PT100486B - LIPOSOMAL AMINOGLUCOSIDS WITH HIGH EFFECTIVENESS OF ENCAPSULATION AND THERAPEUTIC ACTIVITY, IN ADDITION TO NETILMYCIN, AND PROCESS FOR THEIR PREPARATION - Google Patents

LIPOSOMAL AMINOGLUCOSIDS WITH HIGH EFFECTIVENESS OF ENCAPSULATION AND THERAPEUTIC ACTIVITY, IN ADDITION TO NETILMYCIN, AND PROCESS FOR THEIR PREPARATION Download PDF

Info

Publication number
PT100486B
PT100486B PT100486A PT10048692A PT100486B PT 100486 B PT100486 B PT 100486B PT 100486 A PT100486 A PT 100486A PT 10048692 A PT10048692 A PT 10048692A PT 100486 B PT100486 B PT 100486B
Authority
PT
Portugal
Prior art keywords
liposomal
liposomes
antibiotic
lipid
netylmycin
Prior art date
Application number
PT100486A
Other languages
Portuguese (pt)
Other versions
PT100486A (en
Inventor
Maria Eugenia Meirinhos D Cruz
Isabel M Costa Mimo Carvalhosa
Ana Paula Gameiro Francisco
Original Assignee
Ineti Inst Nac Engenh E Tecnol
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ineti Inst Nac Engenh E Tecnol filed Critical Ineti Inst Nac Engenh E Tecnol
Priority to PT100486A priority Critical patent/PT100486B/en
Priority to PCT/PT1993/000001 priority patent/WO1993023015A1/en
Publication of PT100486A publication Critical patent/PT100486A/en
Publication of PT100486B publication Critical patent/PT100486B/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

The invention refers to liposomal formulations containing an antibiotic, comprising drug/lipid ratios up to 10 mg/100 mg lipid, the size of liposomes ranging from 5 mu m to 0.01 mu m and the encapsulation efficiencies typically being greater than 60 %. The liposomal antibiotics, when administered to animals, increase the half-life circulation time in plasma, efficiently reduce the acute toxicity and increase the antimicrobial activities, compared to the free drugs. The invention also refers to a process for the preparation of liposomal formulations comprising forming multilamellar liposomes containing the antibiotic and subjecting the liposomes to lyophilization, rehydration and optionally extrusion under pressure.

Description

Esta invenção relaciona-se com a preparação de lipossomas de misturas de glicerofosfolípidos (e.g. PC, DMPC, DPPC) com colesterol e moléculas carregadas, lipidicas ou não (e.g. SA, PI, DcP), nas proporções 50 a 807o, 10 a 307o e 10 a 507 respectivamente, todas para encapsulação de netilmicina. O tratamento final dos lipossomas é aquele que se obtém depois daThis invention relates to the preparation of liposomes from mixtures of glycerophospholipids (eg PC, DMPC, DPPC) with cholesterol and charged molecules, lipid or not (eg SA, PI, DcP), in the proportions 50 to 807o, 10 to 307o and 10 to 507 respectively, all for encapsulation of netylmycin. The final treatment of liposomes is that which is obtained after

preparação lipossomal ser filtrada por membranas de policarbonato, com poro final sucessivamente decrescente desde 3 pm a 0,01 pm.liposomal preparation to be filtered through polycarbonate membranes, with successively decreasing final portion from 3 pm to 0.01 pm.

Os aminoglucósidos, incluindo a netilmicina, são antibióticos bactericidas usados em clinica no combate de infecções graves causadas por bactérias gram-negativas, incluindo tuberculose, brucelose, septicémia, peritonite, pneumonia, infecções de tracto urinário e outras, que não respondam normalmente a outras classes de antibióticos (1, 2, 3, 4, 5). No entanto, a administração de aminoglucósidos, e da netilmicina em particular, apresenta efeitosAminoglucosides, including netilicin, are bactericidal antibiotics used in the clinic to fight serious infections caused by gram-negative bacteria, including tuberculosis, brucellosis, septicemia, peritonitis, pneumonia, urinary tract infections and others, which do not normally respond to other classes of antibiotics (1, 2, 3, 4, 5). However, the administration of aminoglucosides, and netylmycin in particular, has

laterais graves sendo o principal a nefro e ototoxicidade. Dos efeitos nefrotóxicos salienta-se a alteração da capacidade de reabsorção tubular e alterações da morfologia renal. Em relação aos efeitos ototóxicos salienta-se a toxicidade vestibular e coclear, possuindo tendência para lesarem o 8° par de nervos craneanos (1, 5).severe side effects, the main one being nephro and ototoxicity. The nephrotoxic effects include changes in the tubular resorption capacity and changes in renal morphology. Regarding the ototoxic effects, vestibular and cochlear toxicity stands out, with a tendency to damage the 8th pair of cranial nerves (1, 5).

