PL239178B1 - Kompozycja do leczenia czerniaka u ludzi - Google Patents

Kompozycja do leczenia czerniaka u ludzi Download PDF

Info

Publication number
PL239178B1
PL239178B1 PL420249A PL42024917A PL239178B1 PL 239178 B1 PL239178 B1 PL 239178B1 PL 420249 A PL420249 A PL 420249A PL 42024917 A PL42024917 A PL 42024917A PL 239178 B1 PL239178 B1 PL 239178B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
cells
simvastatin
melanoma
taxol
composition
Prior art date
Application number
PL420249A
Other languages
English (en)
Other versions
PL420249A1 (pl
Inventor
Wojciech PLACHA
Wojciech Placha
Jacek ZAGAJEWSKI
Jacek Zagajewski
Małgorzata SZCZYGIEŁ
Małgorzata Szczygieł
Monika PIWOWAR
Monika Piwowar
Original Assignee
Univ Jagiellonski
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ Jagiellonski filed Critical Univ Jagiellonski
Priority to PL420249A priority Critical patent/PL239178B1/pl
Priority to EP18742177.1A priority patent/EP3570828B1/en
Priority to US16/479,397 priority patent/US10912756B2/en
Priority to PCT/PL2018/050002 priority patent/WO2018135959A1/en
Publication of PL420249A1 publication Critical patent/PL420249A1/pl
Publication of PL239178B1 publication Critical patent/PL239178B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/351—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom not condensed with another ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/366—Lactones having six-membered rings, e.g. delta-lactones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4418—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having a carbocyclic group directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cyproheptadine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna przeznaczona do stosowania w leczeniu lub profilaktyce czerniaka u ludzi.
Czerniak złośliwy (melanoma malignum) należy do nowotworów złośliwych o największej dynamice wzrostu liczby zachorowań w Polsce. Pomimo faktu możliwości wykrycia czerniaka we wczesnym stadium i jego wyleczalności metodami chirurgicznymi (w przypadku czerniaka skóry wyleczalność metodami chirurgicznymi wynosi ponad 90 proc.), nadal zaawansowanie wyjściowe tego nowotworu w Polsce jest znacznie wyższe niż w krajach Europy Zachodniej. Niestety, przekłada się to na niski odsetek całkowitych wyleczeń w naszym kraju, plasujący się jedynie na poziomie 60-70 proc. Dodatkowo, problemem klinicznym występującym u około 10-20 proc. chorych na czerniaki jest wznowa miejscowa oraz przerzuty in-transit, pomiędzy ogniskiem pierwotnym a regionalnym spływem chłonnym. Rokowanie w tej grupie pacjentów jest zbliżone do grupy z klinicznymi przerzutami do węzłów chłonnych przy przeżyciu dziesięcioletnim wynoszącym jedynie 20-30%.
W systemowym leczeniu rozsianego czerniaka pacjenci mogą obecnie skorzystać ze standardowych metod:
1) chemioterapii z użyciem pojedynczych leków (dekarbazyna, temozolomid, pochodne nitrozomocznika, związki platyny, taksany, alkaloidy barwnika itp.)
2) chemioterapii z użyciem programów wielolekowych (PC, CDBT, BOLD, CVD, itp.)
3) immunoterapii z użyciem cytokin (interferon alfa2b, interleukina-2)
4) immunoterapii z użyciem przeciwciał monoklonalnych anty CTLA4 (ipilimumab)
5) biochemioterapii polegającej na skojarzeniu chemioterapii z immunoterapią.
Taksany są związkami diterpenowymi stosowanymi w farmacji, głównie jako cytostatyki. Przykładami leków przeciwnowotworowych należących do rodziny taksanów są paklitaksel znany również jako taksol (Taxol) i docetaksel (Taxotere). Paklitaksel jest związkiem doterpenowym posiadającym ponad 20 chiralnych atomów węgla. Paklitaksel został zidentyfikowany w 1960 roku w trakcie programu poszukiwania związków aktywnych pochodzenia roślinnego prowadzonego przez Narodowy Instytut Zdrowia USA obejmującego 35 tysięcy gatunków roślin jako składnik ekstraktu z kory cisu Taxus brevifolia posiadający ciekawe działanie przeciwnowotworowe. W 1969 wyizolowano składnik aktywny ekstraktu, a w 1971 określono strukturę paklitakselu (Eric K. Rowinsky et al., J. National Can. Inst., 82, 11247 (1990)).
W odróżnieniu od innych związków takich jak kolchicyny i alkaloidy Vinca, których działanie przeciwnowotworowe polega na degradacji mikrotubul, paklitaksel wykazuje odmienny mechanizm działania, tj. przyspieszanie zlepiania mikrotubul i inhibicję degradacji tubuliny (Schiff, P. B., J. Fant and S. B. Horwitz, Nature, 277, 665 (1979)).
Paklitaksel został dopuszczony do obrotu przez FDA jako lek przeciwnowotworowy w 1993 roku, ze wskazaniem do stosowania w chemioterapii raków jajnika, piersi, prostaty, płuc oraz białaczki i czerniaka, przy czym szczególnie skuteczny okazał się w leczeniu raków jajnika, piersi i płuc dając skuteczność odpowiednio 30%, 50% i 20% (David, G., et al., J. Nat. Prod., 53, (1990)).
