PL65984B1 - - Google Patents

Description

Pierwszenstwo: Opublikowano: 15.VII.1972 65984 KI. 12p,4/01 MKP C07d 99/24 UKD Twórca wynalazku: Edwin Harold Flynn Wlasciciel patentu: Eli Lilly and Company, Indianopolis (Stany Zjed¬ noczone Ameryki) Sposób wytwarzania nowych antybiotyków typu cefalosporyny Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowych antybiotyków typu cefalosporyny o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza rodnik al¬ kilowy o 1 lub 2 atomach wegla, a R1 oznacza atom wodoru lub grupe acetoksylowa. Zwiazki otrzymane sposobem wedlug wynalazku maja po¬ dwójne wiazanie w pozycji 3 pierscienia dwu- hydrotiazynowego oraz przylaczona grupe ^-lakta¬ mu. Niektóre zwiazki o wzorze 1 nadaja sie do zwalczania chorób spowodowanych przez rózne mikroorganizmy Gram-dodatnie i Gram-ujemne.Wprawdzie pewne zwiazki cefalosporynowe, na przyklad sól sodowa kwasu 7-/2'-tienylo/-acetoami- docefalosporanowego, sa znane jako antybiotyki do stosowania pozajelitowego, to jednak istnieje ciag¬ le zapotrzebowanie na dalsze zróznicowane i udo¬ skonalone antybiotyki. Zaleta zwiazków wytwarza¬ nych sposobem wedlug wynalazku jest to, ze wy¬ kazuja one znaczna aktywnosc przy stosowaniu do¬ ustnym.W zaleznosci od wartosci pH srodowiska reakcyj¬ nego sposobem wedlug wynalazku otrzymuje sie zwiazki o wzorze 1 w postaci wolnych kwasów lub soli wewnetrznych. Moga one byc jednorodne lub stanowic mieszanine racemiczna ich optycznie czynnych izomerów. Zwiazki o wzorze 1 mozna ewentualnie przeprowadzac w ich sole z farmako¬ logicznie dopuszczalnymi zasadami, na przyklad w postaci soli sodowych, potasowych lub amono¬ wych, albo w postaci addycyjnych soli z mocnymi 10 15 20 25 30 kwasami, równiez dopuszczalnymi w farmakologii, takimi jak kwas solny, siarkowy, bromowodorowy, fosforowy lub trójfluorooctowy itp. Zwiazki o wzo¬ rze 1 korzystnie wytwarza sie i stosuje jako anty¬ biotyki w postaci soli wewnetrznych lub amfote- rycznych. Ponizej przedstawione zwiazki stanowia przyklady zwiazków otrzymanych sposobem we¬ dlug wynalazku: kwas 7-f4-(aminometylo)n£enylo- acetoamido]cefalosporanowy, kwas 7^[4H(«-amino- etylo)fenyloacetoamido]-cefalosporanowy, kwas 7- -[4-Ka-aminopropylo)- fenyloacetoamido]- cefalospo- ranowy, kwas 7-i[4,H(a-aminoetylo)fenyloacetoami- do]dezacetoksycefalosporanowy i kwas 7-»[4'-(a- aminopropylo)fenyloacetoamido] dezacetoksycefalo- sporanowy. Kwasy te moga byc przeprowadzone w znany sposób w omówione wyzej sole.Zwiazki otrzymane sposobem wedlug wynalazku sa zblizone do cefalosporyny C, ale podczas gdy cefalosporyny C zawieraja w polozeniu 7 grupe S^amino^-adypamoiilowa, to zwiazki otrzymywa¬ ne sposobem wedlug wynalazku cechuje obecnosc w polozeniu 7 grupy acyloamidowej, zawierajacej w .pozycji 4 pierscienia fenylowego kwasu fenylo¬ octowego nizsza grupe a-aminoalkilowa. W kwa¬ sach dezacetoksycefalosporanowych o wzorze 1 w pozycji 3 znajduje sie grupa metylowa, natomiast w cefalosporynach C, wystepuje w tej pozycji gru¬ pa acetoksymetylowa. Ponadto, w przeciwienstwie do cefalosporyn C posiadajacych stosunkowo niski efekt bakteriobójczy, zwiazki otrzymane sposobem 65 98465 984 wedlug wynalazku odznaczaja sie silnym dziala¬ niem bakteriobójczym i sa zdolne do hamowania rozwoju licznych rodzajów drobnoustrojów w róz¬ nych srodowiskach.Cefalosporyna C, bedaca najodpowiedniejszym 5 produktem.. wyjsciowym przy wytwarzaniu zwiaz¬ ków sposobem wedlug wynalazku, moze byc otrzy¬ mana w hodowli organizmów wytwarzajacych ce¬ falosporyne C w odpowiedniej pozywce opisanej w brytyjskim opisie patentowym Nr 80.0.196. Cefa- 10 losporyna C moze byc równiez otrzymana sposo¬ bem podanym w opisie patentowym Stanów Zjed¬ noczonych Ameryki Nr 3 082155, polegajacym na - stosowaniu mieszaniny odmian organizmów zawie¬ rajacej Cephalosporinum; I.M.I. 49137 oraz odpo- 15 wiedniej pozywki zawierajacej zródlo azotu orga¬ nicznego w obecnosci tlenu czasteczkowego. Otrzy¬ mana cefalosporyne. C wydziela sie z mieszaniny, przy czym nadaje sie ona do dalszej przeróbki na kwas 7-aminocefalosporanowy. Reakcja ta polega 20 na przerwaniu bocznego lancucha S^amino-N^ady- pamolloweigo pomiedzy grupa amidokarlbonylowa i atomem azotu grupy amidowej, korzystnie przez, poddanie cefalosporyny C reakcji z chlorkiem nitrozylu w roztworze kwasu mrówkowego, a na- ^ stepnie hydrolize metoda.Morina, opisano w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki Nr 3188 311.W przypadku otrzymywania pochodnych kwasu dezacetoksycefalosporanówego, cefalosporyne C 30 poddaje sie przeróbce zwyklym sposobem na kwas 7-dezacetoksyceifalosporanowy. Sposób ten polega, na przyklad na katalitycznym uwodornieniu cefa¬ losporyny C i nastepnie hydrolizie majacej na ce¬ lu usuniecie bocznego lancucha 5-amlnoadypoilo- 35 wego sposobem opisanym, na przyklad w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki Nr 3 129 224. Otrzymane kwasy 7-dezacetoksycefalospo- ranowe stosuje sie zamiast kwasów 7-aminocefalo- sporanowych jako substraty do otrzymywania 40 zwiazków o wzorze 1 