PL229447B1 - Konsorcjum mikroorganizmów zdolnych do hydrolizy białek i tłuszczy w osadach ściekowych i/lub skażonych glebach, preparat je obejmujący, zastosowanie konsorcjum oraz sposób hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i/lub związków organicznych w glebach - Google Patents
Konsorcjum mikroorganizmów zdolnych do hydrolizy białek i tłuszczy w osadach ściekowych i/lub skażonych glebach, preparat je obejmujący, zastosowanie konsorcjum oraz sposób hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i/lub związków organicznych w glebachInfo
- Publication number
- PL229447B1 PL229447B1 PL413998A PL41399815A PL229447B1 PL 229447 B1 PL229447 B1 PL 229447B1 PL 413998 A PL413998 A PL 413998A PL 41399815 A PL41399815 A PL 41399815A PL 229447 B1 PL229447 B1 PL 229447B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- bacillus
- poc
- compounds
- consortium
- hydrolysis
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 67
- 239000003925 fat Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 29
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 25
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 title description 10
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 title description 9
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 title description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 119
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 71
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 59
- 239000010801 sewage sludge Substances 0.000 claims abstract description 54
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 claims abstract description 38
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims abstract description 31
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 241000061154 Brevundimonas sp. Species 0.000 claims abstract description 9
- 241000588754 Klebsiella sp. Species 0.000 claims abstract description 7
- 241001518431 Rummeliibacillus sp. Species 0.000 claims abstract description 7
- 241001147693 Staphylococcus sp. Species 0.000 claims abstract description 7
- 241000983364 Stenotrophomonas sp. Species 0.000 claims abstract description 7
- 241000191936 Micrococcus sp. Species 0.000 claims abstract description 6
- 241000143294 Ochrobactrum sp. Species 0.000 claims abstract description 6
- 241000186312 Brevibacterium sp. Species 0.000 claims abstract description 5
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 64
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 39
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 36
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 36
- 239000010802 sludge Substances 0.000 claims description 35
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 28
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 22
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 20
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 230000000696 methanogenic effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 9
- 239000011651 chromium Substances 0.000 claims description 7
- 239000010949 copper Substances 0.000 claims description 7
- 239000011133 lead Substances 0.000 claims description 7
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 7
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 7
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 abstract description 12
- 241001472591 Lysinibacillus sp. Species 0.000 abstract description 5
- 241000629742 Solibacillus sp. Species 0.000 abstract description 5
- 241000131407 Brevundimonas Species 0.000 abstract description 3
- 101150108813 PMIX gene Proteins 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 20
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 18
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 17
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 14
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 10
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 9
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 9
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 9
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 8
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 8
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 8
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 8
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 7
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 7
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 5
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 5
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 4
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 3
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 3
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 241000568397 Lysinibacillus Species 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 2
- UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N Tributyrin Chemical compound CCCC(=O)OCC(OC(=O)CCC)COC(=O)CCC UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 238000009264 composting Methods 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000003209 petroleum derivative Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- 241001181114 Neta Species 0.000 description 1
- 241000588843 Ochrobactrum Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101150067183 SUB9 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001571329 Solibacillus Species 0.000 description 1
- 241000122971 Stenotrophomonas Species 0.000 description 1
- 244000010375 Talinum crassifolium Species 0.000 description 1
- 235000015055 Talinum crassifolium Nutrition 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000963 caseinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000009585 enzyme analysis Methods 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012757 fluorescence staining Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N phenyl acetate Chemical group CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 238000012667 polymer degradation Methods 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000010421 standard material Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Treatment Of Sludge (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Zgłoszenie dotyczy konsorcjum mikroorganizmów zdolnych do hydrolizy białek i tłuszczy, korzystnie przy utylizacji osadów ściekowych i/lub biodegradacji trudno degradowanych związków organicznych w skażonych glebach, które obejmuje następujące mieszaniny szczepów bakteryjnych: - Stenotrophomonas sp. POC 10, Klebsiella sp. POC 16, Brevundimonas sp. POC 21, Bacillus sp. PSUB 1 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr depozytu B/00087); i - Bacillus sp. PSUB 9, Bacillus sp. LPMIX 2, Brevundimonas sp. LPMIX 5 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00088); i - Brevibacterium sp. LPMIX 6, Bacillus sp. LPSUB 4, Micrococcus sp. LPSUB 9 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00089), - Staphylococcus sp. PGN 1, Solibacillus sp. LPSUB 13, Lysinibacillus sp. LPSUB 15 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00090), - Bacillus sp. PMIX 8, Bacillus sp. LPOC 3, Ochrobactrum sp. POC 9, Rummeliibacillus sp. POC 4 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00091). Zgłoszenie dotyczy również preparatu do hydrolizy białek i tłuszczy obejmującego to konsorcjum, oraz ich zastosowania do utylizacji osadów ściekowych i/lub biodegradacji trudno degradowanych związków organicznych w skażonych glebach oraz sposobu je wykorzystującego.
Description
Przedmiotem wynalazku jest konsorcjum mikroorganizmów zdolnych do hydrolizy białek i tłuszczy w osadach ściekowych i/lub skażonych glebach, preparat je obejmujący, zastosowanie konsorcjum oraz sposób hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i/lub związków organicznych w glebach. Opisane jest również wykorzystanie konsorcjum mikroorganizmów zdolnych do hydrolizy białek, tłuszczy i trudno rozkładalnych związków organicznych, korzystnie osadów ściekowych i związków organicznych w zanieczyszczonych glebach, preparat je obejmujący, zastosowanie konsorcjum mikroorganizmów i/lub preparatu do katalizowania hydrolizy białek, tłuszczy i trudno rozkładalnych związków organicznych, korzystnie osadów ściekowych i/lub zwiększania wydajności produkcji biogazu w procesie fermentacji metanowej i/lub do namnażania konsorcjów metanogennych.
Stan techniki
Racjonalne i bezpieczne, z punktu widzenia ochrony środowiska, wykorzystanie osadów powstających w oczyszczalniach ścieków jest jednym z ważniejszych współczesnych problemów gospodarki ściekowej. Wraz ze wzrostem ilości i stopnia oczyszczenia ścieków rośnie także ilość powstających osadów ściekowych. Do tradycyjnych metod zagospodarowania osadów ściekowych należą: zagęszczanie (odwadnianie), spalanie, oraz procesy tlenowej (kompostowanie) i beztlenowej (fermentacja metanowa) biologicznej stabilizacji. Istotnym elementem w procesie kompostowania i fermentacji są wstępne metody dezintegracji osadów ściekowych (mechaniczne, chemiczne, termiczne, fizyczne oraz biologiczne), które mają na celu zwiększyć wydajność procesu biodegradacji. Biorąc pod uwagę ekonomiczne i ekologiczne aspekty stosowanych technologii, coraz większe znaczenie uzyskują nowe lub ulepszone metody wykorzystujące beztlenową stabilizację osadów w ramach fermentacji metanowej. Proces fermentacji metanowej jest procesem wielofazowym i dzieli się na cztery fazy: (i) hydroliza (rozkład i/lub upłynianie) wielkocząsteczkowych związków organicznych do mniejszych rozpuszczalnych monomerów (białka degradowane do aminokwasów, polisacharydy do cukrów prostych, tłuszcze/oleje do gliceryny i kwasów tłuszczowych) (ii) kwasogeneza, czyli rozkład zhydrolizowanych substancji do m.in. kwasów organicznych i alkoholi, (iii) octanogeneza - utlenianie powstałych kwasów organicznych do octanów i kwasu octowego oraz (iv) metanogeneza, czyli rozkład octanów i kwasu octanowego do metanu i dwutlenku węgla. Produktem końcowym beztlenowej stabilizacji jest, więc osad pofermentacyjny o zmniejszonej zawartości związków organicznych oraz biogaz, składający się głównie z metanu i dwutlenku węgla. Głównym celem fermentacji metanowej jest przemiana hydrofilowego, silnie uwodnionego, cuchnącego, o dużej lepkości i niebezpiecznego pod względem sanitarnym osadu ściekowego w łatwo odwadniający się o zmniejszonej objętości, lepkości i zawartości suchej masy organicznej ziemisty osad (Magrel, 2002). Powstający biogaz może zostać wykorzystany, jako paliwo i/lub źródło energii w oczyszczalniach ścieków.
W skład osadów ściekowych wchodzą w głównej mierze różnorodne cząstki, związki organiczne oraz bakterie i wydzielane przez nie zewnątrzkomórkowe substancje polimerowe (ang. Extracellular polymeric substances, EPS) (głównie białka i polisacharydy). Osady ściekowe zazwyczaj zawierają od 0.5% do 5% zawartości substancji stałych, w której związki organiczne i nieorganiczne występują w stosunku 60:40. Większość składników organicznych obecna w biomasie osadu zawarta jest w komórkach mikroorganizmów stąd jedynie połowa związków (węglowodany, białka, tłuszcze) występujących w osadach może ulec biodegradacji. Rozpad składników biomasy osadu wymaga, zatem odpowiednich metod, mających na celu zniszczenie: (i) „kłaczków” osadu powstałych przez EPS i związane z nim różnorodne związki, (ii) komórek mikroorganizmów oraz (iii) rozpuszczalnych związków i substancji zawartych w osadach ściekowych. Kluczowym etapem limitującym powstawanie metanu w procesie fermentacji metanowej oraz upłynniania osadów ściekowych jest, więc proces hydrolizy złożonych związków organicznych: białek, tłuszczy, olejów, węglowodanów do prostych związków jak aminokwasy, kwasy tłuszczowe, gliceryny, monocukry. W fazie hydrolizy, problemy stwarzać może wysoka zawartość białek i tłuszczy w osadach ściekowych. Białka mogą powodować koagulację i pienienie się osadów. Tłuszcze również mają tendencję do wytrącania się w reaktorach, a tak wytrącone lipidy mogą bezpośrednio wpływać na metanogenezę, ograniczając m.in. transport produktów hydrolizy. Adsorpcja tłuszczy na powierzchni „kłaczków” ogranicza i zmniejsza ich rozkład i konwersję do metanu. Ponadto, tak wysoka zawartość tłuszczy i białek (nawet do 30-40% zawartości suchej masy osadu) może powodować wiązanie dużej ilości wody i ograniczać dehydratację (odwodnienie) osadów, przez co zwiększają one swoją objętość. Zbyt wolne tempo hydrolizy białek, tłuszczy i węglowodanów prowadzi
PL 229 447 Β1 do spowolnienia całego procesu rozkładu oraz odwodnienia osadów, a w konsekwencji obniżenia wydajności procesów fermentacji. Podczas fermentacji metanowej osadów ściekowych, warunki przebiegu procesu również mogą ulec znacznemu pogorszeniu (np. przez obniżenie temperatury, zmiany pH, obecność w osadach metali ciężkich), co może ograniczać oraz zmniejszać wydajność zachodzenia poszczególnych etapów stabilizacji beztlenowej. W oczyszczalniach ścieków wydajność procesów degradacji osadów ściekowych jest uzależniona od obecności i aktywności drobnoustrojów lipolitycznych, proteolitycznych i celulolitycznych. Jeśli wykorzystywany osad ściekowy jest ubogi w mikroflorę hydrolityczną, to proces rozkładu będzie powolny i niestabilny. Stabilizacja odpowiedniego zespołu mikroorganizmów może trwać nawet do kilku miesięcy, co w oczywisty sposób wpływa bezpośrednio na wydajność procesu i zyski ekonomiczne w oczyszczalniach ścieków.
