PL234499B1 - Kompozycja zawierająca wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych, biopreparat zawierający taką kompozycję wykorzystywane do zwalczania patogenów roślin w glebie, użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory oraz biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin w sposobach i zastosowaniach je wykorzystujących - Google Patents
Kompozycja zawierająca wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych, biopreparat zawierający taką kompozycję wykorzystywane do zwalczania patogenów roślin w glebie, użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory oraz biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin w sposobach i zastosowaniach je wykorzystujących Download PDFInfo
- Publication number
- PL234499B1 PL234499B1 PL424794A PL42479418A PL234499B1 PL 234499 B1 PL234499 B1 PL 234499B1 PL 424794 A PL424794 A PL 424794A PL 42479418 A PL42479418 A PL 42479418A PL 234499 B1 PL234499 B1 PL 234499B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- soil
- strain
- biopreparation
- growth
- composition
- Prior art date
Links
- 239000002689 soil Substances 0.000 title claims description 162
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 72
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 61
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 title claims description 27
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 title claims description 25
- 244000005706 microflora Species 0.000 title claims description 14
- 230000008121 plant development Effects 0.000 title claims description 9
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 title description 2
- 241001478887 unidentified soil bacteria Species 0.000 title 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 claims description 57
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 56
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 claims description 48
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 claims description 48
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 claims description 47
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 claims description 47
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 46
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 46
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 claims description 43
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 43
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 claims description 38
- 241000758706 Piperaceae Species 0.000 claims description 31
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 21
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 20
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 17
- 244000000000 soil microbiome Species 0.000 claims description 16
- 241000186073 Arthrobacter sp. Species 0.000 claims description 15
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 15
- 241000873310 Citrobacter sp. Species 0.000 claims description 14
- 241000592795 Paenibacillus sp. Species 0.000 claims description 14
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 claims description 14
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 14
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 claims description 12
- 241000722363 Piper Species 0.000 claims description 12
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 claims description 12
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 claims description 12
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 claims description 12
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 12
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 claims description 9
- 235000000832 Ayote Nutrition 0.000 claims description 9
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 claims description 9
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 claims description 9
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 claims description 9
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 claims description 9
- 240000004244 Cucurbita moschata Species 0.000 claims description 9
- 235000009854 Cucurbita moschata Nutrition 0.000 claims description 9
- 235000009804 Cucurbita pepo subsp pepo Nutrition 0.000 claims description 9
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 9
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 9
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 claims description 9
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 claims description 9
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 claims description 9
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 claims description 9
- 230000001764 biostimulatory effect Effects 0.000 claims description 9
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 9
- 235000021384 green leafy vegetables Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 235000015136 pumpkin Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000011066 ex-situ storage Methods 0.000 claims description 6
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims description 6
- 239000011814 protection agent Substances 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 4
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 claims description 3
- 240000004160 Capsicum annuum Species 0.000 claims description 2
- 235000008534 Capsicum annuum var annuum Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001511 capsicum annuum Substances 0.000 claims description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 claims description 2
- 230000001706 oxygenating effect Effects 0.000 claims description 2
- 244000291564 Allium cepa Species 0.000 claims 4
- 241000588701 Pectobacterium carotovorum Species 0.000 claims 4
- 241000589615 Pseudomonas syringae Species 0.000 claims 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 241000589623 Pseudomonas syringae pv. syringae Species 0.000 description 39
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 35
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 25
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 22
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 18
- 241000588702 Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum Species 0.000 description 17
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 12
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 9
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 9
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 9
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 8
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 8
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N nickel Substances [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 238000004176 ammonification Methods 0.000 description 6
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 6
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 6
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 6
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 6
- 241000234282 Allium Species 0.000 description 5
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 5
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 5
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003864 humus Substances 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 239000004476 plant protection product Substances 0.000 description 5
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 5
- 241000589157 Rhizobiales Species 0.000 description 4
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 4
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 4
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 3
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 3
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 3
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- -1 ammonium ions Chemical class 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 2
- 244000000005 bacterial plant pathogen Species 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 239000002029 lignocellulosic biomass Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 2
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 description 2
- 230000003032 phytopathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229930000184 phytotoxin Natural products 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- ZQVJBRJGDVZANE-MXDMHAPNSA-N (2s)-2-[(3s,6s,9z,12s,15s,18s,21r,24r,27s)-18,21-bis(2-aminoethyl)-12-benzyl-3-[(1s)-2-chloro-1-hydroxyethyl]-15-[3-(diaminomethylideneamino)propyl]-9-ethylidene-27-[[(3s)-3-hydroxydodecanoyl]amino]-24-(hydroxymethyl)-2,5,8,11,14,17,20,23,26-nonaoxo-1-oxa Chemical compound N1C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@@H](CCN)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](O)CCCCCCCCC)COC(=O)[C@H]([C@H](O)CCl)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C(O)=O)NC(=O)\C(=C\C)NC(=O)[C@@H]1CC1=CC=CC=C1 ZQVJBRJGDVZANE-MXDMHAPNSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000860705 Alternaria tomato Species 0.000 description 1
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 1
- 241000186063 Arthrobacter Species 0.000 description 1
- 229920000298 Cellophane Polymers 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMGBNISRFNDECK-CZSBRECXSA-N Coronatine Chemical compound CC[C@H]1C[C@]1(C(O)=O)NC(=O)C1=C[C@H](CC)C[C@@H]2C(=O)CC[C@H]12 FMGBNISRFNDECK-CZSBRECXSA-N 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-VRPWFDPXSA-N D-fructopyranose Chemical compound OCC1(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 229930191978 Gibberellin Natural products 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 229910003328 NaAsO2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000179039 Paenibacillus Species 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQVJBRJGDVZANE-UHFFFAOYSA-N Syringomycin Natural products N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CCN)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(NC(=O)CC(O)CCCCCCCCC)COC(=O)C(C(O)CCl)NC(=O)C(C(O)C(O)=O)NC(=O)C(=CC)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 ZQVJBRJGDVZANE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010069584 Type III Secretion Systems Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N ammonia nh3 Chemical compound N.N XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229910052785 arsenic Inorganic materials 0.000 description 1
- RQNWIZPPADIBDY-UHFFFAOYSA-N arsenic atom Chemical compound [As] RQNWIZPPADIBDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000005282 brightening Methods 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- JOPOVCBBYLSVDA-UHFFFAOYSA-N chromium(6+) Chemical compound [Cr+6] JOPOVCBBYLSVDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000009264 composting Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- FMGBNISRFNDECK-UHFFFAOYSA-N coronatine Natural products CCC1CC1(C(O)=O)NC(=O)C1=CC(CC)CC2C(=O)CCC12 FMGBNISRFNDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 1
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 description 1
- IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N gibberellin A3 Chemical class C([C@@]1(O)C(=C)C[C@@]2(C1)[C@H]1C(O)=O)C[C@H]2[C@]2(C=C[C@@H]3O)[C@H]1[C@]3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 239000003673 groundwater Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 231100000783 metal toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000009329 organic farming Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 230000002351 pectolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229930195732 phytohormone Natural products 0.000 description 1
- 230000000885 phytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005648 plant growth regulator Substances 0.000 description 1
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 description 1
- 239000010908 plant waste Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229930001119 polyketide Natural products 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- PTLRDCMBXHILCL-UHFFFAOYSA-M sodium arsenite Chemical compound [Na+].[O-][As]=O PTLRDCMBXHILCL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004158 soil respiration Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000010421 standard material Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009044 synergistic interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 108010078552 syringomycin Proteins 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/27—Pseudomonas
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/22—Bacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
- C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
- C05F11/00—Other organic fertilisers
- C05F11/08—Organic fertilisers containing added bacterial cultures, mycelia or the like
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Soil Conditioners And Soil-Stabilizing Materials (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
DZIEDZINA TECHNIKI
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja zawierająca 8 szczepów saprofitycznych bakterii glebowych reprezentujących rodzaje: Arthrobacter, Bacillus, Citrobacter, Paenibacillus, Pseudomonas, która zawiera wyizolowane szczepy Arthrobacter sp. szczep 1.4, Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Citrobacter sp. szczep 6A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W) oraz biopreparat zawierający taką kompozycję, jak i sposób ich wytwarzania. Przedmiotem wynalazku są również sposoby zwalczania patogenów roślin w glebie, użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory gleby, biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin oraz zastosowania do zwalczania patogenów roślin w glebie, do użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory gleby, do biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin wykorzystujące kompozycję i biopreparat zawierające to 8 współdziałających ze sobą szczepów.
STAN TECHNIKI
Patogeny roślinne, korzystające z produktów fotosyntezy wytwarzanych przez roślinę, stanowią jeden z czynników biotycznych wywołujących ich choroby. Działanie patogenów stanowi ważny, niepożądany aspekt podczas produkcji roślin spożywczych. Skutki ich aktywności wahają się od łagodnych objawów po zniszczenia na całych obszarach objętych uprawą. Takie rozległe choroby roślin mogą pogłębiać deficyt żywności na świecie. Sprawę z patogenami roślin utrudnia fakt, iż są bardzo trudne do kontrolowania. Zachodzi ich częsta transmisja z chorych roślin na zdrowe, przez co z upływem czasu poszerzają swój zasięg. Przykładem roślinnego patogenu jest Pseudomonas syringae Gram-ujemna bakteria, usytuowana na pierwszym miejscu listy najgroźniejszych bakteryjnych patogenów roślinnych. Opisano już ponad 50 szczepów tego gatunku, z których każdy jest patogenem określonego gatunku rośliny. Ten szeroki zakres obejmuje duże, jak i drobne rośliny uprawne. P. syringae rozwija się na zniszczonych tkankach roślinnych, uszkodzonych mechanicznie lub poprzez niewielkie rany wytworzone przez żerujące na roślinach szkodniki. Mechanizmy patogenności można podzielić na: zdolność do inwazji rośliny wykorzystując wici i pilli, zdolność do przezwyciężania odporności gospodarza oraz zdolność tworzenia biofilmu. P. syringae posiada szereg czynników wirulencji zwanych białkami efektorowymi, które wydziela do komórek roślinnych z udziałem systemu sekrecji typu III. Białka te manipulują odpowiedzią immunologiczną gospodarza w celu ułatwienia infekcji. Działanie P. syringae może polegać także na uwalnianiu toksyn i enzymów degradujących ściany komórkowe. Wydzielane fitotoksyny np. koronatyna, syringomycyna, syringopeptyna, t abtoina, działają jako determinanty wirulencji pomiędzy rośliną a bakterią (Bender, 1999). Konkretny szczep Pseudomonas syringae powoduje u poszczególnych roślin choroby zwane bakteriozami. P. syringae jest patogenem m.in. pomidora, grochu, ogórka, soi, ka lafiora, fasoli i drzew owocowych (Martin-Sanz, 2013; Rio-Alvarezh, 2013).
Kolejnym przykładem patogenu roślinnego jest Pectobacterium carotovorum, bakteria znajdująca się na 10 miejscu listy rankingowej „Molecular Plant Pathology”. Należy do rodziny Enterobacteriaceae (poprzednio zaliczany do rodzaju Erwinia). Gatunek Pectobacterium carotovorum jest geograficznie szeroko rozpowszechniony. Powoduje chorobę zwaną mokrą zgnilizną bakteryjną wśród wielu roślin spożywczych, co powoduje znaczne straty ekonomiczne podczas ich uprawy. Jest patogenem marchewki (stąd nazwa carotovora - „marchewka”), ziemniaka, pomidora, zielonych warzyw liściastych, dyni, cebuli i innych. Występuje na powierzchniach roślinnych oraz w glebie i może infekować rośliny przez uszkodzone miejsca lub naturalnie występujące w roślinie otwory. Po udanej inwazji rośliny, znajduje się w przestrzeni międzykomórkowej lub w tkance naczyniowej, gdzie produkuje enzymy pektynolityczne. Wytwarzane enzymy hydrolizują pektynę, która stanowi jeden z podstawowych polimerów budujących ścianę komórkową roślin, przez co powodują degradację ściany (Lee, 2013). Powyższa cecha stanowi czynnik warunkujący patogeniczność Pectobacterium carotovorum.