Os lipossomas foram usados em modelos animais como veículos de transporte de aminoglucósidos nomeadamente a gentamicina, tendo mostrado evidência de serem protectores contra os referidos efeitos de toxicidade (6, 7, 8). No entanto as formulações desenvolvidas são obtidas a partir de razões elevadas de fármaco / lipido, apresentando eficácias de encapsulação baixas.Liposomes have been used in animal models as aminoglycoside transport vehicles, namely gentamicin, and have shown evidence of being protective against said toxicity effects (6, 7, 8). However, the formulations developed are obtained from high drug / lipid ratios, with low encapsulation efficiencies.

Com o presente processo pretende-se obter formulações lipossomais de netilmicina com elevada eficácia de encapsulação, baixa toxicidade e elevada actividade terapêutica.The present process aims to obtain liposomal formulations of netilmycin with high encapsulation efficiency, low toxicity and high therapeutic activity.

A presente invenção compreende um processo de desidratação-reidratação, seguida por uma extrusão através de filtros de policarbonato. Este processo nunca foi até agora usado para a netilmicina. Do processo destacam-se os principais passos que são: a) o uso de lipossomas multilamelares (MLV) contendo fármaco intra e extra-lipossomal; b) o uso de dextrose na fase de hidratação; c) a abolição dos passos de congelamento-descongelamento antes da liofilização; d) o elevado volume de diluição dos lipossomas antes da extrusão; e) uso dos lipossomas para extrusão sem serem previamente separados da fármaco extra-lipossomal.The present invention comprises a dehydration-rehydration process, followed by an extrusion through polycarbonate filters. This process has never before been used for netilmicina. The main steps of the process are: a) the use of multilamellar liposomes (MLV) containing intra- and extra-liposomal drugs; b) the use of dextrose in the hydration phase; c) the abolition of the freeze-thaw steps before freeze-drying; d) the high volume of dilution of the liposomes before extrusion; e) use of liposomes for extrusion without being previously separated from the extra-liposomal drug.

Assim, de acordo com a presente invenção uma solução de lipido (10 mg/ml - 100 mg/ml) em clorofórmio é sujeita a um fluxo de N2 até formação de um filme lipidico seco. Adiciona-se então uma solução aquosa de fármaco (0,05 mg/ml - 2,4 mg/ml) que é vigorosamente agitada com vortex até hidratação completa da película de lipido. A preparação de lipossomas multilamelares assim obtida é congelada em azoto líquido e liofilizada. 0 pó branco seco resultante é então hidratado em dois passos sucessivos consistindo em (i) adição de solução de dextrose 57», 1/10 do volume de solução de fármaco usada, agitação vigorosa com vortex e 30 minutos de repouso e (ii) adição de soro fisiológico, 9/10 do volume de solução de fármaco usada. A preparação reidratada é diluída com 5 a 10 volumes de soro fisiológico e sujeita a um processo de filtração sob pressão através de membranas de policarbonato de poro sucessivamente decrescente, e.g. entre 3 pm e 0,01 pm. Finalmente a solução de lipossomas é concentrada por ultracentrifugação a 250 000 x g durante 30 minutos e o sedimento ressuspenso em soro fisiológico.Thus, according to the present invention a solution of lipid (10 mg / ml - 100 mg / ml) in chloroform is subjected to a flow of N2 until a dry lipid film is formed. An aqueous drug solution (0.05 mg / ml - 2.4 mg / ml) is then added which is vortexed vigorously until complete hydration of the lipid film. The preparation of multilamellar liposomes thus obtained is frozen in liquid nitrogen and lyophilized. The resulting dry white powder is then hydrated in two successive steps consisting of (i) addition of 57 ”dextrose solution, 1/10 of the volume of drug solution used, vigorous vortexing and 30 minutes of rest and (ii) addition of saline, 9/10 of the volume of drug solution used. The rehydrated preparation is diluted with 5 to 10 volumes of saline and subjected to a process of pressure filtration through successively decreasing pore polycarbonate membranes, e.g. between 3 pm and 0.01 pm. Finally, the liposome solution is concentrated by ultracentrifugation at 250,000 x g for 30 minutes and the pellet is resuspended in saline.

presente processo é mais simples que o usado por outros autores para encapsulação de aminoglucósidos (8), pois parte de lipossomas multilamelares contendo fármaco, em vez de preparar lipossomas vazios aos quais é adicionado o fármaco posteriormente; não usa passos de congelamento e descongelamento antes de liofilização como fazem outros autores (8); prepara lipossomas isosmolares com o plasma humano utilizando dextrose; aumenta a eficácia de encapsulação utilizando, antes da extrusão, lipossomas sem serem previamente separados do fármaco extralipossomal.the present process is simpler than that used by other authors for encapsulation of aminoglucosides (8), since it starts with multilamellar liposomes containing drug, instead of preparing empty liposomes to which the drug is added later; does not use freezing and thawing steps before freeze drying as other authors do (8); prepares isosmolar liposomes with human plasma using dextrose; increases the efficiency of encapsulation using, prior to extrusion, liposomes without being previously separated from the extraliposomal drug.

