PT87078B

PT87078B - PREPARATION PROCESS FOR COMPOSITIONS FOR CONNECTING MINERALIZED FABRICS AND PROCESS FOR INDUCING THAT CONNECTION

Info

Publication number: PT87078B
Application number: PT8707888A
Authority: PT
Inventors: Lars Hammarstrom; Leif Blomlof; Sven Lindskog
Original assignee: Bioventures Nv
Priority date: 1988-06-24
Filing date: 1988-06-24
Publication date: 1994-04-29
Also published as: PT87078A

Abstract

Binding is induced between living mineralised tissue parts by applying a precursor to dental enamel (i.e. enamel matrix) which causes regeneration of the mineralised tissue on at least one of these parts. The enamel matrix can be obtained from pigs or cattle and is combined with a carrier, diluent or adhesive. The enamel matrix can also be obtained by recombinant DNA techniques or cultivation of diploid cells.

Description

FEMORIA DESCRITIVADESCRIPTIVE FEMORATION

G presente invento refere-se a uma composição para induzir a ligação entre partes de tecido vivo mineralizado, por formação de novo tecido mineralizado em pelo menos uma das par tes mas também possivelmente na outra parte. 0 invento também descreve um processo para induzir esta ligação, por exemplo, no tratamento da periodontite.The present invention relates to a composition for inducing binding between parts of living mineralized tissue, by forming new mineralized tissue in at least one part but also possibly in the other part. The invention also describes a process for inducing this connection, for example, in the treatment of periodontitis.

□ presente invento refere-se a novas técnicas de base biológica, úteis para induzir a ligação entre partes de tecidos mineralizados, por exemplo, ossos. Ainda que o invento s_e ja aplicável à generalidade destas ligações, nesta descrição será principalmente ilustrado nos aspectos ligados ao tratamen to de dentas lassos, da chamada periodontite. Note-se contudo que este exemplo do invento não deve ser considerado como lirni tador do âmbito do invento. Antes de descrever mais em pormenor as técnicas do invento e para facilitar a sua compreensão, é conveniente dar um resumo do que se conhece sobre estados biológicos ligados aos dentes e perturbações desses estados. Normalmente os dentes estão dentro de cavidades especiais chamadas alvéolos, nos maxilares. Entre as raízes dos dentes e os maxilares existe a chamada membrana periodontal. As raízes dos dentes são constituídas principalmente por um material cha mado dentina. Esta dentina está coberta perifericamente cor uma fina camada de cimento, de espessura entre cerca de 0,01 e 1 mm. Neste cimento encontram-se inter alia fibras de colagénio que se estendem desde o cimento e através da membrana periodontal até ao maxilar. Assim, o cimento é extremamente importante para a fixação do dente ao maxilar. Ά membrana peri_o dontal tem uma espessura de cerca de 0,2 mm e consiste nas referidas fibras de colagénio, e em vasos e nervos entre as fibras e as células que pertenceçi àquele tecido.The present invention relates to new bio-based techniques, useful for inducing the bond between parts of mineralized tissues, for example, bones. Although the invention is already applicable to most of these connections, in this description it will be mainly illustrated in the aspects related to the treatment of loose teeth, the so-called periodontitis. Note, however, that this example of the invention should not be considered as limiting the scope of the invention. Before describing the techniques of the invention in more detail and to facilitate its understanding, it is convenient to give a summary of what is known about biological states linked to teeth and disorders of these states. Usually the teeth are inside special cavities called alveoli, in the jaws. Between the roots of the teeth and the jaws there is the so-called periodontal membrane. The roots of the teeth consist mainly of a material called dentin. This dentin is covered peripherally with a thin layer of cement, between 0.01 and 1 mm thick. In this cement there are inter alia collagen fibers that extend from the cement and through the periodontal membrane to the jaw. Thus, cement is extremely important for fixing the tooth to the jaw. The periodontal membrane has a thickness of about 0.2 mm and consists of said collagen fibers, and vessels and nerves between the fibers and cells that belong to that tissue.

osso do maxilar não atinge a coroa do dente e, na parte da raiz que não está coberta pelas fibras do osso maxilar desde o cimento da raiz, estende-se a gengiva que rodeia o de_n te. Estas fibras ajudam à fixação do dente e dão ainda estabijaw bone does not reach the crown of the tooth and, in the part of the root that is not covered by the fibers of the jaw bone from the root cement, the gingiva surrounding the tooth extends. These fibers help to fix the tooth and still provide stability

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-3iidade à gengiva. A gengiva, bem como toda a cavidade oral, es tá coberta por uma fina camada de epitálio. Este epitálio fo_r ma um denso colar ou manga à volta do dente. Junto aos dantes forma-se um sulco pouco profundo entre os dentes e o epitélio.-3 ging age. The gingiva, as well as the entire oral cavity, is covered by a thin layer of epithelium. This epithelium forms a dense collar or sleeve around the tooth. Next to the before, a shallow groove is formed between the teeth and the epithelium.

53o bastante frequentes os distúrbios inflamatórios nos tecidos que ligam os dentes aos maxilares, atingindo, com maior ou menor intensidade, a maior parte da população, em todo o mundo. Os processos de tratamento aqui descritos visam princg. palmente atrasar o estabelecimento da doença e evitar tanto quanto possível que os dentes se soltem. Actualmente não exi_s te nenhum método clinicamente aplicável capaz de uma cura tal que permita que os dentes retomem a sua fixação aos maxilares.The inflammatory disorders in the tissues that connect the teeth to the jaws are quite common, reaching, to a greater or lesser extent, the majority of the population, worldwide. The treatment processes described here are aimed at principle. to delay the onset of the disease and to prevent teeth from loosening as much as possible. Currently, there is no clinically applicable method capable of such a cure that allows the teeth to resume their fixation to the jaws.

