PL88532B1 - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- PL88532B1 PL88532B1 PL16638172A PL16638172A PL88532B1 PL 88532 B1 PL88532 B1 PL 88532B1 PL 16638172 A PL16638172 A PL 16638172A PL 16638172 A PL16638172 A PL 16638172A PL 88532 B1 PL88532 B1 PL 88532B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- value
- concentration
- bacitracin
- separation
- proteases
- Prior art date
Links
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 14
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 8
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 8
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 7
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 4
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000009938 salting Methods 0.000 claims description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 1
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób izolacji proteaz z przesaczy hodowlanych po oddzieleniu Zn-bacytra-
cyny.
Znany jest sposób jednoczesnego wytwarzania bacytracyny i proteaz w procesie hodowli np. Bacillus
subtilis w warunkach konwencjonalnych. Z otrzymanej tym sposobem brzeczki hodowlanej izoluje sie bacytracy-
ne w postaci kompleksu z cynkiem przy wartosci pH 5-7, a nastepnie wyodrebnia sie proteazy przez
zageszczenie supernatantu i ewentualnie frakcjonowane wytracanie enzymu.
Stwierdzono, ze proteazy mozna izolowac z przesaczy hodowlanych po oddzieleniu Zn-bacytracyny
zwiekszajac stezenie jonów cynku przez dodanie tych samych soli, które stosuje sie przy wytracaniu
antybiotyku, przy jednoczesnej zmianie wartosci pH srodowiska. Sposób ten pozwala uniknac klopotliwego
procesu oddzielania zwiazków drobnoczasteczkowych oraz odparowywania roztworów wodnych enzymów pod
zmniejszonym cisnieniem i otrzymac wytracony preparat enzymatyczny w prosty sposób, w zmniejszonej
objetosci i pozbawiony innych zanieczyszczen bialkowych, z roztworów o róznej zawartosci proteaz i aktywnos¬
ci proteolitycznej.
Wedlug wynalazku sposób izolacji proteaz polega na tym, ze przesacz hodowlany po odzieleniu
Zn-bacytracyny alkalizuje sie do wartosci pH 7-10, korzystnie do wartosci pH 8-8,5, dodaje sie do niego soli
cynkowej do stezenia jonów cynku do 180 mM, korzystnie do stezenia 60—90 mM, wytracony osad ekstrahuje
sie wodnym roztworem fosforanu jednosodowego o stezeniu 0,1-0,25 M, a nastepnie wytraca sie enzymy przez
frakcjonowane wysalanie ekstraktu siarczanem amonowym przy wartosci pH 6—10, korzystnie przy wartosci pH
okolo 8, oraz suszy.
Przyklad I. Przesacz po oddzieleniu Zn-bacytracyny zawierajacy 4040 j proteazy/ml alkalizowano do
wartosci pH 10 przy uzyciu 10 n NaOH i dodawano 20% ZnS04*7H20 w takiej ilosci, aby doprowadzic stezenie
ZnnS04 w roztworze do wartosci 1,5%, przy ciaglym mieszaniu. Mieszanine o wartosci pH 7,8 pozostawiono na
okres 1 godziny, osad oddzielono przez dekantowanie i wirowanie i ekstrahowano 0,25 M roztworem NaH2P04-
1/5 objetosci roztworu wyjsciowego przez godzine i ponownie 1/8 objetosci roztworu wyjsciowego wciagu
12 godzin w temperaturze 0-4°C. Wydajnosc ekstrakcji wynosi 87% aktywnosci proteolitycznej w odniesieniu2 88 532
do roztworu wyjsciowego. Z polaczonych ekstraktów wysalano enzym przy 60% nasyceniu siarczanem amono¬
wym, przez 12 godzin w temperaturze 0-4°C i oddzielony osad liofilizowano. Z1 litra wyjsciowego roztworu
uzyskano 4,9 g preparatu o aktywnosci 680 j proteazy/mg suchej masy, co stanowi 81% wydajnosci. Aktywnosc'
wlasciwa preparatu jest okolo 10-krotnie wyzsza w stosunku do roztworu wyjsciowego.
Przyklad II. Proteazy wytracono jak w przykladzie I z przesaczu zawierajacego, po oddzieleniu
Zn-bacytracyny, 8100 j/ml aktywnosci proteazowej. Wytracanie przeprowadzano przy wartosci pH 8,15.
Ekstrakcje przeprowadzono dwukrotnie 1/3 objetosci roztworu wyjsciowego za pomoca 0,25 M NaH2P04.
Z polaczonych ekstraktów proteazy wysolono enzym za pomoca siarczanu amonowego jak w przykladzie I.