As formulações assim obtidas apresentam eficácias de encapsulação superior a 607» sem alteração da aetividade biológica in vitro.The formulations thus obtained have encapsulation efficiencies greater than 607 »without altering the biological activity in vitro.

Quando injectadas em murganhos formulações de netilmicina preparadas pelo presente processo mostraram tempos de semi-vida no plasma 12 a 18 vezes superiores aos do fármaco livre.When injected into mice, netylmycin formulations prepared by the present process showed plasma half-life times 12 to 18 times longer than the free drug.

Estudos de toxicidade aguda in vivo demonstraram que a dose letal 50 para as formulações lipossomais de netilmicina é muito superior (> 50 mg/Kg) à dose letal 50 para a netilmicina livre (20-24 mg/Kg).Acute in vivo toxicity studies have shown that the lethal dose 50 for liposomal formulations of netilmycin is much higher (> 50 mg / kg) than the lethal dose 50 for free netylmycin (20-24 mg / kg).

Num modelo de peritonite in vivo, usando uma suspensão bacteriana de E.Coli sensível à netilmicina, as preparações obtidas pelo presente processo mostraram uma actividade terapêutica muito superior à da netilmicina livre.In an in vivo model of peritonitis, using a netylmycin sensitive E.Coli bacterial suspension, the preparations obtained by the present process showed a therapeutic activity far superior to that of free netylmycin.

Os resultados são notoriamente superiores aos publicados para outras formulações lipossomais de aminoglucósidos, dado que com a formulação preparada pelo presente processo se obtêm eficácias de encapsulação elevadas com baixas razões de Fármaeo / lípido (0,47 - 5,6 mg / 100 mg lípido). Ainda, os resultados obtidos indicam que as formulações lipossomais de netilmicina aqui descritas são um agente altamente eficaz no tratamento profilático ou terapêutico de infecções graves provocadas por bactérias gram-negativas. A acção prolongada da netilmicina lipossomal permite uma administração e monitorização menos frequente do fármaeo.The results are noticeably superior to those published for other liposomal formulations of aminoglucosides, given that with the formulation prepared by the present process, high encapsulation efficiencies are obtained with low Pharma / lipid ratios (0.47 - 5.6 mg / 100 mg lipid) . In addition, the results obtained indicate that the liposomal formulations of netilmycin described herein are a highly effective agent in the prophylactic or therapeutic treatment of serious infections caused by gram-negative bacteria. The prolonged action of liposomal netilmycin allows for less frequent administration and monitoring of the drug.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICASBIBLIOGRAPHIC REFERENCES

1. Soares, M.A., Farmácia Portuguesa, 1985, 34, 23-41.1. Soares, M.A., Farmácia Portuguesa, 1985, 34, 23-41.

2. Wright, J.J., J. Chem. Soe. Chem. Commun., 1976, 6, 206.2. Wright, J.J., J. Chem. Soe. Chem. Commun., 1976, 6, 206.

3. Miller, G.H., Arcieri, G., Weinstein, M.J., Waitz, J.A.,3. Miller, G.H., Arcieri, G., Weinstein, M.J., Waitz, J.A.,

Antimicrob. Agent. Chemother., 1976, 10, 827-836.Antimicrob. Agent. Chemother., 1976, 10, 827-836.

4. Sande, M.A., Mandell, G.L. in As Bases Farmacológicas da Terapêutica, Vol. II, p. 1018-1034; ed. by Guanabara Koogan4. Sande, M.A., Mandell, G.L. in The Pharmacological Bases of Therapeutics, Vol. II, p. 1018-1034; ed. by Guanabara Koogan

S.A.,1983.S.A., 1983.

5. Luft, F.C., J.Int. Med. Res., 1978, _6, 286-299.5. Luft, F.C., J.Int. Med. Res., 1978, _6, 286-299.

6. Swenson, C.E., Stewart, K.A., Hammett, J.L., Fitzsimmons, W.E., Ginsberg, R.S., Antimicrob. Agent. Chemother., 1990, 34, 235-240.6. Swenson, C.E., Stewart, K.A., Hammett, J.L., Fitzsimmons, W.E., Ginsberg, R.S., Antimicrob. Agent. Chemother., 1990, 34, 235-240.

7. Fierer, J. , Hatlen, L. , Lin, J.P., Estrella, D., Mihalko, P. ,7. Fierer, J., Hatlen, L., Lin, J.P., Estrella, D., Mihalko, P.,

Yau-Young, A. , Antimicrob. Agent. Chemother., 1990, 34,Yau-Young, A., Antimicrob. Agent. Chemother., 1990, 34,

343-348.343-348.