Wśród największych problemów i ograniczeń metod utylizacji osadów ściekowych w procesie fermentacji metanowej są, więc:(i) niska aktywność mikroorganizmów przeprowadzających poszczególne fazy procesu fermentacji metanowej oraz (ii) wrażliwość na zmienne warunki stresowe (m.in. pH, temperatura, obecność metali ciężkich).
Aktualnie rynek poszukuje nowych skutecznych rozwiązań, m.in. technologii oraz preparatów, które przeznaczone są dla efektywnego przekształcenia osadów ściekowych w bezpieczny produkt organiczny z wydajną produkcją biogazu podczas fermentacji metanowej. Poszukiwane są preparaty, które umożliwiałyby wydajną hydrolizę i prowadzenie procesu w kontrolowany sposób, poszukiwane są również preparaty do zwiększania żywotności i wydajności mikroorganizmów zaangażowanych w produkcję biogazu w procesie stabilizacji beztlenowej.
Obecnie dostępne mikrobiologiczne preparaty na polskim rynku oparte są na działaniu hydrolitycznych konsorcjów mikroorganizmów. Preparaty takie często dedykowane są jedynie do rozkładu osadów ściekowych lub udrożniania rur kanalizacyjnych, co wynika z wysokiej aktywności enzymatycznej tych preparatów, i mogą negatywnie wpływać (silna konkurencja oraz lityczne właściwości) na działanie innych grup mikroorganizmów przeprowadzających proces fermentacji metanowej, aż do całkowitej eliminacji drobnoustrojów odpowiedzialnych za procesy metanogenezy. Dodatkowo dostępne są preparaty enzymatyczne, które są stabilne, ale są zazwyczaj specyficzne dla konkretnej puli substratów. Koszt wykorzystania takich preparatów jest znaczny (nawet przy relatywnie niskiej cenie jednostkowej), gdyż muszą być one systematycznie i regularnie dodawane do pracującej oczyszczalni ścieków (co drastycznie zwiększa ich zużycie). W konsekwencji, wykorzystanie takich preparatów jest nieatrakcyjne ekonomiczne. Należy pamiętać, że wolne enzymy mają także inne właściwości chemiczne. Różnorodność reakcji, jakie mogą być katalizowane przez np. lipazy, czyni je potencjalnie bardzo ważnymi enzymami z punktu widzenia przemysłowego. Poza reakcją hydrolizy, w odpowiednich warunkach lipazy są zdolne również do prowadzenia reakcji: transestryfikacji, estryfikacji czy też polimeryzacji wynikającej z tworzenia wiązań estrowych [Reis i in. 2009]. Należy jednak pamiętać, że enzymy lipazy mogą ulec degradacji przez aktywność wydzielanych proteaz, eliminujących je tym samym ze środowiska. Obecnie poszukiwane są preparaty do utylizacji osadów ściekowych, które: (i) po jednokrotnym dodaniu zapewniałyby długotrwałą i stabilną degradację osadu ściekowego, (ii) byłyby kompatybilne z mikroorganizmami przeprowadzającymi proces fermentacji metanowej, (iii) byłyby atrakcyjnie ekonomicznie oraz (iv) miały szerokie spektrum aktywności, czyli były uniwersalne i oporne na zmienne warunki środowiskowe.
Poza obszarem zastosowania w procesach oczyszczania ścieków, konsorcja mikroorganizmów i/lub czyste kultury mikroorganizmów mogą być wykorzystywane w procesie biodegradacji związków organicznych w glebach i osadach. Wyselekcjonowane szczepy bakterii i/lub grzybów o wysokich aktywnościach hydrolitycznych, mogą rozkładać m.in. związki trudno degradowalne zmniejszając ich zawartość w glebach i osadach. Pośrednio szczepy oraz konsorcja o wysokich aktywnościach hydrolitycznych mogą wpływać na rozwój i aktywność naturalnej mikroflory, zasiedlającej daną niszę ekologiczną. Prowadząc reakcję hydrolizy związków organicznych, udostępniają proste związki, które mogą stymulować wzrost autochtonicznej mikroflory. Dzięki temu mogą stać się doskonałym pierwotnym kolonizatorem zanieczyszczonego środowiska oraz znaleźć szerokie zastosowanie w dziedzinie „białej biotechnologii”.
Szczegółowy opis wynalazku
Wynalazek dotyczy konsorcjum mikroorganizmów zdolnych do hydrolizy białek i tłuszczy korzystnie osadów ściekowych, które obejmujące następujące mieszaniny szczepów bakteryjnych mieszanina A, mieszanina B, mieszanina C, mieszanina D, mieszanina E, które wszystkie zostały zdeponowane
PL 229 447 Β1 w dniu 20 sierpnia 2015 roku w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów (PCM), Instytut Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN, Wrocław, Polska, i zawierały odpowiednio:
Mieszanina A: Stenotrophomonas sp. POC 10, Klebsiella sp. POC 16, Brevundimonas sp. POC21, Bacillus sp. PSUB 1 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr depozytu B/00087);
Mieszanina B: Bacillus sp. PSUB 9, Bacillus sp. LPMIX 2, Brevundimonas sp. LPMIX 5 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00088);
Mieszanina C: Brevibacterium sp. LPMIX 6, Bacillus sp. LPSUB 4, Micrococcus sp. LPSUB 9 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00089);
Mieszanina D: Staphylococcus sp. PGN 1, Solibacillus sp. LPSUB 13, Lysinibacillus sp. LPSUB 15 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00090);
Mieszanina E: Bacillus sp. ΡΜΙΧ 8, Bacillus sp. LPOC 3, Ochrobactrum sp. POC 9, Rummeliibacillus sp. POC 4 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00091).
Konsorcjum według wynalazku zawiera wszystkie mieszaniny A, B, C, D, E. W korzystnych przykładach wykonania niniejszego wynalazku poszczególne szczepy z każdej mieszaniny zmieszane są w równym stosunku. Korzystnie wszystkie przygotowane mieszaniny połączone są w równym stosunku ilościowym.
Wynalazek dotyczy także preparatu, do katalizowania hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudnodegradowanych, który obejmuje konsorcjum mikroorganizmów według wynalazku, przy czym preparat obejmuje również substancje uzupełniające i/lub pomocnicze, przy czym związki trudno degradowane wybrane są ze związków ropopochodnych, korzystniej olei mineralnych. Preparat według wynalazku korzystnie przeznaczony jest do katalizowania hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i związków organicznych w glebach i/lub zwiększania wydajności utylizacji osadów ściekowych pośrednio podczas produkcji biogazu w procesie fermentacji metanowej i/lub namnażania konsorcjów metanogennych i/lub samych mikroorganizmów metanogennych, obejmujący konsorcjum mikroorganizmów według wynalazku. Taki preparat korzystnie obejmuje również substancje uzupełniające i/lub pomocnicze.
Wynalazek dotyczy zastosowania konsorcjum mikroorganizmów według wynalazku i/lub preparatu według wynalazku do hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i/lub związków organicznych w glebach i/lub zwiększania wydajności utylizacji osadów ściekowych podczas produkcji biogazu w procesie fermentacji metanowej i/lub zwiększenia namnażania mikroorganizmów metanogennych, przy czym związki trudno degradowane wybrane są ze związków ropopochodnych, korzystniej olei mineralnych. Korzystne jest, jeśli konsorcjum mikroorganizmów i/lub preparat stosowane są bezpośrednio w komorach fermentacyjnych.
Korzystnie takie zastosowanie prowadzi do zwiększania wydajności produkcji biogazu w procesie fermentacji metanowej.
Niniejszy wynalazek opiera się na opracowanej przez twórców mieszaninie szczepów i obejmującym je preparacie, obejmującym mieszaninę A - mieszanina zdeponowana pod nr B/00087, mieszaninę B - mieszanina zdeponowana pod nr B/00088, mieszaninę C - mieszanina zdeponowana pod nr B/00089, mieszaninę D - mieszanina zdeponowana pod nr B/00090, mieszaninę E - mieszanina zdeponowana pod nr B/00091, przeznaczonego do hydrolizy białek, tłuszczy, korzystnie osadów ściekowych oraz związków trudno degradowanych w glebach zanieczyszczonych związkami organicznymi. Preparat według wynalazku obejmuje konsorcjum, zawierające 17 szczepów bakterii wyspecjalizowanych w rozkładzie osadów ściekowych, wyselekcjonowanych z różnych środowisk (osad surowy z oczyszczalni ścieków Czajka w Warszawie, osad wstępny i nadmierny zagęszczony z Grupowej Oczyszczalni Ścieków w Łodzi, gnojowica bydlęca z gospodarstwa wiejskiego w Mikanowie, ciecz fermentacyjna w bioreaktorze w Instytucie Technik Jądrowych w Warszawie). W skład konsorcjum wchodzą szczepy reprezentujące bakterie z rodzaju Bacillus, Ochrobactrum, Staphylococcus, Brevundimonas, Klebsiella, Brevibacterium, Stenotrophomonas, Micrococcus, Solibacillus, Lysinibacillus. Wynalazek oparty jest na nieoczekiwanym stwierdzeniu, że szczepy bakteryjne wyizolowane z wymienionych wyżej środowisk, wchodzące w skład konsorcjum według wynalazku i preparatu według wynalazku charakteryzują się wysoką aktywnością rozkładu białek, tłuszczy podczas utylizacji osadów ściekowych (oznaczane na podstawie testów proteolitycznych z użyciem kazeiny i lipolitycznych z wykorzystaniem palmitynianu paranitrofenolu) oraz związków organicznych w biodegradacji tych związków w glebach. Ponadto charakteryzują się zdolnością do funkcjonowania w szerokim spektrum czynników stresowych (w warunkach tlenowych i beztlenowych, w pH 2-12, temperatura 10-42°C) oraz opornością na jony metali ciężkich (kadmu, chromu, miedzi, ołowiu, niklu, cynku). Preparat według wynalazku przyspiesza
PL 229 447 Β1 utylizację osadów ściekowych uwalniając wiele prostych związków umożliwiając zwiększenie produkcji biogazu o 83% w procesie fermentacji metanowej. Korzystnie, preparat według wynalazku może być bezpośrednio stosowany w komorach fermentacyjnych oczyszczalni ścieków lub na etapie wstępnej obróbki osadów ściekowych w procesie hydrolizy związków białek i tłuszczy, korzystnie osadów ściekowych. Wynalazek dotyczy także sposób utylizacji osadów ściekowych, obejmujący wykorzystanie konsorcjum mikroorganizmów według wynalazku i/lub preparatu według wynalazku.
Wynalazek ponadto dotyczy sposobu hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i/lub związków organicznych w glebach, który to sposób obejmuje wykorzystanie konsorcjum mikroorganizmów według wynalazku i/lub preparatu według wynalazku, przy czym związki trudno degradowane wybrane są ze związków ropopochodnych, korzystniej olei mineralnych. Korzystny sposób prowadzi do zwiększania wydajności produkcji biogazu w procesie fermentacji metanowej. W korzystnym sposobie hydroliza prowadzona jest w warunkach tlenowych lub beztlenowych. Korzystnie hydroliza w sposobie prowadzona jest w temperaturze od około 10 do około 42°C, korzystniej w około 20-37°C. W korzystnym sposobie hydroliza prowadzona jest w pH od około 2 do około 12, korzystniej w zakresie pH około 5-10. W korzystnym sposobie hydroliza w osadach ściekowych prowadzona jest w temperaturze około 30-37°C przy pH około 7-10. W korzystnym sposobie hydroliza prowadzona jest w środowisku o podwyższonym stężeniu jonów metali ciężkich, szczególnie kadmu, chromu, miedzi, ołowiu, niklu, cynku.