W celu zwalczenia powstających z udziałem patogenów strat stosuje się chemiczne środki ochrony roślin. Użycie takich środków, które zwane są wspólnie pestycydami, rozpoczęło się pod koniec XIX wieku. Jako środki zwalczające fitopatogeny stosowane są bakteriocydy. Niestety ich aktywność nie ogranicza się jedynie do zwalczania bakterii patogennych dla rośliny, ale wpływa również na liczebność i różnorodność mikroorganizmów glebowych, które stanowią ważny składnik środowiska glebowego i pełnią bardzo ważne funkcje w glebie. Mikroorganizmy, a zwłaszcza bakterie odgrywają kluczową rolę w rozkładzie materii organicznej, podczas obiegu pierwiastków w ś rodowisku naturalnym
PL 234 499 B1 i zachowaniu żyzności gleby. Mikroorganizmy poprawiają ogólny stan roślin. Istnieją populacje bakterii, które żyją wokół korzeni roślin, dostarczając im substancje biogenne. Bakterie żyjące w glebie chronią także roślinę przed patogenami (Jastrzębska, 2010). Zmiana w działalności mikroorganizmów glebowych spowodowana stosowaniem pestycydów prowadzi ostatecznie do zakłóceń ekosystemu glebowego i utraty żyzności gleby. Przeprowadzono liczne badania, które podkreślają te niekorzystne oddziaływania pestycydów na bakterie glebowe i respirację gleb (Lo, 2010). Najbardziej niekorzystnie działają pestycydy: bakteriocydy - bakteriobójcze, fungicydy - grzybobójcze oraz herbicydy - chwastobójcze. Szacunki przedstawione przez Grupę ClECH - lidera polskiego rynku chemicznego - wskazują na wahanie się wartości zużycia środków ochrony roślin w Polsce w przedziale 70-90 tys. ton rocznie.
Warstwa gleby bezpośrednio otaczająca system korzeniowy jest określana jako ryzosfera, a termin „ryzobakterie” oznacza grupę bakterii zdolnych do kolonizacji środowiska korzeniowego (Ahemad, 2014). Współpraca mikrobiologiczna w ryzosferze ma kluczowe znaczenie dla trwałości i wzrostu roślin. Rośliny wytwarzają szeroki wachlarz związków organicznych, w tym cukry, kwasy organiczne i witaminy, które mogą być wykorzystywane jako składniki odżywcze lub sygnały przez populacje drobnoustrojów. Natomiast bakterie w glebie ułatwiają roślinom dostępność składników odżywczych i zapewniają dodatkowe korzyści, takie jak bardziej efektywne pobieranie minerałów i wody, odporność na choroby, ochrona przed toksycznością metali ciężkich oraz ulepszona struktura gleby. Mikroorganizmy promujące wzrost roślin tzw. PGPM (ang. Plant Growth Promoting Microorganisms) definiuje się jako bakterie i grzyby działające stymulująco na wzrost roślin i ochronę roślin (Sripontan, 2014). Najbardziej rozpowszechnioną grupą PGPM są ryzobakterie promujące wzrost roślin tzw. PGPR (ang. Plant Growth Promoting Rhizobacteria), kolonizujące strefę korzeniową gleby lub jako endofity bytujące w tkankach powierzchniowych korzeni (Compant, 2005). Mikroorganizmy te wpływają na rozwój roślin w sposób bezpośredni lub pośredni. Mechanizmy bezpośrednie to udostępnienie roślinie składników pokarmowych, synteza substancji biologicznie czynnych - regulatorów wzrostu roślin oraz obniżenie poziomu etylenu, który niekorzystnie wpływa na ukorzenienie roślin. Bakterie mogą działać również w sposób pośredni przez eliminację fitopatogenów wpływających niekorzystnie na rozwój rośliny, bądź eliminację związków hamujących wzrost roślin. PGPR zwalczają patogeny roślin, konkurując o niszę ekologiczną i składniki mineralne. Mogą także produkować antybiotyki, metabolity/bakteriocyny, bądź enzymy lizujące ścianę komórkową fitopatogenów (Glick, 2012; Vejan, 2016).
Szeroka gama bakterii bytujących w ryzosferze może wytwarzać hormony roślinne jak auksyny, cytokininy i gibereliny, czyli substancje regulujące wzrost i rozwój roślin. Efekt działania auksyn jest zależny od ich stężenia i polega m.in. na: stymulacji podziału i wydłużanie komórek roślinnych, wydłużaniu korzenia pierwotnego, stymulacji powstawania korzeni bocznych i przybyszowych. Konsekwencją tego jest zwiększona powierzchnia jak i długość korzeni, dzięki czemu rośliny posiadają lepszy dostęp do składników odżywczych w glebie (Glick, 2012). Bakterie są w stanie poprawić przyswajanie azotu, fosforu i żelaza przez rośliny, w rezultacie wpływają stymulująco na wzrost roślin.
Mikroorganizmy są jednym z najistotniejszych czynników decydujących o żyzności i produktywności biologicznej gleb. Do kluczowej roli bakterii w glebie można zaliczyć:
- obieg pierwiastków w przyrodzie,
- rozkład materii organicznej, w tym wielu związków toksycznych,
- powstawanie próchnicy (jest niezbędna do prawidłowego wzrostu roślin, zatrzymywania wody w glebie),
- wiązanie azotu atmosferycznego (w „zdrowych” glebach bakterie są zdolne związać nawet do 500 kg azotu z 1 ha), oraz jego przemiany (amonifikacja, denitryfikacja, nitryfikacja),
- zwiększenie dostępności biopierwiastków,
- biostymulacja systemu korzeniowego poprzez wydzielanie fitohormonów,
- hamowanie rozwoju patogenów roślin (bakterie patogenne dla roślin, grzyby z rodzaju Fusarium) poprzez wydzielanie metabolitów/bakteriocyn.
W związku z negatywnymi skutkami stosowania pestycydów obecnym trendem w skali globalnej wydaje się być ograniczenie zużycia chemicznych środków ochrony roślin przez poszukiwanie bezpiecznych i ekologicznych alternatyw. Bakterie glebowe produkujące naturalne związki - bakteriocyny wydają się być bardzo dobrą alternatywą dla chemicznych środków ochrony roślin. Szczepy bakterii wytwarzające bakteriocyny mogą być skutecznie wykorzystywane w rolnictwie, zmniejszając ilość stosowanych nawozów mineralnych i środków chemicznych, takich jak środki przeciwbakteryjne czy grzybobójcze (Subramanian, 2015).
PL 234 499 B1
Bakteriocyny
Bakteriocyny to peptydy lub drobnocząsteczkowe białka, które mogą działać bakteriobójczo lub bakteriostatycznie. Wytwarzane są przez różne gatunki bakterii, zarówno Gram -dodatnie, jak i Gram-ujemne oraz archeowce (Riley, 2002). Mikroorganizmy produkujące bakteriocyny posiadają jednocześnie na nie oporność. Wynika to z budowy operonów bakteriocyn, które są wyposażone w geny kodujące aktywne białko zapewniające producentowi niewrażliwość na produkowane związki. Na operon bakteriocyn składają się także geny odpowiedzialne za transport bakteriocyny z komórki i niekiedy geny kodujące enzymy do modyfikacji potranslacyjnej bakteriocyn.
Bakteriocyny mają małą masę cząsteczkową, rzadko jest to ponad 10 kDa (Zacharów, 2012). Produkowane są przez bakterie w celu zwalczania innych drobnoustrojów, które mogą należeć do tego samego lub pokrewnego gatunku co producent (Cotter, 2005). Wynika z tego, że mają wąski zakres działania, jednakże niektóre z nich wykazują znacznie rozszerzone spektrum, w tym wobec organizmów patogennych. Jako peptydy są generalnie odporne na degradację chemiczną i termiczną. Bakteriocyny to bardzo zróżnicowana grupa polipeptydów. Różnice pomiędzy nimi dotyczą właściwości biochemicznych, stabilności termicznej, masy molekularnej, mechanizmów działania, mechanizmów sekrecji pozakomórkowej czy nawet sposobu ochrony organizmu producenckiego przed destrukcyjnym działaniem bakteriocyny (Hammami, 2013). Bakteriocyny są zwykle wytwarzane w warunkach stresowych, co powoduje szybkie wyeliminowanie sąsiednich komórek, które nie są odporne na ich działanie (Eunjung, 2010). Istnieją badania, które wskazują, że bakteriocyny przyczyniają się do wzrostu dynamiki konkurencji pomiędzy różnymi szczepami bakterii, przez co znacznie wpływają na utrzymanie różnorodności mikrobiologicznej (Riley, 2002).
ISTOTA WYNALAZKU
W świetle opisanego stanu techniki celem niniejszego wynalazku jest przezwyciężenie wskazanych niedogodności i dostarczenie kompozycji zawierającej wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych: Arthrobacter sp. szczep 1.4, Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Citrobacter sp. szczep 6A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W), która może być wykorzystana do użyźniania gleby oraz do zwalczania patogenów roślin w glebie i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory gleby, zwłaszcza po intensywnym stosowaniu chemicznych środków ochrony roślin, pestycydów, która biostymuluje rozwój i wzrost roślin i sposób jej zastosowania.
Przedmiotem wynalazku jest więc kompozycja zawierająca wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych: Arthrobacter sp. szczep 1.4, Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Citrobacter sp. szczep 6A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W) i zdeponowana 19 grudnia 2017 roku pod numerem depozytu B/00148 w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów PCM, Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN, Wrocław, Polska.
Wynalazek dotyczy również biopreparatu zawierającego kompozycję szczepów według wynalazku. Biopreparat ponadto korzystnie zawiera podłoże płynne mineralne uzupełnione glukozą jako jedynym źródłem węgla lub podłoże stałe mineralne uzupełnione glukozą jako jedynym źródłem węgla.
Biopreparat korzystnie zawiera co najmniej 105 komórek bakterii w ml podłoża, korzystniej co najmniej 106 komórek bakterii w ml podłoża, korzystniej cfu każdego szczepu wynosi co najmniej 106 w ml podłoża.
Korzystnie jest, jeśli w biopreparacie szczepy Arthrobacter sp. szczep 1.4, Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Citrobacter sp. szczep 6A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W) są do siebie w zasadniczo równym stosunku ilościowym.
Korzystny biopreparat jest w postaci płynnej lub liofilizatu lub osadzony na nośniku.
Wynalazek dotyczy również sposobu wytwarzania kompozycji zawierającej wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych według wynalazku i/lub biopreparatu według wynalazku, w którym prowadzi się hodowlę szczepów Arthrobacter sp. szczep 1.4, Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Citrobacter sp. szczep 6A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W) zdeponowanych jako B/00148
a) jednocześnie na pożywce zapewniającej wzrost każdego ze szczepów, lub
b) każdy ze szczepów hoduje się osobno na odpowiedniej pożywce umożliwiającej jego wzrost, i uzyskane hodowle miesza się w celu uzyskania kompozycji zawierającej wyizolowane
PL 234 499 B1 szczepy saprofitycznych bakterii glebowych i/lub biopreparatu, korzystnie każdy szczep miesza się ze sobą w zasadniczo równych proporcjach ilościowych, przy czym korzystnie hodowlę w a) i/lub b) prowadzi się w temperaturze w zakresie 20-25°C.
W korzystnym sposobie wytwarzania kompozycji i/lub biopreparatu pożywką stosowaną w etapie hodowli a) i/lub b) jest podłoże płynne mineralne uzupełnione glukozą jako jedynym źródłem węgla lub podłoże stałe mineralne uzupełnione glukozą jako jedynym źródłem węgla.