8. Bally, M.B., Bolcsak, L.E. , Cullis, P.R., Janoff, A.S., Mayer, L.D., PCT/US87/00077, 1987.8. Bally, M.B., Bolcsak, L.E. , Cullis, P.R., Janoff, A.S., Mayer, L.D., PCT / US87 / 00077, 1987.

Para completa elucidação da formulação lipossomal preparada pelo presente processo, descrevem-se de seguida alguns estudos realizados de acordo com a presente invenção.For complete elucidation of the liposomal formulation prepared by the present process, some studies carried out according to the present invention are described below.

ESTUDOS QUÍMICOS E BIOLÓGICOS:CHEMICAL AND BIOLOGICAL STUDIES:

CARACTERIZAÇÃO DA FORMULAÇÃO LIPOSSOMALCHARACTERIZATION OF LIPOSOMAL FORMULATION

Para caracterizar a formulação lipossomal de um antibiótico,To characterize the liposomal formulation of an antibiotic,

apresentam-se de seguida os parâmetros de encapsulação caracteristicos da presente invenção (Tabela 1).The encapsulation parameters characteristic of the present invention are shown below (Table 1).

TABELA 1 - Parâmetros de EncapsulaçãoTABLE 1 - Encapsulation Parameters

FORMULAÇÃO LIPOSSOMAL (Diâmetro, gm) FORMULATION LIPOSOMAL (Diameter, gm) RAZÃO FINAL ANTIBIÓTICO/LÍPIDO (mg/mg lípido) FINAL REASON ANTIBIOTIC / LIPID (mg / mg lipid) EFICÁCIA ENCAPSULAÇÃO (7o) EFFICIENCY ENCAPSULATION (7th) RENDIMENTO (7o) YIELD (7th) 0,81 - 1,00 0.81 - 1.00 0,58 - 0,61 0.58 - 0.61 65 - 71 65 - 71 47 - 53 47 - 53 0,19 - 0,21 0.19 - 0.21 4,79 - 5,38 4.79 - 5.38 82 - 88 82 - 88 61 - 65 61 - 65

A eficácia de encapsulação é calculada pela razão entre o quociente antibiótico/lipido final e o quociente antibiótico/lípido inicial. 0 rendimento é calculado pela razão entre a concentração de antibiótico final e a concentração de antibiótico inicial.Encapsulation efficiency is calculated by the ratio of the final antibiotic / lipid quotient to the initial antibiotic / lipid quotient. The yield is calculated by the ratio of the final antibiotic concentration to the initial antibiotic concentration.

Pelos resultados obtidos conclui-se que com a formulação lipossomal preparada pelo presente processo se obtêm rendimentos e eficácias de encapsulação elevados, partindo de baixas razões de fármaco/lipido.From the results obtained, it can be concluded that with the liposomal formulation prepared by the present process, high yields and encapsulation efficiencies are obtained, starting from low drug / lipid ratios.

TOXICIDADE AGUDA IN VIVOACUTE TOXICITY IN VIVO

Para avaliar a toxicidade aguda in vivo da netilmicina livre e encapsulada em lipossomas realizou-se um estudo em que grupos de 10 murganhos Swiss (Charles River) foram injectados via intravenosa com doses de 10 a 50 mg/Kg de fármaco livre e lipossomal. Determinou-se o número de sobreviventes em cada dose e calculou-se a dose que matou 50% dos animais (DLso) (Tabela 2).To evaluate the acute in vivo toxicity of free and liposome-encapsulated netylmycin, a study was carried out in which groups of 10 Swiss mice (Charles River) were injected intravenously with doses of 10 to 50 mg / kg of free and liposomal drug. The number of survivors at each dose was determined and the dose that killed 50% of the animals (DLso) was calculated (Table 2).

TABELA 2 - Toxicidade AgudaTABLE 2 - Acute Toxicity

FORMULAÇÃO FORMULATION DLso (mg/Kg) DLso (mg / kg) Netilmicina livre Free Netylmycin 20 - 28 20 - 28 Netilmicina lipossomal Liposomal Netilmycin > 50 > 50

Os resultados obtidos permitem concluir que a formulação lipossomal de netilmicina obtida pelo presente processo reduzThe results obtained allow to conclude that the liposomal formulation of netilmicina obtained by the present process reduces

eficazmente a toxicidade aguda já que para a dose máxima injectada a sobrevivência foi de 100% sem se observar qualquer sinal de choque anafilático.effectively acute toxicity since for the maximum injected dose the survival was 100% without observing any sign of anaphylactic shock.