W korzystnym przykładzie wykonania sposobu wykorzystania konsorcjum i/lub preparatu według wynalazku prowadzi do przyspieszonej utylizacji osadów ściekowych w tym poprawy parametrów fizyczno-chemicznych [objętości i jakości produkowanego biogazu, redukcji suchej masy osadów, pH, zawartości lotnych kwasów tłuszczowych (LTK), chemicznego zapotrzebowania na tlen (ChZT), zawartości związków azotu i fosforuj.
Korzystnie, w sposobie według wynalazku konsorcjum mikroorganizmów i/lub preparat według wynalazku, stosowane są bezpośrednio w komorach fermentacyjnych.
W korzystnym przykładzie wykonania, utylizacja osadów ściekowych prowadzona jest w warunkach beztlenowych w temperaturze 37°C. W korzystnym przykładzie wykonania, utylizacja osadów ściekowych prowadzona jest w pH 7. W korzystnym przykładzie wykonania, konsorcjum mikroorganizmów i/lub preparat według wynalazku stosowane są razem z konsorcjum metanogennym.
W innym aspekcie, opisane jest zastosowanie konsorcjum mikroorganizmów w biodegradacji związków trudno degradowanych w glebach skażonych tymi związkami organicznymi. Korzystnie, konsorcjum mikroorganizmów, zwiększa tempo degradacji trudno rozkładalnych związków. W korzystnym przykładzie wykonania według wynalazku prowadzi do zwiększenia biologicznego zapotrzebowania na tlen, oraz zawartości ogólnego węgla organicznego.
Aby przygotować konsorcjum i/lub preparat według wynalazku, należy najpierw przygotować pięć mniejszych mieszanin szczepów, mieszaniny : A, B, C, D, E, z których każda składa się z kilku różnych kultur bakterii. W skład mieszanin wchodzą następujące kultury bakterii:
• Mieszanina A: Stenotrophomonas sp. POC 10, Klebsiella sp. POC 16, Brevundimonas sp. POC 21, Bacillus sp. PSUB 1 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00087) • Mieszanina B: Bacillus sp. PSUB 9, Bacillus sp. LPMIX 2, Brevundimonas sp. LPMIX 5 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00088) • Mieszanina C: Brevibacterium sp. LPMIX 6, Bacillus sp. LPSUB 4, Micrococcus sp. LPSUB 9 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00089) • Mieszanina D: Staphylococcus sp. PGN 1, Solibacillus sp. LPSUB 13, Lysinibacillus sp. LPSUB 15 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00090) • Mieszanina E: Bacillus sp. ΡΜΙΧ 8, Bacillus sp. LPOC 3, Ochrobactrum sp. POC 9, Rummeliibacillus sp. POC 4 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00091)
We wszystkich przypadkach procedura przygotowywania składowych mieszanin jest taka sama. Procedura ta opiera się na otrzymaniu hodowli czystych kultur bakterii na pełnym podłożu płynnym LB. Po okresie wzrostu bakterii na podłożu można określić liczbę komórek znanymi technikami (na przykład przez barwienie fluorescencyjne przy użyciu barwnika DAPI) oraz zmieszać ze sobą poszczególne szczepy, korzystnie w równym stosunku. Gęstość komórek w każdej z mieszanin preparatu (A, B, C, D, E) korzystnie wynosi około 107-108. Tak przygotowaną mieszaninę/y mikroorganizmów można przechowywać stosując znane w dziedzinie sposoby, na przykład liofilizację i/lub zamrażanie.
W celu otrzymania konsorcjum mikroorganizmów, należy zmieszać ze sobą wszystkie przygotowane mieszaniny, korzystnie w równym stosunku ilościowym (tak, aby liczba komórek/ml każdego
PL 229 447 Β1 szczepu w każdej mieszaninie była na poziomie 107—108). Preparat według wynalazku może być ponadto uzupełniony dodatkowymi substancjami uzupełniającymi, pomocniczymi, stabilizującymi itd. Dodane substancje mogą dodatkowo wpływać na np. uzyskanie dużego zagęszczenia biomasy, utrzymanie zwiększonej aktywności biochemicznej, zwiększenie dostępu do składników odżywczych czy jeszcze dodatkowo zwiększać przeżywalność mikroorganizmów.
Stosowany tu termin „konsorcjum” nazywane również konsorcjum według wynalazku ma w zamierzeniu oznaczać zespół 17 szczepów (tworzących mieszaniny: mieszaninę A - mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00087, mieszaninę B - mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00088, mieszaninę C - mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00089, mieszaninę D - mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00090, mieszaninę E - mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00091), zdolnych do wspólnego wzrostu, i współdziałających w zakresie utylizacji osadów ściekowych oraz biodegradacji związków trudno degradowanych.
Stosowany tu termin „preparat” nazywany również preparat według wynalazku ma w zamierzeniu oznaczać mieszaninę obejmującą konsorcjum według wynalazku oraz substancje uzupełniające i/lub pomocnicze. Substancjami uzupełniającymi i/lub pomocniczymi mogą być przykładowo dowolne znane w dziedzinie elementy pożywek, nośniki, stabilizatory, suplementy do hodowli bakterii oraz ich mieszaniny.
Cytowane w opisie publikacje oraz podane w nich odniesienia są w całości niniejszym włączone, jako referencje. Dla lepszego zrozumienia wynalazku, został on zilustrowany w przykładach wykonania oraz na załączonych figurach rysunku, na których:
Fig. 1 to wykresy przedstawiające efekt degradacji osadów ściekowych pod wpływem aktywności preparatu według wynalazku (tzw. Lipo-Prep) (próba kontrolna - 3% osad ściekowy bez dodatku konsorcjum (bez tzw. Lipo-Prep); 3% o.s.+ Lipo-Prep - hodowla wzbogacona w konsorcjum mikroorganizmów (tzw. Lipo-Prep). Wykres A przedstawia wyniki zmian zawartości lotnych kwasów tłuszczowych. Wykres B przedstawia zmiany poziomu chemicznego zapotrzebowania na tlen w hodowli. Wykres D prezentuje zmiany zawartości suchej masy organicznej.
Fig. 2 to wykres przedstawiający skumulowaną wydajność produkcji biogazu (dm3 CH4 kg'1s.m. osadu) w hodowli kontrolnej z konsorcjum metanogennym (KM) - bez dodatku preparatu (tzw. LipoPrep) oraz w badanej próbie - z konsorcjum metanogennym z dodatkiem preparatu (tzw. Lipo-Prep).
Fig. 3 to wykres przedstawiający wpływ aktywności preparatu (tzw. Lipo-Prep), na jakość produkowanego biogazu podczas fermentacji metanowej w hodowli kontrolnej oraz w hodowli z dodatkiem preparatu (tzw. Lipo-Prep).
Fig. 4 przedstawia wyniki analizy Biologicznego Zapotrzebowania na Tlen (BZT) w trakcie 28 dni symulacji biodegradacji ropopochodnych z zanieczyszczonej gleby G1ORN (A) oraz gleby G2ORN (B). Symulację prowadzono w butelkach ΟΧΙ-ΤΟΡ z ciągłym pomiarem zużywanego tlenu (mg/L).
Poniższe przykłady zostały umieszczone jedynie w celu zilustrowania wynalazku oraz wyjaśnienia poszczególnych jego aspektów, a nie w celu jego ograniczenia i nie powinny być utożsamiane z całym jego zakresem, który zdefiniowano w załączonych zastrzeżeniach.
W poniższych przykładach, jeśli nie wskazano inaczej stosowano standardowe materiały i metody opisane w Sambrook J. i D.W. Russell. 2001. Molecular cloning: A laboratory manuał. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, lub postępowano zgodnie z zaleceniami producentów dla określonych materiałów i metod.
Przykłady
Przykład 1. Selekcja i identyfikacja szczepów bakterii ze zwiększoną aktywnością hydrolityczną białek i tłuszczy.
Bakterie zdolne do hydrolizy białek i tłuszczy izolowane były z próbek inokulum pochodzących z: (i) osadu surowego z oczyszczalni ścieków Czajka w Warszawie, (ii) osadu wstępnego i nadmiernego zagęszczonego z Grupowej Oczyszczalni Ścieków (GOŚ) w Łodzi, (iii) gnojowicy bydlęcej z gospodarstwa wiejskiego w Mikanowie oraz (iv) cieczy fermentacyjnej z bioreaktora w Instytucie Chemii Technik Jądrowych (IChTJ). Selekcję mikroorganizmów proteolitycznych przeprowadzono stosując podłoże Fraziera (firmy BTL). Selekcję mikroorganizmów lipolitycznych przeprowadzono stosując podłoże stałe Tributyrin Agar (firmy Sigma Aldrich). Ponadto do izolacji mikroorganizmów proteolitycznych oraz lipolitycznych używano opracowanego podłoża zawierającego wysterylizowany osad ściekowy z oczyszczalni ścieków Czajka w Warszawie zestalony agarem 15 g/l. Z próbek badanych materiałów zostały przygotowane odpowiednie rozcieńczenia oraz wykonano posiewy na wymienione podłoża selektywne. Czyste kultury charakteryzujące się różną
PL 229 447 Β1 morfologią selekcjonowano, metodą replik na świeże podłoże. Ze wszystkich prowadzonych hodowli uzyskano pulę - 100 czystych kultur. Wstępne badania aktywności rozkładu białek prowadzono na zmodyfikowanym podłożu o następującym składzie: pepton 5 g/l; ekstrakt drożdżowy 3 g/l; 10% odtłuszczone mleko. pH podłoża doprowadzono do 7-7,2 i zestalono agarem 15 g/l. Przebarwienia wokół kolonii świadczą o pozytywnym wyniku degradacji białek. Po wstępnej selekcji uzyskano pulę 65 szczepów zdolnych do rozkładu białek oraz tłuszczy. W dalszych etapach badań dokładnie określono aktywności lipolityczne i proteolityczne za pomocą testów enzymatycznych. Kolejnym etapem była eliminacja tych samych szczepów. W tym celu zastosowano metodę RFLP (ang. Restriction Fragments Length Polymorphism). Każdy z badanych szczepów poddano izolacji DNA za pomocą zestawu do izolacji genomowego DNA z bakterii, hodowli komórkowych i tkanek stałych (Genomie Mini; A&A Biotechnology). Następnie uzyskany lizat zastosowano, jako matrycę DNA w amplifikacji genu 16S rRNA z wykorzystaniem starterów 27F i 1492R (Lane, 1991). Otrzymane produkty reakcji POR strawiono enzymem Haelll i przeprowadzono analizę elektroforetyczną. Na tej podstawie wybrano unikatowe szczepy reprezentujące każde z wybranych środowisk (patrz Tab. 1).