Wynalazek dotyczy również sposobu zwalczania patogenów roślin w glebie obejmującego etap wprowadzania do gruntu kompozycji zawierającej wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych według wynalazku i/lub biopreparatu według wynalazku, i/lub kompozycji, i/lub biopreparatu wytworzonych sposobem ich wytwarzania według wynalazku, przy czym korzystnie wprowadzanie do gruntu następuje poprzez zraszanie.
Sposób zwalczania patogenów roślin w glebie jest korzystny, gdy patogen jest wybrany z Pseudomonas syringae, Pectobacterium carotovorum, przy czym korzystniej Pseudomonas syringae jest patogenem pomidora, grochu, ogórka, soi, kalafiora, fasoli i drzew owocowych, ziemniaka, marchwi, papryki, i/lub korzystniej Pectobacterium carotovorum jest patogenem marchewki, ziemniaka, pomidora, papryki, zielonych warzyw liściastych, dyni, cebuli.
Korzystnie w sposobie zwalczania patogenów roślin w glebie jest on prowadzony ex situ lub odbywa się in situ.
W korzystnym sposobie zwalczania patogenów roślin w glebie, glebę zrasza się biopreparatem w postaci preparatu rozcieńczonego w ilości 10 litrów na 1 ha powierzchni gruntu i/lub biopreparat wprowadzany jest do gruntu w stosunku objętościowym biopreparat : gleba w przedziale od 1 : 10 do 1 : 30, przy czym preparat wyjściowy stosowany do zraszania i/lub wprowadzania do gruntu korzystnie rozcieńcza się w stosunku 1 : 50 do 1 : 100.
Równie korzystnie sposób zwalczania patogenów roślin w glebie ponadto obejmuje etapy - natlenienia mechanicznego gleby i nawilżania gleby dla utrzymania odpowiedniego stopnia wilgotności gleby.
Wynalazek dotyczy również sposobu użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory gleby obejmującego etap wprowadzania do gruntu kompozycji zawierającej wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych według wynalazku i/lub biopreparatu według wynalazku i/lub wytworzonych zgodnie ze sposobem wytwarzania według wynalazku, przy czym korzystnie wprowadzanie do gruntu następuje poprzez zraszanie, korzystnie po intensywnym stosowaniu chemicznych środków ochrony roślin.
Korzystnie sposób użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory gleby odbywa się ex situ lub odbywa się in situ.
W korzystnym sposobie użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory gleby biopreparat w postaci preparatu rozcieńczonego wprowadzany jest do gruntu w ilości 10 litrów na 1 ha powierzchni gruntu i/lub w stosunku objętościowym biopreparat : gleba w przedziale od 1 : 10 do 1 : 30, przy czym preparat wyjściowy stosowany do zraszania i/lub wprowadzania do gruntu korzystnie rozcieńcza się w stosunku 1 : 50 do 1 : 100.
Wynalazek dotyczy również sposobu biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin obejmującego eta p wprowadzania do gruntu kompozycji zawierającej wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych według wynalazku i/lub biopreparatu według wynalazku, i/lub wytworzonych zgodnie ze sposobem wytwarzania według wynalazku, przy czym korzystnie wprowadzanie do gruntu następuje poprzez zraszanie.
Korzystny sposób biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin odbywa się ex situ lub odbywa się in situ.
W korzystnym przykładzie sposobu biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin biopreparat w postaci preparatu rozcieńczonego wprowadzany jest do gruntu w ilości 10 litrów na 1 ha powierzchni gruntu i/lub w stosunku objętościowym biopreparat : gleba w przedziale od 1 : 10 do 1 : 30, przy czym preparat wyjściowy stosowany do zraszania i/lub wprowadzania do gruntu korzystnie rozcieńcza się w stosunku 1 : 50 do 1 : 100.
Sposób biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin korzystnie jest prowadzony dla roślin wybranych z pomidora, grochu, ogórka, soi, kalafiora, fasoli i drzew owocowych, marchewki, ziemniaka, pomidora, zielonych warzyw liściastych, dyni, cebuli, papryki.
Wynalazek dotyczy również zastosowania kompozycji zawierającej wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych według wynalazku i/lub biopreparatu według wynalazku, i/lub wytworzonych zgodnie ze sposobem wytwarzania według wynalazku do zwalczania patogenów roślin w glebie.
PL 234 499 B1
W korzystnym przykładzie zastosowania do zwalczania patogenów roślin w glebie patogen jest wybrany z Pseudomonas syringae, Pectobacterium carotovorum, korzystniej Pseudomonas syringae jest patogenem pomidora, grochu, ogórka, soi, kalafiora, fasoli i drzew owocowych, ziemniaka, marchwi, papryki, i/lub korzystniej Pectobacterium carotovorum jest patogenem marchewki ziemniaka, pomidora, papryki, zielonych warzyw liściastych, dyni, cebuli.
Wynalazek dotyczy również zastosowania kompozycji zawierającej wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych według wynalazku i/lub biopreparatu według wynalazku, i/lub wytworzonych zgodnie ze sposobem wytwarzania według wynalazku do użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory gleby, korzystnie po intensywnym stosowaniu chemicznych środków ochrony roślin.
Wynalazek dotyczy również zastosowania kompozycji zawierającej wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych według wynalazku i/lub biopreparatu według wynalazku, i/lub wytworzonych zgodnie ze sposobem wytwarzania według wynalazku do biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin, przy czym w takim zastosowaniu rośliny są korzystnie wybrane z pomidora, grochu, ogórka, soi, kalafiora, fasoli i drzew owocowych, marchewki, ziemniaka, papryki, zielonych warzyw liściastych, dyni, cebuli.
Przedmiotowe rozwiązanie stanowi naturalną metodę walki z fitopatogenami roślin: Pseudomonas syringae oraz Pectobacterium carotovorum obecnymi w glebie poprzez działanie bakteriobójcze. Za aktywność bakteriobójczą odpowiedzialne są bakteriocyny wydzielane przez szczepy wchodzące w skład biopreparatu: Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Citrobacter sp. szczep 6A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W). Te same szczepy potrafią degradować materię organiczną do łatwo przyswajalnych związków przez rośliny będących źródłem np. C, N i P oraz są niewrażliwe na metale ciężkie z wyjątkiem kadmu (Cd). Arthrobacter sp. szczep 1.4 zdolny jest do wiązania azotu atmosferycznego i wzbogacania tym samym gleby w azot; do redukcji toksycznego sześciowartościowego chromu Cr(VI) oraz jest niewrażliwy na inne metale ciężkie - Nikiel Ni(ll) oraz miedź Cu(ll), a także do degradacji pestycydów. Szczepy z rodzaju Bacillus i Pseudomonas wchodzące w skład kompozycji zdeponowanej jako B/00148 posiadają właściwości, które są cechą rodzajową: amylolityczne (rozkład skrobi), proteolityczne (rozkład białek), denitryfikacyjne (redukcja azotanów do azotu) oraz amonifikacyjne (przemiana azotu zawartego w związkach organicznych). Kompozycja zdeponowana jako B/00148 jak i wytworzony na jej bazie biopreparat według wynalazku jednocześnie użyźniania glebę i przywraca naturalną równowagę biologiczną mikroflory gleby, zwłaszcza po intensywnym stosowaniu chemicznych środków ochrony roślin takich jak pestycydy. Poprzez kompleksowe działanie kompozycja zdeponowana jako B/00148 i oparty na niej biopreparat biostymuluje rozwój i wzrost roślin.
Wybrane szczepy bakterii wchodzące w skład kompozycji zdeponowanej jako B/00148 zostały wyizolowane z gleb, nie są patogenne i nie zawierają modyfikacji genetycznych. Procesy, które są przeprowadzane przez te szczepy zachodzą naturalnie w środowisku glebowym. Opracowany wyselekcjonowany skład kompozycji i biopreparatu daje możliwość szybkiego namnożenia odpowiedniej ilości preparatu. Efekt działania bakteriobójczego widoczny jest już po okresie 14 dni od zadania kompozycji i/lub biopreparatu do gleby. Dozowanie i dawkowanie zalecane jest zależne od rodzaju i kondycji gleby. Jest oczywiste, że im gleba bardziej zniszczona w wyniku stosowania chemicznych środków ochrony roślin tym więcej preparatu warto zastosować. Przykładowo zakresy stosowanego preparatu dla gleb mało zniszczonych mogą być od 0,2-2 L/ha, korzystniej około 1 L/ha, a przy glebach zniszczonych od około 5 do około 20 L/ha, korzystniej około 10 L/ha.
Przedmiotem wynalazku jest też sposób stosowania biopreparatu w glebie, polegający na tym, iż wyselekcjonowane mikroorganizmy glebowe w postaci kompozycji biopreparatu według wynalazku wprowadza się do gruntu, glebę zaś natlenia się mechanicznie i utrzymuje się odpowiedni stopień jej wilgotności, przez co eliminowane są bakterie patogenne dla roślin: Pseudomonas syringae oraz Pectobacterium carotovorum z gleby.
Użycie kompozycji i biopreparatu będących przedmiotem wynalazku jest metodą całkowicie naturalną, szczególnie zalecaną do wykorzystania w rolnictwie ekologicznym, która nie wprowadza żadnych syntetycznych produktów do środowiska. Fakt, iż kompozycja biopreparatu według wynalazku składa się z wyselekcjonowanych i odpowiednio zestawionych, wzajemnie nie zaburzających swojego rozwoju i wzrostu organizmów autochtonicznych skraca czas potrzebny na namnożenie i aktywność metaboliczną bakterii, co więcej metoda opiera się na procesach naturalnie zachodzących w środowisku, które są efektywne i bardziej ekonomiczne niż przykładowo metody chemiczne.
PL 234 499 Β1
KRÓTKI OPIS FIGUR RYSUNKU
Dla lepszego zrozumienia wynalazku, został on zilustrowany w przykładach wykonania oraz na załączonych figurach rysunku, na których:
fig. 1 przedstawia przykładową wizualizację stref zahamowania wzrostu fitopatogenów w teście drabinkowym.
PRZYKŁADY
Poniższe przykłady umieszczono jedynie w celu zilustrowania wynalazku oraz wyjaśnienia poszczególnych jego aspektów, a nie w celu jego ograniczenia i nie powinny być utożsamiane z całym jego zakresem, który zdefiniowano w załączonych zastrzeżeniach. W poniższych przykładach, jeśli nie wskazano inaczej, stosowano standardowe materiały i metody stosowane w dziedzinie lub postępowano zgodnie z zaleceniami producentów dla określonych materiałów i metod.
Przykład 1
Wybór składu kompozycji biopreparatu
Wyizolowano 563 szczepy bakterii glebowych z różnych gleb uprawnych z gospodarstw ekologicznych oraz stosujących chemiczne środki ochrony roślin z województwa mazowieckiego. Przeprowadzono ich identyfikację do rodzaju/gatunku z wykorzystaniem amplifikacji PCR genu dla 16S rRNA, sekwencjonowania i analiz bioinformatycznych. Z dostępnej puli szczepów do dalszych badań wybrano bakterie nie będące patogenami ludzi, zwierząt i roślin. Dalsze etapy badań polegały na określeniu właściwości metabolicznych wyselekcjonowanych szczepów bakterii.
Celem nadrzędnym było znalezienie bakterii glebowych zdolnych do efektywnego działania bakteriostatycznego/bakteriobójczego wobec dwóch patogenów roślin: Pseudomonas syringae oraz Pectobacterium carotovorum.
