Nastepnie usunieto torebke z kazdej nerki, a tkanke zaibeapieczono i podzielono na cienkie war- 15 stwy i traktowano po tym trypsyna wedlug Youn- gera. Zawiesine komórek wirowano z szybkoscia 600 Obrotów na minute, a ciecz znajdujaca sie na wierzchu usunieto. Komórki zawieszono z kolei w 15 ml surowicy z cielecia w celu zobojetnienia dzia- M lania pozostalej trypsyny, po czym znowu wirowa¬ no. Surowice usunieto, a zbite komórki zawieszono w pozywce w stosunku: 1 czesc zbitych komórek na 250 czesci pozywki. Pozywka skladala sie z roztworu soli Earle z dodatkiem 0,5% hydrolizatu u albuminy mleka i 10*/« surowicy z cielecia.Zawiesine komórek w ilosci po 1 ml przeniesiono do zwyklych probówek stosowanych w hodowli tkankowej. Probówki ustawiono pionowo i frrfcu- bowano w temperaturze 36,5±0,3*C. Po 48 godzi¬ nach wiekszosc komórek przylgnela do szkla i wy¬ kazywala tendencje do reprodukcji. Stara pozyw¬ ke usunieto i zastapiono swieza o takim samym skladzie. Przed dodaniem swiezej pozywki Ph do¬ prowadzono do wartosci okolo 7,4. Hodowle tkan¬ kowa utrzymywano w tym stanie do 5 dni po uzu¬ pelnieniu pozywki. Pod koniec tego okresu Ph spadlo do wartosci okolo 6,8. Pozywke zastapiono swieza o tym samym skladzie z tym, ze zawatitosc surowicy zredukowano z MP/* do 5%. W miedzy* czasie wartosc Ph spadla do 0,8. Pozywke zmienia- -no w odstepach pieciodniowych w ciagu 18 do 20 dni po wprowadzeniu wirusa, a ciekla faze hodow¬ li usuwano i zbierano. Zebrana ciecz stosowano do iniekcji wrazliwych kotów, aby stwierdzic ewen¬ tualne dzialanie wirusa. 1 ml zebranej cieczy z kazdej z dwóch hodowli tkankowych, pochodzacych od kotów A i B, wstrzy¬ kiwano wrazliwym kotom w róznych stadiach roz¬ wojowych w celu stwierdzenia jej ewentualnego dzialania. W tabeli II litery A i B oznaczaja to, ze wirus otrzymano z kota A lub B, a cyfra po li¬ terze oznacza numer zwierzecia doswiadczalnego, któremu wstrzyknieto zebrana ciecz.Tabela II Kot A — 1 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kot A —2 Ilosc dni ,po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kot B —1 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kot B —2 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi 2 39 13800 2 39,1 13450 2 39,1 11700 ¦ 2 ¦ 3*,S 17750 3 38,7 19100 3 38,7 13200 3 39 39 16950 4 39,2 9300 4 38,8 6650 4 38,8 14400 i. 4 38,3 13850 5 39 3350 5 39,2 16«f0 5 38,3 134L0 11- 40,7 960 6 40 900 6 39,7 9700 6 40,4 2500 7 40.8 890 7 3P,2 450 7 39,7 900 7 40,7 350 9 niezyv y 8 39,5 « ¦ g .-¦:¦¦¦'-¦:¦ niezywy Cztery koty podane w tabeli II reagowaly na wstrzykiwanie zebranej cieczy wyrafcna goraczka i silnie zmniejszona iloscia bialych cialek krwi.Dwa koty byly niezywe w ósmym dniu poo iniekcji wirusem, a pozostale dwa byly w stanie agonal¬ nym. U wszystkich kotów wystapily symptomy panleukopenii. Tym samym udowodniono, ze koty A i B cierpialy na panleukopenie.Ciecz zebrana z pierwszej hodowli tkankowej za¬ stosowano do inokulacji nowego srodowiska ho¬ dowli tkankowej w drugim pasazu, w którym za¬ stosowano tkanke zdrowego kota. Sposób preparo¬ wania nerek zdrowego kota byl taki sam jak w 30 35 przypadku preparowania nerek kotów A i B zain¬ fekowanych wirusem. Ciecz zebrana z pierwszych hodowli tkankowych dodano do zawiesiny komó¬ rek- w ilosci 1 ml cieczy na 10 ml zawiesiny