PL23039B1 - Sposób otrzymywania nieaglutynujacych sie zawiesin komórek tkanek zwierzecych. - Google Patents

Description

Pierwszenstwo: 27 marca 1934 r. (Niemcyj.W celu badania reakcyj biologicznych w wyosobnionych komórkach tkanek zy¬ wych, podobnie, jak to ma miejsce w przy¬ padku badania martwego materjalu ko¬ mórkowego, nalezy w zawiesinach komó¬ rek, wyosobnionych z narzadów lub tka¬ nek, zapobiec aglutynacji lub spowodowac jej cofniecie sie w razie, gdyby juz wysta¬ pila.Obecnie wykryto, ze mozna w bardzo korzystny sposób otrzymywac nieagluty- nujace sie zawiesiny komórek tkanek przez wytwarzanie tych zawiesin ze swiezego materjalu komórkowego w obecnosci sub- stancyj, zmniejszajacych napiecie po¬ wierzchniowe lub powstrzymu jacyeh krzepniecie krwi, które wcale nie wplywa¬ ja na zmiany komórkowe lub tylko nie¬ znacznie zmieniaja same komórki, albo tez przez dodawanie wymienionych substancyj do wytworzonych juz zawiesin komórek tkanek zwierzecych.Jako odpowiednie substancje, zmniej¬ szajace napiecie powierzchniowe, nalezy wymienic np. wyzsze alkohole, jak, alkohol oktylowy, benzylowy lub podobne. Jako substancje, powstrzymujace krzepnii^cie krwi, stosuje sie np. sole kwasów wielo- anetolo-sulfonowych, karbamid kwasu m- -amino-ben;zoylo-m-amino-p-metylo - ben- zoylo - 1 - naftylo-amino-4,6,8-trójsulfono- wego, jak równiez wyciagi z narzadów,znane pod niazwa heparyny; hirudyny i no- virudyny.Naogól korzystne jest dodawanie do zawiesin srodków antyseptycznych. Jako tego rodzaju srodki mozna stosowac np. kamforan szesciometylenoczteroanuny, trójboran szesciometylenoczteroanuny, an- hydrometylenocytrynian szesciometyleno- czteroaminy i substancje podobne, jak sa¬ licylan fenylowy, heksylorezorcyne, oksy- benzoesan metylowy lub etylowy i wiele innych.W celu uzyskania zadanego skutku mozna dodawac wymienionych suhstancyj nietylko' do komórek wyosobnionych, lecz równiez w celu zapobiezenia daznosci ko¬ mórek do aglutynacji substancje powyz¬ sze wstrzykuje sie zwierzeciu doswiad¬ czalnemu lub podaje sie mu je doustnie („per os") na pewien czas przed pobra¬ niem materjalu komórkowego. Zawiesina komórkowa, uzyskana z tkanek takiego zwierzecia, nie wykazuje juz daznosci do aglutynacji. Do zawiesin tych nalezy doda¬ wac odpowiednich srodków antyseptycz¬ nych wyzej wymienionego rodzaju w ste¬ zeniach, jakie nie szkodza jeszcze komór¬ kom, ale juz powstrzymuja wzrost bakte- ryj. Powyzej wymienionych suhstancyj o dzialaniu antyseptycznem dodaje sie np. takie ilosci, aby gotowa zawiesina zawie¬ rala od 0,1 do 0,2% tych sdbstancyj.Na tego rodzaju utrwalone zawiesiny, uzyskane np. z komórek embrjonalnych, komórek narzadów normalnych lub cho¬ rych, komórek rakowatych lub tym podob¬ nych, mozna w celach doswiadczalnych lub podobnych dzialac odpowiednia suro¬ wica, innemi komórkami, nastepnie sub¬ stancjami chemicznemi, fermentami lub hormonami. Przez obliczenie liczby komó¬ rek przed doswiadczeniem i po doswiad¬ czeniu, przez dokonanie pomiaru zmetnie¬ nia lub zapomoca podobnych sposobów mozna mierzyc przyrost lub zanikanie ko¬ mórek w tych zawiesinach, a wiec stwier¬ dzic dzialanie, powodujace rozmnazanie sie lub zanikanie komórek, wzglednie przez okreslenie cial chemicznych, powstajacych w zawiesinach, mozna stwierdzic rozpad komórek lub powstawanie produktów przemiany materji, dzialanie fermentów i t.d.Przyklad I. Zaglutynowana zawiesine komórkowa, otrzymana z nowotworu guzo¬ watego (tumoru) myszy, zadaje sie mie¬ szanina, skladajaca sie z 0,25 cm3 drugo- rzedowego alkoholu oktylowego, 0,75 cm3 absolutnego alkoholu etylowego i 0,60 cm3 \vody, w ilosci, odpowiadajacej 1 kropli mieszaniny na 1 cm3 zawiesiny. Po dobrem zmieszaniu wzietej próbki wytworzone gruzelki rozplywaja sie, tak iz poszczegól¬ ne komórki zostaja znów rozdzielone rów¬ nomiernie i pozostaja juz w tym stanie.Przyklad II. Do zawiesiny komórko¬ wej, otrzymanej z guza rakowatego, ulega¬ jacej aglutynacji, dodaje sie 1% -owego roztworu hirudyny w ilosci, odpowiadaja¬ cej 1 kropli hirudyny na 1 cm3 zawiesiny, i dokladnie miesza. W zawiesinie plywaja wówczas oddzielnie poszczególne, równo¬ miernie rozdzielone komórki.Przyklad III. Do zawiesiny komórko¬ wej, ulegajacej aglutynacji, dodaje sie 0,1%-owego roztworu wodnego karbami- njanu kwasu m-amino-benzoylo-m-amino- -p-metylo - benzoylo-7-naftyloamino-4,6,8- -trójsulfonowego w ilosci, odpowiadajacej 1 kropli wymienionego roztworu na 1 cm3 zawiesiny. Pomimo pozostawienia zawiesi¬ ny w spokoju w ciagu wielu dni w tempe¬ raturze 37°C aglutynacja komórek nie na* stepuje.Przyklad IV. Królikowi, choremu na nowotwór (tumor), wstrzykuje sie dozyl¬ nie wiieloanetolosulfoniatn sodowy w ilosci 15 mg na kazdy kilogram zywej wagi. Po \y<2, godz zwierze zostaje zabite, o ile samo nie padlo, pocztem, wyosobnia sie mase tu- morowa i przerabia ja na zawiesine komór¬ kowa. Zawiesina, otrzymana w ten sposób, — 2 —zupelnie nie wykazuje daznosfci do agluty¬ nacji lub wykazuje ja tylko w stopniu nie¬ znacznym. PL