Również docetaksel przyspiesza agregację mikrotubul i hamuje degradację tubuliny, zatrzymując w ten sposób mitozę w fazie M i hamując podział komórki (Katzung’s Pharmacology, 9th Edition (2004)). Docetaksel został uznany za cytostatyk nowej generacji, okazał się być szczególnie skuteczny w zwalczaniu raków płuc i piersi (Piccart, M. Anticancer Drugs. 1995 Suppl 4:7-11). Dotychczas opisano także wiele innych taksanów oraz ich pochodnych, a także sposobów ich otrzymywania, które mogą znaleźć zastosowanie w zwalczaniu nowotworów (np. WO94/14787, US6916942,
US6750246, US6610860, US6476242, US6369244, US6353120, US6248908, US6017935,
US5977386, US5902822, US5840929, US5773464, US5773629, US4814470, US4857653,
US4876399, US4942184, US4960790, US5278324, US5283253, US5352806).
Znacznym problemem obserwowanym podczas leczenia tradycyjnymi chemioterapeutykami jest szybkie nabywanie oporności na cytostatyki przez komórki nowotworowe. Czerniaki pod tym względem są szczególnie mało wrażliwe na leki cytostatyczne z powodu ekspresji wielu białek mających zdolność usuwania cytostatyków z komórek nowotworowych. Są to transportery ABC.
Rodzina białkowych transporterów ABC (ATP-Binding Cassette Transporters) występuje powszechnie w świecie zwierząt, począwszy od Procariota aż do Homo sapiens. W jej skład wchodzą białka błonowe zaangażowane w transport wielu substancji (głównie hydrofobowych) poprzez błony wewnątrz i zewnątrzkomórkowe, z wykorzystaniem energii z hydrolizy ATP. Ich najważniejszą funkcją
PL 239 178 B1 jest udział w detoksykacji oraz ochronie organizmu przed truciznami. Konsekwencją pełnionych funkcji ochronnych jest powstawanie zjawiska oporności wielolekowej (MDR - Multidrug Resistance), poprzez aktywne usuwanie cytostatyków (i innych leków) z komórek nowotworowych, co uniemożliwia osiągnięcie odpowiedniego stężenia związków w leczonych tkankach. Obecnie obserwuje się intensywne badania nad rozwojem nowych terapii, uwzględniających zjawisko MDR. Białko ABCG2, przyczyniające się do powstawania MDR, jest obecne w wielu typach nowotworów. Jednym z jego licznych substratów są taksany. Zwiększona aktywność lub ekspresja ABCG2 może znacznie ograniczać skuteczność terapii z wykorzystaniem taksanów.
Ze względu na opisane powyżej problemy nadal istnieje zapotrzebowanie na ulepszone preparaty, zwłaszcza oparte na stosowanych już w onkologii substancjach aktywnych, nadające się do skuteczniejszego leczeniu czerniaka u ludzi.
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja zawierająca wodny roztwór paklitakselu i wodny roztwór simwastatyny do stosowania w leczeniu i zapobieganiu czerniaka u ludzi.
Korzystnie, paklitaksel i simwastatyna są zawarte w tym samym roztworze wodnym.
Korzystnie, paklitaksel i simwastatyna są zawarte w osobnych roztworach wodnych.
Korzystnie, kompozycja do stosowania według wynalazku jest przeznaczona do stosowania w leczeniu czerniaka u ludzi z towarzyszącymi powikłaniami zatorowo-zakrzepowymi.
Korzystnie, zawiera ona miaszaninę cytostatyków składającą się z taksanu, cisplatyny i melfalanu.
Nieoczekiwanym efektem technicznym osiągniętym dzięki stosowaniu wynalazku jest uzyskanie wzmocnienia przeciwnowotworowego działania taksanu, zwłaszcza taksolu, podawanego w postaci roztworu wodnego, które zostało uzyskane dzięki obecności simwastatyny, który to efekt synergistyczny został zaobserwowany wobec komórek ludzkiego czerniaka.
Nieoczekiwanie, uzyskaną zgodnie z wynalazkiem synergię zaobserwowano dla poddawanego w formie roztworu taksolu jedynie w przypadku linii komórek ludzkiego czerniaka i nie występuje ona w przypadku innych linii ludzkich nowotworów, a nawet czerniaka mysiego (porównaj Kretzer i wsp. International Journal of nanomedicine 2016:11 885-904). Podczas stosowania kompozycji według wynalazku czerniak złośliwy u człowieka nie nabywa oporności na taksany, a podawany taksan selektywnie gromadzi się w komórkach nowotworu do momentu ich śmierci.
Kompozycja według wynalazku jest nowym lekiem przeciwnowotworowym skutecznie ograniczającym podziały komórek czerniaka niezależnie od fazy progresji (radialna, metastatyczna czy przerzutowa). W sposób synergistyczny wywołują apoptozę z udziałem katastrofy mitotycznej w komórkach czerniaka, a efekt jest zależny od dawki simwastatyny.
Simwastatyna może być podana tylko z taksanami lub w ramach wielolekowego schematu leczenia zawierającego roztwór taksanu, w szczególności w połączeniu z cisplatyną i melfalanem. Pozwala to na zmniejszenie wielkości skutecznych dawek taksanów stosowanych w obecności simwastatyny.
Jednocześnie, stosowanie wynalazku eliminuje konieczność stosowania mało skutecznego połączenia cisplatyna-taksol lub innych schematów leczenia zawierających taksany, na które to, nowotwór szybko nabywa oporność.
Zaobserwowano również, że kombinacja taksanu i simwastatyny nie działa na zdrowe fibroblasty ludzkie (nienowotworowe). Jest też mało skuteczna w leczeniu innych nowotworów, nie pochodzących z ektodermy, w szczególności raku jelita grubego.