W celu identyfikacji wyselekcjonowanych szczepów zamplifikowano geny 16S rRNA każdego ze szczepów, a następnie zsekwencjonowano. Sekwencjonowanie wykonano przy użyciu starterów 27F oraz 1492R (Lane, 1991). Analizy informatyczne obejmowały obróbkę otrzymanych sekwencji za pomocą programów: FinchTY ver. 1.4; Clone Manager Professional Suitę ver. 8.0; Blast (http;//blast,ncbimlm^ Wyniki identyfikacji czystych kultur zamieszczono w Tabeli 1.
Tabela 1. Identyfikacja bakterii wchodzących w skład konsorcjum mikroorganizmów według wynalazku rozkładającego białka i tłuszcze
| Nr szczepu. | .Pochodzenie (miejsce izolacji) | Klasyfikacja na podstawie analizy 16S rDNA | |
| Organizm | Sekwencja 16S rDNA iBKQH>NO) | ||
| P GN I | Gnojowica bydlęca z gospodarstwa więj skiego Mikanów | SPiphyloc-occiis ψ. PGŃ 1 | 1. |
| P ΜΙΧ 8 | Ciecz Fermentacyjna. Z bioreaktora z IChTJ | Badlius 8 | Λ |
| P OC 4 | Osad surowy z oczyszczalni ścieków Czajka w Warszawie | sp. POC 4 | 3 |
| P OC 9 | Oehrobadnw sp. POC 9 | 4 | |
| P OC 10 | POC 10 | $ | |
| P OC 16 | B/t-bddd sp. POC 16 | 6 | |
| P OC 21 | Brewindimonas sp. POC 21. | 7 | |
| PŚUB ί 1 | Osad wstępny i nadmierny zagęszczony z GOŚ w Lodzi | Badllus sp. PSUB 1 | 8 |
| P SUB 9 | Budłhtssp, PSUB 9 | 9 | |
| LP ΜΙΧ 2 ' | Ciecz Fermentacyjna Z bioreaktora z IChTJ | Bad/dssp. LPMIX2 | 10 |
| LP ΜIX 5 | Brewndfwws sp. LPMIX 5 | 11 | |
| LP ΜIX 6 | .ftreddMedMm sp. Ι,ΡΜΙΧ 6 | 1.2 | |
| LP OC 3 | Osad surowy z oczyszczalni ścieków Czajka w Warszawie | Baciihs sp. 1.POC 3 | 13 |
| 1 PSUB 4 | Osad wstępny i nadmierny zagęszczony z GOŚ w Łodzi | Bndfdssp. LPSUB 4 | 14 |
| LP SUB9 | AfdrtMwcus sp. LPSUB 9 | 15 | |
| LPSUB i 3 | SMidfassp. LPSUB 13 | 16 | |
| LP SUB 15 | ..... | 17 |
PL 229 447 Β1
Przykład 2. Oznaczanie aktywności zewnątrzkomórkowych enzymów proteolitycznych i lipolitycznych.
Aby wykazać, że wyselekcjonowane szczepy charakteryzują się wysoką aktywnością proteolityczną przeprowadzono szczegółowe, ilościowe oznaczenia aktywności enzymów proteolitycznych wykorzystując zmodyfikowaną metodę zaproponowaną przez firmę Sigma Aldrich opracowanej na podstawie metod Anson M. L. (1938) oraz Folin O. i Ciocalteau, V., (1929). Aktywność proteolityczna została określona pośrednio na podstawie ilości uwolnionej L-tyrozyny w mieszaninie reakcyjnej powstającej w procesie hydrolizy kazeiny przez enzymy wydzielane z wyselekcjonowanych mikroorganizmów hodowanych na podłożu minimalnym (L-asparaginy 2 g/l, glukozy 7 g/l, Na2HPO4 0,96 g/l, KH2PO4 0,44 g/l; MgSO4-7H2O 0,2 g/l, pH 7,0) z 1% kazeiną. Do 0,5 ml ogrzanego w 37°C przez 5 minut roztworu 0,65% kazeiny w 50 mM buforze fosforanowym o pH 7,5, dodano 0,1 ml hodowli bakteryjnej i inkubowano w 37°C przez 10 minut. Następnie, w celu zatrzymania reakcji dodano 0,5ml 110 mM kwasu trichlorooctowego (TCA) i ponownie inkubowano w 37°C przez 30 minut. Po okresie inkubacji mieszaninę reakcyjną odwirowano w 14 tys. RPM przez 5 min. Do 0,2 ml supernatantu dodano 0,5 ml 500 mM wodorowęglanu sodu i 0,1 ml 0,5 M odczynnika Folina & Ciolcaltea’s (Sigma Aldrich). Mieszaninę reakcyjną inkubowano w 37°C przez 30 minut i następnie odczytano absorbancję przy długości fali 660 nm. Analogicznie do powyższej metody przygotowano standardy L-tyrozyny w zakresie 0,005-0,2 mg/ml oraz próbę ślepą, do której zamiast hodowli dodano 50 mM buforu fosforanowego o pH 7,5. Ilość uwolnionych aminokwasów odczytano z krzywej wzorcowej skonstruowanej z zależności absorbancji od ilości L-tyrozyny.
Aby wykazać, że wyselekcjonowane szczepy charakteryzują się wysoką aktywnością lipolityczną przeprowadzono szczegółowe, ilościowe oznaczenia aktywności enzymów lipolitycznych wykorzystując zmodyfikowaną metodę opracowaną przez Gupta i wsp. w 2002 roku. Aktywność lipolityczna została określona pośrednio na podstawie powstałej ilości paranitrofenolu (pNP) z rozkładu palmitynianu para-nitrofenolu (pNPP), w mieszaninie reakcyjnej przez enzymy wydzielane z wyselekcjonowanych mikroorganizmów hodowanych na podłożu minimalnym (pepton 2 g/l; NH4H2PO4 1 g/l; MgSO4-7H2O 0,2 g/l; 2,5 g/l NaCI) z dodatkiem tłuszczy (oliwa z oliwek 0,5 ml/l; Tween 80 0,5 ml/l). Test prowadzono na płytkach 96-dołkowych, w temperaturze pokojowej, przez okres 1 godziny, prowadząc odczyty absorbancji przy λ=410 nm, co 10 minut. Do pojedynczego dołka dodawano 230 μΙ mieszaniny reakcyjnej (1 część roztworu pNPP o stężeniu 3 mg/ml rozpuszczanego w izopropanolu oraz 1 część roztworu gumy arabskiej o stężeniu 0,9 mg/ml, 1 część roztworu Tritonu Χ-100 o stężeniu 40 mg/ml, 1 część buforu Tris HCL pH=8,8 o stężeniu 0,5 M rozpuszczane w wodzie dejonizowanej) i 20 μΙ jednej z testowanych hodowli szczepów. Aktywność enzymatyczną odczytywano z krzywej przyrostu absorbancji w czasie na podstawie ilości uwolnionego pNP. Aktywność enzymatyczna lipazy i esterazy jest zdefiniowana w jednostkach międzynarodowych (IU). Jedną jednostkę aktywności zdefiniowano, jako ilość enzymu, która uwalnia 1 pmol pNPwciągu 1 minuty w warunkach reakcji.
Wśród wyizolowanych 17 szczepów bakterii, występują drobnoustroje, które charakteryzują się podwyższoną aktywnością proteolityczną i lipolityczną (Tab. 2). Zakres aktywności proteolitycznej dla wybranych szczepów proteolitycznych mieścił się od 0,216 lU/ml dla szczepu Staphylococcus sp. PGN 1 do 0,431 lU/ml dla szczepu Rummeliibacillus sp. POC 4. Najwyższymi aktywnościami proteolitycznymi enzymów zewnątrzkomórkowych charakteryzują się ponadto szczepy Ochrobactrum sp. POC 9 (0,386 lU/ml), Stenotrophomonas sp. POC 10 (0,310 lU/ml), Klebsiella sp. POC 16 (0,364 lU/ml), Bacillussp. PSUB 1 (0,386 lU/ml) oraz Bacillussp. PSUB9 (0,407 lU/ml). Zakres aktywności lipolitycznej dla wybranych szczepów lipolitycznych mieścił się od 0,0 lU/ml dla szczepu POC 9 do 23,83 lU/ml dla szczepu Rummeliibacillus sp. POC 4. Wysokimi aktywnościami lipolitycznymi charakteryzują się również szczepy Bacillus sp. LPOC 3 (11,905 lU/ml), Solibacillus sp. LPSUB 13 (13,115 lU/m), Stenotrophomonas sp. POC 10 (7,768 lU/ml) oraz Staphylococcus sp. PGN 1 (6,881 lU/ml) i Lysinibacillus sp. LPSUB 15 (6,416 lU/ml).
PL 229 447 Β1
Tabela 2. Wyniki aktywności proteolitycznych oraz lipolitycznych czystych kultur bakterii wchodzących w skład konsorcjum mikroorganizmów
| l.p. | Nazwa szczepu | Aktywność lipolityczną [W/ml] | proteolityczna iHWnl] |
| 1 | P GN 1. | 6,881 | 0,216 |
| 3133 | 3. v a ' l \ '33 | 3a3'3W^aa | |
| '3 ' | P OC 4 | ' ' 23,830 ' | ..... 0,431 ' |
| W* | 3333 3 | 33^3^433 | |
| 5 | ' 'pocio' | .....7.768...... | 0.310 |
| 3x^003^3. | 1 3v3'33'MW 'ś 3a33 | \ 3-'31'-»,363 3' | |
| POC21 * | 1,352 | 0.234 | |
| W | 3> 3 3.MW 3 333 | ||
| 9 | P SUB 9 ' | .....0.040 ' | ' 0.407 ' ' |
| M3 | 3a<. 33$^'' 3 'a<'; | a33CAW3<':· | |
| ii | '' LP ΜΙΧ 5 | ..... 3.551 ' ' ' | 0,1'00 |
| 3333 ^^3:333 3 | a3<a$W3C3 | ||
| 13 | ' LP OC 3 | 11.905 | 0.124 ' |
| : we | AWW»Wx' | Ό 3 'v O '33 | |
| 15 | ' LP SUB 9' | ' '' 1.594' ' | ...... 0,006 |
| 303 | OcOO.+W | *3333^333' ' x X X' ' . > ' \ XX ' X | |
| π | LP SUB 15 | ......6.416 ' | 0,185 |
Ze względu na dużą liczbę prac dotyczących aktywności enzymatycznych (proteolitycznych i lipolitycznych) oraz różnorodnych metod oznaczania tych aktywności, dane literaturowe nie wskazują jednoznacznie wzorcowych szczepów proteolitycznych i lipolitycznych. Na podstawie analizy danych literaturowych można jedynie stwierdzić, że przy wykorzystaniu wyżej opisanych metod, aktywność proteolityczna powyżej 0,2 ILJ/ml oraz aktywność lipolityczną powyżej 3,0 lU/ml są wartościami podwyższonymi. Istotne jest również, że wyniki aktywności enzymatycznej mogą odbiegać od podanych danych w zależności od składu i odczynu podłoża a także od temperatury, w jakiej prowadzono hodowle. Uzyskane i przedstawione w Tab. 2 wyniki aktywności proteolitycznej i lipolitycznej otrzymano prowadząc hodowle szczepów na podłożu z kazeiną lub oliwą z oliwek i Tween 80 jako jedynym źródłem białka i tłuszczy, odpowiednio. Hodowle prowadzono w temperaturze 37°C w podłożach o pH 7.
