PL240992B1

PL240992B1 - Naphthalimide derivative, production method and its use

Info

Publication number: PL240992B1
Application number: PL430290A
Authority: PL
Inventors: Anna Bogucka-Kocka; Przemysław Kołodziej; Agnieszka Olejniczak; Jan NEKVINDA; Jan Nekvinda; Bohumir GRÜNER; Bohumir Grüner
Original assignee: Inst Biologii Medycznej Polskiej Akademii Nauk; Institute of Inorganic Chemistry CAS; Uniwersytet Medyczny W Lublinie
Priority date: 2019-06-23
Filing date: 2019-06-23
Publication date: 2022-07-11
Also published as: PL430290A1

Description

PL 240 992 B1PL 240 992 B1

Opis wynalazkuDescription of the invention

Przedmiotem wynalazku jest pochodna naftalimidu modyfikowana klasterem boru, sposób jej wytwarzania oraz zastosowanie. Ujawniony związek posiada silne działanie nicionobójcze.The subject of the invention is a naphthalimide derivative modified with a boron cluster, its production method and application. The disclosed compound has a strong nicoticidal effect.

Naftalimidy są klasą policyklicznych imidów zbudowaną z płaskich policyklicznych lub heterocyklicznych pierścieni. Związki te jak również ich pochodne wykazują interesujące właściwości fizykochemiczne i biologiczne. Większość naftalimidów wykazuje szeroki zakres aktywności biologicznej jak: aktywność przeciwnowotworowa, przeciwbakteryjna, przeciwwirusowa czy przeciwbólowa [A. Kamal, N. R. Bolla, P. S. Srikanth, A. K. Sirvastava, Naphhthalimide derivatives with therapeutic characteristics: a patent review, Expert. Opin. Ther. Pat. 2013, 23, 299-317]. Naftalimidy są związkami wykazującymi wysoką aktywność przeciwnowotworową opartą na interkalacji do DNA [R. Tandon, V. Luxami, H. Kaur, N. Tandon, K. Paul, 1,8-Naphthalimide: a potent DNA intercalator and target for cancer therapy, Chem, rec., 2017, 17, 1-139].Naphthalimides are a class of polycyclic imides composed of planar polycyclic or heterocyclic rings. These compounds as well as their derivatives exhibit interesting physicochemical and biological properties. Most of the naphthalimides exhibit a wide range of biological activity, such as: antitumor, antibacterial, antiviral or analgesic activity [A. Kamal, N. R. Bolla, P. S. Srikanth, A. K. Sirvastava, Naphhthalimide derivatives with therapeutic characteristics: a patent review, Expert. Opin. Ther. Stalemate. 2013, 23, 299-317]. Naphthalimides are compounds showing high anti-tumor activity based on intercalation into DNA [R. Tandon, V. Luxami, H. Kaur, N. Tandon, K. Paul, 1,8-Naphthalimide: a potent DNA intercalator and target for cancer therapy, Chem, rec., 2017, 17, 1-139].