W przypadku czerniaka częstym powikłaniem w leczeniu, nawet nowoczesnymi preparatami leczniczymi (np. przeciwciałami), są choroby zakrzepowo-zatorowe. Statyny, które wpływają na hamowanie aktywności układu krzepnięcia i opóźnienie tworzenia skrzepu w naczyniach krwionośnych, zmniejszają ekspresję tromboplastyny tkankowej, produkcję trombiny, hamują agregację i aktywację płytek krwi, powinny dodatkowo poprawić efekty leczenia. Dlatego, niezależnie od poprawionego działania przeciwnowotworowego wobec ludzkiego czerniaka, dzięki działaniu simwastatyny, kompozycja według wynalazku nadaje się do stosowania w leczeniu towarzyszących temu nowotworowi powikłań zatorowo-zakrzepowych i w złagodzeniu objawów związanych z chorobą nowotworową. Podawane dawki statyny powinny być dostosowane przez specjalistę do wielkości dawki taksanu oraz ogólnego stanu pacjenta. Potwierdzono możliwość osiągnięcia wysokich dawek statyn (do ok. 25-30 mg/kg/dzień), które odpowiadają stężeniom działającym antyproliferacyjnie in vitro [van der Spek, Holstein], jednak nadal z akceptowalnym klinicznie ogólnym poziomem toksyczności.
PL 239 178 B1
W korzystnej realizacji kompozycja według wynalazku jest lekiem skierowanym przeciwko czerniakowi ludzkiemu, przeznaczonym do podawania we wlewie, w postaci binarnego układu taksanu razem z simwastatyną.
Przykładowe realizacje wykonania wynalazku zostały omówione poniżej.
P r z y k ł a d 1. Wpływ simwastatyny podanej z taksolem na proliferację komórek czerniaka ludzkiego (melanoma malignum).
Celem analizy była ocena czy podanie simwastatyny w połączeniu z taksolem (lub schematem leczenia zawierającym taksol) może synergistycznie blokować podziały komórek czerniaka ludzkiego. Badania wykonano na liniach komórkowych czerniaka ludzkiego pochodzących z trzech stadiów rozwojowych: WM35 z fazy radialnej wzrostu, WM239A linia metastatyczna i A375P przerzut do płuc, linia złośliwa. Testy proliferacji wykonywano z użyciem testu fioletu krystalicznego oraz testu MTT.
Test fioletu krystalicznego
Test fioletu krystalicznego (patrz: Gillies RJ, Didier N, Denton M (1986) Determination of cell number in monolayer cultures. Anal Biochem 159: 109-113) oparty jest na założeniu, że komórki żywe ulegają wybarwieniu pozostając przyczepione do podłoża, zaś martwe są usuwane wraz z pożywką hodowlaną. Absorbancja roztworu mierzona przy długości fali 540 nm jest proporcjonalna do ilości wybarwionych komórek [Gillies RJ i wsp., 1986]. Test jest testem o stosunkowo wysokiej czułości i dokładności.
Komórki wysiewano na 96-dołkową płytkę w ilości 1,5 χ 103 na dołek. Po hodowli komórek z odpowiednimi ligandami usuwano płyn znad komórek i przepłukiwano je 200 μl roztworu buforowego PBS o temperaturze 37°C. Następnie zlewano PBS, dodawano po 200 μl metanolu i inkubowano przez 15 minut w temperaturze 20°C. Usuwano metanol znad komórek i po wysuszeniu płytki dodawano po 150 μl 5% roztworu fioletu krystalicznego w 20% roztworze metanolu w wodzie. Po 2 minutach zlewano barwnik, płukano komórki trzykrotnie wodą, a następnie dodawano odbarwiacz (bufor cytrynian sodu/kwas cytrynowy w 50% metanolu w wodzie) w ilości 200 μl na dołek. Po 30 min mierzono absorbancję roztworu przy długości fali 540 nm względem próby ślepej.
Test MTT ‘
Test MTT bazuje na aktywności enzymu - dehydrogenazy mitochondrialnej do przekształcania pomarańczowo-żółtej, rozpuszczalnej w wodzie, soli tetrazolowej (bromek 3-(4,5-dimetylotiazol-2-yl)-2,5-difenylotetrazoliowy) do formy nierozpuszczalnego formazanu, produktu powyższej reakcji o ciemnoniebieskim zabarwieniu. Po rozpuszczeniu kryształów formazanu w kwaśnym izopropanolu, powstaje roztwór, którego intensywność zabarwienia jest spektrofotometrycznie mierzona przy 570 nm. Ilość barwnego zredukowanego MTT jest proporcjonalna do aktywności utleniającej mitochondriów w komórce, a w ściśle określonych warunkach eksperymentalnych do liczby aktywnych metabolicznie (czyli żywych) komórek w danej populacji. Test MTT może być też używany zarówno do określania proliferacji komórek jak i żywotności w populacjach komórek już nie dzielących się, ale aktywnych metabolicznie. Tak więc test MTT jest obecnie stosowany do oceny działania cytotoksycznego i jest zalecany jako referencyjny przez międzynarodowe organizacje normotwórcze.
Komórki wysiewano na 96-dołkową płytkę w ilości 1,5 χ 103 na dołek. Po hodowli komórek z odpowiednimi ligandami usuwano płyn znad komórek i przepłukiwano je 200 μl roztworu buforowego PBS o temperaturze 37°C. Następnie usuwano płyn z ligandami znad komórek i przepłukiwano je 200 μl medium RPMI bez surowicy w temperaturze 37°C. Następnie zlewano medium i dodawano roztwór MTT w medium RPMI, o końcowym stężeniu MTT w dołku 0,5 mg/ml, dodawano po 150 μl roztworu barwnika na dołek. Inkubowano w 37°C przy 5% CO2 przez 3 h. Po inkubacji usuwano płyn znad komórek i dodawano po 150 μl zakwaszonego (HCl) izopropanolu, po czym wytrząsano przez 20 min na wytrząsarce horyzontalnej. Absorbancję mierzono przy długości fali 570 nm (spektrometr Synergy HT Bio-tek).