sposobem wedlug wynalazku.Sposobem wedlug wynalazku zwiazki o wzorze 1 stanowiace pochodne kwasu ^-{^'-^"-iCa-aminoalki- lo)fenylo] acetoamido}-cetfalosporanowego otrzymu¬ je sie przez acylowanie kwasu 7-aminocefalospora- 4_ nowego albo kwasu 7-dezacetoksycetfalosporanowe¬ go w postaci badz to wolnego kwasu badz to od¬ powiednich rozpuszczalnych w wodzie soli tych kwasów, znanych z opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki Nr 3 207 755, za pomoca srodka acylujacego zawierajacego co najmniej jed¬ na grupe o ogólnym wzorze 2, w którym R ma wyzej podane znaczenie, w którym grupa amino¬ wa jest chroniona w znany sposób. Proces acylo- wania prowadzi sie w znany sposób. Dogodnymi srodkami acylujacymi sa chlorki lub bromki kwa- 55 su 4-«-aminoalkilofenylooctowego, których grupy aminowe chroni sie uprzednio w zwykly sposób takimi grupami, jak. na przyklad grupa karboben- zoksylowa, karboalloksylowa, III rzed.- butylokar- bonylowa, /?-hydroksyalkilidenowa, funfurylohydro- 60 ksykazbonyIowa, adamantylohydroksykarbonylowa itp. Proces acylowania kwasu 7-aminocefalospora- nowegó lub 7-dezacetoksycefalosporanowego pro¬ wadzi sie korzystnie w obojetnym srodowisku wod¬ nym lub w srodowisku odpowiedniego rozpuszczal- 65 50 nika organicznego, w temperaturze^ nieco ponizej temperatury pokojowej, ale wyzszej od temperatu¬ ry krzepniecia mieszaniny reakcyjnej.Przewaznie kwas 7-aminocefaiosporanowy lub kwas 7-dezacetoksyceifalosporanowy miesza sie z odpowiednia iloscia kwasnego weglanu sodowego lub innego czynnika alkaiizujacegO^ w celu otrzy¬ mania wartosci pH 5 — 9, co sprzyja powstawaniu soli i rozpuszczaniu produktu. Otrzymany produkt rozpuszcza sie w wodnym roztworze acetonu o stezeniu 150% objetosciowych w .taki sposób, aby stezenie kwasu 7-aminocefalosporanowego luib 7- -dezacetoksycefalosporanowego w roztworze wyno¬ silo okolo 1—4% wagowych, po czym roztwór ochladza sie do temperatury 0°-^5°C i mieszajac oraz chlodzac dodaje do niego chlorek 4-aminoal- kilofenyloacetylu z chroniona grupa aminowa w 20% nadmiarze. Podczas dodawania wartosci pH roztworu utrzymuje sie na stalym poziomie 6—7,5 dodajac do mieszaniny reakcyjnej kwasny weglan sodu, badz wprowadzajac belkotka gazowy dwutle¬ nek wegla. Po dodaniu calej ilosci srodka acylu ja¬ cego przerywa sie proces chlodzenia i mieszanine reakcyjna miesza aiz do osiagniecia temperatury pokojowej, a nastepnie zakwasza sie kwasem sol¬ onym lub innym odpowiednim kwasem do wartoscia pH okolo 2, w celu otrzymania produktu w posta¬ ci wolnego kwasu 7-[2'-(4"-a-aminoalkilofenylo)- -acetoamido]-cefalosporanowego z chroniona grupa aminowa lub odpowiedniej pochodnej kwasu 7-de¬ zacetoksycefalosporanowego. Produkt ten ekstra¬ huje sie z mieszaniny reakcyjnej za pomoca roz¬ puszczalnika organicznego, takiego jak na przy¬ klad octan etylu. Otrzymany wyciag alkalizuje sie do wartosci p(H okolo 5,5 za pomoca wodorotlenku potasu lub sodu, amoniaku, odpowiedniej aminy lub innej zasady zawierajacej sód, potas, jon amo¬ nowy lub inny kation, po czym ekstrahuje woda.Ekstrakt wodny, zawierajacy pochodna z chro¬ niona grupa aminowa w postaci anionu soli w po¬ laczeniu z odpowiednim kationem, oddziela sie od roztworu organiazineigo i odparowuje do sucha. Po¬ zostalosc rozpuszcza sie w mozliwie najmniejszej ilosci alkoholu metylowego, po czym oddziela za¬ dany produkt przez odparowanie badz ochlodzenie roztworu i krystalizacje z dodatkiem alkoholu izo¬ propylowego jako czynnika zmniejszajacego roz¬ puszczalnosc. Otrzymany produkt odsacza sie, prze¬ mywa acetonem i suszy.Otrzymany produkt posredni poddaje sie proce¬ sowi usuniecia grupy ochronnej z grupy aminowej.Operacja ta moze byc wykonana przed lub po krystalizacji, korzystnie przez uwodornienie w la¬ godnych warunkach w obecnosci katalizatora pal¬ ladowego lub iprzez poddanie produktu krótkotrwa¬ lej reakcji ze slabym kwasem, na przyklad kwa¬ sem mrówkowym w temperaturze pokojowej w czasie 1—6 godzin. Grupa ochronna moze byc rów¬ niez usunieta z pólproduktu za pomoca kwasu trójfluorooctowego, przy czym zachodzi jednoczes¬ nie reakcja tworzenia soli kwasu trójifluorooctowe- go z kwasem 7-{2,-[4,,Kaminoalkilofenylo]aceto- amido}-ce£alosporanowym lub odpowiednim kwa¬ sem dezacetoksycefalosporanowym. Mozliwe jest usuwanie reszty kwasowej kwasu trójfluoroocto¬ wego na drodze reakcji z odpowiednia zywica65 984 anionowymienna w postaci zasady lub octanu, pjrzy czym wówczas otrzymuje sie produkt w pos¬ taci amfoterycznej. Odpowiednimi zywicami sa w tym przypadku slabe zywice anionowymienne, ta¬ kie ||ak'',9Ain^erli.te''IR-4B'' i „De-acidite — E',' w 5 postaci octanów, badz silnie zasadowe anionity zdolne do eliminowania chlorków lub innych anio¬ nów z roztworów cefalosporyn — takie jak na przyklad „Amberlite IRA-400", „Dowex 1" lub „De-acidite —FF". 