PT628073E

PT628073E - Ligacao ionica de biomassa microbiana

Info

Publication number: PT628073E
Application number: PT94902879T
Authority: PT
Inventors: Martin Neville Hughes; Robert Keith Poole; Sarah Melanie Bennett
Original assignee: Biotechna Environmental Intern
Priority date: 1992-12-16
Filing date: 1993-12-16
Publication date: 2000-10-31
Also published as: AU687769B2; AU5705494A; GB9325744D0; ATE192188T1; DE69328476D1; JPH07506006A; EP0628073A1; GB2274465A; GB2274465B; DE628073T1; WO1994013782A1; EP0628073B1; CA2129996A1; ES2064304T1; DE69328476T2; GB9226182D0

Description

85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ DESCRICÃO "Ligação iónica de biomassa microbiana"

Certas espécies microbianas têm aplicação comercial como uma fonte de produtos químicos finos, lípidos, polissacáridos e proteínas celulares simples. As superfícies de células microbianas são carregadas negativamente e portanto têm baixa afinidade para aniões, excepto em locais especificamente projectados para captação de aniões essenciais. A cianobactéria Spirulina p/atensis é bem conhecida no mercado da alimentação saudável, sendo uma bactéria não tóxica com valor nutritivo intrínseco. O seu teor de proteínas é de cerca de 50-70% de peso seco e a sua composição em aminoácidos é bem equilibrada. O seu teor de lípidos é da ordem de 11% de peso seco enquanto que o seu teor de vitamina B12 é provavelmente o mais elevado entre qualquer alimento animal ou vegetal não processado. Devido à falta de celulose na parede celular da Spirulina, esta é facilmente assimilada pelos seres humanos. Em algumas partes do Mundo a Spirulina é um alimento natural. A pesquisa nas indústrias farmacêutica e dos alimentos saudáveis demonstra que as deficiências de minerais na dieta podem ser aliviadas pela ingestão de minerais contidos em, e.g. comprimidos de minerais ou em mistura física ou combinação com um alimento transportador. No caso de compostos químicos solúveis contendo o mineral requerido, a digestão ou a assimilação podem ser demasiado rápidas para que o corpo absorva as quantidades benéficas.

Dois destes minerais metálicos ou metalóides, que são importantes e foram implicados na deficiência de minerais são o zinco e o selénio. Estes elementos, pelo menos na forma de iões em solução, desempenham um importante papel no metabolismo e na boa saúde geral. Enquanto existe uma necessidade geralmente para assegurar um nível adequado de biodisponibilidade de zinco e de selénio na dieta humana, têm havido problemas na incorporação de, por exemplo, minerais de zinco e selénio em suplementos para produtos alimentares.

85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ 2 A biomassa de Spirulina, por exemplo, contém baixas concentrações de metais captados da solução nutriente na qual as células cresceram. Amostras de Spirulina após combustão e redução a cinzas apresentavam 10% de metais do total de peso seco. O magnésio (na clorofila), o potássio e o sódio estavam de um modo geral sempre presentes.

Fizeram-se tentativas anteriores mas mal sucedidas para introduzir metais na Spirulina numa escala comercial para suplementar as quantidades de metais captadas naturalmente.

Os presentes inventores verificaram agora que uma gama de catiões metálicos essenciais ou desejáveis, do ponto de vista nutritivo, podem ser ligados à parede celular de biomassa microbiana e portanto aniões seleccionados podem ser nela fixados, os quais tornam a biomassa tratada adequada para a produção de suplementos minerais onde as espécies aniónicas são também essenciais ou desejáveis do ponto de vista nutritivo ou adequadas para utilizações em limpezas ambientais, onde se desejem remover aniões tóxicos, contaminantes ou outros aniões perigosos ou indesejáveis de um meio aquoso que os contenha.

De acordo com um aspecto da presente invenção proporcionam-se células de biomassa microbiana em que pelo menos uma espécie catiónica metálica é fixada à superfície das referidas células numa quantidade suficiente para tornar as referidas células eficazes para se ligarem a aniões, e em que pelo menos uma espécie aniónica está também ligada à superfície das referidas células.