Wyniki badania wpływu kompozycji taksolu z simwastatyną w porównaniu z czystym taksolem na proliferację komórek linii A375P, WM35 (faza radialna) i WM239A uzyskane w teście „fioletu krystalicznego” przedstawiono odpowiednio na fig. 1A-C. Uzyskane wyniki były istotne statystycznie (Tabela 1).
PL239 178 Β1
Tabela 1. Analiza statystyczna wyników uzyskanych w teście „fioletu krystalicznego”.
A375P WM35 WM239A
próby Wartość p próby Wartość p próby Wartość p
S vs K 1.67e-07 S vs K 1.10e-07 SvsK 6.39c-15
S vs 25 7.91c-14 S vs 25 5.13c-13 S vs 25 5.216-09
S vs 12.5 6.10e-l 1 S vs 12.5 2.22e-12 Svs 12.5 2.26e-07
T vs K 1.94e-07 T vs K l.02e-07 T vs K 1.62e-ll
K vs z50 6.21e-09 K vsz50 9.50e-09 K vs z50 l.lle-13
K vs 25 3.66e-09 K vs 25 1.68c-09 K vs 25 1.72e-15
K vs 12.5 1.91c-08 K vs 12.5 8.41C-09 K vs 12.5 8.15c-15
K vs 6.25 4.79e-08 K vs 6.25 3.45e-09 K vs 6.25 1.15e-14
K vs3,12 5.28c-08 K vs 3.12 5.15e-09 K vs3.12 3.45c-16
K vs 1.56 3.28c-09 K vs 1.56 6.88e-09 K vs 1.56 1.26e-13
K vs 0.78 1.48c-08 K vs 0.78 2.44c-10 K vs 0.78 9.64c-12
K vs 0.39 2.05e-08 K vs 0.39 8.38e-l 1 K vs 0.39 2.43e-15
T vs z50 1.86e-l 1 T vs z50 1.10e-07 T vs z50 4,04c-18
T vs 25 5.37e-13 T vs 25 5.13e-13 T vs 25 1.15e-09
Tvs 12.5 3.17e-10 T vs 12.5 2.22e-12 T vs 12.5 7.68c-09
T vs 6.25 7.99e-09 T vs 6.25 1.02e-07 T vs 6.25 1.18e-14
Tvs3.12 8.04c-07 Tvs3.12 9.50c-09 T vs 3.12 5.95e-l 1
T vs 1.56 0.019 T vs 1.56 1 68c-09 T vs 1.56 1.29e-12
Tvs0.78 0.010 T vs 0.78 8.41C-09 T vs 0.78 1.28c-12
Tvs0,39 0.013 T vs 0.39 3.45c-09 T vs 0.39 2.13e-09
Obliczenia statystyczne oraz wizualizację danych wykonano w programie R (R Core Team (2015). R: A language and environment for statistical computing. R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria. URL https://www.R-project.org/). Wykorzystano następujące biblioteki: > ggplot2 (H. Wickham. ggplot2: Elegant Graphics for Data Analysis. Springer-Verlag New York, 2009) > PerformanceAnalytics (Brian G. Peterson and Peter Carl (2014). PerformanceAnalytics: Econometric tools for performance and risk analysis. R package version 1.4.3541. http://CRAN.R-project.org/ package=Performance Analytics) > doBy (Soren Hojsgaard and Ulrich Halekoh (2015). doBy: Groupwise Statistics, LSmeans, Linear Contrasts, Utilities. R package version 4.5-14. http://CRAN.R-project.org/package=doBy).
Przeprowadzone testy proliferacyjne na komórkach trzech linii czerniaka ludzkiego z użyciem testu fioletu krystalicznego dowodzą, że simwastatyna synergistycznie i zależnie od dawki (np. od 50 do 12,5 μΜ) w połączeniu z zastosowanym taksoidem (np. taksolem o stałym stężeniu 0,5 μΜ) trwale hamuje proliferację różnych linii komórek czerniaka ludzkiego. Obecność simwastatyny prawdopodobnie wspomaga selektywne gromadzenie się taksolu w komórkach czerniaka, realizowane poprzez zniesienie, w wyniku działania simwastatyny, lekooporności komórek czerniaka ludzkiego na taksol. Terapeutycznie efektywny zakres stosowanych dawek simwastatyny zawiera się w przedziale od 12,5 do 50 μΜ dając efekt synergistyczny z zastosowanym taksolem w stężeniu 0,5 μΜ.
Wynik potwierdzono również testem MTT dla wszystkich trzech linii komórkowych czerniaka pochodzących z trzech stadiów rozwojowych (WM35 z fazy radialnej wzrostu, WM239A linia metastatyczna i A375P przerzut do płuc, linia złośliwa).
Przykład 2. Wpływ simwastatyny podanej z taksolem oraz innymi cytostatykami na toksyczność taksoidu wobec komórek czerniaka ludzkiego (melanoma malignum).
Toksyczność stosowanych leków badano poprzez pomiar zawartości glutationu zredukowanego i utlenionego GSH/GSSG w komórkach czerniaka ludzkiego. Zawartość glutationu analizowano metodą RP-HPLC. Zastosowano metodę zaczerpniętą ze stanu techniki [pozycje literaturowe 1-4].
PL239 178 Β1
Wykorzystana metoda polega na reakcji GSH i GSSG z N-dinitrofluorobenzenem z tworzeniem odpowiednio: N,S-dinitro- pochodnych w przypadku GSH oraz Ν,Ν-dinitro- pochodnych w przypadku GSSG. Elucje wykonano w układzie woda-acetonitryl, zgodnie ze wzrastającym stężeniem acetonitrylu.