Przykład 3. Wyznaczanie optymalnych warunków wzrostu czystych kultur bakterii wchodzących w skład konsorcjum mikroorganizmów
W celu określenia optymalnych warunków wzrostowych oraz oporności na metale ciężkie dla pojedynczych szczepów bakterii wchodzących w skład konsorcjum i/lub preparatu, mikroorganizmy hodowano na podłożu pełnym LB w różnych warunkach wzrostowych (temperatura, pH, obecność różnych stężeń metali ciężkich).
Aby określić optymalne pH badane szczepy bakterii pasażowano na podłoże pełne LB o pH odpowiednio od 2 do 12. Gęstość hodowli na początku eksperymentu ustalono na poziomie ok 106 cfu/ml. Hodowle inkubowano przez 120 godz. w temperaturze 37°C. Pomiary wartości ODeoo nm wykonywano, co 24 godz.
W celu wyznaczenia optymalnej temperatury wzrostu badane szczepy bakterii pasażowano na podłoże pełne LB o pH 7. Hodowle prowadzono przez 120 godz. w temperaturach: 10°C, 15°C, 20°C, 25°C, 30°C, 37°C, 42°C. Pomiary wartości ODeoo nm wykonywano, co 24 godz.
Aby określić oporność czystych kultur bakterii na jony metali ciężkich kadmu, chromu, miedzi, ołowiu, niklu, cynku, badane szczepy bakterii pasażowano na podłoże pełne LB zawierające odpowiednie stężenia wybranych metali (1 mM; 2 mM; 5 mM; 7,5 mM; 10 mM; 15 mM; 25 mM; 50 mM). Hodowle
PL 229 447 Β1 prowadzono przez 48 godz. w temperaturze 37°C. Za wartość MIC (ang. Minimal Ihibiotr Concentration) przyjęto najniższe stężenie związku, przy którym nie nastąpił wzrost bakterii w postaci zmętnienia.
Uzyskane wyniki optymalnych warunków wzrostowych oraz wyznaczone oporności na metale ciężkie dla wszystkich badanych szczepów wchodzących w skład konsorcjum i/lub preparatu według wynalazku zostały przedstawione poniżej w Tabeli 3.
Tabela 3. Wyniki testów fizjologicznych dla czystych kultur bakterii wchodzących w skład konsorcjum mikroorganizmów
| Nr szczepu | Zakres temperatury wzrostu w °C | Optymalna tern peratura wzrostu w °C | Zakres wartości pFl umożl i wi aj ących wzrost | Optymalne pH do wzrostu | C Cd | | )pom< ciężki i ί Cr i | >ść na ch (M Cu | jony i icsjjj Zn | neta! mM] Ni | ii t Pb i t ' |
| P GN 1 | 10-42 | 20-25 | 2-12 | 7-9 | 2 | 10 | 7,5 | 5 | 5 | 10 |
| P ΜΙΧ 8 | 15-42 | 30 | 2-12 | 2-4 | 2 | 10 | 7,5 | 5 | 7,5 | 10 |
| P OC 4 | 10-42 | 42 | 3-12 | 7-8 | 1 | 5 | 7,5 | 5 | 5 | 10 |
| P OC 9 | 15-37 | 20 | 4-10 | 5-7 | 2 | 10 | 10 | 5 | 7,5 | 10 |
| POC 10 | 10-37 | 20-30 | 4-10 | 4-7 | 2 | 10 | 10 | 5 | 7.5 | 10 |
| P OC 16 | 15-42 | 30-37 | 2-10 | 6-8 | T | 10 | 10 | 5 | 5 | 9 |
| POC 21 | 10-37 | .30 | 5-11 | 6-10 | 2 | 10 | 7,5 | 5 | 5 | 15 |
| P SUB 1 | 15-42 | 37 | 2-11 | 10-11 | 1 | 10 | 7,5 | 5 | 5 | 10 |
| P SUB 9 | 15-42 | 37-42 | 2-11 | 10-11 | 1 | 10 | 10 | 5 | 7,5 | 10 |
| LP ΜΙΧ 2 | 20-42~ | 37 | 3-11 | 6-10 | 1 | 7,5 | 7,5 | 5 | 5 | 10 |
| LP ΜΙΧ 5 | 10-37 | 30 | 5-11 | 6-10 | 2. | 5 | 7,5 | 2 | 5 | 10 |
| LPMIX6 | 15-42 | 20-25 | 4-12 | 8-10 | 1 | 7,5 | 7,5 | 2 | 5 | 10 i |
| LP ÓC 3 | 10-42 | i i Cl 1 O co i | 3-12 | 6-10 | 1 | 7,5 | 7,5 | 5 | 5 | 10 |
| LP SUB 4 | 15-42 | 30-37 | 3-12 | 4-7 | 1 | 7,5 | 7,5 | 5 | 5 | 15 |
| LP SUB 9 | 15-42 | 30-37 | 4-12 | 9-11 | 1 | 5 | 7,5 | 5 | 5 | 10 |
| LP SUB 13 | 20-42 | 37 | 3-12 | 9-11 | l | 5 | 5 | 5 | 10 | |
| LP SUB 15 | 15-42 1 | ' 20-30 | 3-12 | 5-11 | 1 | 5 | 7,5 | 2 | 5 ί | 10 |
U wszystkich badanych szczepów bakterii obserwowano wzrost w wyżej opisanych zakresach warunków wzrostowych, które w rzeczywistości mogą stanowić niejako czynniki stresowe limitujące wzrost dla tych mikroorganizmów. Uzyskane wyniki w Tabeli 3 prezentują optymalne warunki wzrostowe charakterystyczne dla danego szczepu wchodzącego w skład konsorcjum i/lub preparatu według wynalazku. W większości szczepów optymalną temperaturą do wzrostu było 30°C i 37°C. Jedynie dla szczepu POĆ 4 i PSUB 9 temperatura była wyższa i wynosiła 42°C. Zakres temperatur, w których badano wzrost wybranych bakterii mieścił się od 10°C do 42°C, jednak żaden ze szczepów nie charakteryzował się optymalną temperaturą wzrostu poniżej 20°C. Stąd temperaturą, w której będą właściwie rozwijać się wszystkie szczepy konsorcjum mieści się w zakresie 20-37°C. W przypadku pH podłoża, na którym prowadzono hodowlę zakres badanych warunków wzrostu mieścił się od pH 2 dla do pH 12. Większość szczepów wykazywało optymalne pH podłoża w zakresie do pH 6 do pH 10. Dla szczepu ΡΜΙΧ 8 najkorzystniejszym pH podłoża było pH kwaśne w zakresie 2-4, natomiast dla szczepów PSUB 1, PSUB 9, LPSUB 9, LPSUB 13 najlepszym podłożem do wzrostu było podłoże o pH w zakresie 9-11. Stąd odczyn pH, w którym będą właściwie rozwijać się wszystkie szczepy konsorcjum mieści się w zakresie 5-10.
PL 229 447 Β1
Ponadto badano oporność wybranych 17 szczepów na obecność w podłożu metali ciężkich takich jak kadm, chrom, miedź, cynk, nikiel i ołów. W przypadku kadmu, najniższe stężenie tego metalu jakie hamowało wzrost bakterii wynosiło 2 mM dla szczepów PGN 1, ΡΜΙΧ 8, POC 4, POC 9, POC 10, POC 16, POC 21, LPMIX 5. Dla pozostałych szczepów stężenie 1 mM hamowało wzrost tych bakterii. Dla wszystkich pozostałych badanych metali ciężkich odnotowano oporność na wybrane metale ciężkie. W przypadku chromu i miedzi, szczepy wykazywały oporność w zakresie od 5 do 10 mM. Dla cynku stężenie hamujące wzrost bakterii było niższe i maksymalnie wynosiło 5 mM a dla niklu 7,5 mM. Uzyskane wyniki dla ołowiu wskazują, że zdecydowana większość szczepów jest oporna na ten metal przy stężeniu 10 mM. Dla szczepu POC 16 wartość jest niższa i wynosi 2 mM a dla POC 21 i LPSUB 4 wyższa i wynosi 15 mM.
Uzyskane wyniki wskazują na elastyczne zakresy optymalnych warunków, które umożliwiają bakteriom wzrost. Powyższe wyniki pozwalają na określenie najlepszych warunków do wzrostu (temp. 30-37°C; pH 7-10) dla skonstruowanych sztucznie mieszanin szczepów oraz konsorcjum i preparatu według wynalazku. Ponadto oporność bakterii na obecność metali ciężkich oraz szeroki zakres tolerancji dla czynników zewnętrznych pozwala na przetrwanie skonstruowanej mieszaninie mikroorganizmów nawet w tych skrajnych i niekorzystnych warunkach zewnętrznych.
Przykład 4. Konstrukcja konsorcjum i preparatu według wynalazku oraz wchodzących w jego skład mieszanin A, B, C, D, E.
Aby przygotować konsorcjum i preparat, najpierw przygotowano mniejsze mieszaniny szczepów A, B, C, D, E otrzymanych w Przykładzie 1, składające się z kilku różnych kultur bakterii. W skład mieszanin wchodzą następujące kultury bakterii:
• Mieszanina A: Stenotrophomonas sp. POC 10, Klebsiella sp. POC 16, Brevundimonas sp. POC 21, Bacillus sp. PSUB 1 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00087) • Mieszanina B: Bacillus sp. PSUB 9, Bacillus sp. LPMIX 2, Brevundimonas sp. LPMIX 5 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00088) • Mieszanina C: Brevibacterium sp. LPMIX 6, Bacillus sp. LPSUB 4, Micrococcus sp. LPSUB 9 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00089) • Mieszanina D: Staphylococcus sp. PGN 1, Solibacillus sp. LPSUB 13, Lysinibacillus sp. LPSUB 15 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00090) • Mieszanina E: Bacillus sp. ΡΜΙΧ 8, Bacillus sp. LPOC 3, Ochrobactrum sp. POC 9, Rummeliibacillus sp. POC 4 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00091)
Opis przygotowywania składowych mieszanin był identyczny. Procedura ta opiera się na otrzymaniu hodowli czystych kultur bakterii na podłożu płynnym LB. W tym celu założono hodowlę nocną w temperaturze 37°C z wytrząsaniem 120 rpm. Po okresie wzrostu bakterii na podłożu określono liczbę komórek/ml (barwienie fluorescencyjne przy użyciu barwnika DAPI) oraz zmieszano ze sobą poszczególne szczepy w równym stosunku. Gęstość komórek/ml w każdej mieszaninie (A, B, C, D, E) ustalono na 107-108. Tak przygotowane 5 mieszanin mikroorganizmów poddano liofilizacji w celu przechowywania i zdeponowano je w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów w Instytucie Immunologii i Terapii Doświadczalnej im Ludwika Hirszfielda we Wrocławiu i wykorzystano do wytworzenia właściwego konsorcjum jak i preparatu.
W celu otrzymania właściwego konsorcjum i/lub preparatu, zmieszano ze sobą wszystkie przygotowane mieszaniny w równym stosunku ilościowym (tak, aby liczba komórek/ml każdego szczepu w każdej mieszaninie była na poziomie 107—108).
Przykład 5. Degradacja osadów ściekowych z oczyszczalni ścieków.