De acordo com um segundo aspecto da presente invenção proporcionam-se células de biomassa de acordo com o referido primeiro aspecto, numa forma adequada para mistura com uma composição digerível para consumo por humanos ou animais, ou uma composição digerível contendo minerais que contém células de biomassa de acordo com o primeiro aspecto, ou qualquer sua característica preferida.

De acordo com um terceiro aspecto proporciona-se um método de preparação de células de biomassa microbiana o qual compreende:

85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ 3 proporcionar células de biomassa num meio de cultura, remover as referidas células do referido meio e lavá-las, suspender as células num meio tampão, adicionar uma quantidade da espécie catiónica requerida numa solução aquosa opcionalmente até à saturação dos locais para a sua ligação na parede celular, adicionar uma quantidade da espécie aniónica requerida em solução aquosa opcionalmente até à saturação dos locais para a sua ligação na parede celular, remover a biomassa tratada e lavá-la, e secar as células para formar um produto sólido.

De acordo com um quarto aspecto proporciona-se um método de preparação de uma composição de acordo com o segundo aspecto, através da mistura de células de biomassa tal como especificadas no primeiro aspecto, num estado seco, com um transportador ou diluente biologicamente aceitável, e conversão da mistura numa forma adequada para consumo por seres humanos ou animais.

De acordo com um quinto aspecto proporciona-se um método de redução da concentração de pelo menos uma espécie aniónica numa composição aquosa contendo a referida espécie, que compreende levar a referida composição aquosa a contacto íntimo com células de biomassa microbianas, às quais pelo menos uma espécie catiónica metálica tenha sido ligada numa quantidade suficiente para tornar as referidas células de biomassa receptivas a ligação com a referida pelo menos uma espécie aniónica. A biomassa pode ser tal como definida no primeiro aspecto com a condição de que as referidas espécies aniónicas estejam ausentes até que a referida composição aquosa tenha sido levada ao referido contacto íntimo.

De acordo com um sexto aspecto proporciona-se um aparelho construído e adaptado para realizar um método como definido no quinto aspecto, o qual 4 85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ compreende pelo menos um receptáculo contendo biomassa fixada a um suporte imobilizado, uma entrada para receber a referida composição aquosa e uma saída para a composição aquosa tratada, em que a biomassa é definida como em qualquer uma das reivindicações 1 a 7, com a condição de que as referidas espécies aniónicas estejam ausentes até que uma composição aquosa contendo a referida espécie aniónica a tratar tenha sido levada ao contacto íntimo com a referida biomassa.

Um tal aparelho pode compreender dois receptáculos, dispostos em série ou em paralelo. Se forem utilizados dois receptáculos em paralelo, é possível ter um meio de comutação para dirigir o escoamento no fluxo de um para o outro, enquanto o receptáculo que não está em uso é regenerado. A regeneração da biomassa nestes receptáculos pode ser efectuada por lavagem com ácido para remover os aniões e catiões ligados. Depois pode-se utilizar um escoamento de uma solução contendo catiões e.g. cloreto ou nitrato de zinco para fixar mais catiões de zinco na biomassa imobilizada.

Prefere-se que os catiões metálicos sejam divalentes ou trivalentes tais como catiões, preferivelmente catiões de elementos de metais de transição essencialmente não tóxicos, mais preferivelmente os que são minerais essenciais ou desejáveis para a dieta de seres humanos ou animais. Por exemplo preferem-se os seguintes catiões: Zn(ll), Cr(lll), Cu(ll), Mn(ll) e em menor extensão pode ser possível fixar catiões derivados de cobalto e magnésio uma vez que estes podem ser úteis como minerais em quantidades vestigiais.