Oznaczenia poziomu glutationu zredukowanego, glutationu utlenionego i całkowitego glutationu przeprowadzone zostały na układzie RP-HPLC firmy Shimadzu, (detektor z matrycą fotodiodową SPD - M10VP, oprogramowanie class VP 7,2). Rozdziały przeprowadzano w temperaturze 20°C na kolumnie Luna 5u C18 (Z) (250 mm χ 4,6 mm, firmy Phenomenex), z guard kolumną o tym samym wypełnieniu. Jako eluentu w rozdziałach używano rozpuszczalników klasy grade: acetonitryl/0,1% TFA i H2O/0,1% TFA. Rozdział otrzymano w elucji gradientowej, w nieliniowym wzroście stężenia acetonitrylu od 20% do 100% w czasie 90 minut, przy przepływie 1,0 ml/min. Na kolumnę nakładano próbki o objętości 20 μΙ, które wcześniej filtrowano z użyciem filtrów PTFE o średnicy porów 0,2 pm (Supelco). Analizę związków prowadzono z detekcją UV-VIS przy 365 nm. Komórki zawieszano w roztworze 70% PCA/1 mM BPDS/0,9% NaCI w stosunku 1:3, sonifikowano 3x5 sekund (Bandelin SonoplusGM70) w temperaturze 4°C i wirowano przy 1400 g w temperaturze 4°C przez 10 minut.
Przygotowany supernatant używano do oznaczeń.
W celu identyfikacji badanych związków zastosowano odpowiednie roztwory wzorcowe wzorce: GSH i GSSG.
Wszystkie roztwory wzorcowe przygotowano w 10% PCA/1 mM BPDS, w wodzie redestylowanej.
W celu oznaczenia poziomu GSH i GSSG korzystano z krzywych standardowych, które przygotowano dla roztworów wzorcowych w zakresie stężeń od 13 do 75 nmol/ml odpowiedniego homogenatu komórkowego. Mieszanina inkubacyjna zawierała odpowiednio: supernatant pochodzący z komórek, N-metyl-L-lizynę (wewnętrzny standard), 10% PCA/1 mM BPDS, 2 Μ KOH - 2,4 M KHCO3 oraz 1% DNFB.
W przypadku krzywej wzorcowej mieszaninę inkubacyjna przygotowano w sposób analogiczny, z tym, że dodawano różne objętości roztworów wzorcowych, a objętość końcową mieszaniny kontrolowano ilością dodanego 10% PCA/1 mM BPDS. Po 24 h derywatyzacji w temperaturze pokojowej, w ciemności, próbki zakwaszano przez dodanie 70% PCA i wirowano przez 2 minuty przy 5600 g. Uzyskany supernatant sączono przez filtr PTFE-Supelco, nakładano na kolumnę i prowadzono 90-minutowy rozdział analizowanych związków. Chromatogramy opracowano identyfikując rozdzielane związki zgodnie z czasami retencji w oparciu o posiadane wzorce i sumując powierzchnie pików chromatograficznych w zakresie wybranych czasów retencji.
Tabela 2
Linia komórkow a+dodanc farmaceutyki Liczba komórek Start 0 h [min] Liczba komórek po 48h [min] GSH nmol/mln komórek GSSG nmol/mln komórek całkowity glulation nmol/mln komórek GSH/GSSG
A375P K 3,8 6,4 0,08 0,85 1,8 0,095
A375P TCM 3,8 5,3 0,35 2,29 4,9 0,154
A375P TCM+S 3,8 3,1 0,5 2,5 5,4 0,202
WM239A K 4 6,6 0,12 1,36 2,8 0,09
WM239A TCM 4 4,6 0,35 1,67 3,7 0,21
WM239A TCM+S 4 3,3 0,50 2.01 4,5 0,25
WM35 K 5,3 6,1 0,39 0,82 2,0 0,48
WM35 TCM 5,3 4,9 1,04 1,92 4,9 0,54
WM35 TCM+S 5,3 3,5 1,21 1,95 5,1 0,62
Legenda: K-kontrola, TCM-Taksol, Cisplalyiia, Melfalan [0.5 μΜ], TCM+S -TCM +Simwastatyna [5 μΜ],
Uzyskane wyniki potwierdzają efekt synergii zaobserwowany w przykładzie 1.
PL239 178 Β1
Przykład 3. Simwastatyna selektywnie zwiększa wchłanianie taksanów do komórek czerniaka ludzkiego.
Celem analizy była ocena, czy podanie simwastatyny w połączeniu z taksolem może selektywnie zwiększyć stężenie taksolu w komórkach nowotworowych. Opracowano metodę z wykorzystaniem techniki HPLC.
Badania wykonano na liniach komórkowych czerniaka ludzkiego pochodzących z trzech stadiów rozwojowych: WM35 z fazy radialnej wzrostu, WM239A linia metastatyczna i A375P przerzut do płuc, linia złośliwa. Na każdy punkt pomiarowy dla każdej z osobnych linii komórkowych hodowano komórki na 4 szalkach dishes Corning 100 mm. Wykonano analizy dla układu kontroli (komórki hodowane w obecności 10% surowicy FSC w medium RPMI), z dodatkiem 0,5 μΜ Taksanu, oraz z dodatkiem kompozycji SIMTAX (0,5 μΜ Taksan + 20 μΜ Simwastatyna). Analizy powtórzono trzykrotnie w niezależnych doświadczeniach, uzyskując podobne rezultaty. Wyniki uśredniono i podano w μΜ na milion komórek. Komórki liczono z wykorzystaniem licznika Countess lnvitrogen TM.