Metalokarborany stanowią rozległą rodzinę kompleksów karboranów i metali. W ich skład mogą wchodzić, pełniące role ligandów, różnego typu karborany oraz jony wielu metali [R. N. Grimes, Transition metallacarboranes in Comprehensive Organometallics Chemsitry, 1995, vol. 1, C. F. Housecraft, ed., Pergamon, New York, 373-430]. Są zazwyczaj związkami krystalicznymi, charakteryzującymi się stosunkowo wysokimi temperaturami topnienia, dobrze rozpuszczalnymi w rozpuszczalnikach organicznych, trwałymi w warunkach atmosferycznych [R. N. Grimes, Metallacarboranes in the new millennium Coord. Chem. Rev., 2000, 200, 773-811]. Większość znanych i opisanych metalokarboranów zawiera jako ligandy karboranylowe typu: C2B3, C2B4 lub C2B9, które pełnią funkcję 6-elektronowych donorów dla jonu metalu lub metali [R. N. Grimes, Boron-carbon ring ligands in organometallics synthesis, Chem. Rev., 1992, 92, 251-268]. Ze wszystkich znanych metalokarboranów najbardziej popularne są te zbudowane z jednakowych ligandów karboranylowych. Najczęściej są to duże dwudziestościenne ligandy typu C2B9, zawierające w swojej strukturze jon kobaltu.Metal carboranes are an extensive family of carborane and metal complexes. They may include various types of carboranes and many metal ions, acting as ligands [R. N. Grimes, Transition metallacarboranes in Comprehensive Organometallics Chemsitry, 1995, vol. 1, C. F. Housecraft, ed., Pergamon, New York, 373-430]. They are usually crystalline compounds, characterized by relatively high melting points, well soluble in organic solvents, stable under atmospheric conditions [R. N. Grimes, Metallacarboranes in the new millennium Coord. Chem. Rev., 2000, 200, 773-811]. Most of the known and described metallocarboranes contain carboranyl ligands of the type C2B3, C2B4 or C2B9, which act as 6-electron donors for the metal or metal ion [R. N. Grimes, Boron-carbon ring ligands in organometallics synthesis, Chem. Rev. 1992, 92, 251-268]. Of all the known metal carborates, those made of the same carboranyl ligands are the most popular. Most often they are large icosahedral ligands of the C2B9 type, containing a cobalt ion in their structure.

Metalokarborany znajdują wiele zastosowań. Możliwości aplikacyjne tych związków są ogromne i różnorodne, obejmują m.in. takie dziedziny jak nowe materiały, katalizatory homogeniczne, mikroelektronika i optyka nieliniowa, biologia, medycyna i inne. Głównymi atrybutami metalokarboranów jest ich wysoka stabilność termiczna i chemiczna, znakomita rozpuszczalność w wielu rozpuszczalnikach organicznych, możliwość precyzyjnego dostrajania właściwości cząsteczki za pomocą zmian rodzaju jonu metalu, ligandów karboranylowych i podstawników do nich przyłączonych [R. N. Grimes, Metallacarboranes in the new millennium Coord. Chem. Rev., 2000, 200, 773-811].Metal carborates have many uses. The application possibilities of these compounds are huge and diverse, they include, inter alia, such fields as new materials, homogeneous catalysts, microelectronics and nonlinear optics, biology, medicine and others. The main attributes of metallocarborates are their high thermal and chemical stability, excellent solubility in many organic solvents, the ability to fine-tune the properties of the molecule by changing the type of metal ion, carboranyl ligands and substituents attached to them [R. N. Grimes, Metallacarboranes in the new millennium Coord. Chem. Rev., 2000, 200, 773-811].

Zastosowanie metalokarboranów jako katalizatorów homogenicznych zostało opisane przez Hawthorne i wsp. Metalokarboran 3,1,2-H(Ph3P)2Rh(lll)(C2B9Hn) okazał się doskonałym katalizatorem reakcji uwodornienia i sililowania nienasyconych węglowodorów [M. F. Hawthorne, Advances on Boron and the Boranes, 1988, J. F. Liebman, A. Greenberg, R. E. Williams, Eds., VCH Publishers, New York, Chapter 10, p. 225].The use of metallocarboranes as homogeneous catalysts has been described by Hawthorne et al. The metalocarborane 3,1,2-H (Ph3P) 2Rh (III) (C2B9Hn) turned out to be an excellent catalyst for the hydrogenation and silylation of unsaturated hydrocarbons [M. F. Hawthorne, Advances on Boron and the Boranes, 1988, J. F. Liebman, A. Greenberg, R. E. Williams, Eds., VCH Publishers, New York, Chapter 10, p. 225].

Znakomita rozpuszczalność soli szeregu monoanionów metaloboranylowych w rozpuszczalnikach organicznych umożliwia wykorzystanie związków tego typu do ekstrakcji kationów z układów wodnych. Ta cecha metalokarboranów wynika z lipofilowych właściwości klastera karboranylowego będącego skutkiem wodorkowego charakteru atomów wodoru grup B-H [J. Piesek, Potential applications of the boron cluster compounds, Chem. Rev., 1992, 92, 269-278].The excellent solubility of the salts of a number of metalloboranyl monoanions in organic solvents enables the use of compounds of this type for the extraction of cations from aqueous systems. This feature of metallocarboranes results from the lipophilic properties of the carboranyl cluster resulting from the hydride nature of the hydrogen atoms of the B-H groups [J. Piesek, Potential applications of the boron cluster compounds, Chem. Rev. 1992, 92, 269-278].