Ligação de catiões metálicos a superfícies microbianas

Preferem-se os catiões metálicos que se ligam fortemente à superfície das células. Estes incluem os últimos metais de transição divalentes (preferivelmente elementos essenciais) ou espécies mais altamente carregadas. O zinco e o crómio são bons exemplos para composições digeríveis. Pode-se adicionar um catião metálico a superfícies de células titulando para uma suspensão das células uma solução do metal requerido até se poderem detectar em solução os catiões livres. É também possível saturar a superfície das células ligando vários metais diferentes, sequencialmente se desejado, ou mesmo em simultâneo. Isto pode ser realizado titulando os metais individuais sobre a superfície das células até uma fracção requerida da capacidade total das células para esse ião 85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ 5

metálico. A quantidade de catião carregada nas células pode também ser controlada por escolha das condições de pH ou, mais directamente, por escolha do agente tamponante. Qualquer espécie tamponante que contenha um grupo que ligue fortemente iões metálicos irá reduzir a ligação desse ião metálico às paredes celulares. Podem existir vários tipo alternativos de locais de ligação disponíveis na superfície das células com diferentes preferências para catiões metálicos.

De modo a que o leitor perito na arte possa seleccionar um material de biomassa apropriado e depois ligar os catiões metálicos de escolha à superfície da célula, pode-se utilizar uma técnica conhecida como polarografia de pulsos diferencial para monitorizar os resultados e indicar as capacidades de ligação quantitativas.

Por exemplo o leitor é referido a um artigo intitulado Differential pulse polarography: a method of directly measuring uptake of metal ions by live bactéria without separation of biomassa and médium - FEMS Microbiology Létters 92 (1992) pag. 181-186.

As espécies microbianas que são empregues para fins nutritivos são preferivelmente cianobactérias comestíveis, mais preferivelmente Spirulina. Para fins de limpeza de poluição ambiental, as espécies microbianas preferidas para a biomassa são preferivelmente bacterianas, mais preferivelmente cianobacterianas e ainda mais preferivelmente Spirulina elou Bacillus.

Ligação de aniões à biomassa tratada com catiões metálicos

Quando se ligam aniões às superfícies de células carregadas com catiões pode haver competição entre a ligação do anião requerido e a ligação de quaisquer outros aniões presentes na solução (usualmente o contra-anião adicionado com o ião metálico). Para a ligação máxima do anião requerido verificou-se que é preferível preparar as superfícies das células utilizando sais nitrato de metais em vez de cloretos, por exemplo, verificou-se que aniões nitrato se ligam menos fortemente aos centros metálicos do que aniões cloreto. Contudo como os requisitos de selénio biodisponível em composições de suplementos digeríveis (tais como comprimidos de minerais ou outro alimento) são muito inferiores aos requisitos de zinco, prefere-se utilizar cloreto de zinco 85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ 6

quando se ligam as superfícies das células a catiões de zinco, uma vez que isto pode resultar subsequentemente em ocupação apenas parcial do total dos locais catiónicos disponíveis por oxianiões de selénio.

Os aniões de ligação para utilização na preparação eventual de composições digeríveis contendo os elementos minerais essenciais e/ou desejáveis são preferivelmente oxianiões metalóides e/ou não metálicos, por exemplo selenito Se032', selenato Se042', ou borato B033\ Estes podem proporcionar uma fonte de dieta conveniente de selénio biodisponível (ou boro) especialmente em combinação com, de outro modo derivados de células de biomassa que podem melhorar a captação biológica.

De modo a que todos os aspectos da presente invenção possam ser mais facilmente apreciados e prontamente levados a efeito, descrevem-se agora suas concretizações preferidas puramente a título de exemplo não limitativo. Quando são dadas explicações de mecanismos ao longo deste fascículo estas são apenas para ilustração e apenas possíveis explicações e não devem ser consideradas como afirmações que se prendam aos requerentes. A invenção em todos os seus aspectos é baseada numa nova abordagem aos problemas da ligação de espécies aniónicas à superfície negativamente carregada de biomassa, por exemplo, ligação de oxianiões de selénio a Spirulina, para proporcionar o selénio mineral forma biodisponível. Determinámos agora, de forma surpreendente, métodos para o tratamento das paredes celulares de biomassa microbiana tal como cianobactérias comestíveis, para melhorar amplamente a sua capacidade para captar este elemento mineral metalóide. A invenção pode ser levada a efeito com outros tipos de biomassa incluindo leveduras, bactérias e cianobactérias diferentes.