10 Sposród organicznych aminowych zywic jono¬ wymiennych znajdujacych zastosowanie przy otrzymywaniu zwiazków wytwarzanych sposobem wedlug wynalazku mozna wymienic zywice wy¬ twarzane przez firme Rohm and Haas Go. pod 15 nazwami handlowymi ,Amberlite LA-I" i „Am¬ berlite LA-2", a takze zywice podane w opisie pa¬ tentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 2 870 207. Zywica anionowymienna ,,Amberlite LA-l" nalezy do (grupy cieklych amin drugorzedo- 20 wych o wysokim ciezarze czasteczkowym, nieroz¬ puszczalnych w wodzie, lecz z 'latwoscia rozpusz¬ czalnych, w weglowodorach i innych rozpuszczalni¬ kach niewodnych. Zywica ,yAmlberlite LA^l" za^ wiera dwa silnie rozgalezione lancuchy alifatycz- 25 ne przylaczone do atomu azotu, co nadaje jej do¬ skonala rozpuszczalnosc w rozpuszczalnikach or¬ ganicznych przy .bardzo mallej rozpuszczalnosci w wodzie. Te wlasciwosci, w polaczeniu z duza reak¬ tywnoscia drugorzedowych amin w stosunku do 30 kwasów powoduja, ze zywica ta nadaje sie szcze¬ gólnie dobrze do eliminowania kwasów z. roztwo¬ rów wodnych.Proces acylowania kwasów 7-aminocefaiospora- nowych i 7-dezacetoksycefalosporanowych moze 35 byc równiez prowadzony przy uzyciu odpowiedniej reaktywnej pochodnej kwasu 2-[4,-i(«-aminoail|kilo)- fenylo]-octowego stosowanego jednoczesnie z kar- boimidem, przy czym w tym przypadku reakcja acylacji zachodzi w temperaturze otoczenia. Do te¬ go celu mozna stosowac jakiekolwiek karboimidy, przy czym aktywna czescia karboimidu jest uklad —iN=c=iN—. Przyklady takich karlboiimidów poda¬ no w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 232 913, a mianowicie: N^-dwuety- lokailbodwuimid, N^-dwu-n-propylokailbodwu- imid, N,N'-dwuizopropylokar)bodwuimid, N,LN'-dwu- cykloheksylokaribodwuim-id, N^-dwuaililokarbo- dwuimid, NjW-dwuiCip-dwumetyloaminofenyW-kar- bodwuimid, N-etylo-N'- (4"-etylo-2"-oksyrynylo)- karbodwuimiditp. 50 Acylacje kwasów 7-aminocefal«sporanowego lub 7-dezacetdksycefalosporanowego mozna prowadzic w inny jeszcze sposób, a mianowicie przy uzyciu wybranych aktywnych pochodnych kwasu [4'-i(a- -aminoalkilo)-tfenylo]-octowego, na przyklad odpo- 55 wiednich bezwodników kwasowych, mieszanych bezwodników kwasowych, badz tez przy uzyciu aktywnych estrów, na przyklad estru p-nitrofeny- lowego lub cyjanometylowego.(Niektóre sposród zwiazków kwasu 4-(a-aminoal- 60 kiikO^fenylooctowego w postaciach nadajacych sie do acylowania kwasów 7-aminocefalosporanowego lub 7-dezacetoksycefalosporanowego, to jest w po- s_taci halogenków kwasowych, mieszanych bezwod¬ ników lub chlorowcomrówczanów, zawieraja nie- 65 40 symetryczny-atom wegla i dzieki temu mozliwe jest istnienie izomerów optycznie czynnych. Te zwiazki stereoizomeryczne maga byc-stosowane do wytwarzania zwiazków o wzorze 1 sposobem we¬ dlug wynalazku zarówno w stanie czystym, to jest bez domieszek innych izomerów^ albo w postaci mieszanin izomerów optycznych: Przykladem takie¬ go zwiajzku mieszanego jest mieszanina stereoizo- merów kwasu 7-{2'-[4,,-J(d- i l-«-armnoetylo)!feny- lo]-acetoamido}^cetfalosporanowego. Taka miesza¬ nina moze byc otrzymana, na przyklad, przez pod¬ danie kwasu 7-aminocefalceporanowego reakcji z mieszanina kwasów 2-[4Xd i l^-aminoetylo)fenylo] -octowych lub ich pochodnych o wiekszej reaktyw¬ nosci, badz tez przez zmieszanie w odpowiednim stosunku oddzielnych izomerów prawo i lewoskret¬ nych kwasu 7-{2,-[4"--(a-aminioetyik)fenylo]-aceto- amido}-cefalosporanowego, otrzymanych sposoba¬ mi opisanymi ponizej w przykladach. W celu otrzy¬ mania oddzielnych izomerów optycznych cefalospo^ ryny kwasy 2-[4H«-aminoalMlo)fenylo]^octowe rozdziela sie w zwykly sposób, polegajacy na pod¬ dawaniu reakcji wolnego kwasu z cynchonina, strychnina, brucyna itp. i na rozdzielaniu otrzy¬ manych soli droga frakcjonowanej krystalizacji.Po rozdzieleniu, poszczególne frakcje soli za¬ kwasza sie, otrzymujac wolne, rozdzielone kwasy w postaci prawo- i lewoskretnych izomerów. Kaz¬ dy z tak otrzymanych prawo- lub lewoskretnych kwasów 2-{4M(a-aminoalkilo)fenylo] -octowych mo¬ ze byc zastosowany .w postaci..kwasu w.obecnosci karboimidu do reakcji z kwasami 7-aminocefa- losporanowymi lub 7-aminodezacetoksycefalospora- nowym, albo tez moze ibyc przeprowadzony w od¬ powiedni halogenek kwasowy, mieszany bezwod-r nik lub chlorowcomrówczan, przy czym reakcje te powinny byc prowadzone tak, aby uniknac pow¬ stawania odmian racemicznych.Aktywnosc biologiczna zwiazków otrzymanych sposobem wedlug wynalazku zbadano wobec róz¬ nych mikroorganizmów. Stwierdzono, ze kwas 7-{2'-[4"-(d^a-aminoetylo)-fenylo]- acetamido}-cefa- losporanowy, otrzymany w sposób opisany w nizej przytoczonym przykladzie I, w stosunku do 4 szcze¬ pów odpornego na penicyline Staphylococcus aure- ues wykazuje minimalne stezenie hamujace wyno¬ szace 0,2—0,8 ^g/ml w obecnosci surowicy krwi ludzkiej i 0,3—0,8 ^g/ml w przypadku nieobecnos¬ ci surowicy. Wartosci porównawcze penicyliny, uzyskane metoda plytkowa na plytkach Petriego, wynosza 1,4^9 ^g/ml, a dla znanego antybiotyku cefalotyny wynosza 0,9^2,2 ^g/ml. Otrzymany spasem wedlug wynalazku kwas 7-{2'-[4"-()d-a- amimoetylo) -fenylio] -acetamido} -cefalosporanowy przy dwukrotnym stosowaniu doustnym wykazuje w stosunku do wyodrebnionego z myszy /ffnhemoli- tycznego szczepu C203 Streptococcus pyogenes srednia dawke skuteczna ED^ wynoszaca 7y5 mg/ /kg* W stosunku do wymienionych nizej organiz¬ mów Gram-ujemnydh kwas ten wykazuje mini¬ malne stezenia hamujace, okreslone metoda plyt¬ kowa, podane w tablicy 1.Kwas 7- {2*1[4"-(aminometylo)^fenylo]-acetamido}- -cefalosporanowy, otrzymany w sposób opisany w nizej przytoczonym przykladzie III, w stosunku do 4 szczepów odpornego na penicyline Staphylo-65 984 8 Tablica 1 -Badany mikroorganizm •¦ :.,.:" " N-9ShigeHa sp [ N-10 Escneridhia coli Nh26 Esdherichiia coli X-26 KHebsiellla pneumoniae Xh©8 Aerdbacter aerogenes K-fl. Klebsiella pneumoniae powyzej Shigella sonnei Minimailne ste¬ zanie hamujace | ^g/ml 24 15 16 10 10 50 20 coccus aureus wykazuje minimalne stezenie hamu¬ jace wynoszace 0,4 jug/ml w obecnosci surowicy krwi ludzkiej i 0,8 — 1 /*g/ml w przypadku nie¬ obecnosci surowicy. Kwas ten przy dwukrotnym stasowaniu doustnym wykazuje w stosunku do wyodrebnionego z myszy /?-hemolitycznego szczepu C203 Streptococcus pyogenes srednia dawke sku¬ teczna ED50 wynoszaca 6,75 mg/kg, zas w stosunku do organizmów Gram-ujemnych wykazuje mini¬ malne stezenie hamujace, okreslone metoda plyt¬ kowa na plytkach Petriego, podane w tablicy 2.Tablica 2 Badany mikroorganizm 1 N-9 Shigella sp.N-io Esdherichia coli Nh26 Escheridhia coli X-26 Klebsiella pneumoniae X^68 Aerobaoter aerogenes K-l Klebsiella pneumoniae powyzej Shigella sonnei Minimalne ste¬ zenie hamujace /*g/ml 24 15 16 10 10 50 20 Kwas 7-{i2'-i[4"- do}-3-metylo-3-cefemokarboksylowy-4, otrzymany w sposób opisany w przykladzie IV, podawany doustnie myszom, wykazuje w stosunku do Strep- tocodcus pyogenes, grupa A, szczep C203, dawke skuteczna ED50 wynoszaca 31,2 mg/kg, podczas gdy smiertelna dawka tego kwasu dla myszy wynosi 3250 m«g/kg. Próby na rozmazach agarowych prze¬ ciwko róznym drobnoustrojom, wykonane przy uzyciu tego kwasu, wykazuja maksymalne stezenie hamujace w ciagu 48 godzin. W stosunku do Strep¬ tococcus faecalis wynosi ono ponizej 6y25 pg/nn i w stosunku do Escherichia coli Nr 2 równiez po¬ nizej 6,25 /*g/m tego kwasu w stosunku do 4 róznych szczepów od¬ pornego na penicyline Streptococcus aureus wynosi w Obecnosci surowicy krwi ludzkiej 5—II /-tg/ml, a w przypadku nieobecnosci surowicy 8 /Ag/ml.- Nastepujace przyklady objasniaja sposób wedlug wynalazku, nie ograniczajac jednak jego zakresu.Przyklad I. Mieszanine 475 mg (5 milimoli) chloromrówozanu metylu i 25 mil acetonu zawie¬ rajacego dwie krople dwumetylobenzyloaminy ochladza sie w lazni zawierajacej mieszanine lodu r alkoholu. Do ochlodzonej mieszaniny wkrapla sie mieszajac w ciagu 30 miriut il,4 g (5 milimoli) kwa¬ su 4-[IN^(iiiH raed.-butotosykaiibonylo)-d-a-a.minoety- lol-fenylooctowego rozpuszczonego w 25 ml aceto¬ nu zawierajacego 500 mg trójetyloaminy, W celU 5 otrzymania mieszanego bezwodnika" kwasowego; Nastepnie przygotowuje sie mieszanine 1,5" g (5,5 milimoli) kwasu 7-aminocefadosporanowego w 30 ml wody zawierajacej 550 mg (5t5 milimoli) trój¬ etyloaminy i po oczyszczeniu weglem aktywowa- io nym i ochlodzeniu wkrapla sie ja mieszajac w cia¬ gu 5 minut do mieszaniny zawierajacej uprzednio otrzymany bezwodnik kwasowy. Mieszanine pozo¬ stawia sie nastepnie na okres 1 godziny bez ogrze¬ wania, w celu doprowadzenia reakcji do konca. 15 Otrzymuje sie kwas 7-{2,-{4"-(N-IIl-rz.-butoksykar- bonylo-d-a-aminoetylo)- fenylo]- acetoamino}- ce- falosporanowy z chroniona igrupa aminowa. Kwas ten oczyszcza sie przez usuniecie acetonu, przemy¬ cie pozostalosci woda, ochlodzenie i ekstrakcje roz- 20 puiszczalnilkiem organicznym po uprzednim zakwa¬ szeniu roztworu do wartosci riH 2,15 za pomoca In kwasu solnego w obecnosci octanu etylu. Nie ob¬ serwuje sie stracania kwasu 7-aminocefalosporano- wego. Nastepnie oddziela sie warstwe wodna, war- 25 stwe organiczna suszy sie za .pomoca siarczanu magnezu i odparowuje octan etylu. Otrzymuje sie 2,5 g bezpostaciowej cefalosporyny z chroniona grupa aminowa, co odpowiada 93% wydajnosci teoretycznej. Otrzymany produkt rozciera sie na proszek z eterem dwuizopropylowym i suszy pod zmniejszonym cisnieniem. Otrzymuje sie 2,0 g kwa¬ su 7- (!2,-i[4,,^(|N-IIiI-rz,-butoksykairbonylo-d-«-amino- etyio)-fenylo]-acetoamido}-cefalosporanowego.Analiza elementarna produktu wykazuje zawar¬ tosc 55,94% C, 6,4(1% Hi 6,911% N, podczas gdy wartosci te obliczone dla zwiazku o wzorze suma¬ rycznym CfljHgiNaOe wynosza 56,28% C, 5,86% H i 7,88% N.Wartosc pKa otrzymanego zwiazku wynosi 4,95.Absorpcja w ultrafiolecie w alkoholu etylowym wynosi Am260 = 8050.Ig kwasu 7-{2,-i[4,,- -d-a-amdnoetylo)- ifenylo]- acetoamido}- cefalospo¬ ranowego otrzymanego w sposób opisany powyzej rozpuszcza sie w J10 ml zimnego kwasu 'trójfluoro- octowego i pozostawia bez ogrzewania na okres 2 godzin', w celu odszczepienia trzeciorzedowej buto- ksykarbonylowej grupy chroniacej grupe aminowa i utworzenia soli kwasu trójfluorooctowego i kwa¬ su 7-{^-^"-Kd-a-aminoetylojtfenylo]-acetoamido}- -cefalosporanowego. Sól te wytraca sie z