ESTUDO FARMACOCINÈTICOPHARMACOKINETIC STUDY

Os estudos de farmacocinética foram realizados com netilmicina livre e lipossomal em murganhos Swiss (Charles River) normais e imunodeprimidos (granulocitopénicos). A imunossupressão foi induzida, administrando intraperitonealmente uma solução de ciclofosfamida. Os animais foram injectados via intravenosa, com doses de 4 mg/Kg, recolhendo-se o sangue aos tempos previamente seleccionados (Tabela 3).Pharmacokinetic studies were performed with free and liposomal netilmycin in normal and immunodepressed (granulocytopenic) Swiss (Charles River) mice. Immunosuppression was induced by intraperitoneally administering a cyclophosphamide solution. The animals were injected intravenously, with doses of 4 mg / kg, collecting blood at the previously selected times (Table 3).

TABELA 3 - Parâmetros FarmacocinéticosTABLE 3 - Pharmacokinetic Parameters

ANIMAIS ANIMALS FORMULAÇÃO FORMULATION TEMPO SEMI-VIDA (min) TIME SEMI-LIFE (min) VOL. DIST. (SS) (ml) VOL. DIST. (SS) (ml) TEMPO MÉDIO RESIDÊNCIA (min) AVERAGE TIME RESIDENCE (min) Normais Normal Netilmicina livre Free Netylmycin 12 12 15,69 15.69 21 21 Netilmicina lipossomal Liposomal Netilmycin 138 138 2,89 2.89 204 204

Netilmicina livre Free Netylmycin 11 11 15,89 15.89 19 19 Granuloci- Granulocyte topénicos topenics Netilmicina lipossomal Liposomal Netilmycin 219 219 2,90 2.90 330 330

Vol. Dist. (SS) - Volume de Distribuição estado estacionárioDist. (SS) - Steady State Distribution Volume

Os resultados mostram o aumento significativo do tempo de circulação das formulações lipossomais preparadas de acordo com a presente invenção quando comparadas com o fármaco na forma livre.The results show a significant increase in the circulation time of the liposomal formulations prepared according to the present invention when compared to the drug in free form.

facto deste aumento ser ainda mais relevante para os animais imunodeprimidos deveu-se à diminuição da capacidade fagocitica, uma vez que as defesas destes animais estavam diminuídas.The fact that this increase is even more relevant for immunocompromised animals was due to the decrease in phagocytic capacity, since the defenses of these animals were reduced.

ACTIVIDADE FARMACOLÓGICAPHARMACOLOGICAL ACTIVITY

Para testar a eficácia das formulações lipossomais preparadas pelo presente processo realizou-se um estudo in vivo de actividade terapêutica utilizando um modelo de peritonite em murganhos Swiss (Charles River). A infecção foi provocada com uma suspensão bacteriana de E. Coli sensível à netilmicina. Utilizando grupos de murganhos estudaram-se dois tipos de tratamento: num os animais foram tratados profilaticamente 24 h antes da infecção e no outro o tratamento foi efectuado imediatamente após a infecção. 0 grupo controlo foi injectado comTo test the effectiveness of the liposomal formulations prepared by the present process an in vivo study of therapeutic activity was performed using a peritonitis model in Swiss mice (Charles River). The infection was caused by a bacterial suspension of E. coli sensitive to netylmycin. Using groups of mice, two types of treatment were studied: in one the animals were treated prophylactically 24 h before infection and in the other, the treatment was carried out immediately after infection. The control group was injected with

NaCl 154mM. A dose de tratamento foi 10 vezes inferior à dose de mg/Kg utilizada profilacticamente. A percentagem de sobrevivência foi determinada ao fim de 24 dias (Tabela 4).154mM NaCl. The treatment dose was 10 times lower than the dose of mg / kg used prophylactically. The percentage of survival was determined after 24 days (Table 4).

TABELA 4 - Actividade Farmacológica num Modelo de PeritoniteTABLE 4 - Pharmacological Activity in a Peritonitis Model

% SOBREVIVÊNCIA% SURVIVAL

FORMULAÇÃO FORMULATION PROFILÁCTICO (-24h) PROPHYLACTIC (-24h) TRATAMENTO (0H) TREATMENT (0H) NaCl 154mM 154mM NaCl 0 0 0 0 Net. Livre Net. Free 33 33 17 17 Net. Lip. (0,81-1,00 gm) Net. Lip. (0.81-1.00 gm) 17 17 50 50 Net. Lip. (0,19-0,21 gm) Net. Lip. (0.19-0.21 gm) 83 83 33 33

Net. - NetilmicinaNet. - Netilmicina

Lip. - LipossomasLip. - Liposomes

Dos resultados apresentados conclui-se que a actividade farmacológica foi bastante potenciada pelas formulações lipossomais produzidas de acordo com a presente invenção, o que sugere a sua utilização em clínica.From the results presented, it can be concluded that the pharmacological activity was greatly enhanced by the liposomal formulations produced in accordance with the present invention, which suggests its use in the clinic.