Um problema parcial nesta área é o caso em que os racisn tes têm defeitos congénitos na fixação dos dentes. Estes pacj_ entes desenvolvem sintomas de periodontite bem cedo, a chamada periodontite juvenil. 0 tratamento envolve frequentemente a extracção do dente e a substituição peia construção de uma oo_n te de preço substancialmente elevado.A partial problem in this area is the case where the racisans have birth defects in the teeth fixation. These patients develop symptoms of periodontitis very early, called juvenile periodontitis. The treatment often involves tooth extraction and replacement for the construction of a substantially high price.

As bactérias à superfície dos dentes orcvccam inflamaçães crónicas nas gengivas, à volta dos mesmos. As células inflam_a das excretam as suas enzimas de decomposição destinadas às bactérias mas que neste caso atacam as fibras de colagénio que ligam os dantes à gengiva e ao maxilar. As células à suoerfície da raiz do dente ou do cimento ficam sujeitas à destruição e o epitélio da membrana da mucosa oral desce ao longo dos den tes e produz as chamadas gretas na gengiva. Nestas gretas novas bactérias obtêm uma área protegida onde se podem desenvolver. Juntam-se mais células inflamadas nesta área e a decompjç sição dos tecidos e da membrana periodontal prcgride. As cél_u· las de cimento morrem e o osso da área alveolar é destruído. Geralmente este processo progride lentamente mas por vezes avança rapidamente. Após algum tempo os dentes atacados perdem completamsnte a sua ligação ao maxilar.The bacteria on the surface of the teeth cause chronic inflammation around the gums. The inflammatory cells excrete their decomposition enzymes for bacteria, but in this case they attack the collagen fibers that connect them before to the gums and the jaw. The cells on the surface of the root of the tooth or cement are subject to destruction and the epithelium of the oral mucosa membrane descends along the teeth and produces the so-called cracks in the gums. In these cracks new bacteria obtain a protected area where they can grow. More inflamed cells are added in this area and the decomposition of tissues and the periodontal membrane progresses. Cement cells die and bone in the alveolar area is destroyed. Usually this process progresses slowly but sometimes it moves quickly. After some time, the attacked teeth completely lose their connection to the jaw.

Hoje em, dia o tratamento é principalmente dirigido à remoção de depósitos bacterianos na superfície des dentes. JuanNowadays the treatment is mainly directed at the removal of bacterial deposits on the surface of teeth. Juan

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-6do so removem as bactérias, a inflamação da gengiva e da membrana periodontal cessa a o processo de decomooscção pára. 0 tratamento visa também evitar que ss formem novos depósitos bacterianos na superfície dos dentes. Assim, o tratamento tem como resultado parar a destruição da ligação dos dantes ao maxilar, mas a cura não implica a formação de nova membrana oeriodontai nem de novo cimento.-6do only remove the bacteria, the inflammation of the gums and the periodontal membrane ceases and the process of decomooscção stops. The treatment also aims to prevent ss from forming new bacterial deposits on the tooth surface. Thus, the treatment has as a result to stop the destruction of the connection of the former to the jaw, but the cure does not imply the formation of a new oeriodontai membrane or new cement.

Ma pesquisa que constitui a base do presente invento foi, de certo modo, surpreendente descobrir que a formação do cimen to é iniciada por uma fina camada precursora de esmalte que, durante o crescimento Ga raiz, se forma em toda a sua superfície. Esta camada de esmalte parece afectar as células das fibras de coiagénio da área, de modo a desenvolverem células fo_r madoras de cimento. Esta fina camada de esmalte parece reduzir-se muito durante o desenvolvimento do cimento mas, em certos casos, é possível observarem-se resíduos remanescentes.The research that forms the basis of the present invention was, in a way, surprising to discover that the formation of the cement is initiated by a thin precursor layer of enamel that, during the growth of the root, forms on its entire surface. This layer of enamel appears to affect the cells of the collagen fibers in the area, in order to develop cement forming cells. This thin layer of enamel appears to be greatly reduced during the development of the cement, but in some cases, it is possible to observe remaining residues.

Durante as investigações descobriu-se que se a dentina estiver exposta às células da membrana periodontal, por exemplo abrindo uma cavidade na superfície da raiz, o tratamento faz-se com um tecido de tipo ósseo, isto é, não estando as fibras a ligar o dente aos tecidos circundantes. Se, contudo, a cavidade aberta for coberta com um precursor de esmalte, daqui em diante denominado de matriz de esmalte, descobriu-se que se cria novo tecido de cimento normal. Nas primeiras experiências usou-se matriz de esmalte endógena mas verificou-se mais tarde que se obtinham os mesmos resultados favoráveis usando matriz de esmalte de espécies animais totalmente diferentes. Assim verificou-se que, em experiências com macacos, se pode induzir a formação de cimento cobrindo a cavidade aberta na superfície do dente com matriz de esmalte de origem, p. ex., porcina.During the investigations it was discovered that if the dentin is exposed to the cells of the periodontal membrane, for example opening a cavity in the root surface, the treatment is done with a bone type tissue, that is, the fibers are not connecting the surrounding tissues. If, however, the open cavity is covered with an enamel precursor, hereinafter called an enamel matrix, it has been found that new normal cement fabric is created. In the first experiments, an endogenous enamel matrix was used, but later it was found that the same favorable results were obtained using an enamel matrix of totally different animal species. Thus it was found that, in experiments with monkeys, it is possible to induce the formation of cement by covering the open cavity in the tooth surface with original enamel matrix, p. pig.