roztworu po dodaniu 3 porcji po 30 ml bezwodnego eteru etylowego. Sól te odwirowuje sie, przemywa bez¬ wodnym eterem i suszy w eksykatorze próznio¬ wym. Otrzymuje sie 800 mg soli kwasu trójfluoro¬ octowego kwasu 7-[d-4-a-aminoetylofenacetoami- do]-cefalosporanowego, co odpowiada '78% wydaj¬ nosci teoretycznej. Wartosci pKa produktu wyno¬ sza 4,7 i 9,2, a widmo w ultrafiolecie dla roztworu 60 tego zwiazku w etanolu wykazuje absorpcje Am260 = 7730.Roztwór 500 mg (0,9 milimola) soli kwasu trój¬ fluorooctowego i kwasu 7-{i2,-;[4"-(d-a-aminoetylo) fenylo]-acetoamido}-cefalosporanowego w 4 ml 65 wody wkrapla sie w ciagu 1 godziny w tempera- 30 35 40 45 50 5565 984 9 10 turze pokojowej do 20 ml 25°/o roztworu cieklej anionowej zywicy jonowymiennej „Aniberlite LA-1" w postaci octanu w ketonie metyloizóbutylowym.Nastepnie oddziela sie warstwe wodna, przemywa ja ketonem metyloizohutylowym, a na koniec ete- 5 rem etylowym. Podczas zatezania roztworu pod zmniejszonym cisnieniem straca sie sól wewnetrz¬ na kwasu 7- {12'-[4"-(d-a-aminoe1;ylo)-fenylo] -aceto¬ amido}-cefalosporanowego, lecz nie krystalizuje.Otrzymuje sie 265 mg produktu, co odpowiada &8°h 10 wydajnosci teoretycznej. Wartosci pKa wynosza dla produktu 4,8 i 9,35. Skrecalnosc wlasciwa zwiazku wynosi +103,6°.Przyklad II. Postepujac w sposób analogicz¬ ny do opisanego w przykladzie I, kwas 7-(2'-{4"- 15 -(N-III-rzed1. butoksyikarbonylo-l-«-aminoetylo)-fe- nylo]-acetoamido}-cefalosporanowy wytwarza sie przez reakcje chlorku kwasu 2-[4,-(N-IH-rzed. bu- toksykarbonyilo-l-a-amiinoetylo)Hfenylo]-octowego z kwasem 7Haminocefalosporanowym. Po roztarciu 20 produktu z eterem dwuizopropylowym otrzymuje sie 1,8 g kwasu 7-{2'-[4,,-i(NJHI-rzed. butoksykar- bonylo-1-a-aminoetylo)- fenylo]- acetoamido}- ce¬ falosporanowego.(Produkt ten nie topnieje lecz rozklada sie w tern- 25 peraturze okolo iiaO°C. Absorpcja w ultrafiolecie dla roztworów w alkoholu etylowym przy Am262 wynosi 7400 w roztworze wodnym 8200. Otrzyma¬ ny zwiazek posiada wartosc pKa równa 4,9. Wid¬ mo w podczerwieni odpowiada strukturze tego 30 zwiazku.Analiza elementarna otrzymanego zwiazku wy¬ kazuje: 55,69tyo C, 6,30°/o H i 7,04% N, podczas gdy wzorowi sumarycznemu C^H^fi^ odpowiada: 56,27% O, 5,86% H i 7,88% N. ii g otrzymanego kwasu 7-{2,-[4,,-(N-IH-rzed. lu- toksykarbonylo-1-a-aminoetylo)- fenylo]- acetoami¬ do}-cefalosporanowego rozpuszcza sie w 10 ml zimnego kwasu trójfluorooctowego i pozostawia nie 40 ogrzewajac w ciagu 2 godzin w celu oderwania grupy chroniacej grupe aminowa i otrzymania soli kwasu 'trójfluorooctowego kwasu 7-{2^[4"-i(l-a-ami- noetylo)- fenylo]- acetoamido}- cefalosporanowego.Sól te straca sie z roztworu przez dodanie do nie¬ go 3 porcji po 30 ml bezwodnego eteru etylowego.Stracona sól odwirowuje sie, przemywa i suszy w eksykatorze prózniowym. Otrzymuje sie 820 mg produktu o wartosciach pKa wynoszacych 4,7 i 9,2.Absorpcja w ultrafiolecie przy Am2flo wynosi 6700.Roztwór '500 mg soli kwasu trójfluorooctowego 50 7-{2'- ^"-/l-a-aminoetylo] - acetoamido}- cefalospo¬ ranowego w ilO ml wody wkrapla sie mieszajac w czasie 1 godziny, w temperaturze pokojowej, do 20 ml cieMej 25% anionowymiennej zywicy „Am- berllte LA-il" w postaci octanu w srodowisku ke¬ tonu metyloizobutylowego. Oddziela sie faze wod¬ na, przemywa ja ketonem metyloizóbutylowym i woda i odparowuje do malej objetosci, otrzymu¬ jac 275 mg (wydajnosc 70%) krystalicznego zwiaz¬ ku amfoterycznego, to jest soli wewnetrznej kwa- 60 su 7-{!2'-i[4,,-,(i-a-aminoetylo)fenylo]-acetoamido}-ce¬ falosporanowego. Otrzymany zwiazek wykazuje albsorpcje w ultrafiolecie przy Am26o wynoszaca 7720 1 posiada dwie wartosci piKa — 4,7 oraz 9,3.Widmo w pod^rwieni odpowiada strukturze 65 35 45 55 zwiazku. Skrecalnosc optyczna zwiazku; wynosi Przyklad HI. 2,75 g (10,4 milimoli) kwasu 2- [4" (Ml-i^cL-butoksykarbonjdoaininometylo) -fe¬ nylo]-octowego rozpuszcza sie w mieszaninie 30 ml dwuoksanu i 15 ml acetonu i do roztworu dodaje roztwór 1,05 g '(110,4 milimoli) trójetyloaminy w 5 ml acetonu. Otrzymana mieszanine chlodzi sie na lazni lodowo-alkoholowej i mieszajac wkrapla w ciagu 20 minut roztwór 1,41 g chloromrówczanu izobutylu w 5 ml dwuoksanu. Mieszanine miesza sie jeszcze w ciagu 10 minut w temperaturze —5°C w celu zakonczenia reakcji i otrzymania^Jdanego bezwodnika kwasowego. Do oziebionej mieszaaany dodaje sie w jednej porcji swiezo przygotowany roztwór .2,83 g {10,4 milimoli) fcwasu 7Haminocefa^ losporanowego i 1,05 g trójetyloaminy w 20 ml zimnej wody. Mieszanine pozostawia sie przez noc w temperaturze 0°C, po czym zateóa sie ja pod zmniejszonym cisnieniem w celu odpedzenia dwu¬ oksanu i acetonu, a nastepnie rozciencza 30 ml wody i przemywa 150 ml octanu etylu. Do mie¬ szaniny dodaje sie nastepnie 200 ml octanu etylu i mieszajac traktuje 1 n kwasem solnym az do- otrzymania wartosci pH 2,8. Po oddzieleniu wa£& stwe z octanem etylu, zawierajaca aminozwiaarifc z chroniona grupa aminowa, przemywa sie 2 por^ cjami wody po 100 ml i nastepnie dodaje 100 ml wody i tyle 1 n roztworu wodorotlenku potasowe¬ go, aby uzyskac wartosc pH 6,S i spowodowac powstanie soli potasowej kwasu 7-{2r-t*E-i^lI^ -rzed.