De modo a realizar concretizações úteis da invenção, a parede celular ou a superfície das bactérias comestíveis Spirulina pode ser saturada com uma solução aquosa contendo catiões metálicos tais como Zn2+ ou Cr3 + . Verificou-se inesperadamente que quando quantidades suficientes de catiões tais como estes eram ligadas à superfície das células, tornava-se então exequível ligar subsequentemente aniões e.g. oxianiões metalóides ou não metálicos, à superfície das células. Verificou-se que iões de zinco se ligavam

85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ 7 relativamente com facilidade à superfície de Spirulina e que os locais de ligação disponíveis aparentemente podiam ser saturados tratando e.g. Spirulina platensis com concentrações apropriadas do ião de zinco utilizando uma solução aquosa de um sal de zinco. A determinação da captação de zinco e da capacidade para captação de outro catião metálico pode ser estabelecida utilizando a anteriormente mencionada polarografia de pulsos diferencial.

Adicionalmente, verificou-se que a adição de aniões adequados, desejáveis do ponto de vista nutritivo e.g. Se032\ Se042', ou B032‘ à suspensão de Spirulina combinada com ião de zinco, resulta numa captação mais sinergética do ião de zinco da solução. O oxianião de selénio pode ser ligado aos iões de zinco em "ponte" na superfície de Spirulina, ou ser fixado a outros locais de ligação disponíveis na superfície das células o que bastante inesperadamente parece ter o efeito mais sinergético da captação, i.e. a ligação à superfície da célula do ião de zinco. O ião selenito, como exemplo de um anião de ligação potencialmente útil, parece ser captado em quantidades por Spirulina platensis que dependem do pH da solução aquosa que contém esses iões, e/ou da natureza da solução tampão na qual é mantida a biomassa.

Estão contempladas composições digeríveis tais como suplementos alimentares ou comprimidos de minerais contendo e.g. selénio e/ou zinco juntamente com um ou mais elementos minerais essenciais ou desejáveis do ponto de vista nutritivo, na forma das suas sespécie aniónicas correspondentes. Por exemplo numa biomassa é possível ligar selénio, zinco, manganês, crómio e boro na forma das suas espécies iónicas correspondentes. Quando os elementos minerais requeridos foram fixados à superfície da célula de Spirulina, as células podem ser filtradas da suspensão, lavadas, secas, e adicionalmente processadas em comprimidos ou outra forma de suplemento. Uma vantagem particular consiste em que pode ser preparado um produto alimentar com elevado teor de proteínas, com quantidades controladas de modo preciso de elementos minerais adequados, numa forma que se presta a captação biológica adequada.

De modo a realizar o método sob condições de crescimento cuidadosamente controladas para a biomassa, verificou-se ser particularmente

85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ 8 conveniente utilizar um aparelho especialmente projectado para a produção de biomassa fabricado e vendido por Biotechna Limited com a marca registada BIOCOIL. Para uma descrição e ilustração deste fotobiorreactor com serpentina, o leitor é referido à descrição e desenhos de EP-A-0 239 372.

