PL99496B1 - Sposob otrzymywania edeiny b i f lub ich mieszaniny - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania antybiotyków edein B i F lub ich mieszaniny. Edeiny B i F sa amidynowymi analogami edein A i D, w których fragment spermidynowy zastapiony jest fragmentem guanylospermidynowym.Edeiny B i F powstaja w wyniku biosyntezy przy pomocy szczepu Bacillus brevis V m 4, obok edein A i D.Dotychczas znany jest równiez sposób otrzymywania edeiny B na drodze amidynowania edeiny A przy pomocy nadmiaru O-metyloizomocznika w wodnym roztworze wodorotlenku sodowego. Natomiast dotychczas nie jest znany sposób otrzymywania edeiny F na innej drodze niz biosynteza.Niedogodnoscia opisanego wyzej sposobu otrzymywania edeiny B jest powstawanie ubocznych produktów reakcji, które utrudniaja izolacje wlasciwych substancji i maja wplyw na niska wydajnosc procesu.Celem wynalazku jest opracowanie sposobu otrzymywania edein B i F lub ich mieszaniny, który nie bedzie posiadal opisanych wyzej niedogodnosci.Sposób otrzymywania edeiny B i F lub ich mieszaniny wedlug wynalazku polega na tym, ze na edeine A lub D, ich mieszanine, wzglednie surowy preparat antybiotyku, zawierajacy obie te edeiny dziala sie czynnikiem amidynujacym, zawierajacym ewentualnie wegiel C14, jak O-alkiloizomocznikiem, S-alkiloizotiomocznikiemlub guanylopyrozolem, korzystnie w nadmiarze, w mieszaninie wody, alkoholi alicyklicznych lub alifatycznych oraz amin, której pH doprowadza sie przy pomocy silnego kwasu lub zasady do wartosci 9,5—12,5, korzystnie 11, zas uzyskany produkt izoluje sie ze srodowiska reakcji znanymi sposobami.Zaleta sposobu wedlug wynalazku jest wyeliminowanie powstawania produktów ubocznych, co pozwala uzyskac prostymi metodami substancje jednorodne chemicznie z ilosciowymi wydajnosciami, latwosc przepro¬ wadzenia procesu w dowolnej skali oraz mozliwosc uzyskania edein B i F o wysokiej aktywnosci biologicznej.Ponadto proponowany sposób umozliwia uzyskanie promieniotwórczych edein B i F, co zwieksza ich przydat¬ nosc jako bioodczynników.Sposób otrzymywania edein B i F lub ich mieszaniny wedlug wynalazku ilustruja podane nizej przyklady.2 99496 Przyklad I. 132 mg siarczanu edeiny A (0,106 mM) i 220 mg chlorowodorku O-metyloizomocznika (2,0 mM) rozpuszcza sie w 5 ml roztworu wody, alkoholu etylowego i trójetyloaminy, po czym 1 n roztworem wodorotlenku sodowego doprowadza sie pH do wartosci 11,0. Reakcje prowadzi sie przez 22 godziny w tempe¬ raturze 25°C. Roztwór po reakcji zateza sie do objetosci okolo 0,5 ml i poddaje oczyszczeniu przy pomocy filtracji molekularnej na kolumnie wypelnionej zelem Sephadex LH—20 w wodzie. Otrzymany roztwór odparo¬ wuje sie pod zmniejszonym cisnieniem do objetosci okolo 0,5 ml i wkrapla do metanolu. Wytracony osad odwirowuje sie, przemywa acetonem i eterem oraz suszy nad wodorotlenkiem sodu. Otrzymuje sie 104 mg siarczanu edeiny B.Przyklad II. 56 mg siarczanu edeiny D (45,6 jumola) i 76 mg chlorowodorku O-metyloizomocznika (690jumoli) rozpuszcza sie w 4 ml roztworu wody, alkoholu