Por este invento fornecem-se técnicas para induzir a ligação entre partes de tecido vivo mineralizado pela formação renovada de tecido mineralizado em pelo menos uma das partes, caracterizando-se estas técnicas pela aplicação de um precursor de esmalte, também chamado matriz de esmalte, para induzir a ligação. D invento fornece uma composição para este uso, con67 529By this invention techniques are provided to induce the connection between parts of living mineralized tissue by renewed formation of mineralized tissue in at least one of the parts, these techniques being characterized by the application of an enamel precursor, also called enamel matrix, for induce bonding. The invention provides a composition for this use, according to 529

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tendo, como constituinte activo, essa matriz de esmalte.having this enamel matrix as an active constituent.

Como anteriormente se indicou, o invento é especialmente aplicável a terapias odontológicas, por exemplo, no tratamento da periodontite, isto á, nos dentes lassos, na transplantação de dentes ou na reintrodução de dentes que se desligaram por acidente. Contudo, o invento pode também ser usado para Facilitar a ligação de enxertos artificiais, por exemplo, enxertos de dentes, enxertos de substitutos ósseos como juntas artific_í ais para as ancas. 0 invento pode também ser usado para induzir a formação de tecido mineralizado nos substitutos ósseos a que se deseje ligar tendões. A matriz de esmalte usada na apl_i cação de técnicas de acordo com o presente invento pode ser convenientamente obtida de alguns mamíferos com os dentes ainda em desenvolvimento. Uma fonte adequada de matriz de esmalte es tá nos animais abatidos, p. ex., leitões ou vitelos que se sacrificam frequentemente enquanto os dentes estão ainda em deseje volvi mento, p. ex. nos leitões para abater com cerca de meio ano de idade. Preferem-se as espécies bovina ou porcina (isto é, gado ou porcos) mas também se podem utilizar outras espécies por exemplo carneiros e roedores que têm um crescimento cori tínuo dos dentes. Como fonte alternativa desta substância podem também utilizar-se células ou bactérias de culturas por técnicas de AON recombinante.As previously indicated, the invention is especially applicable to dental therapies, for example, in the treatment of periodontitis, that is, in loose teeth, in the transplantation of teeth or in the reintroduction of teeth that were accidentally disconnected. However, the invention can also be used to facilitate the attachment of artificial grafts, for example, tooth grafts, bone substitute grafts as artificial hip joints. The invention can also be used to induce the formation of mineralized tissue in bone substitutes to which tendons are to be attached. The enamel matrix used in the application of techniques according to the present invention can be conveniently obtained from some mammals with teeth still in development. A suitable source of enamel matrix is found in slaughtered animals, e.g. piglets or calves that are frequently sacrificed while the teeth are still in development, p. ex. piglets to slaughter at about half a year old. Bovine or porcine species (that is, cattle or pigs) are preferred, but other species, for example sheep and rodents that have a continuous growth of teeth, can also be used. As an alternative source of this substance, cells or bacteria from cultures can also be used by recombinant AON techniques.

A composição de acordo com o invento pode consistir apenas nesta matriz de esmalte, adequadamente misturada com água, mas pode também conter a matriz de esmalte combinada com um veículo, diluente ou adesivo, aceitáveis para o fim em vista. Para uso dentário o veículo ou diluente deve ser odontologicamente aceitável. A composição pode conter opcionalmente agentes estabilizadores ou conservantes com a finalidade de aumentarem a sua estabilidade durante o tempo de armazenagem. A ma triz dentária apenas em combinação com água deve contudo ser armazenada em refrigeração durante um certo período até ser usada.The composition according to the invention can consist only of this enamel matrix, suitably mixed with water, but it can also contain the enamel matrix combined with a vehicle, diluent or adhesive, acceptable for the intended purpose. For dental use, the vehicle or diluent must be dentically acceptable. The composition can optionally contain stabilizing agents or preservatives in order to increase its stability during the storage time. The dental matrix only in combination with water, however, should be stored in a refrigerator for a period of time before use.

invento revela um processo para tratamento da periodo_n tite que envolve a re-ligação dos dentes por indução da forma67 529invention discloses a process for treating period that involves reconnecting the teeth by inducing the shape67 529

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-6ção do cimento da raiz e do maxilar e uma ligação fisiológica entre eles por fibras de cclagánio. 0 processo caracteriza-se pela remoção do epitáiio (se estiver presente) da raiz do dente e pelo revestimento da raiz com uma camada de percursor oe esmalte dentário, também chamado matriz de esmalte.-6 cementation of the root and jaw and a physiological connection between them by cclagánio fibers. The process is characterized by the removal of the epithelium (if present) from the root of the tooth and by coating the root with a precursor layer and dental enamel, also called an enamel matrix.

Na aplicação preferida do invento no tratamento da psric dontite a área do dente atacado é submetida a uma incisão para expor a superfície da raiz, enquanto se remove o eoitélio possivelmente formado, e reveste-se então a superfície limpa da raiz com uma camada de matriz de esmalte ou de uma composição contenda a referida matriz de esmalte como constituinte activo, após o que o tecido de colagénio é reposto e opcionalmente ec sido para facilitar a cicatrização.In the preferred application of the invention in the treatment of psric dontite, the area of the attacked tooth is incised to expose the root surface, while removing the possibly formed eithelium, and then the clean root surface is coated with a matrix layer. of enamel or a composition comprises said enamel matrix as an active constituent, after which the collagen tissue is replaced and optionally dried to facilitate healing.