Claims (3)

1. Zastrzezenia patentowe. 1. Spoisób otrzymywania nieaglutynu- jacych sie zawiesin komórek tkanek zwie¬ rzecych, znamienny tern, ze zawiesine wy¬ twarza sie ze swiezego materjalu komórko¬ wego w obecnosci substamcyj, zmniejszaja¬ cych napiecie powierzchniowe lub po¬ wstrzymujacych krzepniecie krwi, które nie zmieniaja znacznie komórek, najlepiej w obecnosci srodków o dzialaniu antysep- tycznem, albo tez do otrzymanych zawie¬ sin komórek tkanek zwierzecych dodaje sie wymienionych sdbstancyj.
2. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamien¬ ny tern, ze wodne zawiesiny komórkowe, w których komórki sa zaglutypowane, za¬ daje sie substancjami wymienionego ro¬ dzaju.
3. 3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamien¬ ny tern, ze zywemu zwierzeciu, z którego ma byc pobrany okreslony materjal ko¬ mórkowy do wytworzenia zawiesin, podaje sie substancje rodzaju, wymienionego w zastrz. 1, na pewien czas przed pobraniem materjalu komórkowego. L G. Farben Industrie Aktiengesellschaft. Zastepca Inz. J. Wyganowski, rzecznik patentowy. Druk L. Boguslawskiego i Ski, Warszawa, PL