Celami pośrednimi były: wyselekcjonowanie bakterii o różnych cennych właściwościach metabolicznych dla funkcjonowania bioróżnorodności i właściwej mikroflory gleby (zdolność wiązania azotu; przeprowadzania procesu denitryfikacji, nitryfikacji i amonifikacji; posiadania właściwości proteolitycznych i celulolitycznych - zdolność do rozkładania szczątek zwierzęcych i roślinnych) oraz dla prawidłowego rozwoju i wzrostu plonów rolnych (udostępnianie łatwo przyswajanych związków mineralnych dla roślin, biopierwiastków: azotu, węgla, potasu i fosforu). Szczepy zostały pogrupowane w określone kompozycje, tak aby wykazywały działanie synergistyczne. Z przebadanych, najbardziej efektywna kompozycja wybranych wyselekcjonowanych szczepów bakteryjnych jest przedmiotem niniejszego zgłoszenia.
Ze względu na swoje uzupełniające się właściwości i synergistyczne współdziałanie zostały wybrane następujące wyizolowane mikroorganizmy wchodzące w skład kompozycji biopreparatu (tabela 1).
Tabela 1
Oznaczenie wybranych szczepów wchodzących w skład kompozycji/biopreparatu zdeponowanego jako B/00148
| Nr | Oznaczenie szczepu | Rodzaj bakterii |
| 1 | 1.4 | Arthrobacter sp. |
| 2 | 202 B | Bacillus sp. |
| 3 | 233 | Bacillus sp. |
| 4 | 3O7A | Bacillus sp. |
| 5 | 6A | Citrobacter sp. |
| 6 | 45 | Paenibacillus sp. |
| 7 | 23 (W) | Pseudomonas sp. |
| 8 | 60 (W) | Pseudomonas sp. |
Przykład 2
Określenie wzajemnego antagonistycznego wpływu szczepów stanowiących kompozycję biopreparatu zdeponowanego jako B/00148
Aby określić, czy poszczególne szczepy nie wywierają na siebie wpływu o charakterze antagonistycznym (hamowanie wzrostu jednych szczepów przez drugie), za pomocą jałowej ezy bakterie posiano rysą na szalki Petriego z podłożem Davisa przygotowane z następujących składników: 150 ml wody destylowanej lub 150 ml agaroidu (woda dest. + agar) (zależnie od konsystencji podłoża); 40 ml soli Davisa; 4 ml 20% glukozy. Wykonywano posiew określonych szczepów bakterii w odległości około 2 mm od siebie w ustalonych konfiguracjach. Stworzone układy miały na celu sprawdzenie, czy każdy ze szczepów jest w stanie rosnąć w bezpośrednim sąsiedztwie pozostałych szczepów. Po 24 h inkubacji
PL 234 499 B1 w temperaturze 22°C wykonano odczyt. Każdy z przebadanych szczepów był w stanie rosnąć w bezpośrednim sąsiedztwie pozostałych. Na tej podstawie można wnioskować, że pomiędzy badanymi mikroorganizmami wchodzącymi w skład kompozycji zdeponowanej jako B/00148 nie zachodzi oddziaływanie o charakterze antagonistycznym, tzn. żaden z badanych szczepów nie zmienia środowiska w taki sposób, by hamować wzrost innych i prowadzić do bakteriostazy.
Przykład 3
Określenie właściwości metabolicznych szczepów wchodzących w skład kompozycji/biopreparatu zdeponowanego jako B/00148 (stosowano standardowe metody badawcze)
A. Degradacja materii organicznej pochodzenia roślinnego
Badanie zdolności do rozkładu biomasy ligniono-celulozowej związane z wytwarzaniem enzymów celulolitycznych przeprowadza się z wykorzystaniem szczątków roślinnych np. resztki pożniwne lub fragmenty biomasy roślinne używane do kompostowania. Wynikiem dodatnim zdolności do biodegradacji biomasy ligniono-celulozowej jest przetworzenie tej biomasy na humus oraz obecność glukozy. Powstawanie humusu oceniane jest po wyglądzie, a glukoza (C6H12O6) oznaczana jest kolorymetrycznie z oksydazą glukozy wg standardowej metody z wykorzystaniem zestawu diagnostycznego (Lquick Cor-GLUCOSE) po 14 dniach inkubacji w temperaturze 22°C. Wykazano, że szczepy wchodzące w skład biopreparatu: Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W) potrafią degradować materię organiczną do łatwo przyswajalnych związków przez rośliny będących źródłem np. C, N i P.
B. Wiązanie azotu atmosferycznego
Wiązanie azotu atmosferycznego związane jest z redukcja azotu N2 do amoniaku NH3. Badanie przeprowadza się na podłożu płynnym nie zawierającym źródła azotu. Wynikiem dodatnim jest a) zwiększenie gęstości hodowli po 24 h inkubacji w temperaturze 22°C mierzone za pomocą spektrofotometru oraz charakterystyczny zapach amoniaku i alkalizacja podłoża mierzona za pomocą wskaźnika pH. Wykazano, że szczep Arthrobacter sp 1.4 jest zdolny do wiązania azotu atmosferycznego.
C. Właściwości proteolityczne, amylolityczne, denitryfikacyjne oraz amonifikacyjne
Właściwości proteolityczne badano z wykorzystaniem stałych podłoży: agar odżywczy z dodatkiem 4% odtłuszczonego mleka. Do badania właściwości amylolitycznych zastosowano stałe podłoże: agar odżywczy z dodatkiem 1% skrobi. Na podłoże każdy ze szczepów z rodzaju Bacillus i Pseudomonas został wysiany w postaci posiewu rysą. Po 24 h inkubacji w temperaturze 22°C wykonano odczyt. Zdolność do rozkładu białek, przejawiająca się pojawieniem się strefy przejaśnienia pożywki wokół linii wzrostu bakterii wykazały szczepy z rodzaju Bacillus i Pseudomonas wchodzące w skład kompozycji zdeponowanej jako B/00148. Właściwości amylolityczne, gdzie wynikiem dodatnim było brak fioletowego zabarwienia wokół linii wzrostu bakterii po zalaniu szalek płynem Lugola, wykazały szczepy z rodzaju Bacillus i Pseudomonas wchodzące w skład preparatu, tj.: Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W).
Właściwości proteolityczne badano z wykorzystaniem podłoża płynnego: bulion odżywczy z 0,1% KNO3. Podłoże umieszczone jest w długich szklanych probówkach, w których znajduje się również rurka Durhama. O zdolności szczepu do denitryfikacji świadczy gromadzenie się gazu (azotu) w rurce Durhama oraz alkalizacja podłoża oznaczana za pomocą wskaźnika pH po 24 h inkubacji w temperaturze 22°C. Zdolność do przeprowadzania procesu denitryfikacji (redukcja azotanów do azotu) wykazały szczepy z rodzaju Bacillus i Pseudomonas wchodzące w skład biopreparatu, tj.: Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W).
Właściwości amonifikacyjne, czyli proces przemiany azotu zawartego w związkach organicznych pochodzenia roślinnego lub zwierzęcego do amoniaku i jonów amonowych (NH4+) przeprowadzano z wykorzystaniem podłoża płynnego: bulion odżywczy z dodatkiem 4% odtłuszczonego mleka lub mocznika). Obecność amoniaku i jonów amonowych wykrywa się po charakterystycznym zapachu oraz zalkalizowaniu podłoża. Dodatek do podłoża czerwieni fenolowej zmienia zabarwienie podłoża z żółtego na czerwone, co świadczy o pH alkalicznym. Właściwości amonifikacyjne wykazały szczepy z rodzaju Bacillus i Pseudomonas wchodzące w skład preparatu, tj.: Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W).
Przykład 4
Określenie wrażliwości szczepów stanowiących kompozycję na metale ciężkie
W badaniach wykorzystywano stężenia metali ciężkich w zakresie 0,2-30 mM. W tym celu, bezpośrednio przed zastosowaniem, podłoże płynne (bulion odżywczy) uzupełniano odpowiednią objętością
PL 234 499 Β1 stężonego roztworu wyjściowego do uzyskania końcowego stężenia podanego w tabeli 2 dla poszczególnych metali. Stosowano NaAsC>2 dla As(lll), NiCl2x6H2O dla Ni(ll), C^foO? dla Cr(VI), ZnSO4x7H2O dla Zn(ll), CdSO4x8H2O dla Cd(ll), CuSO4 dla Cu(ll).
Tabela 2
Zakres stężeń roztworów soli metali w bulionie odżywczym (BO)
| As (III), Cu(ll), Cr (VI), Ni, Zn | 2 mM | 4 mM | 8 mM | 6 mM | 8 mM | 10 mM | 12 mM | 14 mM | 16 mM | 18 mM | 20 mM | 30 mM |
| Cd | 0,2 mM | 0,4 mM | 0,8 mM | 0,6 mM | 0,8 mM | 1.0 mM | 1.2 mM | 1,4 mM | 1,6 mM | 1,8 mM | 2,0 mM | 3,0 mM |
Wrażliwość wyizolowanych szczepów na metale ciężkie badano poprzez wyznaczenie wartości MIC. W tym celu wykorzystywano 96-dołkowe płytki titracyjne (ROTH). Do każdego z dołków pipetowano po 150 μΙ roztworu soli metalu w BO, tak aby stworzyć szereg o wzrastającym stężeniu każdego metalu (gradient), po czym zaszczepiano je 150 μΙ inokulum uzyskanym z hodowli poszczególnych szczepów o gęstości 0,5 McFarlanda. W każdym z 8 rzędów (12 dołków) znajdowało się inne stężenie danego metalu zgodnie z tabelą 2, przy czym ostatni rząd mikroprobówek stanowił kontrolę negatywną (samo podłoże BO z solą fizjologiczną, bądź BO ze stokiem metalu bez inokulum).
Płytki nakrywano plastikowym wieczkiem i dodatkowo zawijano w folię celofanową w celu zabezpieczenia ich przed parowaniem. Całość inkubowano w wytrząsarce (80 obr./min) w temperaturze 22°C. Po 24 i 48 godz. inkubacji mierzono gęstość optyczną hodowli (ODeoo) w każdym z 96 dołków. Do pomiarów wykorzystywano spektrofotometr „Sunrise” (TECAN).
Wyznaczono wartości minimalnego stężenia metalu hamującego wzrost bakterii (MIC).
Za wartość MIC przyjęto najniższe stężenie, przy którym nie obserwowano wzrostu bakterii. Wyniki przedstawiono w tabeli 3.
Tabela 3
Wartości MIC metali ciężkich dla badanych szczepów
| Nr | Oznaczenie szczepu | Wartość graniczna MIC [mM/L], 24h(48h) | |||||
| Cu(ll) | Ni(ll) | Zn(ll) | Cd(ll) | As (III) | Cr(VI) | ||
| 1 | 1.4 | 2,5 | 2,5 | 2 | 1 | 0,6 | 0,5 |
| 2 | 202B | 5 | 3 | 1,5 | 0,5 | 4 | 0,5 |
| 3 | 233 | 5 | 3 | 1,5 | 0,5 | 4 | 0,5 |
| 4 | 307A | 4 | 3 | 1,5 | 0,5 | 3(4) | 0,5 |
| 5 | 6A | 5 | 3 | 1,5 | 0,5 | 4(5) | 0,5 |
| 6 | 45 | 5 | 3 | 1,5 | 0,5 | 4(5) | 0,5 |
| 7 | 23 (W) | 5 | 3 | 1,5 | 0,5 | 4 | 0,5 |
| 8 | 60 (W) | 5 | 3 | 1,5 | 0,5 | 3(4) | 0,5 |
Tabela 4
Wartości MIC określone dla szczepu wzorcowego Escherichia coli, wg Spain, 2003
| Roztwory soli metali w (BO): | As (III), Cr(VI), Ni(ll), Zn(ll), Cu(ll): 1 mM, 2mM, 3mM, 4 mM, 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 10 mM, 15 mM | Metal ciężki | MIC [mM/L] |
| As(lll) | 0,5 | ||
| Cu (II) | 1 | ||
| Cd(ll): 0,1 mM; 0,2mM; 0,3 mM; 0,4 mM; 0,5 mM, 0,7 mM; 0,8 mM, 0,9 mM, 1,0 mM, 1,5 mM | Ni (II) | 1 | |
| 'Zn (II) | 1 | ||
| Cd (II) | 0,5 | ||
| Cr (VI) | 0,2 |
PL 234 499 Β1
Otrzymane wyniki wskazują, że badane szczepy bakterii są oporne na Ni(ll), Cu(ll), Zn(ll), As(lll), średnio wrażliwe na Cr(VI) oraz wrażliwe na Cd(ll). Należy podkreślić, że w przypadku arsenu oraz chromu zastosowano formę metalu uznawaną za najbardziej toksyczną dla organizmów żywych (Aslll i CrVI) i mimo to odnotowano wysokie wartości MIC dla badanych szczepów w porównaniu z danymi literaturowymi dla szczepu wzorcowego (tabela 4) (Spain, 2003).