Como anteriormente se indicou o invento pode ser usado para além do tratamento da periodontite, na reimplantação ou zAs previously indicated, the invention can be used in addition to the treatment of periodontitis, in reimplantation or z

na transplantação de dentes. E relativamente frequente que jo. vens de tenra idade estejam sujeitos a acidentes de que resuite a deslocação de um ou de vários dentes. E este principalmente o caso dos dentes da frente. Recolocando rapidamente os dentes deslocados para obter-se uma boa cura com uma ligação normal ao maxilar. Em muitos casos este reposicionamento dos dentes não se pode realizar num espaço de tempo razoável e os dentes mantêm-se por um certo tempo em meio inadequado, fora da boca, p. ex. ao ar livre. As células da membrana periodontal na superfície da raiz foram então destruídas e, quando o dente é recolocado na boca, este não consegue obter uma ligação fisiológica acabando por cair ao fim de certo tempo. Até agora não foi revelado nenhum processo pelo qual se obtenha a regeneração de uma nova ligação. De acordo com a técnica do invento a mentira na periodontal morta do dente deslocado pode, contudo ser remo vida de modo adequado, mecânico ou químico, e aplica-se então a composição de matriz de esmalte à superfície desnudada da raiz. 0 dente é depois recolocado no seu alvéolo e fixado ligeiramente, por algumas semanas. Devido à nova matriz de esmal te na superfície da raiz cria-se uma nova camada de cimento e o dente obtém uma nova fixação.in transplanting teeth. It is relatively frequent that jo. young people are subject to accidents that result in the displacement of one or more teeth. This is especially the case for front teeth. Quickly replacing the dislocated teeth to obtain a good cure with a normal connection to the jaw. In many cases this repositioning of the teeth cannot take place within a reasonable time and the teeth are kept for some time in an inappropriate medium, outside the mouth, p. ex. outdoors. The cells of the periodontal membrane on the root surface were then destroyed and, when the tooth is replaced in the mouth, it fails to obtain a physiological connection and eventually falls off after a certain time. So far, no process has been revealed by which to regenerate a new connection. According to the technique of the invention, lying in the dead periodontal of the displaced tooth can, however, be removed in a suitable, mechanical or chemical way, and the enamel matrix composition is then applied to the bare root surface. The tooth is then replaced in its socket and slightly fixed for a few weeks. Due to the new enamel matrix on the root surface, a new layer of cement is created and the tooth obtains a new fixation.

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No que se refere à transplantação de dentes, isto é, transferência de dantes de um indivíduo para outro, verifica-se que os tecidos dos dentes transplantados são atacados por defesas imunológicas do receptor e decompostos muito rapidamente. Tã_m sido feitas tentativas para realizar transplantas entre indivíduos imunologicamente compatíveis. E s 13s tentativas têm contudo sido desencorajantes. Também não se tem mostrado razoável o recurso a tratamentos de longo termo com preparações farmacológicas supressoras da reacção de rejeição com o fim de manter um ou vários dentes transplantados. Não há portanto hoje nenhum método útil para o transplante de dentes que leve a uma prognose favorável a longo termo.With regard to the transplantation of teeth, that is, the transfer of teeth from one individual to another, it appears that the tissues of the transplanted teeth are attacked by the immune defenses of the recipient and decomposed very quickly. _M Ta been attempts to make transplantas between immunologically compatible individuals. And 13th attempts have however been discouraging. Nor has the use of long-term treatments with pharmacological preparations suppressing the rejection reaction been shown to be reasonable in order to maintain one or more transplanted teeth. Therefore, today there is no useful method for transplanting teeth that leads to a favorable prognosis in the long term.

Empregando contudo as técnicas de acordo com o presente invento, o problema pode ser resolvido removendo os dentes a serem transplantados do dador, removendo a polpa dos dentes, limpando o espaço da polpa s aplicando ao espaço da polpa o agente que enche a raiz. A membrana periodontal é mecânica ou quimicamente removida e a raiz do dente é coberta com a composição contendo a matriz de esmalte. 0 dente é então colocado na sua nova posição na boca do receptor . Mantém-se o dente numa posição fixa por um curto período de tempo e, devido à ma triz de esmalte, induzir-se-á uma formação endógena de tecido mineralizado que cobrirá o dente transplantado e permitirá a fixação do mesmo.However, employing the techniques according to the present invention, the problem can be solved by removing the teeth to be transplanted from the donor, removing the pulp from the teeth, cleaning the pulp space, and applying the agent that fills the root to the pulp space. The periodontal membrane is mechanically or chemically removed and the tooth root is covered with the composition containing the enamel matrix. The tooth is then placed in its new position in the receiver's mouth. The tooth is kept in a fixed position for a short period of time and, due to the enamel matrix, an endogenous formation of mineralized tissue will be induced to cover the transplanted tooth and allow its fixation.