komór¬ kowej.Inkubacje prowadzono w temperaturze 3«,5 ± ± 0,5°C. Po 48 godzinach pozywke zastapiono swie¬ za pozywka o tym samym skladzie. Po 5 dniach powstala pelna plyta komórek, po czym pogyu/ke znowu zastapiono swieza pozywka, przy czym jed¬ nak stezenie surowicy z cielecia obnizono do 5*/*.Nastepnie pozywke stale zmieniano w odstepach 4r-5 dnL Po wystapieniu oznak degeneracji ma-53531 terialu komórkowego po 15 dniach zebrano ciecz i przeniesiono do swiezej hodowli tkankowej na¬ stepnego pasazu.W trzecim pasazu nerki zdrowego kota trakto¬ wano jak w ispoBoibie opdlsamyim dla /drugiego pasazu, a zawiesine komórek poddano takze takiej obróbce jak w drugim sftopniu. Zamiast zbierania cieczy 8 po 15-dniach, zebrano ja po 7 dniach. We wszyst¬ kich dalszych pasazach powtórzono ten sam spo¬ sób, az wiruis przeszedl przez 16 pasazy. Na koncu kazdego pasazu szczepiono niezakazone koty do¬ mowe wrazliwe na panleukopenie* w celu stwier¬ dzenia ewentualnego dzialania na koty oslabionego wirusa. Wyniki te podane sa w ponizszej tabeli III.Tabela III (trzeci pasaz wirusa) Kot A —3 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi 2 39,3 17550 3 39,7 8000 4 39,6 75J0 5 39,8 8300 6 38,7 3300 7 40,2 1800 8 41,1 950 9 39,4 7600 10 38,4 9000 ir 38,4 moa Kot zaatakowany, temperatura i ilosc krwinek pozostaly w normalnych granicach.Kot B —3 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi 2 37,8 18050 3 39,7 6100 4 38,9 5250 5 39,2 9000 6 40,1 2150 7 41,3 2200 8 41,2 4450 9 41,2 21400 10 40 17100 11 39,6 13c00 Kot B —4 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kot zaatakowany, tempera ura i ilosc krwinek pozostaje normalna. 2 37,9 13050 3 38,9 9150 4 38,8 10150 5 38,6 5500 6 38,6 4150 7 38,6 5100 8 38,9- 3050 9 39,4 5250 10 39,1 89:0 11 39,1 1550 .2 39,6 32000 13 38,1 25100 14 38,6 20150 15 38,6 15950 2 38,3 11950 3 38,9 9050 4 39 7250 5 39,1 7100 6 40,2 1300 7 37,2 6860 8 38,2 6850 9 40,2 10200 10 11 38,1 37,9 10850 15900 12 38,4 22250 13 38,3 33800 14 38,8 30900 15 38,6 3450 Kot B —5; Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kot zaatakowany, temperatura, bale cUlka krwi bez zmian. 16 38,8 20300 Kot B —6 (czwarty pasaz wirusa) Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Nie stwierdzono goraczki.Kot A —4 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kot zaatakowany, temperatura i ilosc bialych cialek krwi bez zml n 2 39,9 20500 3 39,1 5050 4 38,3 9800 5 37,9 15800 6 39,1 1000 7 40,7 1400 8 40,4 2800 9 37,7 9700 10 40,6 24000 (piaty pasaz wirusa) 1 39,2 23900 2 39,9 10500 3 39,8 8600 4 39,2 6500 5 38,1 3450 6 39 2700 7 39,9 2100 8 40 3500 9 39,1 10250 11 39,1 13450 10 38,3 14700 1 38,4 12000 2 39,2 79.0 3 39,2 8300 4 38,6 6400 5 38,6 6050 6 38,6 7450 7 38,4 8850 Kot A —5 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kat zaatakowany, temperatura i ilosc bialych cialek krwi pozostaja bez zmian. 