Aplicações em limpeza ambiental. A presente invenção pode também ser utilizada em métodos de remoção de espécies aniónicas tóxicas tais como selenato por "biossorção" para a superfície de células microbianas. Em algumas regiões do Mundo existem selénio ou outras espécies iónicas tóxicas em excesso na água e portanto é desejável reduzir a sua concentração. Assim, a invenção encontra aplicação não apenas na produção de composições digeríveis que contêm selénio como mineral essencial do ponto de vista nutritivo, para consumo por seres humanos ou animais, como também encontra aplicação na redução dos níveis de principalmente espécies aniónicas normalmente associadas a poluição de água ambiental. Por exemplo a invenção pode ser utilizada para a remoção de aniões contaminantes, possivelmente tóxicos de água que os contenha. A biomassa tratada com catiões pode assim ser utilizada, por exemplo, como sequestrante saturada de catiões ligada a um suporte imobilizado para a remoção de aniões contaminantes indesejados tais como arsenato, cromato ou complexos de cloro, de metais preciosos de correntes de processo e efluentes e outros contaminantes aniónicos contendo metais de processos industriais. Adicionalmente, os aspectos da presente invenção que estão relacionados com a limpeza ambiental de espécies aniónicas contaminantes dissolvidas em água podem ser particularmente atractivos uma vez que as células de biomassa se prestam a possível regeneração. Por exemplo quando as células de biomassa num suporte imobilizado ficam suficientemente carregadas com, ou mesmo saturadas com a espécie aniónica contaminante, os aniões e catiões podem ser removidos com soluções ácidas apropriadas e depois a biomassa pode ser reactivada através de carga com a espécie catiónica adequada, e.g. iões de zinco, para subsequente reutilização.

Utilizou-se o seguinte procedimento dos Exemplos 1 a 4 para preparar amostras carregadas de zinco de Spirulina platensis que puderam então ser utilizadas para ligar espécies iónicas negativamente carregadas, i.e. os aniões seleccionados.

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Exemplo 1

Fez-se ο crescimento de uma cultura de 200 ml de Spirulina platensis num meio Standard. Separaram-se as células do meio de crescimento por centrifugação, lavaram-se com água e suspenderam-se num tampão HEPES a pH 7,4. Colocou-se uma amostra de 0,9 ml desta suspensão numa célula polarográfica e adicionou-se uma solução 50 mM de um sal de zinco (quer nitrato quer cloreto) com agitação até as medições polarográficas indicarem a presença de iões de zinco livres em solução. Nesta etapa os locais de ligação para o zinco nas superfícies de células Spirulina estavam saturados. A cultura de Spirulina foi então tratada com um volume proporcional da solução de zinco, com agitação, de modo a que os locais de ligação para o zinco em toda a suspensão ficassem completamente saturados. 0 teor de zinco da Spirulina foi confirmado por digestão com ácido de uma amostra da cultura carregada de zinco e medição directa do zinco por análise de absorção atómica. Esta medição não era essencial mas serviu para confirmar a precisão da titulação polarográfica. Adicionou-se então uma solução aquosa de selenito de sódio 50 mM ou selenato de sódio 50 mM (de volume igual ao da solução de zinco 50 mM) à suspensão de células de Spirulina carregadas de zinco e deixou-se em espera com agitação suave durante alguns minutos. Removeu-se a Spirulina por centrifugação, lavaram-se as células com água e criodessecou-se a suspensão para obter um produto sólido. A quantidade de selénio no produto dependia da identidade do contra-anião adicionado com o zinco, uma vez que estes competem com os oxianiões de selénio para os locais.

Exemplo 2

Repetiu-se o Exemplo 1 em escalas maior e menor, cada uma repetida seis vezes com resultados consistentes.

Exemplo 3

Trataram-se Spirulina platensis e Bacillus subtilis saturados com zinco com soluções contendo aniões selenato ou selenito e monitorizou-se a extensão da captação observando a diminuição da concentração desse anião em solução. Investigou-se também o efeito de iões cloreto sobre a captação de selenito por células de Spirulina platensis preparadas utilizando cloreto de zinco. Tratou-se o produto com uma solução de selenito de sódio contendo um número de moles 10 85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ igual ao do zinco ligado à superfície. Verificou-se que as células carregadas de zinco captaram cerca de 4 mg de selenito por grama de peso seco de células, cerca de duas vezes a quantidade de selenito captado por células sem zinco, substancialmente menos do que se antecipava. Esta queda na captação de selenito resultou da competição com o cloreto. O selenito ligou-se ao zinco, uma vez que o zinco e o selénio apenas podiam ser removidos juntos, por exemplo por lavagem repetida das células com ácido.