W celu oznaczenia ilości leku zaabsorbowanego przez komórki czerniaka wykorzystano metodę chromatograficzną. Do pomiarów zastosowano System HPLC (Shimadzu Corporation Japan) złożony z dwóch pomp wysokociśnieniowych LC 10AT vp, degazera DGU-14A, pieca do termostatowania kolumny CTO-10 ASvp, automatycznego podajnika próbek SIL-10 ADvp oraz detektora diodowego SPD-M10 Avp. Wykorzystano oprogramowanie CLASS-VP 7.2.1.
Opis metody
Próbki rozdzielano na kolumnie Phenomenex Gemini -Νχ 5μ Cis (4,6 χ 150 mm i.d) + guard kolumna firmy Phenomenex (4x3 mm i.d.) o identycznym wypełnieniu, w temperaturze 20°C.
Zastosowano eluent o składzie: solwent A (woda + 0,1% kwas trifuorowooctowy - TFA) i solwent B (acetonitryl 0,1% TFA). Próbkę rozdzielano w układzie gradientu: 20% solwentu B do 30% solwentu B liniowo przez 15 minut, kolejno liniowo do 34% przez 6 min, przez 24 minuty liniowo do 100% solwentu B, następnie 10 minut izokratycznie przy 100% solwentu B. Kolumnę rekalibrowano przez 15 min w 20% solwentu B.
Podawano 20 μΙ próbki przy przepływie 1,0 ml/min w czasie 65 min z detekcją UV-VIS 220 nm.
Wyniki walidowano dwustopniowo poprzez porównanie wartości Rt do Rt standardów oraz poprzez analizę widma spektroskopowego rozdzielonych związków i porównanie ich z widmem standardów.
Procedura odzysku leku z tkanki
Zamrożoną suchą peletę zalewano 650 μΙ roztworu (2/1 izopropanol, metanol + 10% acetonitrylu) po czym sonifikowano 3 χ 15 s próbkę zamrażano na 24 h.
Po rozmrożeniu delikatnie wytrząsano przez 30 min, dodawano 200 μΙ soli fizjologicznej i 1083 μΙ chloroformu intensywnie mieszając przez 3x4 min.
Oddzielenie fazy organicznej od wodnej przeprowadzono poprzez wirowanie 10 000 obr./10 min.
Zebraną fazę chloroformową poddano zagęszczaniu przy podciśnieniu w koncentratorze w 4°C i dosuszano w atmosferze argonu. Osad rozpuszczano w 100 μΙ metanolu i rozdzielano na HPLC.
Odzysk
Uzyskano 99% odzysk w stosunku do standardów zawieszonych w soli fizjologicznej.
Błąd pomiarowy dla obydwu związków w powyższej metodzie nie przekracza 5%.
Tabela 3. Analiza wchłaniania taksolu do komórek czerniaka ludzkiego.
Nazwa linii i liczba komórek |mln| WM 35 13,2 WM239A 15.6 Α375Ρ 16.1
zmiciuic Całka pola powierzchni piku Stężenie Taksolu |μΜ] /111111 komórek % zawartość w komórkach Całka pola powierzchni piku Stężenie Taksolu [pM]/mln komórek % zawartość w komórkach Całka pola powierzchni piku Stężenie taksolu |J1M| /min komórek % zawartość w komórkach
konlrola 0 0 0 0 0 0 0 0 0
TCM 402994 23,83 /1,805 100 619558 36,8 /2,36 100 318221 18,9 /1,17 100
TCM+ Simwastatyna 631422 37,5/2.84 156 1237116 73,48 /4,71 199 631547 37,5 /2,32 198
PL239 178 Β1
Wniosek:
Simwastatyna selektywnie zwiększa wchłanianie taksanów do komórek czerniaka ludzkiego niezależnie od fazy progresji z jakiej dany rodzaj komórek się wywodzi. Simwastatyna zwiększa średnio o dwieście procent zawartość taksolu w komórkach czerniaka ludzkiego w stosunku do kontroli z samym taksolem. Zatrzymanie taksolu jest procesem trwałym.
Przykład porównawczy 1. Wpływ simwastatyny podanej z taksolem na proliferację i toksyczność komórek czerniaka mysiego.
Celem analizy była ocena, czy podanie simwastatyny w połączeniu z taksolem (lub schematem zawierającym taksol) może synergistycznie blokować podziały komórek czerniaka mysiego.
Badania wykonano na linii komórkowej czerniaka mysiego S91. Testy proliferacji/cytotoksyczności wykonywano z użyciem testu fioletu krystalicznego oraz testu MTT jak opisano w przykładzie 1.
Uzyskane wyniki świadczą o tym, że w komórkach czerniaka mysiego linii S91 nie istnieje synergia związana z wpływem simwastatyny na działanie taksolu.
Przykład porównawczy 2. Wpływ simwastatyny podanej z taksolem na proliferację komórek nowotworu jelita grubego HT-29.
Celem analizy była ocena, czy podanie simwastatyny w połączeniu z taksolem (lub schematem zawierającym taksol) może synergistycznie blokować podziały komórek nowotworu jelita grubego HT-29. Badania wykonano na linii komórek nowotworu jelita grubego HT-29. Testy proliferacji/cytotoksyczności wykonywano z użyciem testu fioletu krystalicznego oraz testu MTT jak opisano w przykładzie 1.
Wyniki działania kompozycji simwastatyny i taksolu na proliferację komórek nowotworu jelita grubego HT-29 potwierdziły, że simwastatyna nie działa na linię komórek nowotworu jelita grubego HT-29. Nie wykazuje synergii z taksolem. Badana linia komórkowa jest wrażliwa jedynie na wysokie dawki taksanów.