Przykład 5
Działanie bakteriobójcze wobec fitopatogenów: eksperyment szalkowy - test drabinkowy
Szczepy wchodzące w skład biopreparatu zdeponowanego jako B/00148, w postaci czystych kultur, zostały przebadane na zdolność do hamowania wzrostu szczepów bakterii fitopatogennych: Pseudomonas syringae oraz Pectobacterium carotovorum. Dla każdego szczepu wykonano posiew drabinkowy celem obserwacji ich aktywności bakteriostatycznej/bakteriobójczej (fig. 1). Po 24-godzinnej inkubacji w temperaturze 22°C dokonywano pierwszego odczytu, który polegał na wizualnej ocenie stref zahamowania. Szczepy badane potencjalnie wytwarzające metabolity/bakteriocyny hamowały wzrost fitopatogenów. Stopień zahamowania był oceniany w trzystopniowej skali (+, ++, +++). Strefy zahamowania obserwowano, dokonując odczytu po 48 h i 72 h. Uzyskane wyniki przedstawia tabela 5.
Tabela 5
Ocena stref zahamowania wzrostu fitopatogenów przez badane szczepy
| Numer szczepu | Rodzaj szczepu | Pseudomonas syringae | Pectobacterium carotovorum |
| 1.4 | Arthrobacter sp. | - | - |
| 202B | Bacillus sp. | +++ | 4-+4- |
| 233 | Baciilus sp. | +++ | ++ |
| 307A | Baciilus sp. | - | 4-4- |
| 6A | Citrobacter sp. | - | 4-4- |
| 45 | Paenibacilius sp. | + | + |
| 23 (W) | Pseudomonas sp. | +++ | - |
| 60 (W) | Pseudomonas sp. | ++ | - |
Strefy zahamowania definiowano w następującej skali: + = 0,1-1 mm, ++ = 1,1-2,1 mm, 2,2-3 mm, +++ = całkowite zahamowanie wzrostu, - = brak zahamowania wzrostu.
Działanie bakteriobójcze potwierdzono również stosując metodę badania aktywności supernatantów hodowlanych bakterii produkujących bakteriocyny wobec fitopatogenów - eksperyment szalkowy. Na szalki posiano Pseudomonas syringae oraz Pectobacterium carotovorum o gęstości 0,5 McFarlanda, tak aby po inkubacji 24 h w temperaturze 22°C otrzymać wzrost w postaci jednorodnej murawy. Przed inkubacją na tak przygotowane szalki nanoszono supernatanty hodowlane wszystkich ośmiu badanych szczepów bakterii (każdy oddzielnie) na ułożone symetrycznie jałowe krążki bibuły. W przypadku siedmiu badanych szczepów zaobserwowano strefę zahamowania wzrostu bakterii fitopatogennych dla roślin. Trzy z badanych szczepów hamują rozwój obu fitopatogenów, dwa hamują tylko Pectobacterium carotovorum, a inne dwa szczepy są aktywne tylko wobec Pseudomonas syringae. Wyniki przedstawia tabela 6, wyniki te są zgodne z otrzymanymi w teście drabinkowym.
Tabela 6
Ocena stref zahamowania wzrostu fitopatogenów przez badane szczepy
| Numer szczepu | Rodzaj szczepu | Pseudomonas syringae | Pectobacterium carotovorum |
| 1.4 | Arthrobacter sp. | - | - |
| 202B | Baciilus sp. | + | + |
| 233 | Bacillus sp. | 4- | + |
| 307A | Bacillus sp. | - | + |
| 6A | Citrobacter sp. | - | + |
| 45 | Paenibacilius sp. | 4- | + |
| 23 (W) | Pseudomonas sp. | + | - |
| 60 (W) | Pseudomonas sp. | 4- | - |
Strefy zahamowania definiowano w następującej skali: + = zahamowanie wzrostu, - = brak zahamowania wzrostu.
PL 234 499 Β1
Przykład 6
Działanie bakteriobójcze wobec fitopatogenów - testy wazonowe dla różnych gatunków roślin
Eksperyment wazonowy został wykonany z użyciem szczepów wchodzących w skład biopreparatu po ich uprzednim namnożeniu (hodowla nocna) w dwóch wersjach: dla każdego szczepu oraz mieszaniny wszystkich szczepów, po zmieszaniu ich w tym samym stosunku objętościowym oraz z uwzględnieniem liczby bakterii (zawiesiny wszystkich szczepów cechowały się zbliżoną gęstością optyczną mierzoną spektrofotometrycznie). Eksperyment wykonano w celu oceny aktywności pojedynczych szczepów oraz biopreparatu w naturalnym środowisku glebowym. Eksperyment prowadzono w dwóch wariantach; A. dla Pectobaterium carotovorum oraz B. dla Pseudomonas syringae. Do każdego wazonu z glebą ogrodową dodano 30 ml nocnej hodowli Pectobaterium carotovorum lub Pseudomonas syringae, po 24 godzinach do każdego wazonu dodano 30 ml kompozycji biopreparatu zdeponowanego jako B/00148 lub po 30 ml osobno każdego szczepu wchodzącego w skład kompozycji. Dodatkowo przygotowano kontrolę pozytywną - sama gleba bez dodawania żadnych bakterii (dodano 30 ml soli fizjologicznej); kontrole negatywną - gleba zaszczepiona Pectobaterium carotovorum lub Pseudomonas syringae (30 ml nocnej hodowli) oraz próbę, gdzie dodano tylko pojedyncze szczepy lub mieszaninę szczepów (biopreparat zdeponowany jako B/00148) (30 ml) bez uprzedniego dodania fitopatogenów. W sumie otrzymano 10 prób kontrolnych (kontrole) 2 warianty (A i B) dla mieszaniny szczepów oraz 16 wariantów (A i B) dla pojedynczych szczepów (tabela 7), każdy z nich powtórzono co najmniej trzykrotnie.
Tabela 7
Warianty doświadczenia w eksperymencie wazonowym
| Kontrole K | Wariant A | Wariant B |
| 1K. próba pozytywna | 1A. kontrola negatywna- gleba zaszczepiona Pectobaterium carotovorum | 1B. kontrola negatywnagleba zaszczepiona Pseudomonas syringae |
| 2K. Próba - gdzie dodano tylko biopreparat (kompozycja B/00148) | 2A. gleba zaszczepiona Pectobaterium carotovorum + po 24h dodany biopreparat (kompozycja B/00148) | 2B. gleba zaszczepiona Pseudomonas syringae + po 24h dodany biopreparat (kompozycja B/00148) |
| 3K. Próba - gdzie dodano tylko szczep 1.4 | 3A. gleba zaszczepiona Pectobaterium carotovorum + po 24h dodany szczep 1.4 | 3B. gleba zaszczepiona Pseudomonas syringae + po 24h dodany szczep 1.4 |
| 4K. Próba - gdzie dodano tylko szczep 202 B | 4A. gleba zaszczepiona Pectobaterium carotovorum + po 24h dodany szczep 202B | 4B. gleba zaszczepiona Pseudomonas syringae + po 24h dodany szczep 202B |
| 5K. Próba - gdzie dodano tylko szczep 233 | 5A. gleba zaszczepiona Pectobaterium carotovorum + po 24h dodany szczep 233 | 5B. gleba zaszczepiona Pseudomonas syringae + po 24h dodany szczep 233 |
| 6K. Próba - gdzie dodano tylko szczep 307A | 6A. gleba zaszczepiona Pectobaterium carotovorum + po 24h dodany szczep 307A | 6B. gleba zaszczepiona Pseudomonas syringae + po 24h dodany szczep 307A |
| 7K Próba - gdzie dodano tylko szczep 6A | 7A. gleba zaszczepiona Pectobaterium carotovorum + po 24h dodany szczep 6A | 7B. gleba zaszczepiona Pseudomonas syringae + po 24h dodany szczep 6A |
| 8K. Próba - gdzie dodano tylko szczep 45 | 8A. gleba zaszczepiona Pectobaterium carotovorum + po 24h dodany szczep 45 | 8B. gleba zaszczepiona Pseudomonas syringae + po 24h dodany szczep 45 |
| 9K. Próba - gdzie dodano tylko szczep 23 (W) | 9A. gleba zaszczepiona Pectobaterium carotovorum + po 24h dodany szczep 23 (W) | 9B. gleba zaszczepiona Pseudomonas syringae + po 24h dodany szczep 23 (W) |
| 10K. Próba - gdzie dodano tylko szczep 60 (W) | 10 A. gleba zaszczepiona Pectobaterium carotovorum + po 24h dodany szczep 60 (W) | 10B. gleba zaszczepiona Pseudomonas syringae + po 24h dodany szczep 60(W) |
PL 234 499 Β1
Po upływie dwóch tygodni od wprowadzenia do gleby odpowiednich zawiesin posadzono w nich odpowiednio: ziemniaki (bulwy), marchew (nasiona), pomidor, paprykę (sadzonki z rozsady). Rośliny wzrastały w odpowiedniej temperaturze z dbałością o odpowiednie nawodnienie roślin.
Ziemniak-Po okresie 6 tygodni zebrano wyniki: wzrost pędów ziemniaka zaobserwowano w przypadku Kontroli dla wszystkich prób (1-10), oraz w przypadku Wariantu A dla prób: 2, 4, 5 i 6, a w przypadku wariantu B dla prób: 2, 4, 5 i 6. W wariantach z dodatkiem tylko fitopatogenów nie zaobserwowano wzrostu wcale (wariant B1 gleba z Pseudomonas syringae) bądź na minimalnym poziomie (wariant A1 gleba z Pectobaterium carotovorum), gdzie długość pędu wynosiła tylko 3 cm. Oprócz oceny wizualnej przeprowadzono również ocenę ilościową poprzez zważenie pędów z każdego z wazonów (tabela 8). Tylko w wariantach A2 i B2 zaobserwowano wzrost pędów na porównywalnym poziomie do próby kontrolnej 1., co świadczy o wyeliminowaniu bakterii patogennych w wyniku dodania biopreparatu. W pozostałych próbach (A 3-10 oraz B 3-10), gdzie dodawane były pojedyncze szczepy bakterii, wzrost był na znacznie niższym poziomie, o czym świadczy rozrzut biomasy w zakresie 0,75-15,01 i w żadnym przypadku nie otrzymano wyniku na takim poziomie jak w wariantach A2 i B2. Dodatkowo zaobserwowano nieznaczną biostymulację wzrostu pędów ziemniaka w Kontrolach, próby 3-10 (różnica w porównaniu z kontrolą wynosiła średnio 8%), a znaczącą w próbie 2 - próba - gdzie dodano mieszaninę wszystkich szczepów wchodzących w skład biopreparatu, różnica w porównaniu z kontrolą wynosiła średnio 38%, co wskazuje na synergistyczne działanie szczepów bakterii wchodzących w skład biopreparatu. W próbach Wariant A, 1 i B, 1, gdzie nie zaobserwowano wzrostu pędów ziemniaka lub był on nieznaczny przeprowadzono badanie stanu bulw. W przypadku wariantu B, 1 (gleba z Pectobaterium carotovorum) bulwa była w 70% zgniła, a w przypadku wariantu A, 1 (gleba z Pseudomonas syringae) bulwa była całkowicie w stanie rozkładu. W każdym przypadku stwierdzono charakterystyczną dla danej bakterii i procesu rozkładu woń.