Odkryto, że metalokarboran [3,3’-Co(1,2-C2B9Hio)(1’,’-C2B9Hio)]· jest silnym, specyficznym i selektywnym inhibitorem kompetencyjnym proteazy HIV. Najbardziej aktywny związek dianion butyloimino bis-8,8-[5-(3-oksa-pentoksy)3-kobalt bis (1,2-C2B9Hio) wykazał wysoką aktywność anty HIV (IC50 = 100 nM) i nie wykazał toksycznej aktywności wobec linii prawidłowych [P. Cigler, P. Kozisek, P. Rezacova, J. Brynda, Z. Otwinowski, J. Pokorna, J. Plesek, B. Gruner, L. Doleckova-Maresova, M. Masa, J. Sedlacek, J. Bodem, H. G. Krausslich, V. Kral, J. Konvalinka, From nonpeptide toward noncarbon protease inhibitors: metallacarboranesas specific and potent inhibitors of HIV protease, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2005, 102, 15394-15399].It was found that the metallocarborate [3,3'-Co (1,2-C2B9Hio) (1 ',' - C2B9Hio)] · is a potent, specific and selective competitive inhibitor of HIV protease. The most active compound dianion butylimino bis-8.8- [5- (3-oxa-pentoxy) 3-cobalt bis (1,2-C2B9Hio) showed high anti-HIV activity (IC50 = 100 nM) and showed no toxic activity against the lineage correct [P. Cigler, P. Kozisek, P. Rezacova, J. Brynda, Z. Otwinowski, J. Pokorn, J. Plesek, B. Gruner, L. Doleckova-Maresova, M. Masa, J. Sedlacek, J. Bodem, H. G. Krausslich , V. Kral, J. Konvalinka, From nonpeptide toward noncarbon protease inhibitors: metallacarboranesas specific and potent inhibitors of HIV protease, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2005, 102, 15394-15399].

Zbadano, że metalokarboran typu [3,3’-Co(1,2-C2B9Hio)(1’,’-C2B9Hio)]· z podstawnikiem alkoksylowym (K121) wykazał aktywność wobec bakterii Staphylococcus aureus opornym na metycylinę (MRSA), w zależności od dawki z minimalnym stężeniem hamującym 8 μg/mL oraz wysoką selektywnością wobec komórek ssaczych [Y. Zheng, W. Liu, Y. Chen, H. Jiang, H. Yan, I. Kosenko, L. Chekulaeva, I. Sivaev, V. Bregadze, X. Wang, A highly potent antibacterial agent targeting methicillin-resistantIt was tested that [3,3'-Co (1,2-C2B9Hio) (1 ',' - C2B9Hio)] · type metallocarborate with an alkoxy substituent (K121) showed activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), depending on from dose with a minimum inhibitory concentration of 8 μg / mL and high selectivity for mammalian cells [Y. Zheng, W. Liu, Y. Chen, H. Jiang, H. Yan, I. Kosenko, L. Chekulaeva, I. Sivaev, V. Bregadze, X. Wang, A highly potent antibacterial agent targeting methicillin-resistant

PL 240 992 Β1PL 240 992 Β1

Stahpylococcus aureus based on cobalt bis(1,2-dicarbollide) alkoxy derivative, Organometallics, 2017, 36, 3484-3490],Stahpylococcus aureus based on cobalt bis (1,2-dicarbollide) alkoxy derivative, Organometallics, 2017, 36, 3484-3490],