RESUMORESUME

AMINOGLUCÓSIDOS LIPOSSOMAIS COM ALTAS EFICÁCIA DE ENCAPSULAÇÃO ELIPOSOMAL AMINOGLUCOSIDES WITH HIGH ENCAPSULATION EFFECTIVENESS AND

ACTIVIDADE TERAPÊUTICA, NOMEADAMENTE A NETILMICINA, E PROCESSOTHERAPEUTIC ACTIVITY, INCLUDING NETILMICINE, AND PROCESS

PARA A SUA PREPARAÇÃOFOR YOUR PREPARATION

A presente invenção refere-se a formulações lipossomaisThe present invention relates to liposomal formulations

contendo containing um antibiótico, an antibiotic, caracterizadas characterized por per terem razões have reasons fármaco / drug / lipido até 10 mg lipid up to 10 mg / 100 mg lipido, / 100 mg lipid, em que on what o tamanho the size dos From lipossomas liposomes varia entre varies between I gm e 0,01 gm I gm and 0.01 gm e as and the eficácias efficacies de in

encapsulação são superiores a 60%.encapsulation are greater than 60%.

Os antibióticos lipossomais quando administrados ao animal resultam num aumento do tempo de semi-vida no plasma, reduzem substancialmente a toxicidade aguda e aumentam a actividade antimicrobiana relativamente ás formas livres dos fármacos.Liposomal antibiotics when administered to the animal result in an increase in plasma half-life, substantially reduce acute toxicity and increase antimicrobial activity relative to free forms of drugs.

processo para a preparação das formulações lipossomais é caracterizado pela formação de lipossomas multilamelares contendo o antibiótico e sujeitando os lipossomas a liofilização, reidratação e extrusão sob pressão.The process for the preparation of liposomal formulations is characterized by the formation of multilamellar liposomes containing the antibiotic and subjecting the liposomes to lyophilization, rehydration and extrusion under pressure.

Claims (18)