De acordo com um outro aspecto preferido deste invento a composição da matriz de esmalte pode ser complementada com um tecido adesivo com base em fibrinogênio, Factor XIII (que é um factor de coagulação derivado do plasma) e trombina. Esta com posição complementar pode ser constituída oor uma oré-mistura de matriz de esmalte, fibrinogênio e Factor XIII, sendo a trom bina adicionada imediatamente antes da aplicação da composição ao local da cirurgia. A pré-rniistura pode conter opcionalmente aprotinina para reduzir a velocidade de decomposição. Um produ to comercial preferido para uso nesta composição complementar é Tisseel^ um selante de fibrina de dois componentes produzido e vendido por IMMUIMO AG, Viena, Áustria.According to another preferred aspect of this invention the enamel matrix composition can be complemented with a fibrinogen based adhesive fabric, Factor XIII (which is a plasma derived coagulation factor) and thrombin. This with complementary position can be constituted by an ore-mixture of enamel, fibrinogen and Factor XIII matrix, with thrombin being added immediately before the application of the composition to the surgery site. The pre-mixture can optionally contain aprotinin to reduce the rate of decomposition. A preferred commercial product for use in this complementary composition is Tisseel®, a two-component fibrin sealant produced and sold by IMMUIMO AG, Vienna, Austria.

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-3uuando se usa este adesivo de tecidos, a pre-mistura de matriz de esmalte, fibrinogénio, Fac tor XIII e , opcionalmente, aprotinina, ê misturada com uma sclução da tromtina e a composição resultante é então rapidamente aplicada ao local da cirurgia. do tratamento da pericdontite esta técnica Facilita muito a cirurgia. Assim, a adesão da composição â raiz é melhorada, a hemorragia pára, o posicionamento da aba nuco-perios. tal é muito simplificado e é eliminado o uso da sutura.When using this tissue adhesive, the enamel matrix premix, fibrinogen, Factor XIII and, optionally, aprotinin, is mixed with a solution of thrombin and the resulting composition is then quickly applied to the surgery site. of pericdontitis treatment this technique makes surgery much easier. Thus, the adhesion of the composition to the root is improved, the bleeding stops, the positioning of the neck flap. this is very simplified and the use of the suture is eliminated.

C invento será a seguir ilustrado por exemplos específicos. Os exemplos estão ligados a experiências odontoiógicas conduzidas em ratos, macacos e no homem. A exemplificação ê feita em ligação com os desenhos apensos:The invention will now be illustrated by specific examples. The examples are linked to odontoiologic experiments conducted in rats, monkeys and in man. The example is made in connection with the attached drawings:

n n Fig. 1 Fig. 1 mostra um shows a pormenor detail de uma secção recta of a straight section a t r av és a t r av és da raiz from the root de um on one dente com tooth with os tecidos the fabrics adjacentes, de um adjacent, from one macaco. monkey. A THE Fig. 2 Fig. 2 mostra um shows a pormeno r at least r de uma secção recta of a straight section da raiz from the root de um dente de vento. of a tooth wind. macaco, tratada de monkey, treated acorde com o processo do in- agree with the investor process A plantado THE planted Fig. 5 , sem Fig. 5 , without mostra um tratamento shows a treatment pormenor • detail • de um dente de maca of a litter tooth co, reim co, reim A THE Fig. 4 Fig. 4 mostra um shows a pormenor detail correspondente mas corresponding but num dente on a tooth

tratado de acordo com o invento.treated according to the invention.

A Fig. 5 mostra uma radiografia intra-oral tirada antes da operação ; eFig. 5 shows an intraoral radiography taken before the operation; and

A Fig. 6 mostra uma radiografia correspondente tirada após a operação.Fig. 6 shows a corresponding radiograph taken after the operation.

pormenor ampliado mostrado na Fig. 1 ilustra uma secção recta através da raiz de um dente de macaco, com cs tecidos adjacentes, normaimente e naturalmente ligada ao maxilar. Fntre o maxilar 1, onde os dentes estão ligados, e a raiz 7 do dente, a dentina, o chamado cimento 5 e a membrana peridontal 5 que fornecem a fixação do dente ao maxilar 1, encontram-se adjacentes à raiz 7 do dente.enlarged detail shown in Fig. 1 illustrates a straight section through the root of a monkey tooth, with adjacent tissues, normally and naturally connected to the jaw. Between the jaw 1, where the teeth are attached, and the root 7 of the tooth, the dentin, the so-called cement 5 and the peridontal membrane 5 that provide the fixation of the tooth to the jaw 1, are adjacent to the root 7 of the tooth.

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EXE F P L 0 3EXE F P L 0 3

Nos seguintes exemplos foi usado, como comoosiçSo ds tra tamento, um precursor de esmalte ou matriz oe esmalte, tecido obtido de porcos de matadouro sacrificados com cerca de 6 meses de idade e portanto com dentes em desenvolvimento. Isolam -se os germens dos dentes de mandíbulas de porcos limpas. Estes germens s3o constituídos por células produtoras de matriz de esmalte (o orgão produtor de esmalte), por matriz de esmalte, por dentina, por odontoblastos e por papilas. Os germens dos dentes, libertos das células produtoras de esmalte, são limpos a fim de isolar e recolher a desejada matriz de esmalte, obtendo-se uma massa semi-sólida, branca, que á homogeneizada com água para ganhar uma consistência de natas batidas. 0 hoco geneizador usado é o polytron fabricado por kinematica GmbH, Luzerna, Suiça. A composição obtida é então usada nos seguintes exemplos.In the following examples, as a treatment option, an enamel precursor or matrix and enamel, tissue obtained from slaughtered pigs slaughtered at around 6 months of age and therefore with developing teeth, was used. Germs are isolated from the teeth of clean pig jaws. These germs are made up of enamel matrix producing cells (the enamel producing organ), enamel matrix, dentin, odontoblasts and papillae. The germs of the teeth, freed from the enamel-producing cells, are cleaned in order to isolate and collect the desired enamel matrix, obtaining a semi-solid, white mass, which is homogenized with water to gain a consistency of whipped cream. The gene generator used is the polytron manufactured by kinematica GmbH, Luzern, Switzerland. The composition obtained is then used in the following examples.