Exemplo 4

Adicionaram-se vários metais essenciais do ponto de vista nutritivo, sozinhos ou em combinação, às células de Spirulina, através de um procedimento semelhante ao que anteriormente se descreveu. Utilizaram-se as células carregadas de metal para ligar várias espécies aniónicas, incluindo iões borato e selenato.

Exemplo 5

Utilizando um procedimento semelhante ao do Exemplo 1, prepararam-se amostras de Spirulina Platensis e Baciiius subtiiis, um organismo gram-positivo com uma elevada capacidade para ligação de catiões metálicos. Em ambos os casos ligaram-se vários tipos de catiões, sozinhos ou em combinação, à superfície das células para saturar os locais de ligação disponíveis na biomassa. Ligaram-se sozinhos ou em combinação, em simultâneo e sequencialmente, os catiões de zinco(ll), crómio(lll), cobre(ll), manganês (II), cádmio(ll) e chumbo(ll) às superfícies das células, os dois últimos para ilustração uma vez que estes são indesejáveis para a dieta dos seres humanos ou animais. Em aplicações que não a limpeza ambiental, pode não ser necessário saturar os locais de ligação para catiões.

Para todos estes catiões descritos com a excepção do crómio, a ligação do metal foi directa e foi usualmente máxima a cerca de pH 6 a 8, com capacidades de ligação típicas de cerca de 30 mg por grama de biomassa, embora dependessem do pH e do tipo de tampão. No caso de Spirulina platensis, as técnicas polarográficas mostraram que a pH 7,4 se pode adicionar um máximo de 310 mg de zinco por grama de peso seco de Spirulina (para saturação dos locais de ligação). Isto foi confirmado por análise directa das células por espectroscopia de absorção atómica. Pode ser adicionada qualquer 11 85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ quantidade de zinco até este limite. A pH 4,5, a captação foi substancialmente inferior a 18 mg por grama de peso seco. No caso do Bacillus subtiiis, a pH 4,5 este valor foi reduzido para 3,3 mg.

Esperava-se que a ligação de crómio(lll) à superfície das células ocorresse lentamente em comparação com os outros catiões. A análise polarográfica de soluções de cloreto de hexa-aquacrómio(lll) mostrou a formação de uma segunda espécie após espera. Mostrou-se que esta era o primeiro produto da hidrólise do catião hexa-aquacrómio(lll), nomeadamente o dímero ligado por pontes de hidroxi. A monitorização polarográfica contínua da solução na presença de Spirulina p/atensis mostrou que o dímero era rapidamente captado para a superfície das células enquanto a espécie original era captada mais lentamente. O Cr(lll) era o que estava ligado mais firmemente de todos os metais às superfícies das células e não podia ser desalojado por outros metais de transição ou ácido diluído.

Mostrou-se que diminuindo o pH do tampão no qual está suspensa a cianobactéria Spirulina piatensis resultam maiores afinidades de ligação para oxianiões de selénio (por exemplo) uma vez que a protonação de locais negativos aumenta a possibilidade de que a espécie carregada negativamente se ligue à parede celular. Contudo, os locais aniónicos nas superfícies das células são neutralizados mais eficazmente por ligação de catiões metálicos em vez de protões, uma vez que a primeira espécie terá cargas positivas maiores, de modo a permitir a produção de centros carregados positivamente para ligação de aniões.