Przykład porównawczy 3. Wpływ simwastatyny podanej z taksolem na proliferację komórek fibroblastów ludzkich.
Celem analizy była ocena, czy podanie simwastatyny w połączeniu z taksolem (lub schematem zawierającym taksol) może synergistycznie blokować podziały komórek fibroblastów ludzkich. Badania wykonano na linii komórek fibroblastów ludzkich tj. komórek nienowotworowych. Testy proliferacji/cytotoksyczności wykonywano z użyciem testu fioletu krystalicznego oraz testu MTT.
Tabela 4. Analiza statystyczna wyników uzyskanych w teście „fioletu krystalicznego”.
próby Wartość p
S vs K 0.1221
S vs 25 0.0004
S vs 12.5 0.0626
MCT vs K 7.24e-07
K vs z50 0.0430
K vs 25 0.5085
K vs 12.5 0.5000
K vs 6.25 0.9482
Kvs3.12 0.4318
K vs 1.56 0.1920
K vs 0.78 0.2505
K vs 0.39 0.2156
Wniosek:
Jak wynika z przeprowadzonych testów proliferacyjnych na komórkach fibroblastów ludzkich, z użyciem testu fioletu krystalicznego, simwastatyna w różnych zastosowanych stężeniach podana
PL 239 178 B1 z zastosowanym schematem TCM w dawce 0,5 μΜ nie działa na prawidłowe komórki skóry ludzkiej jakimi są fibroblasty. Jest to szczególnie istotne ze względu na fakt możliwych niepożądanych działań zastosowanego schematu na inne nienowotworowe komórki ludzkie.
Literatura:
1. Dominik, P.K., Cassidy, P.B., Roberts, J.C., (2001). A new and versatile method for determination of thiolamines of biological importance”, J. Chromatogr. B. 761; 1-12.
2. Bronowicka-Adamska, P., Wróbel, M., Zagajewski, J., (2011). “RP-HPLC method for quantitative determination of cystathionine, cysteine and glutathione: An application for the study of the metabolism of cysteine in human brain”, Journal of Chromatography B. 879; 2005-2009.
3. Bronowicka-Adamska, P., Wróbel, M., Zagajewski, J., (2015). An application of RP-HPLC for determination of the activity of cystathionine beta-synthase and gamma-cystathionase in tissue homogenates. Nitric Oxide. 46; 186-91.
4. Wróbel, M., Lewandowska, I., Bronowicka-Adamska, P., Paszewski, A., (2009). “The level of sulfane sulfur in The fungus Aspergillus nidulans wild type and mutant strains”, Amino Acids. 37; 565-571.
5. Follet J, Corcos L, Baffet G, Ezan F, Morel F, Simon B and Le Jossic-Corcos C (2012) “The association of statins and taxanes: an efficient combination trigger of cancer cell apoptosis” British Journal of Cancer 106, 685-692.
6. DeConti RC, Algaz AP, Andrews S, Urbas P, Born O, Stoeckigt D, Floren L, Hwang J, WeberVK J Sondak and Daud AI, (2010) “Phase II trial of sagopilone, a novel epothilone analog in metastatic melanoma” British Journal of Cancer 103, 1548-1553.
7. Sarah A. Holstein and Raymond J. Hohl, (2001) “Synergistic Interaction of Lovastatin and Pacli- taxel in Human Cancer Cells”; Vol. 1, 141-149, Molecular Cancer Therapeutics.
8. Kretzer lara F; Durvanei A Maria; CGuido Maria, CContente Thais, Maranhao Raul C (2016) “Simvastatinx increases the antineoplastic actions of paclitaxel carried in lipid nanoemulsions in melanoma-bearing mice”; International Journal of Nanomedicine: 11 885-904.
9. Werner Martin, Atil Bihter, Sieczkowski Evelyn, Chiba Peter, Hohenegger Martin (2013) “Simvastatin-induced compartmentalisation of doxorubicin sharpens up nuclear topoisomerase II inhibition in human rhabdomyosarcoma cells”, Arch Pharmacol; 386:605-617.
10. Meder Janusz, (2011) „Podstawy Onkologii Klinicznej” Warszawa.
11. Krzakowski Maciej, Potemski Piotr, Warzocha Krzysztof, Wysocki Piotr (2014) „Onkologia Kliniczna”; Gdańsk.
12. Holstein S.A., Knapp H.R., Clamon G.H., Murry D.J., Hohl R.J. (2006) “Pharmacodynamic effects of high dose lovastatin in subjects with advanced malignancies”. Cancer Chemother. Pharmacol.; 57: 155-164.
13. van der Spek E., Bloem A.C., van de Donk N.W. i wsp. (2006) “Dosefinding study of high-dose simvastatin combined with standard chemotherapy in patients with relapsed or refractory myeloma or lymphoma”. Haematologica; 91: 542-545.

Claims (5)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Kompozycja zawierająca wodny roztwór paklitakselu i wodny roztwór simwastatyny do stosowania w leczeniu i zapobieganiu czerniaka u ludzi.
  2. 2. Kompozycja do stosowania według zastrz. 1, znamienna tym, że paklitaksel i simwastatyna są zawarte w tym samym roztworze wodnym.
  3. 3. Kompozycja do stosowania według zastrz. 1, znamienna tym, że paklitaksel i simwastatyna są zawarte w osobnych roztworach wodnych.
  4. 4. Kompozycja do stosowania według zastrz. 1, znamienna tym, że jest przeznaczona do stosowania w leczeniu czerniaka u ludzi z towarzyszącymi powikłaniami zatorowo-zakrzepowymi.