EXE FPL 0 1EXE FPL 0 1

Um dente extraído de um macaco é exposto ao ar durante uma hora, sendo então removida a membrana pericdontal. A raiz do dente aplica-se uma fina camada de matriz de esmalte de le_i tão, produzida como acima se referiu sendo o dente recolocado na sua posição no queixai.A tooth extracted from a monkey is exposed to the air for one hour, then the pericdontal membrane is removed. The root of the tooth is applied with a thin layer of enamel matrix, produced as mentioned above, the tooth being returned to its position in the chin.

Na Fig. 2 mostra-se como após algumas semanas se formou uma nova membrana periodontal 5 entre o maxilar 1 e a raiz 7 do dente e como também se formou uma nova camada de cimento 3 entre a membrana periodontal 5 e a raiz 7 do dente. Devido ao uso da composição preparada pelo inventa a reimplantação do deri te de macaco realizou-se com sucesso com completa e renovada f_i xação do dente ao maxilar.In Fig. 2 it is shown how after a few weeks a new periodontal membrane 5 was formed between the jaw 1 and the root 7 of the tooth and how a new layer of cement 3 was also formed between the periodontal membrane 5 and the root 7 of the tooth. . Due to the use of the composition prepared by the inventions, the reimplantation of the monkey derive was successfully carried out with complete and renewed fixation of the tooth to the jaw.

EXEMPLO 2EXAMPLE 2

Este exemplo é uma comparação entre as curas de cavidades abertas em dentes de macaco, corr. e sem tratamento, usando as técnicas de acordo com o presente invento. Na Fig. 3 mostra -se um detalhe ampliado da área entre o maxilar 1 e a raiz 7 deThis example is a comparison of open cavity cures in monkey teeth, corr. and without treatment, using the techniques according to the present invention. Fig. 3 shows an enlarged detail of the area between the jaw 1 and the root 7 of

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-10uúi dento de macaco. Este dente foi primeiro extraído, escavotj -se uma cavidade na superfície da raiz do dente e recolocou-se □ dente no maxilar para cura. A ampliação, de acordo com a Fig. 3, mostra c estado da cura após 8 semanas, podendo varem-se apenas formadas pequenas áreas de tecido mineralizado tipo ósseo (ver as setas curvas).-10uuento monkey. This tooth was first extracted, a cavity was carved into the root surface of the tooth and a tooth was replaced in the jaw for healing. The enlargement, according to Fig. 3, shows the state of healing after 8 weeks, with only small areas of bone-like mineralized tissue varying (see curved arrows).

Na Fig. 4 mostra-se uma experiência conduzida do mesmo modo mas onde a cavidade criada foi cheia com a composição pre parada de acordo com o acima referido, antes de recolocar □ dente. Também aqui se mostra o estado da cura 3 semanas deoois, e está patente na figura como a membrana periodontal sarou bem.Fig. 4 shows an experiment conducted in the same way but where the created cavity was filled with the composition prepared according to the above, before replacing the tooth. Here, too, the state of healing is shown 3 weeks later, and the figure shows how well the periodontal membrane healed.

A figura mostra ainda como se formou na cavidade o novo cimento 3 (ver setas abrar.co).The figure also shows how the new cement 3 was formed in the cavity (see arrows abrar.co).

EXEMPLO 3EXAMPLE 3

A finalidade deste invento é mostrar a influência da coni posição promotora da fixação na cura de feridas periodontais marginais e experimentais. Criaram-se defeitos experimentais no periodonto marginal dos dentes de um macaco, por remoção do cimento dentário, da membrana periodontal e do osso alveolar marginal até uma distância cervico-apical de aproximadamen te 5 mm, com um instrumento dentário adequado. Aplicou-se então a composição aos defeitos experimentais e deixou-se a área sarar. Preparam-se também defeitos para controlo, deixados sa rar sem a aplicação da composição. Após o período de cura os resultados foram avaliados histologicamente.The purpose of this invention is to show the influence of the fixation-promoting condition on the healing of marginal and experimental periodontal wounds. Experimental defects were created in the marginal periodontium of a monkey's teeth, by removing dental cement, periodontal membrane and marginal alveolar bone up to a cervico-apical distance of approximately 5 mm, with a suitable dental instrument. The composition was then applied to the experimental defects and the area was allowed to heal. Defects for control are also prepared and left without the application of the composition. After the curing period, the results were evaluated histologically.

Os resultados mostram, de modo semelhante aos descritos nos exemplos anteriores, que a cura só foi obtida quando a com posição era aplicada. A cura compreendeu a formação de uma c_a mada aderente de cimento novo, de nova membrana peridontal e osso alveolar. Portanto, foi obtida uma nova fixação. Não foi este o caso dos dentes de controlo onde o defeito persistiu até ser coberto com epitélio oral. Estes resultados indicam que a composição é aplicável ao tratamento da periodontite.The results show, in a similar way to those described in the previous examples, that the cure was only obtained when the composition was applied. The cure included the formation of an adherent layer of new cement, a new peridontal membrane and alveolar bone. Therefore, a new fixation was obtained. This was not the case for control teeth where the defect persisted until it was covered with oral epithelium. These results indicate that the composition is applicable to the treatment of periodontitis.