Pochodne metalakarboranu [3,3’-Co(1,2-C2B9Hio)(1’,2’-C2BgHio)]· wykazały powinowactwo wiązania wobec enzymu syntazy tlenku azotu (NOS) jak również niewielkie powinowactwo wiązania wobec endotelialnej syntazy tlenku azotu (eNOS) [R. Kapłanek, P. Martasek, B. Gruner, S. Panda, J. Rak, B. S. Siler Masters, V. Kral, L. J. Roman, Nitric oxide synthases activation and inhibition by metallacarborane-cluster-based isoform-specific affectors, J. Med. Chem., 2012, 55, 9541-9548],Metal carborate derivatives [3,3'-Co (1,2-C2B9Hio) (1 ', 2'-C2BgHio)] · showed binding affinity for the enzyme nitric oxide synthase (NOS) as well as low binding affinity for endothelial nitric oxide synthase (eNOS ) [R. Kapłanek, P. Martasek, B. Gruner, S. Panda, J. Rak, B. S. Siler Masters, V. Kral, L. J. Roman, Nitric oxide synthases activation and inhibition by metallacarborane-cluster-based isoform-specific affectors, J. Med. Chem., 2012, 55, 9541-9548],

Wzrastająca częstość chorób pasożytniczych wywołanych przez nicienie oraz rosnąca lekooporność pasożytów na dostępne leki powodują konieczność poszukiwania nowych, skutecznych leków nicieniobójczych.The increasing frequency of parasitic diseases caused by nematodes and the increasing drug resistance of parasites to the available drugs make it necessary to search for new, effective nematocidal drugs.

Istota wynalazkuThe essence of the invention

Nieoczekiwanie określony powyżej problem został rozwiązany w niniejszym wynalazku.Unexpectedly, the problem defined above is solved by the present invention.

Przedmiotem wynalazku jest pochodna naftalimidu składająca się z klastera boru przyłączonego łącznikiem eterowym (CH2CH2O)2 z naftalimidem. Pochodna ta została przedstawiona na wzorze 1:The present invention relates to a naphthalimide derivative consisting of a boron cluster linked by an ether linkage (CH2CH2O) 2 with naphthalimide. This derivative is represented in formula 1:

gdzie R oznacza klaster boru zawierający w swojej strukturze jon kobaltu, zwłaszcza metalokarboran dikarbolidowy [3,3’-Co(1 ,2-C₂B₉Hio)(1 '.Z-CzBgHio)]-.where R is a boron cluster containing a cobalt ion in its structure, especially dicarbolide metallocarborate [3,3'-Co (1,2-C ₂ B ₉ Hio) (1 '.Z-CzBgHio)] -.

Korzystnie związkiem według wynalazku jest związek o wzorze 3:Preferably the compound of the invention is a compound of formula 3:

PL 240 992 Β1PL 240 992 Β1

gdzie:where:

=BH ©=B ·=ΌΗ= BH © = B · = ΌΗ

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania pochodnej naftalimidu charakteryzujący się tym, że do bezwodnika 3-nitro-1,8-naftoesowego (korzystnie 1 eq.) o wzorze 1 rozpuszczonego w rozpuszczalniku organicznym, korzystnie absolutnym etanolu (zwłaszcza 20 mL na 0,1 mmol), dodaje się trietyloaminę (korzystnie 2 eq.) oraz aminę o wzorze 2 (korzystnie 1 eq.) rozpuszczoną w rozpuszczalniku organicznym, korzystnie absolutnym etanolu (zwłaszcza 10 mL na 0,1 mmol) (jak pokazano na Schemacie 1). Roztwór miesza się, korzystnie w temperaturze 60°C, w czasie 5 godzin, zwłaszcza w atmosferze gazu obojętnego argonu (Ar), a następnie z mieszaniny reakcyjnej izoluje się produkt o wzorze 3. Korzystnie w celu wyizolowania produktu z mieszaniny reakcyjnej usuwa się rozpuszczalnik, a surowy produkt o wzorze 3 oczyszcza się za pomocą chromatografii kolumnowej, korzystnie na żelu krzemionkowym.Another object of the invention is a process for the preparation of a naphthalimide derivative, characterized in that 3-nitro-1,8-naphthoic anhydride (preferably 1 eq.) Of formula 1 dissolved in an organic solvent, preferably absolute ethanol (especially 20 mL per 0.1 mmol) ), triethylamine (preferably 2 eq.) and an amine of formula 2 (preferably 1 eq.) dissolved in an organic solvent, preferably absolute ethanol (especially 10 mL per 0.1 mmol) are added (as shown in Scheme 1). The solution is stirred, preferably at 60 ° C, for 5 hours, especially under an argon (Ar) inert gas, and then the product of formula 3 is isolated from the reaction mixture. Preferably, the solvent is removed from the reaction mixture to isolate the product. and the crude product of formula 3 is purified by column chromatography, preferably over silica gel.