Jednym z głównych zastosowań preparatu według wynalazku jest upłynnianie osadów ściekowych. Aby zweryfikować rzeczywistą aktywności enzymatyczną (proteolityczną i lipolityczną) szczepów wchodzących w skład skonstruowanego preparatu według wynalazku, przeprowadzono testy z osadem ściekowym z oczyszczalni ścieków w Łodzi. Eksperymenty przeprowadzono w celu sprawdzenia zastosowania preparatu według wynalazku na wydajność hydrolizy białek i tłuszczy zawartych w osadach ściekowych, co spowodowane będzie skutecznym upłynnianiem danego substratu i w efekcie możliwym wydajnym odwadnianiem osadów. Osady ściekowe są substratem, w którym podstawowym składnikiem jest woda występująca w różnych formach oraz materiał organiczny i biologiczny występujący w formie kłaczków. Ze względu na dużą ilość białek i tłuszczy w kłaczkach, mają one charakter adhezyjny i wysoką zawartość wody. Po etapie degradacji polimerów wspomnianych tłuszczy i białek, osady mogą zostać wysoce odwodnione, co może zwiększyć ich suchą masę organiczną, wartość kaloryczną a także zmniejszyć objętość do dalszego zagospodarowania odpadami.
PL 229 447 Β1
Eksperymenty przeprowadzono w warunkach laboratoryjnych w 1L butelkach w z dodatkiem osadów w stężeniu 3% suchej masy, w temperaturze 37°C przez 7 dni. Inokulum (preparat otrzymany według Przykładu 4), stanowiło 10% (v/v) całej objętości prowadzonej hodowli. W czasie trwania hodowli pobierano próby do oznaczeń parametrów fizyczno-chemicznych: pH, zawartości lotnych kwasów tłuszczowych, poziomu chemicznego zapotrzebowania na tlen, suchej masy organicznej.
Z wyników eksperymentu opartego na szacowaniu zmian zawartości lotnych kwasów tłuszczowych (LTK) oraz poziomu chemicznego zapotrzebowania na tlen (ChZT) wynika, że największy rozkład polimerów węglowodanów, białek i tłuszczy występuje po 120 h prowadzenia hodowli z użyciem preparatu (Fig. 1). Zawartość lotnych kwasów tłuszczowych w hodowli wzrasta z 3,45 g/l do 7,85 g/l. Ponadto w ciągu 48 godzin obserwuje się znaczny wzrost poziomu chemicznego zapotrzebowania na tlen (z wartości 25,8 do wartości 30,3 g/l). W przypadku hodowli kontrolnej, w której nie stosowano żadnego preparatu, zawartość LTK wzrasta jedynie do 6,19 g/l a poziom ChZT rośnie z opóźnieniem względem badanego wariantu, dopiero po 96 godzinach do maksymalnej wartości 30,3 g/l. Wzrost wartości LTK, ChZT obserwuje się także w próbie kontrolnej ze względu na rozwój autochtonicznej mikroflory występującej w wykorzystywanych osadach odpowiedzialnej za naturalny proces hydrolizy. Podwyższone wartości LTK, ChZT podczas prowadzonego procesu informują o zwiększonej ilości rozpuszczalnych substratów w podłożu. Powstałe kwasy tłuszczowe mogą ponadto odgrywać ważną rolę na etapie hydrolizy białek tłuszczy i celulozy powodując zmniejszenie stabilizacji struktury wiązań w związkach celulozy, białek i tłuszczy. W trakcie biologicznych procesów degradacji związków organicznych w osadach ściekowych istotny jest monitoring zmian zawartości suchej masy organicznej. Wyniki pokazują, że po 120 godzinach w hodowli z dodatkiem preparatu mikroorganizmów (tzw. Lipo-Prep) odnotowano spadek zawartości suchej masy organicznej o ok. 17% w badanej próbie (z 67,98% do 50,636%) oraz o 4% w próbie kontrolnej (z 67,98% do 63,85%) (Fig. 1). Spadek zwartości suchej masy organicznej podczas biodegradacji świadczy o skutecznym rozkładzie związków organicznych oraz upłynnianiu osadów ściekowych.
Zastosowanie opisanej metody wywołuje efekt zwiększonej hydrolizy oraz dostępności prostych substancji organicznych zawartych w osadach (cukry proste, aminokwasy itd.) dla dalszego biochemicznego rozkładu w warunkach beztlenowych, co w konsekwencji oznacza skrócenie fazy hydrolitycznej, przyspieszenie i intensyfikację procesów zachodzących w kolejnych fazach utylizacji osadów ściekowych - fermentacji metanowej.
Przykład 6. Wpływ preparatu według wynalazku na efektywność fermentacji metanowej wybranych osadów ściekowych z oczyszczalni ścieków - wpływ na wydajność produkcji biogazu.
Fermentacja metanowa jest jednym z najczęściej stosowanych procesów stabilizacji osadów w oczyszczalniach ścieków. Podczas biologicznego rozkładu związków organicznych złożonych z wysokocząsteczkowych substancji organicznych powstaje biogaz złożony głównie z metanu i dwutlenku węgla. Produkty powstałe w wyniku degradacji osadów ściekowych mogą być wykorzystywane przez inne grupy mikroorganizmów w całym procesie fermentacji metanowej mając wpływ na poziom i jakość uzyskiwanego biogazu. W celu weryfikacji wpływu działania preparatu według wynalazku, na jakość i wydajność produkcji biogazu założono eksperyment z mieszaninami: szczepów wchodzących w skład konsorcjum i/lub preparatu według wynalazku z konsorcjum metanogennym KM z kolekcji kultur Pracowni Analizy Skażeń Środowiska. Przeprowadzono następujące warianty eksperymentu:
(1) 50% (v/v) konsorcjum metanogennego KM o gęstości hodowli na poziomie ~109 komórek/ml (ustalanej za pomocą barwienia fluorescencyjnego DAPI i oznaczania w mikroskopii fluorescencyjnej) zmieszano z 10% (v/v) mieszaniny szczepów preparatu (tzw. LipoPrep) o gęstości hodowli na poziomie ~108 komórek/ml (2) 50% (v/v) konsorcjum metanogennego KM, (co stanowi o gęstości hodowli na poziomie ~109 komórek/ml) bez dodatku preparatu (tzw. Lipo-Prep) jako hodowla kontrolna.
Hodowle prowadzono w szklanych bioreaktorach o objętości czynnej 900 ml z wykorzystaniem mierników Ritter MGC-1 V3.3 PMMA (Dr.-Ing. RITTER Apparatebau GmbH & Co. KG, Niemcy) do pomiarów objętości biogazu. Substratem w doświadczeniu był osad ściekowy o końcowym stężeniu 3% suchej masy. Proces fermentacji metanowej prowadzono w temperaturze 37°C, przez 21 dni, codziennie monitorując objętość powstałego biogazu oraz co 7 dni jakość produkowanego biogazu. W hodowli kontrolnej oraz z dodatkiem preparatu według wynalazku, obserwowano dzienną produkcję biogazu na poziomie nieprzekraczającym 14 dm3 biogazu/dobę/kg s.m. osadów. Podczas
PL 229 447 Β1
21-dniowego eksperymentu produkcja biogazu była efektywniejsza w wariancie z dodatkiem preparatu Lipo-Prep. Całkowita skumulowana objętość biogazu wynosiła 92,25 dm3 biogazu/kg s.m. osadów, natomiast w wariancie kontrolnym - 52,5 dm3 biogazu/kg s.m. osadów. Analizy chromatograficzne GC-MS wykazały, że dodatek preparatu według wynalazku wpływa również na jakość produkowanego biogazu. Maksymalne stężenie metanu obserwowane w hodowli kontrolnej wynosiło 69,63% po 7 dniach hodowli oraz 41,05% po 14 dniach hodowli, zaś w wariantach z dodatkiem 10% (v/v) preparatu według wynalazku 78,09% i 57,03%, po 7 i 14 dniach, odpowiednio. Z użyciem preparatu według wynalazku uzyskano wzrost wydajności wytwarzania metanu od 11 do 16% w stosunku do kontroli.
Uzyskane wyniki eksperymentów świadczą o skuteczności działania preparatu według wynalazku (tzw. Lipo-Prep) w procesie beztlenowej stabilizacji osadów ściekowych. Wykorzystany preparat według wynalazku funkcjonuje w przeprowadzonym doświadczeniu jako „wzmacniacz” produkcji wysokiej jakości biogazu. Dodanie preparatu według wynalazku przyspiesza etap hydrolizy oraz wspomaga żywotność i wydajność mikroorganizmów metanogennych.
Przykład 7. Wykorzystanie preparatu według wynalazku do biodegradacji związków organicznych w skażonych glebach.
W celu sprawdzenia przydatności skonstruowanego preparatu według wynalazku (tzw. LipoPrep) w procesach bioremediacji środowisk zanieczyszczonych ropopochodnymi przeprowadzono symulację procesu bioaugmentacji dwóch typów gleb zanieczyszczonych olejami mineralnymi. Założono, że dodatek preparatu przyspieszy rozkład trudno rozkładalnych związków organicznych, a także zwiększy dynamikę rozwoju i aktywność naturalnej mikroflory.
Symulację bioaugmentacji prowadzono w 2,5 L butelkach ΟΧΙ-ΤΟΡ z dodatkiem 250 g zanieczyszczonej gleby oraz systemem do pułapkowania CO2 (10 g NaOH umieszczone w wewnętrznej zlewce). W badaniu zastosowano dwa rodzaje gleby: (i) G1ORN - zawierająca oleje mineralne w stężeniu ~ 5 700 mg/kg gleby, (ii) G2ORN - zawierająca oleje mineralne w stężeniu ~ 67 000 mg/kg gleby. Jako wariant kontrolny zastosowano glebę potraktowaną 25 ml wody nisko zmineralizowanej, zaś w wariancie badanym dodano 25 ml preparatu według wynalazku. Eksperyment prowadzono przez 21 dni w temperaturze 22°C. W trybie ciągłym monitorowano biologiczne zapotrzebowanie na tlen, na podstawie, którego oszacowano wydajność procesu biodegradacji związków ropopochodnych.
Przeprowadzone analizy wykazały, że bioaugmentacja mieszaniną szczepów wchodzących w skład preparatu według wynalazku (tzw. Lipo-Prep) zwiększa tempo degradacji związków ropopochodnych w obu testowanych glebach. Dowodem na wysoką wydajności biodegradacji z wykorzystaniem preparatu według wynalazku jest analiza biologicznego zapotrzebowania na tlen. Jak przedstawiono na Fig. 5 w trakcie 21 dni symulacji prowadzonej w systemie ΟΧΙ-TOP zużycie tlenu w wariancie z dodatkiem preparatu według wynalazku było o ~30% wyższe niż w warunkach kontrolnych dla gleby G1ORN, oraz o 17 % wyższe niż kontroli z gleba G2ORN. Potwierdzeniem funkcjonalności preparatu są także analizy chromatograficzne (GC-MS) opisujące stopień degradacji związków organicznych. Na starcie i po 21 dniach hodowli przeprowadzono 8-godzinną ekstrakcję 5 g gleby mieszaniną rozpuszczalników organicznych dichlorometan:metanol (9:1) i poddano analizie chromatograficznej GC-MS. W próbie kontrolnej z glebą GIORN zanotowano obecność 38 związków organicznych, które nie uległy rozkładowi, zaś w hodowli z dodatkiem preparatu według wynalazku zanotowano jedynie 12 związków (Tab. 4).