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Folio Μ.45899 •d·'· · .Folio 45.45899 • d · '· ·.

-11EXEMPLO 4-11EXAMPLE 4

Este exemplo mostra a influência da composição promotora de fixação sobre a cura periodontal marginal a seguir ao tratamento da periodontite num animal experimental. Para a ex periência foram escolhidos macacos com periodontite naturaimen te ocorrente. Receberam cirurgia periodontal convencional após o que um lado experimental de cada animal foi tratado com aplicação da composição à superfície exposta das raízes. 0 ojj tro lado serviu como controlo. Após o período de cura os resultados foram avaliados histomorfometricamente.This example shows the influence of the fixation-promoting composition on marginal periodontal healing following treatment of periodontitis in an experimental animal. For the experience, monkeys with naturally occurring periodontitis were chosen. They received conventional periodontal surgery after which an experimental side of each animal was treated by applying the composition to the exposed surface of the roots. The other side served as a control. After the curing period, the results were evaluated histomorphometrically.

□s resultados mostraram que, após aplicação da composição, se criou uma nova fixação marginal consistindo em novo c_i mento aderente, nova membrana periodontal e novo tecido ósseo alveolar até ao nível correspondente da borda do cimento-esmal te. Nas figuras isto representa vários milímetros de nova fixação periodontal. Os dentes de controlo mostraram apenas um ganho insignificante e inconsistente de nova fixação sem qualquer cimento novo. Estes resultados recomendam a aplicação da composição para tratamento da periodontite também no homem.The results showed that, after applying the composition, a new marginal fixation was created consisting of a new adherent cement, a new periodontal membrane and a new alveolar bone tissue up to the corresponding level of the enamel cement edge. In the figures this represents several millimeters of new periodontal fixation. The control teeth showed only an insignificant and inconsistent gain in new fixation without any new cement. These results recommend the application of the composition to treat periodontitis in men as well.

EXEMPLO 5EXAMPLE 5

A finalidade deste exemplo é mostrar a influência da composição promotora de fixação sobre a periodontite marginal no homem. Após aprovação de The Smedish Medicai Board e de The Regional Ethics Comittee a composição foi usada como adjuvante do tratamento cirúrgico convencional de pacientes com periodontite marginal. Durante a operação foram removidos dos pacientes os cálculos dentários e tecidos de granulação. As superfícies desnudadas das raízes foram pintadas com a compo sição e cobertas com a aba muco-periostal. Os resultados da cura foram avaliados por inspecção clínica periódica, registo da profundidade da bolsa e índice ingival bem como por exame de radiografias intra-orais. Os resultados após aoiicação da composição foram comparados com estudos quantitativos anteriores sobre cirurgia periodontal convencional.The purpose of this example is to show the influence of the fixation-promoting composition on marginal periodontitis in men. After approval by The Smedish Medical Board and The Regional Ethics Committee, the composition was used as an adjunct to conventional surgical treatment of patients with marginal periodontitis. During the operation, dental calculi and granulation tissues were removed from the patients. The bare surfaces of the roots were painted with the composition and covered with the mucus-periosteal flap. The results of the cure were evaluated by periodic clinical inspection, recording of the depth of the pouch and ingestive index as well as by examination of intraoral radiographs. The results after applying the composition were compared with previous quantitative studies on conventional periodontal surgery.

Os resultados mostraram que a composição promoveu um si67 529The results showed that the composition promoted a si67 529

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-12gnificativo aumsnto da altura do osso alveolar marginal (Figs.-12 significant increase in the height of the marginal alveolar bone (Figs.

e 6). Estas Figuras mostram radiografias intra-orais tiradas antes (Fig. 5) e 6 meses depois (r ig. 6) da cirurgia peri_o dontal envolvendo a aplicação da composição promotora de fixa, ção. A radiografia pre-operativa (Fig. 5) mostra que o nível (seta) do osso alveolar (l) está situado quase no apex do dente. Seis meses após a aplicação da composição (Fig. ó) tinha-se formado uma quantidade significativa de novo osso alveolar (l) sendo o nível indicado por uma seta a meio da raiz, alguns milímetros acima da anterior. Tal cura nunca tinha sido verificada após cirurgia periodontal convencional. A cura parece progredir em geral mais rapidamente quer no que se refere à ap_a rência clínica quer na redução da profundidade da bolsa marginal quando comparada com anteriores estudos de cirurgia periodontal convencionai. Estes resultados mostram que a composição também é capaz de promover no homem uma nova fixação periodontal, resultado ainda não verificado nos tratamentos convencionais.and 6). These Figures show intraoral radiographs taken before (Fig. 5) and 6 months after (Fig. 6) the peri-frontal surgery involving the application of the fixation-promoting composition. The preoperative radiograph (Fig. 5) shows that the level (arrow) of the alveolar bone (l) is located almost at the apex of the tooth. Six months after the application of the composition (Fig. 3), a significant amount of new alveolar bone (1) had formed, the level being indicated by an arrow in the middle of the root, a few millimeters above the previous one. Such a cure had never been verified after conventional periodontal surgery. The cure seems to progress in general more quickly, both in terms of clinical appearance and in the reduction of the depth of the marginal pocket when compared to previous studies of conventional periodontal surgery. These results show that the composition is also capable of promoting a new periodontal fixation in man, a result not yet verified in conventional treatments.