Korzystnie, do oczyszczania związku 3 jako eluent stosuje się acetonitryl o stężeniu poniżej 20% w dichlorometan.Preferably, acetonitrile less than 20% in dichloromethane is used as eluent for the purification of compound 3.

Korzystnie, w sposobie według wynalazku chromatografię związku 3 prowadzi się na żelu krzemionkowym, 230-400 mesh, stosując jako eluent acetonitryl, 0-20%.Preferably, in the process of the invention, the chromatography of compound 3 is carried out on 230-400 mesh silica gel, using acetonitrile, 0-20% as eluent.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie medyczne związku o wzorze 3 jako związku o znaczącej aktywności nicieniobójczej, zwłaszcza wobec nicieni z rodzaju Rhabditis sp.Another object of the invention is the medical use of a compound of formula III as a compound with significant nematocidal activity, in particular against nematodes of the genus Rhabditis sp.

W szczególnie korzystnej realizacji wynalazku, związek według wynalazku może być otrzymany sposobem przedstawionym na schemacie 1. Odpowiedni związek wyjściowy o wzorze 2 może być otrzymany sposobem znanym z literatury: E. Kvasnićkova, J. Masak, J. Ćejka. O. Matatkowa, V. Śicha, Preparation, characterization, and the selective antimicrobial activity of A/-alkylammonium 8-diethyleneglycol cobalt bis-dicarbollide derivatives, J. Organomet. Chem. 827 (2017) 23-31.In a particularly preferred embodiment of the invention, the compound according to the invention can be obtained by the method shown in scheme 1. The corresponding starting compound of formula 2 can be obtained according to the method known from the literature: E. Kvasnićkova, J. Masak, J. Ćejka. O. Matatkowa, V. Śicha, Preparation, characterization, and the selective antimicrobial activity of A / -alkylammonium 8-diethyleneglycol cobalt bis-dicarbollide derivatives, J. Organomet. Chem. 827 (2017) 23-31.

PL 240 992 Β1PL 240 992 Β1

Schemat 1Scheme 1

Uzyskane wyniki przeprowadzonych testów biologicznych wskazują na silną aktywność nicieniobójczą związku 3 będącego przedmiotem wynalazku (zwłaszcza wobec nicieni z rodzaju Rhabditis sp.). Ponadto nieoczekiwanie wykazano, że aktywność nicieniobójczą związku 3 jest wyższa od aktywności obecnie stosowanego leku mebendazolu a także znacznie wyższa od aktywności związku 4, posiadającego analogiczną strukturę, różniącej się jedynie tym, że atom Co zastąpiono atomem Cr. Otrzymane dane pozwalają oczekiwać, że związek według wynalazku może znaleźć zastosowanie do wytwarzania nowych leków w terapii chorób pasożytniczych wywołanych przez nicienie.The results of the biological tests carried out show the strong nematocidal activity of the compound 3 according to the invention (especially against nematodes of the genus Rhabditis sp.). Moreover, it was surprisingly shown that the nematocidal activity of compound 3 is higher than that of the currently used drug mebendazole and also significantly higher than that of compound 4 having an analogous structure, differing only in that the Co atom was replaced by a Cr atom. The data obtained lead to the expectation that the compound according to the invention can find application for the preparation of new drugs in the treatment of parasitic diseases caused by nematodes.

Dla lepszego wyjaśnienia wynalazku poniżej przedstawiono jego przykłady wykonania.For a better explanation of the invention, some embodiments are presented below.

Przykład I. Wytwarzanie związku o wzorze 3.Example I. Preparation of the compound of formula 3.