8 38,6 12000 Z tabeli III wynika, ze wirus z trzeciego do pia¬ tego pasazu wywolal gwaltowna reakcje u wszyst¬ kich kotów domowych zaszczepionych tym wiru¬ sem. Po piatym pasazu mozna bylo szczepic koty A4 i A5 zjadliwym wirusem panleukopenii, przy czym nie wysttepowaly przypadki smierci. Z obili- 10 czenia bialych cialek krwi u kotów A 4 i A 5 wy¬ nika, ze reakcja kotów byla dosc gwaltowna.Dalsze zdrowe koty, które byly wrazliwe na pan- leukopenie zaszczepiono wirusem z dziesiatego pa¬ sazu. Wyniki podano w tabeli IV.53531 Tabela IV (dziesiaty pasaz wirusa kota A) Kot 375 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kot 376 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka 'krwi Kot 377 Ilosc dni 'po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kot 378 Ilosc dni po inokulacji Temperatura **C Biale cialka krwi Kot 379 Ilosc dni po inokulacji Temperatura *C Biale cialka krwi Kot 380 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kot 381 Ilosc -dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kot 382 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi 0 — 16700 0 — 35400 0 — 18000 0 — 32900 0 — 13900 0 — 14800 0 — 19600 0 — 124 0 5 38,3 10800 5 39 18400 5 40,1 11950 5 39 24100 5 38,1 6260 5 — — 5 — — 5 — — 6 37,8 8950 6 38,3 10960 6 38,2 20100 6 38,7 14600 6 38,1 6200 6 — — 6 — — 6 — — 7 38,2 9800 7 38,8 17750 7 39 14600 7 39,3 10950 7 38,2 5800 7 £9,2 14600 7 39,2 20100 7 38,9 11950 8 38,2 . 9200 8 38.8 24100 8 39,1 35400 8 39,1 13400 8 38,8 9300 8 38,9 20950 8 39 22950 8 38,7 13250 9 38,1 21900 9 39,3 28550 9 38,8 36850 9 38,3 17850 9 38,6 3900 9 39,2 36450 9 39,1 23100 9 39 :8050 10 38,2 15950 10 38 22900 10 37.7 30400 10 38,8 19050 10 38,3 8500 10 38,4 23950 10 38,6 28150 10 38,3 21900 11 37,2 18500 11 38,3 24000 11 37,2 30500 11 '8,2 18500 11 38,1 14100 11 ?88 250SO 11 38,4 26250 11 38,3 205E0 12 S8,3 lfflOfc 12 36,8 20600 12 39,1 27100 12 39,3 10200 12 38,8 Ir 600 12 39,2 14 00 12 38,9 262 0 12 38,9 19550 Z powyzszej taibeli wynika, ze szczepienie kota domowego wirusem z dziesiatego pasazu nie wy¬ woluje zadnej reakcji, albo tylko stosunkowo lek¬ ka reakcje. U wszystkich kotów z taibeli IV zaszcze¬ pionych oslabionym wirusem panleukopenii nie wystapily oznaki choroby. 10 Inne koty tego samego pochodzenia-co koty z tabeli IV zaszczepione tym samym/zjadliwym w.- rusem w celach kontrolnych. Wyniki tych Nbadan podane sa w tabeli V.Tabela V. Koty kontrolne — wirus z zainfekowanej sledziony kotów Kot 359 Ilosc dni po inokulacji Temperatura °C Biale cialka krwi Kot 360 Temperatura °C Biale cialka krwi Kot 361 Temperatura °C Biale cialka krwi Kot 362 Temperatura *C Biale cialka krwi Kot 363 Temperatura °C Biale cialka krwi. 0 — 21650 2*650 — 14350 10200 14050 5 39,2 5750 39 16600 39,2 12 00 38,9 12750 — 6 39 6450 39 20450 39,3 13550 38,9 9000 — 7 39 7500 40,7 17150 35,6 200 38,4 6700 _ — 8 40,2 450 39,9 3850 martwy — 39 3750 41,4 850 9 martwy — matwy — 38,4 8100 41,1 700 10 38,6 4500 40,3 2850 11 38,6 7350 12 3M *68tf)0 kot przetrwa 40,6 7250 martwyKot 364 Temperatura °C Biale cialka krwi Kot 365 Temperatura "C Biale cialka krwi Kot 366 Teimiperatura °C Biale cialka krwi 53531 17150 12500 13500 — — — — — — — — 39,2 23550 39,7 15150 38,9 3050 39,1 1150 40,1 18200 40,6 900 martwy 38,9 20550 41,1 3300 38,3 15500 kot prz 38,3 6300 38,6 2700 38,6 103?0 kot przetrwal 11 Z tabeli V winika, ze padla polowa kotów za¬ szczepionych zjadliwym wirusem panleukopenii.U wszystkich kotów wystapily typowe oznaki pan¬ leukopenii.Jakkolwiek w poprzednich przykladach stosowa¬ no tkanke z nerek* takie same wyniki daje stoso¬ wanie tkanek z wnetrznosci, rnigdalków, jader, pluc, watrolby, sledziony, serca i podobnych tkanek niedzwiedzia i szarego lisa. PL