-lbutoksykarbonyloaminometylo) -fenjj^o] -aas- toamido}-cefalosporanowego. Wodny roztarór^ tej soli przemywa sie 100 ml octanu etylu, rozdziela warstwy, odrzuca warstwe organiczna, a warstwe wodina suszy sie pod zmniejszonym cisnieniem az do otrzymania pólkrystalicznej pozostalosci.Otrzymana sól oczyszcza sie przez krystalizacje, rozpuszczajac ja w 15 ml cieplego alkoholu mety¬ lowego, saczac roztwór i stracajac krystaliczny osad soli przez dodanie do roztworu okdlo 15 ml alko¬ holu izopropylowego. Krysztaly wraz z lugiem ma¬ cierzystym ochladza sie do temperatury 0°C, odsa¬ cza i suszy pod zmniejszonym cisnieniem. Otrzy¬ muje sie 11,0 g soli potasowej kwasu 7-{2'-[4"- -Ill-rzed. butoksykaiibonyloaminometylo) -fenylo]- -acetoamido}-cefalosporanowego. Absorpcja pro¬ duktu w ultrafiolecie przy Am26ó wynosi 8140, a wartosc pKa wynosi 4,8.Roztwór 0,75 g otrzymanej soli w 15 anl ,*hh^ traktuje sie 15 ml wody traktuje sie 15 3ffl&J§8^r kwasu mrówkowego i ogrzewa roztwór w^teiape- raturze 40^ w ciagu okolo 3,5 godziny, po czym zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem az do otrzymania krystalizujacej zywicowatej pozosta¬ losci. Otrzymany 7-{2'-i[4,M(aminometylo)fenylo]- -acetoamido}-cefalosporanian nieznacznie rozpusz¬ cza sie w goracej i zimnej wodzie, nie rozpuszcza sie w octanie etylu i kwasie octowym, lecz roz¬ puszcza w kwasie mrówkowym. Sporzadza sie za¬ wiesine soli w 10 ml wody i ustala sie jej wartosc pH na 1 za pomoca 1 n kwasu solnego. Przy toj^ wartosci pH rozpuszcza sie wiekszosc czesci sta^ lych. Roztwór saczy sie, po czym ponownie ustala* wartosc pH na 4,2 za pomoca 1 n roztworu wodo¬ rotlenku sodowego, Wytracony klaczkowaty osada 65 984 iz *«dsacza sie otrzymujac o&blo 20''tal roztworu sólf wewnetrznej kwasu 7-{2S[4,,-(aminometylo)fenylo]- ^oóloamidol-cefalósporanowego. Roztwór odparo¬ wuje Sie pod zmniejszonym cisnieniem, otrcymu- ja^e krystaMczny '¦'- produkt Otrzymana sól wew¬ netrzna kwasu ' 7-{l2N[4*^aminometylo)fenylQ]-ace¬ toamido}-cefalosporanow w mieszaninie z 2/3 (zejsciami dwumetyloformamidu posiada wartosci piKa wynoszace 4,7 i 9,4. Absorpcja w ultrafiolecie przy Am260 wynosi PrziykiJad IVv Sporzadza sie mieszanine 5 g (0,00186 m^a) kwasu 2-[4Wra-rzeti.-bu1»ksykarbo- nyloanii2iometylo/-fenylo]-octowego, 1,9 g trójetylo- aminy i 2,512 ig chloromrówczanu izobutylu rozpusz¬ czonego w 100 ml czterowodorafuranu, otrzymujac mieszainy bezwodnik kwasu amino 2-[4,- -butoksykarbonylpaminometylo)- fenylo] -octowego i kwasu izomaislowego. Nastepnie sporzadza sie roztwór 40 g kwasu 7-amino^ezacetoksycefalospo- ranowego w 60 mil czterowodofrofuranu i 00 ml wody i aa pomoca trójetyloaminy doprowadza war¬ tosc p(H tego roztworu do a. Roztwór ten dodaje sie nastepnie mieszajac do uprzednio przygotowa¬ nej ochlodzonej mieszaniny zawierajacej miesza¬ ny bezwodnik. Mieszanine pozostawia sie do cal¬ kowitego przereagowania. Otrzymany jako produkt posredni kwas 7-{2,^[4,,^(lN^IIiI-rzed.-butoksykaiibo- nyloaminometylo)- fenylo]- acetoamido}- dezaceto- ksycefalosporanowy wyodrebnia sie z mieszaniny sposobem opisanym w przykladzie I. Otrzymuje sie 2,06 ig tego produktu, posiadajacego absorpcje w ultrafiolecie wynoszaca przy Am2M — 4770. War¬ tosci pKa wynosza 5,55 i 7,il. Zwiazek straca sie ponownie z mieszaniny eterów dwuetyflowego i naf¬ towego i otrzymuje 1,6 g oczyszczonego produktu, zasiadajacego absorpcje w ultrafiolecie wynoszaca przy Am22o = 12,800, przy Am26o — 57O0, a wartosci pKa wynosza 5,5 i 7,2. 1,6 g kwasu 7-{2,-![4"-i(NHlH-rzedHbutoksykarbo- nyloaminometylo)- fenylo]- acetoamido}- dezaceto- ksyeefalosporanowego poddaje sie reakcji z 6 ml kwasu trójfluorooctowego w sposób opisany w przykladzie II, w celu odszczepienia grupy ochron¬ nej z grupy aminowej i utworzenia soli kwasu trójfluorooctowego kwasu 7-{2'H[4,,-(aminometylo)- -fenylo]- acetoamido}- dezacetoksycefalosporano- wego, która straca sie z roztworu po dodaniu eteru etylowego. Otrzymuje sie 1,2 g tej soli. Absorpcja w ultrafiwlecie przy Am260 = 65O0. Wartosci pKa wynosa^Ldla tego zwiazku 5,55 i 9,1. 1 g otrzymanej soli dodaje sie do mieszaniny 2 ml wody i 2 ml ketonu metyloizobutylowego, w której sól nie rozpuszcza sie. Do otrzymanej zawiesiny dodaje sie 3 ml wody i poddaje miesza¬ nine reakcji z anionowymienna zywica „LA-1" produkcji firmy Rohm & Haas, znajdujacej sie w postaci octanowej. Mieszanine miesza sie w ciagu 1 godziny az do zakonczenia reakcji, odsacza faze stala, przemywa ja woda, ketonem metyloizobuty- lowym i nitrylem octowym, po czym suszy. Otrzy¬ muje sie 3)90 mg wewnetrznej soli kwasu 7-{2'-[4"- -aminometylo)fenylo]- acetoamido}- 3-metylo-3-ce- femo-4-karboksylowego. Widmo w podczerwieni odpowiada strukturze zwiazku. Absorpcja w ultra¬ fiolecie wynosi przy Am216 = 13070 i przy Am2M = 40 — 71130. Próba l\loora-iSteina wykazuje jedno mak¬ simum. Wartosci $Ka dla tego zwiazku wynosza 5,35 i9,2. 5 PL PL