PL 229 447 Β1
Tabela 4. Związki organiczne zidentyfikowane w próbce gleby GIORN pobranej po 21 dniach hodowli kontrolnej niezaszczepionej preparatem według wynalazku oraz w hodowli z dodatkiem preparatu według wynalazku
| Czas ! Reiericji | Pole powierzchni | Nazwa | 2 > 1.. '52/8.. Λ 5. χ. V Λ η. 1 |
| ! 29.2 59 | /051 | J/7JU>tdn^^ _______________________J |
| ; 2W· | 1,889 | „^ίϊ/5ί559ϊ___________________ : |
| L 55. | 4.6'?8 | ________________________________! |
| Γ | 1.487 Π | 252t‘en£€i,e4i^ ac/d. ester „ „ ___ „ j |
| S 26/58 | 55 li) | _L£li2£E<£^e<i2il£!?929diL^^___________· |
| f 2^.44.5 | 0512 | ..................... Π |
| L 28.609 | ___________________________________________________j | |
| 1,554 | ........................................ i | |
| i 34,0® | 2,667 | Ο-ηκτΙμΙκΌ^.ϋίύ t |
| J 36.068 | 5.747 | ‘fó; achane : |
| i 38.022 | 7.198 | kasaac__________________ j |
| t 38,676 | 0,665 | |
| [ sos | ......7,48.......... | |
| 0,814 | _____________ __ _________ ______________ J | |
| i 39504 | :> “ ? γ | k>:7-y lcyclohexanc____________________________________________________1 |
| j 39,908 | 8.686 | ________________________________________________________________________________________________________________________________,_J |
| ΐοί III ! 1 | 0.990 | .............. _................... i |
| i 40532 | 1.961 | CWesunie _ _ _ ' |
| _____ ί 5 361 | 55^____ | |
| 0.908 | Bęnzcic ącid. 34/<te<;;ii/’fhovl.z.4;M-i’8riętb545-fnę40y^ i meUiyί ester. f 1Η1.aipiia. .2.Veta..4a.beta. .Sa alpha.)] ; | |
| 1______4/420_______ | .......1,118 ____ | (P;8iuyyheiiyl/be ί |
| L-·,-· | ______________________________________________________________________________________________J | |
| ί 4'2504 | 1529 ' ~ | 1Μκέ/> c.liJoraię i |
| ί 42.363 | ___05/8__ | 2^phuyjtenoł, decebydrc-1.2.55,ałpha,.2,beta.,4ΰ.beta., |
| ; 42,,3 97 | ~.........1,489.....' ' | ..................................................; |
| ΡΣΖΕΖ | ___1,790 __ | iewacosane | |
| j 43,00'9 | 0,983 | J^neihA55^caad££Jux^^ ________________________j |
| i | ___ 4/703 | Octacosasie i |
| ! 43,680 | 152? j | |
| i 43,833 | ........Lin......... | ..........................................................................................................[ 4<yraiaqcydQhep8i[ijil^enc __„ ___ „1 |
| pzztz: i 2?JM_ | 0594 | .................. j |
| 2,913 _ _ ' | KG5ane__________________________________________________________________________________________________________________________________________i | |
| .........0689 ...... | Cbotesiaue___ _________ _____ j - ^b ^b ^b-^b^^b^b-^br^b ^b^w^b^b-^bb^b-^b-^b ^b ^b^W^b^b-^b-^b ^b^b-^b-^b-^b^b^b-^b^b-^b^b^b ^b-^b ^b^b^^b^b^b^^b^b^b^^b^b^b-^b^^b^b ^b^b^b^b^b^b*^b^b^bxb^b^b*^b^b ^b^b^b ^b-^b^b^bbb^^b ^b-^b^b^b-^b^b-^b-^b^b^b-^b^b^b^b^b^b-^b-^b^b ^b^b ^b^b^b^b^b^b ^b ^b-^b^b-^b^b-^b^b^b^b-^b ^b^b^^b^b^b-^b^b ^b-b | |
| .....46515__ | ___1,979 | OUacosiwe_________________________________i |
| l· /2.545__ | 1__1£ŁlZL. | _______________________i |
| | 48,403 | 0,708 | DcluacoiUime , incthyl eskf ol e(h/ aiiiłKcudlaie azo pigmej\<dpha.z.> of bilivtibhin x.aipha 2hj» ; acyl ghicumiicte i |
| i 48.904 | 0.6 46 | .6£8τ-ίί5£105 knume : |
| 9.284 | ^^^Οοχνη^^ΰ^^όΟΙΤΤ^/ώΗ^ΐΙ^ 5'5 .ΙΊ/?'?.5 .Ζ§Ζ?| | |
| I >2 858 I | 2,665 | Tejradecane i |
| | 28,618 | 3.447 | aexadecaiioicacad · |
| ΐ | 3.3 74 | _____________________________________ί |
| j HO®.....1 | PZEZZZZ | ΓΛί/9.5^5_.„.„.„.....„............„...„„...„.„.„^ ............ i |
| i 36,868 j | PZZZZZZ | JJetmdecjH ic........................ j |
| Ρ385ΪΗ.....j | L __55<a L_ ' | _______________________________________________________________________________________________________________________________J |
| /38.956 J | lZ ~ z | ____________________________________________....___J |
| Γ 39.899 | I ~ 9,1 B | ’.>G(;8$<UK* ! |
| Γ__2.942__ | Dc-cohaiK__________________________ _______________j | |
| Γ. .. 43J?6 | | :.^..1.-935 | llocgsaiK· ___ ______________________________________________________-.,,,,,,-.-.-.-.,,,,,-.,-.,,..,,,-1 |
| [ 46.815 1 | | ~ 2,59< ~ | f ·Ί;Κ’Γη4|?ίΐ3ΰ i |
| Γ........35^ 1 | |~5502 | _27i±ii2^*£^lEłLhł51i2^/Eł£Lil^^^ __________1 |
* - procentowa zawartość związku w odniesieniu do związków w całej próbie
PL 229 447 Β1
Literatura
Anson, M. L., 1938. The estimation of pepsin, trypsin, papain and cathepsin with hemoglobin. J. Gen. Physiol. 22, 79-89
Folin, O. and Ciocalteau, V., 1929. On tyrosine and tryptophane determinations in proteins. J. Biol. Chem., 73, 627-650;
Gupta N., Rathi P., Gupta R., 2002. Simplified para-nitrophenyl palmitate assay for lipases and esterases. Anal. Blochem., 311:98-99;
Lane D. J., 16S/23S rRNA sequencing. 1991. (Stackebrandt E., Goodfellow M., red.) Nucleic Acid Techniques in Bacterial Systematics. John Wiley and Sons: New York;
Magrel L. 2002. Metodyka oceny efektywności procesu fermentacji metanowej wybranych osadów ściekowych. Wydanie 93 z Rozprawy Naukowe-Politechnika Białostocka;
Reis P., Holmberg K., Watzke H., Leser M.E., Miller R., 2009. Lipases at interfaces: a review. Adv. Gol. Inter. Sci., 147-148: 237-250.
PL 229 447 Β1
WYKAZ SEKWENCJI <110> Uniwersytet Warszawski, Warszawa, Polska <12 G> Lipo-Prep - preparat mikrobiologiczny do katalizowania rozkładu białek, tłuszczy <130> FK/3303/AGR <160 17 <170 Pa ten tin version 3,5 <210 1 <211> 1514 <212> DNA <213> Staphylococcus sp, PGN 1 <4001 tagagtttga tcatggctca ggatgaacgc tggcggcgtg cotaatacat gcaagtcgag60 cgaacagacg aggagcttgc tcctctgacg ttagcggcgg acgggtgagt aacacgtgga120 taacetacct ataagactgg gataacttcg ggaaaccgga getaataccg gataatatat160 tgaaccgcat ggttcaatag tgaaagaegg ttttgctgtc acttatagat ggatccgcgc240 egcattagct agttggtaag gtaacggctt accaaggcaa cgatgogtag ccgacctgag300 agggtgatcg gccacactgg aactgagaca cggtccagac tcctacggga ggcagcagta360 gggaatcttc cgcaatgggc gaaagoctga cggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggtc420 ttcggatcgt aaaactctgt tattagggaa gaacaaatgt gtaagtaact atgcacgtct480 tgacggtacc taatcagaaa gcaacggcta actacgtgcc agcagacgcg gtaatacgta540 ggtggcaagc gttatccgga attattgggc gtaaagcgcg cgtaggaggt tttttaagtc600 tgatgtg&aa geceacggct ćaacogtgga gggteattgg aaaetggaaa aettgagtgo660 agaagaggaa agtggaattc catgtgtagc ggtgaaatgc gcagagatat ggaggaacac720 oagtggcgaa ggogaatttc tggtctgtaa ctgacgctga tgtgcgaaag cgtggggatc780 aaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgagtgctaa gtgttagggg840 gtttccgccc cttagtgctg cagotaacgc attaagcact ccgcctgggg agtacgacag900 aaaggttgaa actcaaagga attgacgggg acccgcacaa gcggtggagc atgtggttta960 attcgaagca acgcgaagaa ccttaccaaa tottgacatc ctctgacccc totagagata1020 gagttttccc cttcggggga cagagtgaca ggtggtgcat ggttgtcgto agctcgtgtc1060 gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt aagcttagtt gccatcatta1140 agttgggcac rctaagttga ctgccggtga caaaceggag gaaggtgggg atgacgtcaa1200 ataataatgc accttatgat ttgggctaaa cacgtgatac aatggacaat acaaagggta1260 gcgaaaccgc gaggtcaagc aaatcccata aagttgttct cagttcggat tgtagtctgc1320 aactcgacta tatgaagctg gaatcgctag taatcgtaga tcagcatgct acggtgaata1380 cgttcecggg tettgtaeac accgcecgte acaceacgag agtttgtaae aeccgaagco1440 ggtggagtaa ccatttggag ctagccgtcg aaggtgggac aaatgattgg ggtgaagtcg 1500 taacaaggta acca1514 <210>
<211>
<212>
<213>
<400>
1202
DNA
Bacillus sp. ΡΜΙΧ 8 gcagagtttg atcatggctc aggatgaacg ctggcggcgt gcctaataca tgcaagtcga gcgaatggat taagagcttg ctcttatgaa gttagcggcg gacgggtgag taacacgtgg gtaacctgcc cataagactg ggataactcc gggaaaccgg ggctaatacc ggataacatt ttgaaccgca tggttcgaaa ttgaaaggcg gcttcggctg tcacttatgg atggacccgc gtcgcattag ctagttggtg aggtaacggc tcaccaaggc aacgatgcgt agccgacctg agagggtgat cggccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccgcaatgg acgaaagtct gacggagcaa cgccgcgtga gtgatgaagg ctttcgggte gtaaaactct gttgttaggg aagaacaagt gctagttgaa taagctggca ccttgacggt acctaaccag aaagccacgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttatcc ggaattattg ggcgtaaagc gcgcgcaggt ggtttcttaa gtctgatgtg aaagcccacg gctaaaccgt ggagggtcat tggaaactgg gagacttgag tgcagaagag gaaagtggaa ttćcatgtgt agćggtgaaa tgcgtagaga tatggaggaa caccagtggc gaaggcgact ttctggtctg taactgacac tgaggcgcga aagcgtgggg