Lisboa, 21 JUL 2000

Por BIOTECHNA ENVIRONMENTAL INTERNATIONAL LIMITED

Claims

85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ 1/3 REIVINDICAÇÕES 1. Células de biomassa microbianas isoladas em que são ligados catiões de pelo menos uma espécie catiónica metálica até à saturação, à superfície das referidas células tornando as referidas células mais eficazes para se ligarem a aniões, e em que são também ligados aniões de pelo menos uma espécie aniónica às referidas células de biomassa.
2. Células de biomassa microbianas bacterianas em que são ligados catiões de pelo menos uma espécie catiónica metálica até à saturação, à superfície das referidas células tornando as referidas células mais eficazes para se ligarem a aniões, e em que são também ligados aniões de pelo menos uma espécie aniónica às referidas células de biomassa.
3. Células de biomassa de acordo com a reivindicação 1 ou 2 em que são fixadas uma pluralidade de diferentes espécies catiónicas metálicas às referidas células.
4. Células de biomassa de acordo com a reivindicação 1 ou 2 às quais estão também fixadas uma pluralidade de diferentes espécies aniónicas.
5. Células de biomassa de acordo com qualquer reivindicação anterior que são derivadas de cianobactérias comestíveis.
6. Células de biomassa de acordo com a reivindicação 5 derivadas de bactérias do género Spiru/ina ou Bacillus.
7. Células de biomassa de acordo com qualquer reivindicação anterior, em que a espécie catiónica compreende uma ou mais das seguintes, nomeadamente os catiões derivados de zinco, crómio, cobre, manganês, cobalto e magnésio.
8. Células de biomassa de acordo com qualquer reivindicação anterior em que os aniões compreendem oxianiões de um ou mais metalóides e/ou oxianiões de um ou mais não metais.

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9. Células de biomassa de acordo com qualquer reivindicação anterior numa forma adequada para mistura numa composição digerível para consumo por seres humanos ou animais.
10. Células de biomassa de acordo com a reivindicação 8 ou 9 compreendendo catiões de zinco e um ou mais dos seguintes oxianiões: selenato, selenito e borato. 1. Método de preparação de células de biomassa microbianas de acordo com qualquer das reivindicações anteriores que compreende: proporcionar células de biomassa num meio de cultura, remover as referidas células do referido meio e lavá-las, suspender as células num meio tampão, adicionar uma quantidade da espécie catiónica requerida em solução aquosa até à saturação dos locais para a sua ligação na parede celular, adicionar uma quantidade da espécie aniónica requerida em solução aquosa opcionalmente até à saturação dos locais para a sua ligação na parede celular, remover a biomassa tratada e lavá-la, e secar as células para formar um produto sólido.
12. Método de acordo com a reivindicação 11 em que são adicionados catiões de mais do que uma espécie catiónica em simultâneo ou sequencialmente.
13. Método de acordo com a reivindicação 11 ou 12 em que são adicionados aniões de mais do que uma espécie aniónica em simultâneo ou sequencialmente.
14. Composição digerível contendo minerais que contém células de biomassa de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10.
15. Método de preparação de uma composição de acordo com a 85361 ΕΡ Ο 628 073/ΡΤ 3/3 reivindicação 14 que compreende a mistura de células de biomassa de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, num estado seco, com um transportador ou diluente biologicamente aceitável, e a conversão da mistura numa forma adequada para consumo por seres humanos ou animais.
16. Método de redução da concentração de pelo menos uma espécie aniónica numa composição aquosa contendo a referida espécie, que compreende levar a referida composição aquosa ao contacto íntimo com células de biomassa microbianas, às quais pelo menos uma espécie catiónica metálica foi ligada numa quantidade para saturação dos locais para a sua ligação na parede celular, sendo suficiente para tornar as referidas células de biomassa receptivas para ligação da referida pelo menos uma espécie aniónica.
17. Método de acordo com a reivindicação 16 que adicionalmente envolve fazer com que as referidas células de biomassa sejam regeneradas com a mesma espécie catiónica metálica ou uma diferente, depois da espécie aniónica se ter ligado à referida biomassa.
18. Método de acordo com a reivindicação 16 ou 17 em que a biomassa utilizada compreende biomassa tal como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, com a condição de que as referidas espécies aniónicas estejam ausentes até que a referida composição aquosa tenha sido levada ao referido contacto íntimo. Lisboa, 21 JUL 2000 Por BIOTECHNA ENVIRONMENTAL INTERNATIONAL LIMITED - O AGENTE OFICIAL-

ENG* ANTÓNIO J0A0 DA CUNHA FERRE1RA Ag. 0|. Pr. Ind. Ruo dos Flores, 74 - 4.· 1E0O LISBOA