Claims (16)

1. Zastrzezenia patentowe ii. Sposób wytwarzania nowych, antybiotyków typu cefaloisporyny o ogólnym wzorze 1, w którym R oznacza atom wodoru lub rodnik alkilowy, o 1 io lub 2 atomadh we^la, a R1 oznacza atom wodoru lub grupe acetoksylowa, jak równiez ich wewnetrz¬ nych soli lub mieszanin stereoizomerów, znamien¬ ny tym, ze kwas 7-aminocefalosporanowy lub kwas 7-aminodezacetokJsycefalosporanowy lub ich 15 rozpuszczalne w wodzie sole acyluje sie za pomo¬ ca srodka acylujacego zawierajacego co najmniej jedna grupe o ogólnym wzorze 2, w którym R ma wyzej podane znaczenie i w którym grupa amino¬ wa jest chroniona w anany sposób, po czym usai- 20 wa sie w znany sposób grupe ochronna i otrzyma¬ ny zwiazek o wzorze ii ewentualnie przeprowadza znanymi sposobami w sól z farmakologicznie do¬ puszczalnym kwasem lub zasada.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze 25 proces acylowania prowadzi Isie w srodowisku wodnym lub w rozpuszczalniku organicznym w temperaturze powyzej temperatury krzepniecia mieszaniny reakcyjnej, do temperatury pokojowej.