Bezwodnik 3-nitro-1,8-naftoesowy (1) (5.7 mg, 0.02 mmol), rozpuszczono w etanolu absolutnym (0,4 mL), dodano trietyloaminę (5 pL, 0,04 mmol) oraz [8-NH3-(CH2CH2O)2-(1,2-C2BgHio)(1,2-C2BgHn)-3,3'-Co]· (2) (10 mg, 0,02 mmol) rozpuszczony w etanolu absolutnym (0,2 mL). Roztwór był mieszany w temperaturze 60°C w atmosferze argonu (Ar). Po 5 godzinach odparowano rozpuszczalnik z mieszaniny reakcyjnej. Surowy produkt 3 oczyszczono za pomocą chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym (230-400 mesh) stosując jako eluent acetonitryl (0-20%) w dichlorometanie. A/-[(8-(3-oksa-pentoksy)-3,3'-commo-bis(1,2-dikarba-3-kobalta(lll)-closo-dodekaborano)]-1,8-naftalimid 3: żółte ciało stałe, wydajność 58%, Rf = 0,50 (CH2Cl2:CH3CN 4:1, v/v). ¹H NMR (aceton-ds, 600.173-nitro-1,8-naphthoic anhydride (1) (5.7 mg, 0.02 mmol), dissolved in absolute ethanol (0.4 mL), added triethylamine (5 pL, 0.04 mmol) and [8-NH3- ( CH2CH2O) 2- (1,2-C2BgHio) (1,2-C2BgHn) -3,3'-Co] · (2) (10 mg, 0.02 mmol) dissolved in absolute ethanol (0.2 mL). The solution was stirred at 60 ° C under argon (Ar). After 5 hours, the solvent in the reaction mixture was evaporated. The crude product 3 was purified by column chromatography on silica gel (230-400 mesh) eluting with acetonitrile (0-20%) in dichloromethane. A / - [(8- (3-oxa-pentoxy) -3,3'-commo-bis (1,2-dicarb-3-cobalta (III) -closo-dodecaborano)] - 1,8-naphthalimide 3: yellow solid, 58% yield, Rf = 0.50 (CH2Cl2: CH3CN 4: 1, v / v). ^1H NMR (acetone-ds, 600.17

PL 240 992 B1PL 240 992 B1

MHz): δ (ppm) = 9.28 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-4), 9.03 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-7), 8.67 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-5), 8.66 (1H, s, H-2), 8.02 (1H, t, J = 8.4 Hz, H-6), 4.36 (2H, t, J = 6.6 Hz, OCH2CH2N), 4.14 (2H, br s, CH2-karboran), 4.12 (2H, br s, CH2-karboran), 4.36 (2H, t, J 1,2 = 6.6, J13 = 12.6 Hz, O-CH2 CH2N), 3.57 (4H, m, BOCH2CH2OCH2CH2N); ¹³C NMR (aceton-d₆, 150.91 MHz): δ (ppm) = 163.11 (1C, C=O),MHz): δ (ppm) = 9.28 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-4), 9.03 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-7), 8.67 (1H, d, J = 1.8 Hz , H-5), 8.66 (1H, s, H-2), 8.02 (1H, t, J = 8.4 Hz, H-6), 4.36 (2H, t, J = 6.6 Hz, OCH2CH2N), 4.14 (2H , br s, CH2-carborane), 4.12 (2H, brs, CH2-carborane), 4.36 (2H, t, J 1.2 = 6.6, J13 = 12.6 Hz, O-CH2 CH2N), 3.57 (4H, m , BOCH2CH2OCH2CH2N); ¹³ C NMR (acetone-d ₆ , 150.91 MHz): δ (ppm) = 163.11 (1C, C = O),