Tabela 8
Ilościowa ocena wzrostu ziemniaka w poszczególnych wazonach. Warianty doświadczenia jak w tabeli 7
| Kontrole | Biomasa (g) | Wariant A | Biomasa (g) | Wariant B | Biomasa (g) |
| 1 K_ziemniak | 19,56 | 1A_ziemniak | 0,72 | 1B_ziemniak | 0 |
| 2K ziemniak | 26,83 | 2A ziemniak | 22,21 | 2B ziemniak | 19,74 |
| 3K ziemniak | 21,15 | 3A ziemniak | 0,89 | 3B ziemniak | 2,8 |
| 4K ziemniak | 21,34 | 4A ziemniak | 14,08 | 4B ziemniak | 13,89 |
| 5K ziemniak | 21,22 | 5A ziemniak | 14,46 | 5B ziemniak | 14,21 |
| 6K ziemniak | 21,36 | 6A ziemniak | 15,01 | 6B ziemniak | 1,2 |
| 7K ziemniak | 20,67 | 7A ziemniak | 0,75 | 7B ziemniak | 2,8 |
| 8K ziemniak | 21,18 | 8A ziemniak | 13,56 | 8B ziemniak | 13,02 |
| 9K ziemniak | 20,23 | 9A ziemniak | 1,8 | 9B ziemniak | 11,7 |
| 10K ziemniak | 20,45 | 10A ziemniak | 2,1 | 10B ziemniak | 10,89 |
Marchew - Po okresie 8 tygodni od wschodu zebrano wyniki: wzrost pędów marchwi zaobserwowano w przypadku Kontroli dla wszystkich prób (1-10), oraz w przypadku Wariantu A dla prób: 2, 4, 5 i 6, a w przypadku wariantu B dla prób: 2, 4, 5 i 6. W wariantach z dodatkiem tylko fitopatogenów nie zaobserwowano wzrostu wcale (wariant A1 oraz B1; gleba z Pectobaterium carotovorum, gleba z Pseudomonas syringae, odpowiednio). Oprócz oceny wizualnej przeprowadzono również ocenę ilościową poprzez zważenie pędów z każdego z wazonów (tabela 9). Tylko w wariantach A2 i B2 zaobserwowano wzrost pędów na porównywalnym poziomie do próby kontrolnej 1., co świadczy o wyeliminowaniu bakterii patogennych w wyniku dodania biopreparatu. W pozostałych próbach (A 3-10 oraz B 3-10), gdzie dodawane były pojedyncze szczepy bakterii, wzrost był na znacznie niższym poziomie, o czym świadczy rozrzut biomasy w zakresie 1,24-13,08 i w żadnym przypadku nie otrzymano wyniku na takim poziomie jak w wariantach A2 i B2. Dodatkowo zaobserwowano nieznaczną biostymulację wzrostu pędów marchwi w Kontrolach, próby 3-10 (różnica w porównaniu z kontrolą - 1. wynosiła średnio 4%), a znaczącą w próbie 2 - próba - gdzie dodano mieszaninę wszystkich szczepów wchodzących w skład biopreparatu, różnica w porównaniu z kontrolą wynosiła 27%. Otrzymane wyniki świadczą o synergistycznym działaniu szczepów bakterii wchodzących w skład biopreparatu.
PL 234 499 Β1
Tabela 9
Ilościowa ocena wzrostu marchwi w poszczególnych wazonach. Warianty doświadczenia jak w tabeli 7
| Kontrole | Biomasa (g) | Wariant A | Biomasa (g) | Wariant B | Biomasa (g) |
| 1 K_marchew | 15,34 | 1A_marchew | 0,72 | 1 B_marchew | 0 |
| 2K marchew | 19,52 | 2A marchew | 17,46 | 2B marchew | 16,82 |
| 3K marchew | 16,78 | 3A marchew | 1,34 | 3B marchew | 2,34 |
| 4K marchew | 16, 36 | 4A marchew | 12,14 | 4B marchew | 8,23 |
| 5K marchew | 15, 82 | 5A marchew | 12,76 | 5B marchew | 9,26 |
| 6K marchew | 15, 21 | 6A marchew | 13,08 | 6B marchew | 2,28 |
| 7K marchew | 14,34 | 7A marchew | 1,25 | 7B marchew | 2,12 |
| 8K marchew | 15,32 | 8A marchew | 11,87 | 8B marchew | 11, 02 |
| 9K marchew | 16,33 | 9A marchew | 1,24 | 9B marchew | 11,30 |
| 10K marchew | 15,24 | 10A marchew | 3,18 | 10B marchew | 10,15 |
Pomidor - Po okresie 10 tygodni od posadzenia rozsady zebrano wyniki: wzrost pędów pomidora zaobserwowano w przypadku Kontroli dla wszystkich prób (1-10), oraz w przypadku Wariantu A dla prób: 2, 4, 5 i 6, a w przypadku wariantu B dla prób: 2, 4, 5 i 6. W wariantach z dodatkiem tylko fitopatogenów zaobserwowano wzrostu na niskim poziomie, a oprócz tego stwierdzono zmiany na liściach (wariant A1 oraz B1; gleba z Pectobaterium carotovorum, gleba z Pseudomonas syringae, odpowiednio). Oprócz oceny wizualnej przeprowadzono również ocenę ilościową poprzez zważenie pędów z każdego z wazonów (tabela 10). Tylko w wariantach A2 i B2 zaobserwowano wzrost pędów na porównywalnym poziomie do próby kontrolnej 1., co świadczy o wyeliminowaniu bakterii patogennych w wyniku dodania biopreparatu. W pozostałych próbach (A 3-10 oraz B 3-10), gdzie dodawane były pojedyncze szczepy bakterii, wzrost była na niższym poziomie, o czym świadczy rozrzut biomasy w zakresie 12,39-15,54 i w żadnym przypadku nie otrzymano wyniku na takim poziomie jak w wariantach A2 i B2. Dodatkowo zaobserwowano znaczącą biostymulację wzrostu pędów pomidora w Kontroli, w próbie 2 - próba - gdzie dodano mieszaninę wszystkich szczepów wchodzących w skład biopreparatu, różnica w porównaniu z kontrolą wynosiła 20%, w pozostałych próbach Kontrolnych, próby 3-10, nie zaobserwowano efektu biostymulacji, wzrost był na tym samym poziomie co w Kontroli - próbie 1. Otrzymane wyniki świadczą o synergistycznym działaniu szczepów bakterii wchodzących w skład biopreparatu.
Tabela 10
Ilościowa ocena wzrostu pomidora w poszczególnych wazonach. Warianty doświadczenia jak w tabeli 7
| Kontrole | Biomasa (g) | Wariant A | Biomasa (g) | Wariant B | Biomasa (g) |
| 1K_pomidor | 22,43 | 1A_pomidor | 13,28 | 1B_pomidor | 11,56 |
| 2K pomidor | 26,98 | 2A pomidor | 23,18 | 2B pomidor | 22,47 |
| 3K pomidor | 22,19 | 3A pomidor | 14,45 | 3B pomidor | 13,89 |
| 4K pomidor | 22,14 | 4A pomidor | 14,76 | 4B pomidor | 14,28 |
| 5K pomidor | 22, 28 | 5A pomidor | 15,54 | 5B pomidor | 14,27 |
| 6K pomidor | 21, 42 | 6A pomidor | 15,21 | 6B pomidor | 14,22 |
| 7K pomidor | 21,89 | 7A pomidor | 11,87 | 7B pomidor | 13,11 |
| 8K pomidor | 22,26 | 8A pomidor | 10,56 | 8B pomidor | 12, 82 |
| 9K pomidor | 21,81 | 9A pomidor | 12,37 | 9B pomidor | 14,75 |
| 10K pomidor | 21,72 | 10A pomidor | 12,39 | 10B pomidor | 13,24 |
Papryka - Po okresie 10 tygodni od posadzenia rozsady zebrano wyniki: wzrost pędów papryki zaobserwowano w przypadku Kontroli dla wszystkich prób (1-10), oraz w przypadku Wariantu A dla prób: 2, 4, 5 i 6, a w przypadku wariantu B dla prób: 2, 4, 5 i 6. W wariantach z dodatkiem tylko fitopatogenów zaobserwowano wzrostu na niskim poziomie, a oprócz tego stwierdzono zmiany na liściach (wariant A1 oraz B1; gleba z Pectobaterium carotovorum, gleba z Pseudomonas syringae, odpowiednio). Oprócz
PL 234 499 Β1 oceny wizualnej przeprowadzono również ocenę ilościową poprzez zważenie pędów z każdego z wazonów (tabela 11). Tylko w wariantach A2 i B2 zaobserwowano wzrost pędów na porównywalnym poziomie do próby kontrolnej 1., co świadczy o wyeliminowaniu bakterii patogennych w wyniku dodania biopreparatu. W pozostałych próbach (A 3-10 oraz B 3-10), gdzie dodawane były pojedyncze szczepy bakterii, wzrost był na niższym poziomie, o czym świadczy rozrzut biomasy w zakresie 10,16-18,58 i w żadnym przypadku nie otrzymano wyniku na takim poziomie jak w wariantach A2 i B2. Dodatkowo zaobserwowano znaczącą biostymulację wzrostu pędów papryki w Kontroli, w próbie 2 - próba - gdzie dodano mieszaninę wszystkich szczepów wchodzących w skład biopreparatu, różnica w porównaniu z kontrolą wynosiła 15%, w pozostałych próbach Kontrolnych, próby 3-10, nie zaobserwowano efektu biostymulacji, wzrost był na tym samym poziomie co w Kontroli - próbie 1. Otrzymane wyniki świadczą o synergistycznym działaniu szczepów bakterii wchodzących w skład biopreparatu.
Tabela 11
Ilościowa ocena wzrostu papryki w poszczególnych wazonach. Warianty doświadczenia jak w tabeli 7
| Kontrole | Biomasa (g) | Wariant A | Biomasa (g) | Wariant B | Biomasa (g) |
| 1 K_papryki | 25,84 | 1A_papryki | 14,28 | 1B_papryki | 13,56 |
| 2K papryki | 29,76 | 2A papryki | 26,27 | 2B papryki | 25,94 |
| 3K papryki | 23,12 | 3A papryki | 16,51 | 3B papryki | 16,19 |
| 4K papryki | 24,96 | 4A papryki | 16,79 | 4B papryki | 16,71 |
| 5K papryki | 24,58 | 5A papryki | 18,58 | 5B papryki | 17,77 |
| 6K papryki | 25,22 | 6A papryki | 16,23 | 6B papryki | 16,12 |
| 7K papryki | 25,19 | 7A papryki | 15,89 | 7B papryki | 16,21 |
| 8K papryki | 24,68 | 8A papryki | 10,16 | 8B papryki | 11, 52 |
| 9K papryki | 24,79 | 9A papryki | 15,26 | 9B papryki | 15,54 |
| 10K papryki | 24,12 | 10A papryki | 14,45 | 10B papryki | 15,14 |
Przykład 7
Określenie przynależności produkowanych związków do grupy bakteriocyn
W celu oceny, czy produkowane przez szczepy z rodzaju Bacillus wchodzące w skład biopreparatu zdeponowanego jako B/00148 związki należą do grupy bakteriocyn przeprowadzono testy krzyżowe. Wykonano je na 3 szczepach z rodzaju Bacillus wchodzących w skład biopreparatu: Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A. Wykazano, że badane szczepy nie hamują swojego wzrostu, czyli że są oporne na działanie związków wydzielanych przez same siebie. Wynik ten jednoznacznie sugeruje, iż badane szczepy produkują bakteriocyny, na które wzajemnie są oporne.