3. Sposób wedlug zastrz. 1 i 2, znamienny tym, 30 ze proces acylowania prowadzi sie w srodowisku obojetnym.

4. Sposób wedlug zastrz. 1^3, znamienny tym, ze proces acylowania prowadzi sie w temperaturze 0°C—5^C, 35

5. Sposób wedlug zastrz. 1—4, znamienny tym, ze jako srodek acylujacy stosuje sie chlorek lub bromek kwasu 2-[4'-l(«-aminoalkilo)fenylo]-octowe¬ go z chroniona grupa aminowa.

6. Sposób wedlug zalstrz. 5, znamienny tym, ze reakcje prowadzi sie w wodnym roztworze ace¬ tonu.

7. Sposób wedlug zastrz. 1—4, znamienny tym, ze jako srodek acylujacy stosuje sie mieszany bez¬ wodnik kwasu 2-[4'^(a-ammoailkilo)feny(lo]-octowe¬ go z chroniona grupa aminowa i nizszego kwasu karlboksylowego.

8. Sposób wedlug zalstrz. 7, znamienny tym, ze reakaje prowadzi sie w wodnym roztworze cztero- wodorofuranu. 50

9. Sposób wedlug zastrz. 7, znamienny tym, ze reakcje prowadzi sie w mieszaninie acetonu i dioksanu.

10. Sposób wedlug zastrz. 1—9, znamienny tym, ze z kwasu 2-[4^(a-aminoalkilo)-fenylo]-octowego 55 z chroniona grupa aminowa odszczepia sie grupe ochronna przez reakcje uwodornienia^ prowadzona w lagodnych warunkach w obecnosci katalizatora palladowego. 1,1.

11. Sposób wedlug zastrz. 1^9, znamienny tym, 60 ze z kwasu 2-[^(a-aminoalkiilo)-fenylo]-octowego z chroniona grupa aminowa, odszczepia sie grupe ochronna na drodze hydrolizy za pomoca slabych kwasów.

12. Sposób wedlug zastrz. 11, znamienny tym, ze'. 65 hydrolize prowadzi sie za * pomoca kwasu mrów-65 i 13 kowego w temperaturze pokojowej w czasie 1—5 godzin.

13. Sposób wedlug zastrz. 1—9, znamienny tym, ze z kwasu 2-[4M(a-aniiinoalikilo)fenylo]-octowego z chroniona grupa aminowa odszczepia sie grupe 5 ochronna w reakcji z kwasem trójfluorooctowym, przy czym powstaje sól kwasu trójfluorooctowego z kwasem 7-{'2V[4"-i(aminoalkalo)fenylo]-acetoami- do}-cefalosporanowym lub z kwasem 7-{2'-[4"- -(aminoalkilo)fenylo]- acetoamido}- dezacetoksyce- 10 falosporanowym.

14. Sposób wedlug zastrz. 13, znamienny tym, ze sól kwasu trójdiluorooctowego i kwasu 7-{2,-[4"- -(aminoalkilo)fenylo]- aceta/mido}- cefalospora no¬ wego lub sól kwasu trójfluorooctowego i kwasu 15 7-{2'-{4"-(aminoalkilo)fenylol- acetamido}- dezace- toksycefalosporanowego poddaje sie reakcji z zy-- 14 wica anionowymienna w postaci zasady lub octa¬ nu, w celu otrzymania amfoterycznych kwasów ce- falosporanowych lub dezacetoksycefalospora no¬ wych.

15. Sposób wedlug zastrz. ,1—14, znamienny tym, ze do acylowania stosuje sie kwasy 2-[4'H(a-amino- alkilo)fenylo]-octowe* w postaci rozdzielonyclh, op¬ tycznie czynnych kwasów diastereoizomerycznych.

16. Sposób wedlug zastrz. 15, znamienny tym, ze mieszanine racemiczna optycznie czynnych wol¬ nych kwasów 2- [4'-(a-aminoialkilo)fenyilo]-octowych rozdziela sie przez poddawanie jej reakcji z cyn- chonina, strychnina lub brucyna i nastepnie-frak¬ cjonowana krystalizacje soli diastereoizomerycz¬ nych i oddzielne zakwaszanie rozdzielonycii soli, w celu otrzymania wolnych kwasów w postaci izo¬ merów lewo--i. prawoskretnych. - :..,..,.,..65 984 MKP C07d 99/24 O CH2—C A/zór 1 NH-CH 0=C- CH -N COOH CH2 C-CH, RA R CH \ CH, h/zcr Z ZF „Ruch", W-wa, zam. 496-72, nak2. 200 egz. -f 20 Cena zl 10,— PL PL