162.69 (1C, C=O), 146.36 (1C, C-3), 136.13 (1C, C-4), 134.15 (1C, C-7), 131.33 (1C, C-5), 130.21 (1C, C-6), 129.38 (1C, C-2), 129.24 (1C, C-10), 124.59 (1C, C-1), 123.34 (1C, C-9), 123.10 (1C, C-8), 71.77 (1C, CH2CH2N), 68.51 (1C, OCH2CH2N), 67.82 (1C, OCH2CH2O), 54.03 (1C, CH-karboran), 46.52 (1C, CH-karboran), 39.63 (1C, OCH2CH2OB); ¹¹B {¹H} NMR (aceton-d6, 192.56 MHz): δ (ppm) = 22.17 (1B, s, B-8), 3.28 (1B, d, J = 128 Hz, B-8'),-0.63 (1B, d, J = 136 Hz, B-10'), -3.43 (1B, d, J = 138 Hz, B-10), -5.44 (2B, d, J = 134 Hz B-9, 9'), -8.31 (2B, d, J = 141 Hz B-12, 12'), -9.04 (4B, d, J = 127 Hz B-4, 4', 7, 7'), -18.30 (2B, d, J = 155 Hz, B-5, 5'), -21.47 (2B, d, J = 150 Hz, B-11, 11'), -23.06 (1B, d, nałożone, B-6), -29.52 (1B, d, J = 143 Hz, B-6'); UV (95% C2H5OH): λmin (nm) = 238, 295, λmax = 276, 314; FT-IR: vmax (cm^-1) = 3648-3545 (CH arom), 3077, 3044, 2923, 2879 (CH alkyl), 2535 (BH), 1705, 1660 (C=O), 1599, 1331 (NO2), 1540, 1508, 1435, 1422 (C=C); ESI-MS: m/z: 651.50 (80%), 652.50 (100%), obliczona dla: C20H34B1bCoN2O₆: 651.36.162.69 (1C, C = O), 146.36 (1C, C-3), 136.13 (1C, C-4), 134.15 (1C, C-7), 131.33 (1C, C-5), 130.21 (1C, C -6), 129.38 (1C, C-2), 129.24 (1C, C-10), 124.59 (1C, C-1), 123.34 (1C, C-9), 123.10 (1C, C-8), 71.77 (1C, CH2CH2N), 68.51 (1C, OCH2CH2N), 67.82 (1C, OCH2CH2O), 54.03 (1C, CH-carborane), 46.52 (1C, CH-carborane), 39.63 (1C, OCH2CH2OB); ¹¹ B { ^1H } NMR (acetone-d6, 192.56 MHz): δ (ppm) = 22.17 (1B, s, B-8), 3.28 (1B, d, J = 128 Hz, B-8 '), - 0.63 (1B, d, J = 136Hz, B-10 '), -3.43 (1B, d, J = 138Hz, B-10), -5.44 (2B, d, J = 134Hz B-9, 9 '), -8.31 (2B, d, J = 141Hz B-12,12'), -9.04 (4B, d, J = 127Hz B-4,4 ', 7,7'), -18.30 (2B , d, J = 155 Hz, B-5, 5 '), -21.47 (2B, d, J = 150 Hz, B-11, 11'), -23.06 (1B, d, overlaid, B-6), -29.52 (1B, d, J = 143Hz, B-6 '); UV (95% C2H5OH): λmin (nm) = 238, 295, λmax = 276, 314; FT-IR: vmax (cm ^-1 ) = 3648-3545 (CH arom), 3077, 3044, 2923, 2879 (CH alkyl), 2535 (BH), 1705, 1660 (C = O), 1599, 1331 (NO2 ), 1540, 1508, 1435, 1422 (C = C); ESI-MS: m / z: 651.50 (80%), 652.50 (100%), calc'd for C20H34B1bCoN2O ₆ : 651.36.

P r z y k ł a d II. Badanie aktywności nicieniobójczej.P r z x l a d II. Study of nematocidal activity.

Do badań wykorzystano wolnożyjące nicienie z rodzaju Rhabditis sp., które w środowisku naturalnym żyją w glebie. Hodowla nicieni i metodyka badawcza oceny właściwości nicieniobójczych została opracowana przez Katedrę i Zakład Biologii z Genetyką Uniwersytetu Medycznego w Lublinie i ujawniona w polskim zgłoszeniu patentowym nr P. 421846. Hodowla nicieni z rodzaju Rhabditis sp. prowadzona była w sterylnych 6-dołkowych płytkach, na pożywce z agaru wzbogaconego surowicą bydlęcą.Free-living nematodes of the genus Rhabditis sp., Which live in the soil in the natural environment, were used for the research. The breeding of nematodes and the research methodology for the evaluation of nematocidal properties was developed by the Department of Biology and Genetics of the Medical University of Lublin and disclosed in the Polish patent application No. P. 421846. The breeding of nematodes of the genus Rhabditis sp. Was carried out in sterile 6-well plates on a nutrient medium from agar enriched with bovine serum.