REIVINDICAÇÕES 1. Formulação lipossomal contendo um antibiótico caracterizada por ter uma razão fármaco / lipido que vai até 10 mg / 100 mg lípido em que o tamanho dos lipossomas varia entre 1 μτη e 0,01 μτη.1. Liposomal formulation containing an antibiotic characterized by having a drug / lipid ratio that goes up to 10 mg / 100 mg lipid in which the size of the liposomes varies between 1 μτη and 0.01 μτη. 2. Formulação lipossomal de acordo com a reivindicação caracterizada por o antibiótico se encontrar na fase aquosa.2. Liposomal formulation according to the claim characterized in that the antibiotic is in the aqueous phase. 3. Formulação lipossomal de acordo com as reivindicações 1 e caracterizada por o antibiótico ou um seu derivado hidrófobo se encontrar na fase lipídica.Liposomal formulation according to claims 1 and characterized in that the antibiotic or a hydrophobic derivative thereof is in the lipid phase. 4. Formulação lipossomal de acordo com as reivindicações 1 a 3 caracterizada por o antibiótico ou um seu derivado hidrófobo se encontrar na fase aquosa e na fase lipídica.Liposomal formulation according to claims 1 to 3, characterized in that the antibiotic or a hydrophobic derivative thereof is found in the aqueous phase and in the lipid phase. 5. Formulação lipossomal de acordo com as reivindicações caracterizada pelo facto de ser conservada a sua actividade biológica.Liposomal formulation according to the claims characterized by the fact that its biological activity is preserved. 6. Formulação lipossomal de acordo com as reivindicações 1 a 5 caracterizada por os antibióticos usados serem os aminoglucósidos.A liposomal formulation according to claims 1 to 5, characterized in that the antibiotics used are aminoglucosides. 7. Formulação lipossomal de acordo com as reivindicações 1 a 6 caraterizada por o aminoglucósido ser a Netilmicina.A liposomal formulation according to claims 1 to 6 characterized in that the aminoglucoside is Netilmicina. 8. Formulação lipossomal de acordo com as reivindicações 1 a 7 caracterizada pelo facto de aumentar o tempo de semi-vida no plasma e reduzir a toxicidade aguda, relativamente à netilmicina livre.Liposomal formulation according to claims 1 to 7, characterized in that it increases the plasma half-life and reduces acute toxicity, relative to free netylmycin. 9. Formulação lipossomal de acordo com as reivindicações 1 a 8 caracterizada pelo facto de quando utilizada no tratamento de peritonite potenciar a actividade farmacológica, avaliada pelo aumento de sobrevivência relativamente à netilmicina livre.Liposomal formulation according to claims 1 to 8, characterized in that when used in the treatment of peritonitis potentiates the pharmacological activity, evaluated by the increase of survival in relation to free netylmycin. 10. Processo para a preparação de formulações lipossomais de acordo com a reivindicação 1 que é caracterizado pela formação de lipossomas multilamelares, contendo o antibiótico, e sujeitando os lipossomas a liofilização, reidratação e extrusão sob pressão.10. Process for the preparation of liposomal formulations according to claim 1 which is characterized by the formation of multilamellar liposomes, containing the antibiotic, and subjecting the liposomes to freeze-drying, rehydration and extrusion under pressure. 11. Processo de acordo com a reivindicação 10 caracterizado por os lipossomas multilamelares serem formados por hidratação de um filme lipidico na presença de um solução aquosa de antibiótico.Process according to claim 10, characterized in that the multilamellar liposomes are formed by hydration of a lipid film in the presence of an aqueous solution of antibiotic. 12. Processo de acordo com as reivindicações 10 e 11 caracterizado por o antibiótico não incorporado nos lipossomas ser removido antes ou depois da fase de extrusão.Process according to claims 10 and 11, characterized in that the antibiotic not incorporated in the liposomes is removed before or after the extrusion step. 13. Processo para a preparação de formulações lipossomais de netilmiclna caracterizado pela formação de lipossomas multilamelares a partir de uma solução aquosa de netilmicina e lipido, liofilização dos lipossomas resultantes, reidratação dos lipossomas liofilizados compreendendo a adição de um volume pequeno de uma solução não salina seguida, após uma fase de repouso, pela adição de uma solução salina, diluindo a suspensão resultante e extrudando-a sob pressão sem separação prévia do fármaco não Incorporado.13. Process for the preparation of liposomal formulations of netilmiclna characterized by the formation of multilamellar liposomes from an aqueous solution of netilmycin and lipid, lyophilization of the resulting liposomes, rehydration of lyophilized liposomes comprising the addition of a small volume of a non-saline solution followed , after a resting phase, by adding a saline solution, diluting the resulting suspension and extruding it under pressure without prior separation of the Unincorporated drug. 14. Processo de acordo com a reivindicação 13 caracterizado pelo facto de se obterem formulações lipossomais de netilmicina que quando administradas reduzem a toxicidade aguda pelo menos duas vezes relativamente à netilmicina livre.Process according to claim 13, characterized in that liposomal formulations of netylmycin are obtained which, when administered, reduce acute toxicity at least twice compared to free netylmycin. 15. Processo de acordo com as reivindicações 13 e 14 caracterizado pelo facto de se obterem formulações lipossomais de netilmicina com eficácia de encapsulação superior a 60%.Process according to claims 13 and 14, characterized in that liposomal formulations of netylmycin with encapsulation efficacy greater than 60% are obtained. 16. Processo de acordo com as reivindicações 13 a 15 caracterizado pelo facto de se obterem formulações lipossomais de netilmicina que quando utilizadas no tratamento de infecções causadas por bactérias gram-negativas potenciam a actividade farmacológica, avaliada pelo aumento de sobrevivência relativamente à netilmicina livre.16. Process according to claims 13 to 15, characterized in that liposomal formulations of netilmycin are obtained which, when used in the treatment of infections caused by gram-negative bacteria, enhance the pharmacological activity, assessed by the increase in survival over free netylmycin. 17. Formulações lipossomais de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9 caracterizadas por serem preparadas pelo processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 16.Liposomal formulations according to any one of claims 1 to 9, characterized in that they are prepared by the process according to any one of claims 10 to 16. 18. Formulações lipossomais e processos para a sua preparação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores caracterizados pelo uso dos seguintes lípidos, hidrogenados ou não, individualmente ou em misturas, numa razão molar entre 0,01 e 10: colesterol (Col), fosfatidilcolina (PC), diestearilfosfatidilcolina (DSPC), esfingomielina (SM), dioleoilfosfatidilcolina (DOPC), dioleoilfosfatidilglicerol (DOPG), fosfatidilglicerol (PG), dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC), dipalmitoilfosfatidilcolina (DPPC), gangliósidos, ceramidas, fosfatidilinositol (PI), ácido fosfatidico (PA), dicetilfosfato (DcP), dimiristoilfosfatidilglicerol (DMPG), estearilamina (SA), dipalmltoilfosfatidilglicerol (DPPG) e outros lípidos sintéticos.18. Liposomal formulations and processes for their preparation according to any one of the preceding claims, characterized by the use of the following lipids, whether or not hydrogenated, individually or in mixtures, in a molar ratio between 0.01 and 10: cholesterol (Col), phosphatidylcholine (PC), distearylphosphatidylcholine (DSPC), sphingomyelin (SM), dioleoylphosphatidylcholine (DOPC), dioleoylphosphatidylglycerol (DOPG), phosphatidylglycerol (PG), dimyristoylphosphatidylchloride (DMPC), dimiristoylphosphatidyl (DMPC), (PA), dicetylphosphate (DcP), dimyristoylphosphatidylglycerol (DMPG), stearylamine (SA), dipalmltoylphosphatidylglycerol (DPPG) and other synthetic lipids.
PT100486A 1992-05-14 1992-05-14 LIPOSOMAL AMINOGLUCOSIDS WITH HIGH EFFECTIVENESS OF ENCAPSULATION AND THERAPEUTIC ACTIVITY, IN ADDITION TO NETILMYCIN, AND PROCESS FOR THEIR PREPARATION PT100486B (en)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PT100486A PT100486B (en) 1992-05-14 1992-05-14 LIPOSOMAL AMINOGLUCOSIDS WITH HIGH EFFECTIVENESS OF ENCAPSULATION AND THERAPEUTIC ACTIVITY, IN ADDITION TO NETILMYCIN, AND PROCESS FOR THEIR PREPARATION
PCT/PT1993/000001 WO1993023015A1 (en) 1992-05-14 1993-05-14 Liposomal aminoglycoside compositions and process for their preparation

