTION AND CHARACTERIZATION OF PECTINASE ENZYME FROM RHIZOPUS ORYZAE. | |
| Kuo et al. | Preparation and growth of yeast protoplasts | |
| Keen et al. | Induction and repression of endopolygalacturonase synthesis by Pyrenochaeta terrestris | |
| Pourrat et al. | Production of tannase (tannin acyl hydrolase EC 3.1. 1.20) by a strain of Aspergillus niger | |
| Sandhu et al. | Production of α-amylase by Saccharomycopsis fibuligera (Syn. Endomycopsis fibuligera) | |
| Sanghvi et al. | Isolation, optimization, and partial purification of amylase from Chrysosporium asperatum by submerged fermentation | |
| RO107684B1 (ro) | Procedeu de obținere a invertazei fungice | |
| RShalinimol | Identification and Evaluation of Bacillus Species Bacteria from Sago Industrial Waste | |
| JP3761236B2 (ja) | 新規なβ−グルコシダーゼ、その製造法および用途 | |
| El-Gendy et al. | Solid state fermentation of Agro-industrial residues for glucoamylase production from Endophytic Fungi Penicillium javanicum of Solanum tuberosum L | |
| DK153568B (da) | Alfa-galactomannangalactosidase og middel indeholdende denne | |
| CA2101063A1 (fr) | Xylanase, souches de bacillus productrices de xylanase et leurs utilisations | |
| EP0157638A2 (en) | Method for production of high conversion syrups and immobilized alpha-amylase employed in the process | |
| US6534303B2 (en) | Process for the preparation of acidic lipase | |
| CN100360667C (zh) | 透性化细胞海藻糖合酶及其制备和用途 | |
| Oseni | Production of microbial protease from selected soil fungal isolates | |
| Gupta et al. | Solid State Fermentation of Wheat Bran for Production of Glucoamylase by Aspergillus niger | |
| Mahmoud | Different factors affecting growth and amylase production by fungi inhabiting poultry feeds | |
| AL-ASADY | Optimization of α-amylase production from a local isolate of Bacillus licheniformis and characterization of purified enzyme | |
| Take Ajaykumar et al. | Production and characterization of α-amylase isolated from Aspergillus niger by Solid State Fermentation |