  5. 5. Kompozycja do stosowania według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera miaszaninę cytostatyków składającą się z taksanu, cisplatyny i melfalanu.
PL420249A 2017-01-19 2017-01-19 Kompozycja do leczenia czerniaka u ludzi PL239178B1 (pl)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL420249A PL239178B1 (pl) 2017-01-19 2017-01-19 Kompozycja do leczenia czerniaka u ludzi
EP18742177.1A EP3570828B1 (en) 2017-01-19 2018-01-19 Combination of a taxane and a hydrophobic statin for the treatment of human melanoma
US16/479,397 US10912756B2 (en) 2017-01-19 2018-01-19 Method for the treatment of human melanoma
PCT/PL2018/050002 WO2018135959A1 (en) 2017-01-19 2018-01-19 A composition for the treatment of human melanoma

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL420249A PL239178B1 (pl) 2017-01-19 2017-01-19 Kompozycja do leczenia czerniaka u ludzi

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL420249A1 PL420249A1 (pl) 2018-07-30
PL239178B1 true PL239178B1 (pl) 2021-11-08

Family

ID=62909239

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL420249A PL239178B1 (pl) 2017-01-19 2017-01-19 Kompozycja do leczenia czerniaka u ludzi

Country Status (4)

Country Link
US (1) US10912756B2 (pl)
EP (1) EP3570828B1 (pl)
PL (1) PL239178B1 (pl)
WO (1) WO2018135959A1 (pl)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023009174A1 (en) * 2021-07-30 2023-02-02 Oregon Health & Science University Methods for predicting lymph node status, likelihood of metastasis, and/or overall prognosis in patients with melanoma

Also Published As

Publication number Publication date
EP3570828B1 (en) 2023-01-04
US20190358194A1 (en) 2019-11-28
WO2018135959A1 (en) 2018-07-26
EP3570828A4 (en) 2020-11-11
EP3570828A1 (en) 2019-11-27
US10912756B2 (en) 2021-02-09
PL420249A1 (pl) 2018-07-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Weidmann Dihydroquercetin: More than just an impurity?
Guerrero et al. Curcumin-loaded nanoemulsion: A new safe and effective formulation to prevent tumor reincidence and metastasis
de Oliveira Júnior et al. Bixin, an apocarotenoid isolated from Bixa orellana L., sensitizes human melanoma cells to dacarbazine-induced apoptosis through ROS-mediated cytotoxicity
Amin et al. Overview of major classes of plant-derived anticancer drugs
Patel et al. Piperlongumine for enhancing oral bioavailability and cytotoxicity of docetaxel in triple-negative breast cancer
Rahman et al. Unfolding the apoptotic mechanism of antioxidant enriched-leaves of Tabebuia pallida (lindl.) miers in EAC cells and mouse model
Liu et al. Chemosensitizing effect of Paris Saponin I on Camptothecin and 10-hydroxycamptothecin in lung cancer cells via p38 MAPK, ERK, and Akt signaling pathways
Serra et al. Processing cherries (Prunus avium) using supercritical fluid technology. Part 2. Evaluation of SCF extracts as promising natural chemotherapeutical agents
Ceramella et al. Anchusa azurea Mill.(Boraginaceae) aerial parts methanol extract interfering with cytoskeleton organization induces programmed cancer cells death
Aqil et al. Lung cancer inhibitory activity of dietary berries and berry polyphenolics
Choi et al. Effects of myricetin on the bioavailability of doxorubicin for oral drug delivery in rats: possible role of CYP3A4 and P-glycoprotein inhibition by myricetin
Yang et al. In vitro synergistic cytotoxic effect of triptolide combined with hydroxycamptothecin on pancreatic cancer cells
Osman et al. Modulatory role of resveratrol on cytotoxic activity of cisplatin, sensitization and modification of cisplatin resistance in colorectal cancer cells
Abdel‐Salam et al. Chemical Composition of Aqueous Ethanol Extract of Luffa cylindrica Leaves and Its Effect on Representation of Caspase‐8, Caspase‐3, and the Proliferation Marker Ki67 in Intrinsic Molecular Subtypes of Breast Cancer in Vitro
Suno et al. Improved high-performance liquid chromatographic detection of paclitaxel in patient's plasma using solid-phase extraction, and semi-micro-bore C18 separation and UV detection
Wang et al. Ferroptosis induction via targeting metabolic alterations in triple-negative breast cancer
Hasibuan et al. The ethyl acetate extract of Vernonia amygdalina leaf ameliorates gemcitabine effect against migration and invasion of PANC-1 cells via down-regulation the VEGF, COX2, and RAS/MEK pathways
PL239178B1 (pl) Kompozycja do leczenia czerniaka u ludzi
Rahman et al. Multifunctional Role of Natural Products for Therapeutic Approaches of Prostate Cancer: An Updated Review
Miura et al. Oxidative stress-mediated antitumor activity of erythorbic acid in high doses
Silalahi et al. Curcumin’s Antioxidant Properties in Stable Coronary Artery Disease Patients Undergoing Percutaneous Coronary Intervention: A Randomized Controlled Trial
AU2018200709B2 (en) Tripterygium wilfordii extracts to overcome chemotherapy resistance
Li et al. A thiol-responsive and self-immolative podophyllotoxin prodrug for cancer therapy
Gupta et al. Development and validation of bioanalytical method for the determination of hydrazinocurcumin in rat plasma and organs by HPLC-UV
Wagle et al. Synergistic Cytotoxicity of Extracts of Chaga Mushroom and Microalgae against Mammalian Cancer Cells In Vitro