Z1 litra wyjsciowego roztworu uzyskano 6g preparatu oaktywrosci 1140 j/mg suchej masy, co stanowi 84%
wydajnosci. Aktywnosc wlasciwa preparatu jest okolo 5-krotnie wyzsza w stosunku do roztworu wyjsciowego.
Przykladlll. Z przesaczu zawierajacego po oddzieleniu Zn-bacytracyny proteazy w stezeniu
12500 j/ml wytracono enzym za pomoca 20% roztworu ZnS04 * 7H20 doprowadzajac stezenie ZnS04 do
wartosci 2,0% przy ciaglym mieszaniu, przy wartosci pH 8,5. Ekstrakcje i wysalanie przeprowadzono jak
w przykladzie MII, uzyskujac z 1 litra roztworu wyjsciowego 9,8 g preparatu o aktywnosci proteazowej
850 j/ml, co stanowi 68% wydajnosci. Aktywnosc wlasciwa preparatu jest okolo czterokrotnie wyzsza *
w stosunku do roztworu wyjsciowego.
Claims (1)
1. Zastrzezenie patentowe Sposób izolacji proteaz z przesaczy hodowlanych po oddzieleniu Zn-bacytracyny, znamienny tym, ze przesacz alkalizuje sie do wartosci PH 7—10, korzystnie do wartosci pH 8—8,5, dodaje sie do niego soli cynkowej do stezenia jonów cynku 180 mM, korzystnie do stezenia 60—90 mM, wytracony osad ekstrahuje sie wodnym roztworem jednosodowego fosforanu o stezeniu 0,1—0,25 M, a nastepnie wytraca sie enzymy przez frakcjonowane wysalanie ekstraktu siarczanem amonowym przy wartosci pH 6—10, korzystnie przy wartosci pH okolo 8 i suszy. Prac. Poligraf. UP PRL naklad 120+18 Cena 45 zl
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL16638172A PL88532B1 (pl) | 1972-03-04 | 1972-03-04 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL16638172A PL88532B1 (pl) | 1972-03-04 | 1972-03-04 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL88532B1 true PL88532B1 (pl) | 1976-09-30 |
Family
ID=19964735
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL16638172A PL88532B1 (pl) | 1972-03-04 | 1972-03-04 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL88532B1 (pl) |
-
1972
- 1972-03-04 PL PL16638172A patent/PL88532B1/pl unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Malathi et al. | Production of alkaline protease by a new Aspergillus flavus isolate under solid-substrate fermentation conditions for use as a depilation agent | |
| Revah‐Moiseev et al. | Conversion of the enzymatic hydrolysate of shellfish waste chitin to single‐cell protein | |
| Ishida | Physiological studies on evolution of dimethyl sulfide from unicellular marine algae | |
| TWI558722B (zh) | 酵母萃取物萃取殘渣之利用方法 | |
| US3677898A (en) | Acid protease and method of preparing the same | |
| Hayashida et al. | Production and purification of thermostable cellulases from Humicola insolens YH-8 | |
| Elgammal et al. | Enhanced production, partial purification, and characterization of alkaline thermophilic protease from the endophytic fungus BT21 | |
| CN110547458A (zh) | 一种酶解珍珠粉的制备方法 | |
| DK143164B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af sur protease | |
| Sakaguchi et al. | Studies on toxin production of Clostridium botulinum type E III: Characterization of toxin precursor | |
| Fries | The nutrition of fungi from the aspect of growth factor requirements | |
| DOI et al. | Joint action of two glucanases produced by Arthrobacter in spheroplast formation from baker's yeast | |
| Horikoshi et al. | Studies on autolysis of Aspergillus oryzae. The lytic phenomenon of Aspergillus oryzae caused by Bacillus circulans. | |
| PL88532B1 (pl) | ||
| US3475276A (en) | Method of producing uricase from yeast | |
| CA1047303A (en) | Process for preparing from a microbial cell mass a protein concentrate having a low nucleic acid content, and the protein concentrate thus obtained | |
| OSMUNDSVAG et al. | Cellulases from Sporocytophaga myxococcoides: Purification and properties | |
| Perrino et al. | Betaine aldehyde dehydrogenase kinetics partially account for oyster population differences in glycine betaine synthesis | |
| Kameda et al. | Occurrence of D-acylase in soil bacteria | |
| JPS60217894A (ja) | 新規プロテア−ゼ及びその製造方法 | |
| US3862109A (en) | Method for obtaining a protein isolate from hydrocarbon assimilating microbial cells | |
| US2102315A (en) | Process of preparing an enzyme from mold | |
| US3772152A (en) | Process for manufacturing enzymes from hydrocarbons | |
| Hebert | Phenotypic variability of lactate dehydrogenase in Daphnia magna | |
| CN109295138B (zh) | 一种安康鱼皮肽的制备方法及所制备的安康鱼皮肽的免疫调节应用 |