EXEMPLO 6EXAMPLE 6

Este exemplo ilustra um método melhorado de aplicação da composição promotora de fixação na prática clínica. Pacientes com periodontite marginal foram tratados como se descreveu no Exemplo 5 com a única diferença de que um tecido adesivo com base em fibrina foi misturado com a composição. 0 tecido adesivo é composto de fibrinogénio, plasmafibronectina, Factor XIII (um factor de coagulação derivado do plasma), plasminogénio, aprotinina, trombina e cloreto de cálcio, produzido por IMMUNO AG, Uiena, Áustria. 0 tecido adesivo comercializado sob o nome de Tisseel ou Tissucol polimeriza após mistura dos seus vários componentes formando um coágulo aderente. Assim, a adição de Tisseel (Tissucol) à composição promotora de fix_a ção melhora a adesão à superfície da raiz, durante a cirurgia periodontal. Além disso, a hemorragia pára, facilitando a visibilidade e o posicionamento da aba muco-perios tal. A eba p_o de também ser posicionada mais cervicalmente sobre a superfície da raiz e a sutura pode ser eliminada. A cobertura da superfí. cie da raiz é essencial para se obter a cura visto que ela de67 529This example illustrates an improved method of applying the fixation-promoting composition in clinical practice. Patients with marginal periodontitis were treated as described in Example 5 with the only difference that a fibrin-based adhesive tissue was mixed with the composition. The adhesive tissue is composed of fibrinogen, plasma fibronectin, Factor XIII (a plasma-derived clotting factor), plasminogen, aprotinin, thrombin and calcium chloride, produced by IMMUNO AG, Uiena, Austria. The adhesive fabric sold under the name Tisseel or Tissucol polymerizes after mixing its various components to form an adherent clot. Thus, the addition of Tisseel (Tissucol) to the fixation-promoting composition improves adhesion to the root surface during periodontal surgery. In addition, the bleeding stops, facilitating the visibility and positioning of the mucous membrane flap. The eba can also be positioned more cervically on the root surface and the suture can be removed. The surface coverage. root is essential to obtain a cure as it de67 529

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termina, en ultimo lugar, a nova fixação.lastly, the new fixation ends.

EXEMPLO 7EXAMPLE 7

A finalidade deste exemplo é descrever a capacidade ind_u tora de tecido mineralizado da composição promotora de fixação. A composição foi colocada em cápsulas de gelatina intrjo duzidas no músculo abdominal de ratos, por operação. Ratos com operação idêntica foram usados como controlo. Após o período de cura os ratos foram mortos e avaliou-se a reacção dos tecidos, nas áreas da operação, por radiografias, histologia e incorporação de ^^Ca.The purpose of this example is to describe the mineralized tissue-inducing capacity of the fixation-promoting composition. The composition was placed in intravenous gelatin capsules placed in the abdominal muscle of rats, by operation. Mice with identical operation were used as controls. After the curing period, the rats were killed and the tissue reaction in the areas of the operation was evaluated by radiographs, histology and incorporation of ^^ Ca.

Os resultados mostraram que se formou um tecido minsralj. zado, semelhante a cimento, após a aplicação da composição.The results showed that a minsral tissue was formed. similar to cement, after applying the composition.

Nos ratos de controlo não se encontraram vestígios de tecido recentemente formado.In the control rats, no traces of newly formed tissue were found.

As experiências acima apresentadas mostram, sem qualquer ambiguidade, a aplicação prática e as vantagens do presente i_n vento. Por ter sido usada uma matriz de esmalte de porco em experiências com macacos, prova-se ainda que não é necessário usar uma matriz endógena de esmalte. Esta última descoberta representa evidentemente uma vantagem substancial pois signif_i ca que a matéria prima é facilmente acessível e oortanto assegurada.The experiences presented above show, without any ambiguity, the practical application and the advantages of the present i_n wind. Because a pig enamel matrix was used in experiments with monkeys, it also proves that it is not necessary to use an endogenous enamel matrix. This latest discovery evidently represents a substantial advantage as it means that the raw material is easily accessible and therefore assured.

Claims

1 - Process of preparing a composition to induce the bond between parts of living mineralized tissue by regenerating the mineralized tissue of at least one of the parts characterized by isolating the germs of the teeth from the mammalian jaws, releasing the said germs from the enamel from the organ, recover the enamel matrix from the said released germs and, optionally, mix it with a vehicle, solvent or adhesive acceptable for that purpose.

Process according to claim 1, characterized in that the isolation is carried out from a bovine or porcine source.

Process according to claim 1 or 2, characterized in that said vehicle, diluent or adhesive is biologically or odontologically acceptable.

4 - Process to induce the connection between parts of the mineralized living tissue, by regenerating the mineralized tissue of at least one of the parts, characterized by the removal of soft tissue, if present, from the junction site of at least one of the parts, applying to at least one of the parts a layer of an enamel precursor, also called matrix of the malt, and joining the parts in order to allow the connection, with regeneration, of the mineralized tissue.

5 - Process according to claim 4 for the treatment of periodontitis, characterized by treating the area of a tooth subject to attack, exposing the root surface, simultaneously removing the possibly formed epithelium, covering the clean root surface with a layer of enamel matrix or with a composition contends this matrix and replenishes the collagen tissue and, optionally, sews so as to allow healing.

Process according to claim 5, characterized by 529

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-15 used to isolate the enamel matrix from a mammal, for example bovine or porcine.

Process according to claim 5, characterized in that the enamel matrix is obtained by means of recombinant A D N techniques or by culturing diploid cells.