Nicienie z rodzaju Rhabditis sp. wymywano z agarowego podłoża stałego przy pomocy 0,6% NaCI oraz nanoszono na nowe sterylne 24-dołkowe płytki w celu prowadzenia hodowli na podłożu płynnym.The nematodes of the genus Rhabditis sp. Were eluted from the agar solid medium with 0.6% NaCl and applied to new sterile 24-well plates for liquid culture.

Do przygotowanej hodowli na podłożu płynnym prowadzonej w sterylnych 24-dołkowych płytkach dodawano badany związek w postaci homogennej zawiesiny w następujących stężeniach: 0,0182 μg/μL; 0,0911 μg/μL; 0,2733 μg/μL; 0,4556 μg/μL; 0,9111 μg/μL i pozostawiano na 24 godzinną ekspozycję. Prowadzono także kontrolę ujemną z rozpuszczalnikiem oraz kontrolę dodatnią z mebendazolem.The test compound was added as a homogeneous suspension to the prepared liquid culture in sterile 24-well plates at the following concentrations: 0.0182 µg / µL; 0.0911 μg / μL; 0.2733 μg / μL; 0.4556 μg / μL; 0.9111 μg / μL and allowed to expire for 24 hours. A negative control with a solvent and a positive control with mebendazole were also performed.

Nicienie poddane działaniu badanego związku obserwowano w mikroskopie optycznym i stereoskopowym pod kątem deformacji oraz zaburzeń ich rozwoju. W celu określenia ilości osobników żywych i martwych hodowlę płynną barwiono błękitem metylenowym i liczono w specjalnych komorach Burkera.The nematodes exposed to the test compound were observed under optical and stereoscopic microscopy for deformation and abnormalities in their development. In order to determine the number of live and dead individuals, the liquid culture was stained with methylene blue and counted in special Burker chambers.

Na Fig. 1 przedstawiono przykładowy obraz hodowli in vitro nicieni z rodzaju Rhabditis sp. prowadzonej przez 24 godzin na podłożu płynnym po ekspozycji na badany związek 3.Fig. 1 shows an example of an in vitro culture of nematodes of the genus Rhabditis sp. For 24 hours in a liquid medium after exposure to the test compound 3.

PL 240 992 Β1PL 240 992 Β1

Użyte oznaczenia:Symbols used:

=bh <=b e=CH= bh <= b e = CH

Claims

PL 240 992 Β1

Patent claims

1. Compound of formula 1:

where R is a boron cluster containing a cobalt ion in its structure, especially dicarbolide metallocarborate [3,3'-Co (1,2-C2B9Hio) (1 ', 2'-C2BgHio)] ·.

2. The compound according to claim The compound of claim 1, which is a compound of formula 3:

where:

= BH ® — B ® ⁼ CH

Process for the preparation of a naphthalimide derivative, characterized in that for 3-nitro-1,8-naphthoic anhydride of the formula I:

PL 240 992 Β1

dissolved in an organic solvent, preferably absolute ethanol, is added triethylamine and the amine of formula 2:

where:

= BH ® = B e = CH dissolved in an organic solvent, preferably absolute ethanol, the solution is stirred, preferably at 60 ° C for 5 hours, and then the product of formula 3 is isolated from the reaction mixture.

4. The method according to p. The process of claim 3, wherein the solvent is removed to isolate the product from the reaction mixture, and the crude product of formula 3 is purified by column chromatography, preferably on silica gel.

5. The method according to p. The process of claim 4, wherein acetonitrile is used as eluent for the purification of 3 in less than 20% in dichloromethane.

6. A compound as defined in claim 1-2 for use in treating or preventing a parasitic disease caused by nematodes.