Wnioski z przeprowadzonych eksperymentów i uzyskanych wyników:
a) Wykazano (przykład 2), że pomiędzy badanymi szczepami wchodzącymi w skład kompozycji biopreparatu zdeponowanego jako B/00148 nie zachodzi oddziaływanie o charakterze antagonistycznym, tzn. żaden z badanych szczepów nie zmienia środowiska w taki sposób, by hamować wzrost innych, stąd wykazano, że szczepy te mogą być ze sobą bezpiecznie współhodowane.
b) Wykazano (przykład 3A), że szczepy wchodzące w skład biopreparatu zdeponowanego jako B/00148: Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W) potrafią degradować materię organiczną do łatwo przyswajalnych związków przez rośliny będących źródłem np. C, N i P.
c) Wykazano (przykład 3B), że szczep Arthrobacter sp 1.4 jest zdolny do wiązania azotu atmosferycznego, stąd podanie kompozycji według wynalazku umożliwia ograniczenie zużycia nawozów azotowych jak i w sposób naturalny wzbogacanie gleby w przyswajalne dla roślin związki azotowe.
d) Wykazano (przykład 3C), że szczepy z rodzaju Bacillus i Pseudomonas wchodzące w skład biopreparatu zdeponowanego jako B/00148 posiadają właściwości, które są ich cechą rodzajową: amylolityczne (rozkład skrobi), proteolityczne (rozkład białek), denitryfikacyjne (reduk
PL 234 499 B1 cja azotanów do azotu) oraz amonifikacyjne (przemiana azotu zawartego w związkach organicznych). Rozkład związków organicznych przyczynia się do powstawania próchnicy i uwalniania np. zw. fosforu i azotu. Próchnica glebowa decyduje o żyzności gleby. Stąd podanie kompozycji według wynalazku umożliwia wytworzenie próchnicy.
e) Wykazano (przykład 4), że szczepy wchodzące w skład biopreparatu B/00148: Arthrobacter sp. szczep 1.4, Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Citrobacter sp. szczep 6A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W) są oporne na Ni(ll), Cu(ll), Zn(ll), As(lll), średnio wrażliwe na Cr(VI) oraz wrażliwe na Cd(ll). Zanieczyszczenia gleb metalami ciężkimi występuje w Polsce lokalnie i dotyczy przede wszystkim obszarów uprzemysłowionych. Metale ciężkie w glebach stanowią potencjalne źródło zagrożenia dla roślin - działanie fitotoksyczne oraz dla wód podziemnych, a w konsekwencji - mogą być włączone do łańcucha pokarmowego. Pierwiastki te pobierane i kumulowane przez warzywa są szkodliwe dla zdrowia człowieka. Stąd podanie kompozycji według wynalazku umożliwia unieczynnienie metali ciężkich oraz spełnianie innych funkcji przez te bakterie nawet w glebach zanieczyszczonych metalami ciężkimi.
f) Zaobserwowano w teście szalkowym (przykład 5), że związki wydzielane przez szczepy wchodzące w skład biopreparatu: Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Citrobacter sp. szczep 6A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W) całkowicie hamują wzrost obydwu badanych fitopatogenów: Pseudomonas syringae i Pectobacterium carotovorum, wykazano więc, że kompozycja według wynalazku zwalcza patogeny roślin w glebie.
g) Wykazano (przykład 6), że bakterie produkujące bakteriocyny wchodzące w skład preparatu według wynalazku mogą być z powodzeniem stosowane jako preparaty doglebowe o właściwościach bakteriobójczych, gdyż wykazano w eksperymentach wazonowych, że eliminują bakterie patogenne dla roślin z gleby, nie dopuszczając tym samym do rozwoju procesu patogenezy w tym środowisku.
h) Wykazano (przykład 6), że kompozycja według wynalazku po dodaniu do gleby silniej stymuluje wzrost roślin, co wykazano na przykładzie ziemniaka, marchwi, pomidora i papryki, niż pojedyncze szczepy wchodzące w skład biopreparatu, przez co nie tylko wykazano działanie bakteriobójcze na fitopatogeny: Pseudomonas syringae i Pectobacterium carotovorum, ale i synergistyczny efekt współdziałania poszczególnych bakterii wchodzących w skład kompozycji według wynalazku.
i) Wykazano (przykład 7), że związki przeciwbakteryjne produkowane przez szczepy z rodzaju Bacillus są bakteriocynami.
Bibliografia
1. Ahemad M., Kibret M., 2014, Mechanisms and applications of plant growth promoting rhizobacteria: Current perspective, Journal of King Saud University - Science, 26(1): 1-20.
2. Bender C.L., Alarcón-Chaidez F., Gross D.C., 1999, Pseudomonas syringae Phytotoxins: Mode of Action, Regulation and Biosynthesis by Peptide and Polyketide Synthetases, Microbiol. Mol. Biol. Rev., 63(2): 266-292.
3. Compant S., Duffy B., Nowak J., Clement C., Barka EA. 2005. Use of plant growth-promoting bacteria for biocontrol of plant diseases: principles, mechanisms of action, and future prospects. Appl Environ Microbiol. 71(9): 4951-9.
4. Cotter P.D., Hill C., Ross R.P., 2005, Bacteriocins: developing innate immunity for food, Nat. Rev. Microbiol., 3(10): 777-788.
5. Eunjung R., Tae-Ho P., Myung-il K., Seungdon L., Sangryeol R., Chang-Sik O., Sangkee R., Doo-Ho K., Beom-Seok P., Sunggi H., 2010, Characterization of a New Bacteriocin, Carocin D, from Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum Pcc21, Appl. Environ. Microbiol., 76(22): 7541-7549.
6. Glick B.R., 2012, Plant Growth-Promoting Bacteria: Mechanisms and Applications, Scientifica, 15.
7. Hammami R., Fernandez B., Lacroix C., Fliss I., 2013, Anti-infective properties of bacteriocins: an update, Cell. Mol. Life Sci. 70(16): 2947-2967.
8. Jastrzębska E., 2010, The Effect of Crop Protection Chemicals on Soil-Dwelling Microorganisms, Contemporary Problems of Management and Environmental Protection, 5: 43-53.
PL 234 499 B1
9. Lee D.H., Lim J.-A., Lee J., Roh E., Jung K., Choi M., Heu S., 2013, Characterization of genes required for the pathogenicity of Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum Pcc21 in Chinese cabbage, Microbiology, 159(7): 1487-1496.
10. Lo C.C., 2010, Effect of pesticides on soil microbial community, Journal of Environmental Science and Health, Part B: Pesticides, Food Contaminants, and Agricultural Wastes, 45: 5, 348-359.
11. Martin-Sanz A., Perez de la Vega M., Murillo J., Caminero C., 2013, Strains of Pseudomonas syringae pv. syringae from Pea Are Phylogenetically and Pathogenically Diverse, Phytopathology, 103(7): 673-681.
12. Riley M.A., and Wertz J.E., 2002, Bacteriocins: Evolution, Ecology, and Application, Annu. Rev. Microbiol., 56: 117-37.
13. Rio-Alvarez I., Rodriguez-Herva J.J., Martinez P.M., Gonzalez-Melendi P., Garcia-Casado G., Rodriguez-Palenzuela P., López-Solanilla E., 2013, Light regulates motility, attachment and virulence in the plant pathogen Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000, Environ. Microbiol., 16(7): 2072-2085.
14. Sripontan Y., Tan Ch.-W., Hung M.-H., Young Ch.-Ch., Hwang S.-Y., 2014. Effects of plant-growth-promoting microorganisms and fertilizers on growth of cabbage and tomato and Spodoptera litura performance. Journal of Asia-Pacific Entomology, 17(3): 587-593.
15. Subramanian S., Smith D.L., 2015, Bacteriocins from the rhizosphere microbiome - from an agriculture perspective, Front. Plant Sci., 6: 909.
16. Vejan P., Abdullah R., Khadiran T., Ismail S., Nasrulhaq Boyce A., 2016, Role of Plant Growth Promoting Rhizobacteria in Agricultural Sustainability-A Review, Molecules, 21(5): 573.
17. Zacharof M.P., Lovitt R.W., 2012, Bacteriocins Produced by Lactic Acid Bacteria a Review Article, APCBEE Procedia, 2: 50-56.
Claims (25)
- Zastrzeżenia patentowe1. Kompozycja zawierająca wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych: Arthrobacter sp. szczep 1.4, Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Citrobacter sp. szczep 6A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W) i zdeponowana pod numerem depozytu B/00148 w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów PCM.
- 2. Biopreparat zawierający kompozycję szczepów określoną w zastrzeżeniu 1.
- 3. Biopreparat według zastrz. 2, znamienny tym, że ponadto zawiera podłoże płynne mineralne uzupełnione glukozą jako jedynym źródłem węgla lub podłoże stałe mineralne uzupełnione glukozą jako jedynym źródłem węgla.
- 4. Biopreparat według zastrz. 2-3, znamienny tym, że zawiera co najmniej 105 komórek bakterii w ml podłoża, korzystniej co najmniej 106 komórek bakterii w ml podłoża, korzystniej cfu każdego szczepu wynosi co najmniej 106 w ml podłoża.
- 5. Biopreparat według zastrz. 2-4, znamienny tym, że szczepy Arthrobacter sp. szczep 1.4, Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Citrobacter sp. szczep 6A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W) są do siebie w zasadniczo równym stosunku ilościowym.
- 6. Biopreparat według zastrz. 2-5, znamienny tym, że jest w postaci płynnej lub liofilizatu, lub osadzony na nośniku.
- 7. Sposób wytwarzania kompozycji określonej w zastrz. 1 i/lub biopreparatu jak określonego w zastrz. 2-6, znamienny tym, że prowadzi się hodowlę szczepów Arthrobacter sp. szczep 1.4, Bacillus sp. szczep 202B, Bacillus sp. szczep 233, Bacillus sp. szczep 307A, Citrobacter sp. szczep 6A, Paenibacillus sp. szczep 45, Pseudomonas sp. szczep 23 (W), Pseudomonas sp. szczep 60 (W) zdeponowanych jako B/00148a) jednocześnie na pożywce zapewniającej wzrost każdego ze szczepów, lubb) każdy ze szczepów hoduje się osobno na odpowiedniej pożywce umożliwiającej jego wzrost, i uzyskane hodowle miesza się w celu uzyskania biopreparatu, korzystnie każdy szczep miesza się ze sobą w zasadniczo równych proporcjach ilościowych, przy czym korzystnie hodowlę w a) i/lub b) prowadzi się w temperaturze w zakresie 20-25°C.PL 234 499 B1
- 8. Sposób wytwarzania według zastrz. 7, znamienny tym, że pożywką stosowaną w etapie hodowli a) i/lub b) jest podłoże płynne mineralne uzupełnione glukozą jako jedynym źródłem węgla lub podłoże stałe mineralne uzupełnione glukozą jako jedynym źródłem węgla.
- 9. Sposób zwalczania patogenów roślin w glebie obejmujący etap wprowadzania do gruntu kompozycji określonej w zastrz. 1 i/lub biopreparatu określonego w zastrz 2-6, i/lub kompozycji, i/lub biopreparatu wytworzonego sposobem określonym w zastrz. 7-8, przy czym korzystnie wprowadzanie do gruntu następuje poprzez zraszanie.
- 10. Sposób zwalczania patogenów roślin w glebie według zastrz. 9, znamienny tym, że patogen jest wybrany z Pseudomonas syringae, Pectobacterium carotovorum, przy czym korzystniej Pseudomonas syringae jest patogenem pomidora, grochu, ogórka, soi, kalafiora, fasoli i drzew owocowych, ziemniaka, marchwi, papryki, i/lub korzystniej Pectobacterium carotovorum jest patogenem marchewki, ziemniaka, pomidora, papryki, zielonych warzyw liściastych, dyni, cebuli.