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PT100486A PT100486B (en) 1992-05-14 1992-05-14 LIPOSOMAL AMINOGLUCOSIDS WITH HIGH EFFECTIVENESS OF ENCAPSULATION AND THERAPEUTIC ACTIVITY, IN ADDITION TO NETILMYCIN, AND PROCESS FOR THEIR PREPARATION

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PT100486A PT100486A (en) 1993-11-30
PT100486B true PT100486B (en) 1999-07-30

Family

ID=20085148

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PT100486A PT100486B (en) 1992-05-14 1992-05-14 LIPOSOMAL AMINOGLUCOSIDS WITH HIGH EFFECTIVENESS OF ENCAPSULATION AND THERAPEUTIC ACTIVITY, IN ADDITION TO NETILMYCIN, AND PROCESS FOR THEIR PREPARATION

Country Status (2)

Country Link
PT (1) PT100486B (en)
WO (1) WO1993023015A1 (en)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU3244393A (en) * 1992-12-02 1994-06-22 Vestar, Inc. Antibiotic formulation and process
US5958449A (en) 1992-12-02 1999-09-28 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Antibiotic formulation and use for bacterial infections
US5759571A (en) * 1993-05-11 1998-06-02 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Antibiotic formulation and use for drug resistant infections
IT1269569B (en) * 1994-04-22 1997-04-08 Ugo Citernesi PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF COMPLEX BETWEEN PHOSPHOLIPIDS AND ACTIVE PRINCIPLES USEFUL FOR THE PRODUCTION OF LIPOSOMES AND ACTIVE PRINCIPLES AND LIPOSOMES OBTAINED WITH THE PROCEDURE
US5662929A (en) * 1994-12-23 1997-09-02 Universite De Montreal Therapeutic liposomal formulation
US6613352B2 (en) 1999-04-13 2003-09-02 Universite De Montreal Low-rigidity liposomal formulation

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT78628B (en) * 1984-05-02 1986-06-18 Liposome Co Inc Pharmaceutical composition with reduced toxicity
CA1314481C (en) * 1986-12-23 1993-03-16 Marcel B. Bally Liposomal preparation and antibiotic
US4952405A (en) * 1988-10-20 1990-08-28 Liposome Technology, Inc. Method of treating M. avium infection
DE69128455T2 (en) * 1990-11-06 1998-06-18 Inst Nacional De Engenharia E Liposomal agents and processes for their preparation

Also Published As

Publication number Publication date
PT100486A (en) 1993-11-30
WO1993023015A1 (en) 1993-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6770290B1 (en) Amphotericin B liposome preparation
ES2437866T5 (en) Uninterrupted release of aminoglycoside anti-infectives
JP4874548B2 (en) Drug loading method to liposome by gradient
PT1581236E (en) Sustained release of antiinfectives
WO1994012155A1 (en) Antibiotic formulation and process
US20210393525A1 (en) Liposomal composition containing mild acidic active agent
PT100486B (en) LIPOSOMAL AMINOGLUCOSIDS WITH HIGH EFFECTIVENESS OF ENCAPSULATION AND THERAPEUTIC ACTIVITY, IN ADDITION TO NETILMYCIN, AND PROCESS FOR THEIR PREPARATION
WO2016061117A1 (en) Nano-liposomal aminoglycoside-thymoquinone formulations
US20040175417A1 (en) Amphotericin B liposome preparation
CN107823646B (en) Antibacterial drug cefaclor clavulanic acid composition and preparation method thereof
PT96037B (en) PROCESS FOR THE PREPARATION OF LIPOSOMAL PROTEINS WITH HIGH THERAPEUTIC INDEX, ESPECIALLY L-ASPARAGINASE

Legal Events

Date Code Title Description
FG3A Patent granted, date of granting

Effective date: 19990416

MM3A Annulment or lapse

Free format text: LAPSE DUE TO NON-PAYMENT OF FEES

Effective date: 20041018

NF3A Restitutio in integrum

Free format text: RESTITUTIO IN INTEGRUM

Effective date: 19920514

MM4A Annulment/lapse due to non-payment of fees, searched and examined patent

Free format text: MAXIMUM VALIDITY LIMIT REACHED

Effective date: 20140416