etylowego i trójetyloaminy, koryguje pH wodoro¬ tlenkiem sodowym do pH = 11,0 i pozostawia mieszanine w temperaturze .25°C przez 24 godziny. Po reakcji obniza sie pH do 2,5 roztworem kwasu solnego, zateza mieszanine reakcyjna do objetosci okolo 0,5 ml pod zmniejszonym cisnieniem i izoluje edeine F na kolumnie z zelem Sephadex LH-20 w wodzie. Otrzymuje sie 34 mg siarczanu edeiny F.Przyklad III. 12,3 mg siarczanu edeiny D (10 /zmoli) i 27,5 mg chlorowodorku O-metyloizomocznika (250 jumoli) rozpuszcza sie w 0,75 ml mieszaniny wody, alkoholu etylowego i trójetyloaminy, 1 n roztworem kwasu solnego doprowadza sie pH roztworu do wartosci 9,5 i prowadzi reakcje w 25°C przez 24 godziny. Edeine F izoluje sie metoda filtracji molekularnej na kolumnie wypelnionej zelem Sephadex LH—20 w wodzie. Otrzy¬ muje sie 6,3 mg siarczanu edeiny F, Prz,yklad IV. 37,2 mg siarczanu edeiny A (30jumoli) i 55,2 mg siarczanu S-metyloizotiomocznika (300 jLimoli) rozpuszcza sie w 1,5 ml roztworu wody, alkoholu metylowego i trójetyloaminy, po czym 1 n wodo¬ rotlenkiem sodowym doprowadza sie pH do wartosci 12,5. Reakcje prowadzi sie przez 24 godziny w temperatu¬ rze 25°C. Edeine B izoluje sie metoda filtracji molekularnej na zelu Sephadex LH—20 w wodzie. Otrzymuje sie ,3 mg siarczanu edeiny B.Przyklad V. 165 mg kompleksu edein w postaci siarczanu i 275 mg chlorowodorku O-metyloizo¬ mocznika rozpuszcza sie w 6 ml roztworu wody, alkoholu etylowego i trójetyloaminy, 1 n roztworem wodoro¬ tlenku sodowego doprowadza sie pH roztworu do wartosci 11,0 i pozostawia przez 24 godziny w temperaturze °C. Reakcje przerywa sie przez dodanie roztworu 1 n kwasu solnego do pH 2,5. Edeiny B i F otrzymane w wyniku reakcji izoluje sie przy pomocy filtracji molekularnej na zelu Sephadex LH-20 w wodzie. Otrzymuje sie 118 mg siarczanu edeiny B i 6,5 mg siarczanu edeiny F.Przyklad VI. 61,7 mg siarczanu edeiny A (0,05 mM) i 100,5 mg azotanu guanylopyrazolu (0,5 mM) rozpuszcza sie w 2 ml roztworu wody, alkoholu metylowego i trójetyloaminy, po czym 1 n roztworem wodoro¬ tlenku sodowego doprowadza sie pH roztworu do wartosci 10,5 i prowadzi reakcje przez 18 godzin w temperatu¬ rze 25°C. Reakcje przerywa sie przez obnizenie pH roztworu do wartosci 2,5. Otrzymana edeine B izoluje sie przy pomocy filtracji molekularnej na zelu Sephadex LH—20 w wodzie. Otrzymuje sie 48,8 mg siarczanu edeiny B. PL

Claims (1)

1. Zastrzezenie patentowe Sposób otrzymywania edeiny B i F lub ich mieszaniny, znamienny t y m, ze na edeine A lub D, ich mieszanine, wzglednie surowy antybiotyk, zawierajacy obie te edeiny dziala sie czynnikiem amidymijacym, zawierajacym ewentualnie wegiel C14, np. O-alkiloizomocznikiem, S-alkiloizotiomocznikiem lub guanylopyrazo- lem, korzystnie w nadmiarze, w mieszartinie wody, alkoholi alicyklicznych lub alifatycznych oraz amin, której pH doprowadza sie przy pomocy silnego kwasu lub zasady do wartosci 9,5 — 12,5, korzystnie 11,0, a uzyskany produkt izoluje sie ze srodowiska reakcji znanymi sposobami. Prac. Poligraf. UP PRL naklad 120+18 Cena 45 zl PL