- 11. Sposób zwalczania patogenów roślin w glebie według zastrz. 9-10, znamienny tym, że odbywa się ex situ lub odbywa się in situ.
- 12. Sposób zwalczania patogenów roślin w glebie według zastrz. 9-11, znamienny tym, że glebę zrasza się biopreparatem w ilości 10 litrów na 1 ha powierzchni gruntu i/lub biopreparat wprowadzany jest do gruntu w stosunku objętościowym biopreparat : gleba w przedziale od 1 : 10 do 1 : 30, przy czym preparat wyjściowy stosowany do zraszania i/lub wprowadzania do gruntu korzystnie rozcieńcza się w stosunku 1 : 50 do 1 : 100.
- 13. Sposób zwalczania patogenów roślin w glebie według zastrz. 9-12, znamienny tym, że ponadto obejmuje etapy - natlenienia mechanicznego gleby i nawilżania gleby dla utrzymania odpowiedniego stopnia wilgotności gleby.
- 14. Sposób użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory gleby obejmujący etap wprowadzania do gruntu kompozycji określonej w zastrz. 1 i/lub biopreparatu określonego w zastrz. 2-6, i/lub wytworzonych sposobem określonym w zastrz. 7-8, przy czym korzystnie wprowadzanie do gruntu następuje poprzez zraszanie, korzystnie po intensywnym stosowaniu chemicznych środków ochrony roślin.
- 15. Sposób użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory gleby według zastrz. 14, znamienny tym, że odbywa się ex situ lub odbywa się in situ.
- 16. Sposób użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory gleby według zastrz. 14-15, znamienny tym, że biopreparat wprowadzany jest do gruntu w ilości 10 litrów na 1 ha powierzchni gruntu i/lub w stosunku objętościowym biopreparat : gleba w przedziale od 1 : 10 do 1 : 30, przy czym preparat wyjściowy stosowany do zraszania i/lub wprowadzania do gruntu korzystnie rozcieńcza się w stosunku 1 : 50 do 1 : 100.
- 17. Sposób biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin obejmujący etap wprowadzania do gruntu kompozycji określonej w zastrz. 1 i/lub biopreparatu określonego w zastrz. 2-5, i/lub wytworzonych sposobem określonym w zastrz. 7-8, przy czym korzystnie wprowadzanie do gruntu następuje poprzez zraszanie.
- 18. Sposób biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin według zastrz. 17, znamienny tym, że odbywa się ex situ lub odbywa się in situ.
- 19. Sposób biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin według zastrz. 17-18, znamienny tym, że biopreparat wprowadzany jest do gruntu w postaci preparatu rozcieńczonego, w ilości około 10 litrów na 1 ha powierzchni gruntu i/lub w stosunku objętościowym biopreparat : gleba w przedziale od 1 : 10 do 1 : 30, przy czym preparat wyjściowy stosowany do zraszania i/lub wprowadzania do gruntu korzystnie rozcieńcza się w stosunku 1 : 50 do 1 : 100.
- 20. Sposób biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin według zastrz. 17-19, znamienny tym, że rośliny są wybrane z pomidora, grochu, ogórka, soi, kalafiora, fasoli i drzew owocowych, marchewki, ziemniaka, pomidora, zielonych warzyw liściastych, dyni, cebuli, papryki.
- 21. Zastosowanie kompozycji określonej w zastrz. 1 i/lub biopreparatu określonego w zastrz. 2-6, i/lub wytworzonego sposobem określonym w zastrz. 7-8 do zwalczania patogenów roślin w glebie.
- 22. Zastosowanie według zastrz. 21, znamienne tym, że patogen jest wybrany z Pseudomonas syringae, Pectobacterium carotovorum, korzystniej Pseudomonas syringae jest patogenem pomidora, grochu, ogórka, soi, kalafiora, fasoli i drzew owocowych, ziemniaka, marchwi, papryki, i/lubPL 234 499 Β1 korzystniej Pectobacterium carotovorum jest patogenem marchewki, ziemniaka, pomidora, papryki, zielonych warzyw liściastych, dyni, cebuli.
- 23. Zastosowanie kompozycji określonej w zastrz. 1 i/lub biopreparatu określonego w zastrz 2-6, i/lub wytworzonych sposobem określonym w zastrz. 7-8 do użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory gleby, korzystnie po intensywnym stosowaniu chemicznych środków ochrony roślin.
- 24. Zastosowanie kompozycji określonej w zastrz. 1 i/lub biopreparatu określonego w zastrz 2-6, i/lub wytworzonych sposobem określonym w zastrz. 6-7 do biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin.
- 25. Zastosowanie według zastrz. 24, znamienne tym, że rośliny są wybrane z pomidora, grochu, ogórka, soi, kalafiora, fasoli i drzew owocowych, marchewki, ziemniaka, papryki, zielonych warzyw liściastych, dyni, cebuli.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL424794A PL234499B1 (pl) | 2018-03-08 | 2018-03-08 | Kompozycja zawierająca wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych, biopreparat zawierający taką kompozycję wykorzystywane do zwalczania patogenów roślin w glebie, użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory oraz biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin w sposobach i zastosowaniach je wykorzystujących |
| EP19161182.1A EP3536153B1 (en) | 2018-03-08 | 2019-03-07 | The composition comprising isolated strains of saprophytic soil bacteria, biopreparation containing such composition and methods and uses thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL424794A PL234499B1 (pl) | 2018-03-08 | 2018-03-08 | Kompozycja zawierająca wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych, biopreparat zawierający taką kompozycję wykorzystywane do zwalczania patogenów roślin w glebie, użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory oraz biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin w sposobach i zastosowaniach je wykorzystujących |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL424794A1 PL424794A1 (pl) | 2019-09-09 |
| PL234499B1 true PL234499B1 (pl) | 2020-03-31 |
Family
ID=66091842
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL424794A PL234499B1 (pl) | 2018-03-08 | 2018-03-08 | Kompozycja zawierająca wyizolowane szczepy saprofitycznych bakterii glebowych, biopreparat zawierający taką kompozycję wykorzystywane do zwalczania patogenów roślin w glebie, użyźniania gleby i przywracania naturalnej równowagi biologicznej mikroflory oraz biostymulacji rozwoju i wzrostu roślin w sposobach i zastosowaniach je wykorzystujących |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP3536153B1 (pl) |
| PL (1) | PL234499B1 (pl) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024167426A1 (en) | 2023-02-07 | 2024-08-15 | Green Tree Group Sp. Z O.O. | Method of obtaining liquid agent and method for biodegradation of thermoplastic polymeric materials in compost |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112608869B (zh) * | 2020-12-23 | 2022-02-22 | 山东佐田氏生物科技有限公司 | 一株耐盐碱阿根廷假单胞菌及其活菌制剂与应用 |
| CN115786178B (zh) * | 2022-10-10 | 2023-08-29 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所农业技术中心 | 一株耐盐碱柠檬酸杆菌及其在促进植物生长中的应用 |
| CN119391575B (zh) * | 2024-10-29 | 2025-10-21 | 东北农业大学 | 能够降解扑草净和/或乙草胺的芽孢杆菌菌株及应用 |
| CN119162073A (zh) * | 2024-11-01 | 2024-12-20 | 湖南省微生物研究院 | 一株柠檬酸杆菌基因工程菌株及其构建方法和应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102258310B1 (ko) * | 2013-07-11 | 2021-06-01 | 바이엘 크롭사이언스 악티엔게젤샤프트 | 유용 식물에서 박테리아성 유해 유기체를 방제하기 위한, 숙주 방어 유도인자와 생물학적 방제제를 포함하는 조합물의 용도 |
| AP2016009398A0 (en) * | 2014-01-29 | 2016-08-31 | Univ Pretoria | Plant growth promoting rhizobacterial strains and their uses |
| CA2984075C (en) * | 2015-05-01 | 2024-01-23 | Inocucor Technologies, Inc. | Microbial compositions and methods for bioprotection |
| TR201513059A1 (tr) * | 2015-10-20 | 2019-01-21 | Ibrahim Isildak | Bi̇r bi̇yogübre formülasyonu |
-
2018
- 2018-03-08 PL PL424794A patent/PL234499B1/pl unknown
-
2019
- 2019-03-07 EP EP19161182.1A patent/EP3536153B1/en active Active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2024167426A1 (en) | 2023-02-07 | 2024-08-15 | Green Tree Group Sp. Z O.O. | Method of obtaining liquid agent and method for biodegradation of thermoplastic polymeric materials in compost |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL424794A1 (pl) | 2019-09-09 |
| EP3536153B1 (en) | 2020-12-23 |
| EP3536153A1 (en) | 2019-09-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gutiérrez-Miceli et al. | Sheep manure vermicompost supplemented with a native diazotrophic bacteria and mycorrhizas for maize cultivation | |
| Wu et al. | Effects of bio-organic fertilizer on pepper growth and Fusarium wilt biocontrol | |
| Nagendran et al. | Management of bacterial leaf blight disease in rice with endophytic bacteria | |
| RU2550268C2 (ru) | Новая флуоресцентная псевдомонада вида pseudomonas azotoformans для улучшения всхожести и роста растений | |
| EP3536153B1 (en) | The composition comprising isolated strains of saprophytic soil bacteria, biopreparation containing such composition and methods and uses thereof | |
| KR20150050578A (ko) | 식물의 비생물적 스트레스 저항성을 증가시키는 방법 | |
| Doolotkeldieva et al. | Effects of Streptomyces biofertilizer to soil fertility and rhizosphere’s functional biodiversity of agricultural plants | |
| US10000427B2 (en) | Phosphate solubilizing rhizobacteria bacillus firmus as biofertilizer to increase canola yield | |
| KR102670981B1 (ko) | 고추 탄저병과 세균병 방제 및 생육촉진 효과를 가진 다기능 천연식물보호제 개발 | |
| CA3240854A1 (en) | Agricultural compositions comprising microbial consortia and methods of use thereof | |
| KR20140071145A (ko) | 신균주인 페니바실러스 폴리믹사 ab-15 균주 및 이의 용도 | |
| KR20220067077A (ko) | 식물의 저항성을 증진시키는 바실러스 잔톡실리 균주 및 이의 용도 | |
| KR20190136009A (ko) | 미츠아리아속에 속하는 균주 및 그 균주를 사용한 미생물 농약 | |
| BiBi et al. | Isolation and evaluation of Qatari soil rhizobacteria for antagonistic potential against phytopathogens and growth promotion in tomato plants | |
| Zarea | Conservation tillage and sustainable agriculture in semi-arid dryland farming | |
| Sawicka et al. | The Role and Importance of Microorganisms in Environmental Sustainability | |
| KR20100133307A (ko) | 토양을 개선하고 작물의 생육을 증진시키는 미생물 혼합제제 | |
| ARMENTA-BOJÓRQUEZ et al. | Organic versus synthetic fertilisation of beans (Phaseolus vulgaris L.) in Mexico | |
| JP7468842B2 (ja) | 植物病害防除用の農薬組成物及びそれを用いる植物病害防除方法 | |
| KR102073487B1 (ko) | 바실러스 발리스모티스 bs07m 균주를 접종한 가축분 입상 퇴비의 제조방법 | |
| Collins | Management of Fusarium wilt in bunching spinach production in Ontario, Canada | |
| Sood et al. | Role of PGPR in sustainable agriculture under changing scenario of climate change | |
| Abobaker | The influence of fertiliser type on mycorrhizal colonisation and plant growth in horticultural systems | |
| Khalil et al. | Efficacy of Sulfur, Copper and Rhizobium leguminosarum against Faba bean damping-off caused by Fusarium solani | |
| Shipoh | Isolation, identification and characterization of Cleome Gynandra L. bacterial seed endophytes from Northern Namibia |