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
PL 229 447 Β1 ageaaaeagg attagatacc ctggtagtec acgćcgtaaa cgatgagtge taagtgttag agggtttccg ccctttagtg ctgaagttaa egcattaago actccgactg gggagtaegg ćcgćaaggct gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagćggtgg agćatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac atcatctgac aaccctagag
840
900
960
1020 atagggcttc tccttcggga gcagagtgac aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt 1080 cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tgatcttagt tgccatcatt aagttgggca ctctaaggtg actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca aa
1140
1200
1202 <210> 3 <211> 1479 <212> DNA <213> Ruiwneliibacillus sp. POC 4 <400> 3 gatcatggct eaggacgaac gctggcggcg tgcctaatac atgcaagtcg agcgaatgae60 gagaagcttg ettctetgat ttagcggegg aegggtgagt aacaagtggg eaacctgacc120 tgtagactgg gataacttcg ggaaaccgga gctaataccg gataatccat ttcacctcat180 ggtgaaatgt taaaaggegc atctcgcgte actacaggat gggcccgcgg tgcattagct240 agttggtggg gtaacggcat accaaggcaa agatgcatag ccgacctgag agggtgatcg300 gccacattgg gactgagaca cggcccaaac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc360 cacaatggac gaaagtctga tggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggtt ttcggatcgb420 aaaactctgt tgtaagggaa gaacaagtac gttaggaaat gaacgtacct tgacggtacc480 ttattagaaa gecacggcta actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta ggtggeaagc540 gttgtcegga tttattgggc gtaaagęgęg ęgeaggęggt ttąttaagte tgatgtgaaa600 gcacaeggct taaccgtgga gggtaattgg aaaetgggag aattgagtgc agaagaggaa660 agtggaattc caagtgtagc ggtgaaatgc gtagagattt ggaggaacac cagtggcgaa720 ggcgaatttc tggtctgcaa ctgacgctga ggcgcgaaag catggggagc aaacaggatt780 agataccatg gtagtccatg ccgtaaacga tgagtgctaa gtgttagggg gtttccgcca840 cttagtgctg cagetaaagc attaagcact ecgaetgggg agtacgaeeg caaggttgaa900 aateaaagga attgacgggg gaccgcaaaa gcggtggagc atgtggttta attogaagoa960 acgcgaagaa ccttaccagg tattgaaatc acagtgacca etctagagat agagttttcc1020 cttcggggac attggtgaca ggtggtgcat ggttgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt1080 gggttaagtc ccgcaacgag cgćaacććtt gatcttagtt gceatcattc agttgggćac1140 tataaggtga ctgcaggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa atcatcatgc1200 cććttatgac ćtgggćtaca ćaćgtgctae aatggaćggt aćaaagagtc gctaaćtć.gć1260 gagagtaagc taatctaata aaaccgttct cagttcggat tgtaggatgc aactagccta1320 catgaagcag gaatcgatag taa-tcgcgga tcagcatgac gćggtgaata cgttcoćggg1380 ccttgtacac accgaccgtc acaccacgag agtttgtaac acccgaagtc ggtgaggtaa1440 cettttgggg ecagcegccg aaggtgggat agatgattg1479 <210>
<211>
<212>
<213>
<400>
1444
DNA
Ochrobactrum sp. POC 9 4 tagagtttga tcatggctca gaaagaacgc tggcggcagg cttaacacat gcaagtcgag cgccccgcaa ggggagcggc agacgggtga gtaacgcgtg ggaacgtaoc ttttgctacg gaataactca gggaaacttg tgctaatacc gtatgtgcac gaaaggggaa agatttateg gcaaaggatc ggcccgcgtt ggattagcta gttggtgagg taaaggctca ccaaggcgac gatccatagc tggtctgaga ggatgatcag ccacactggg actgagacac ggcccagaat cctacgggag gcagagtggg gaatattgga caatgggcgc aagcctg&tc cagccatgca gcgtgagtga tgaaggaect agggttgtaa agctetttaa ccggtgaaga taatgaeggt aaccggagaa gaagccccgg ctaacttcgt gocagcagcc gcggtaatac gaagggggct agcgttgttc ggatttactg ggcgtaaagc gcacgtaggc ggacttttaa gtcaggggtg aaatcccggg gctcaacccc ggaaatgcct ttgatactgg aagtcttgag tatggtagag gtgagtggaa ttccgagtgt agaggtgaaa ttcgtagata ttcggaggaa caacagtggę gaaggaggct cactggacaa ttactgaagc tgaggtgcga aagagtgggg agcaaacagg attagatacc etggtagtce acgccgtaaa cgafcgaatgt tagcegttgg ggagtttact cttcggtggc gaagctaacg aattaaacat tcagcctggg gagtaaggtc gcaagattaa aactaaaagg aattgacggg ggcccgaaca agcggtggag catgtggttt aattegaage aacgagcaga accttaccag cccttgaaat accgatcgcg gttagtggag acactatcet
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
PL 229 447 Β1 tcagttcggc tggatcggag acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc ctcgccctta gttgccagca ttcagttggg cactctaagg ggaetgecgg tgataagccg agaggaaggt ggggatgacg tcaagtcctc atggccctta cgggctgggc tacacacgtg ctacaatggt ggtgacagtg ggcagcgagc acgcgagtgt gagctaatet aeaaaagcca tctcagttcg gattgcactc tgcaactcga gtgcatgaag ttggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcat gcegcggtga atacgttcce gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagttggt tttacccgaa ggcgctgtgc taaccgcaag gaggcaggcg accacggtag ggtcagcgac tggggtgaag tcgtaacaag gtaa
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1440
1444
1555
DNA
StenatrophomonaB sp. POC 10 <210 <211> <212> <213> <400 aagtagagtt tggctcagag gagcttgctc tcgtggggga aggggatctt gtaaaggccc aactgagaca gcaagcctga tgttgggaaa gcaccggcta attactgggc caacctggga ctggtgtagc tggaceaaca gtagtccacg aagctaacgc attgacgggg ccttacctgg cgaacacagg gcaacgagcg ccgcaggtga cagggctaca caatcccaga gaatcgctag caccgcccgt gggcgcttgc tgatcatggc tgaacgatgg cttgggtggc taacgtaggg cggaccttgc acaaaggaga cggtccagac tceagccata gaaatccagc acttcgtgcc gtaaagcgtg actgcagtgg agtgaaatgc ctgacactga acctaaacga gttaagttcg gcccgcacaa ccttgacatg tgctgcatgg caacccttgt caaaccggag caagtactac aaccatatct taatcgcaga cacaccatgg cacggtgtgg tcagtaagtc cggtaggcct gagtggcgga aaacttacgc gcgattgaat cgatccgtag tcctacggga ccgcgtgggt aggctaatac agcagccgcg cgtaggtggt atactggacg gtagagatca ggcacgaaag tgcgaactgg ccgcctgggg gcggtggagt tcgagaactt ctgtcgtcag ecttagttgc gaaggtgggg aatggtaggg cagtccggat tcagcattgc gagtttgttg acgatgactg gtaacaaggt aacacatgca cgggtgagga taatacegca gagccgatgt ctggtctgag ggcagcagtg gaagaaggcc ctggttggga gtaatacgaa cgtttaagtc aatagagtgt ggaggaacat cgtggggagc at-gttgggtg agtacggtcg atgtggttta tccagagatg ctcgtgtcgt cagcacgtaa atgacgtaaa acagaggga t tggagtatgc tgcggtgaat caccagaagc gggtgaagtc aaccaagtag agtegaacgg ataaatcgga tacgacetac cggattagct aggatgatca gggaatattg ttcgggttgt tgacggtacc gggtgcaagc cgttgtgaaa ggtagagggt caatggcgaa aaaeaggatt caatttggaa caagactgaa attcgatgca gattggtgcc gagatgttgg tggtgggaac gtaatcatgg gcaagccggc aactcgacta acgttcccgg aggtagctta gtaacaaggt agtttgatca cagcacagag atctactttt gggtgaaagc agttggcggg gccacactgg gacaatgggc aaagcccttt caaagaataa gttactcgga gccctgggct agaggaattc ggcagctacc agataccctg cgaagtatcg actcaaagga acgcgaagaa ttcgggaact gttaagtccc tctaaggaga cccttacggc gacggtaagc catgaagtcg gccttgtaca accttcggga aacca
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1440
1500
1555
1551 DNA Klebsiella sp.
<210 <211> <212> <213>
<400 6 aagtagagtt atggctcaga gagcttgctc ggagggggat gg^g^ccttc taacggctca actgagacac caagcctgat agcggggagg caccggetaa ttactgggcg aacctgggaa aggtgtagcg ggacaaagac tgatcatggc ttgaacgctg tcgggtgacg aactaatgga gggcctcttg cctaggcgac ggtccagact gcagccatgc aagggggtaa ctccgtgcca taaagcgcac ctgcattcga gtgaaatgcg tgacgctcag
POC 16 tcagtaagtc gcggcaggcc agtggcggac aacggtagct ccatcagatg gatccctagc cctacgggag cgcgtgtatg ggttaataac gcagccgcgg gcaggcggtc aactggcagg tagagatctg gtgcgaaagc gtaacaaggt taaaacatgc 999tgagtaa aataccgcat tgcccagatg tggtctgaga gcagcagtgg aagaaggcct cttgtcgatt taatacggag tgtcaagtcg ctggagtett gaggaatacc gtggggagca aaccaagtag aagtcgaacg tgtctgggaa aacgtcgcaa ggattagcta ggatgaccag ggaatattgc tcgggttgta gacgttaccc ggtgcaagcg gatgtgaaat gtagaggggg ggtggcgaag aacaggatta agtttgaatc gtagcacaga actgcctgat gaccaaagag gtaggtgggg ccacactgga acaatgggcg aagtactttc gcagaagaag ttaatcggaa ccaagggatc gtagaattcc gcggccccct gataccetgg
120 180 240 300 360 420
480 540 600
660 720 780 040
PL 229 447 Β1 tagtacacgc gctaacgagt tgacgggggc ttacctactc gagacaggtg aacgagcgaa ecagtgataą ggctacacac catcataaag tegctagtaa gccagtcaaa gattaccaet tgtaaacgat. taagtcgacc ccgcacaagc ttgaeatcoa ctgcatggct aaccttatce aętggaggaa gtgatacaat tatgtcgtag tcgtggatca ccatgggagt t tg tg a t tęa gtcgacttgg gcctggggag ggtggagcat gagaacttag gtcgtcagct tttgttgcca ggcatataca teeggattgg gaatgccacg gggttgcaaa tgaętggggt aggttgttcc tacggccgca gtggtttaat cagagatgct cgtgttgtga gcggtccggc aegtęaagtę aagagaagcg agtetgcaac gtgaatacgt agaagtaggt gaagtcgtaa cttgaggagt aggttaaaac tcgatgcaac ttggtgcctt aatgttgggt cgggaaatca atęatggeąę acctcgcgag tcgactccat tcccgggcct agattaacct ęaąggtaaac ggcttccgga tcaaatgaat gagaagaacc cgggaaetct taagtcccgc aaggagactg ttaągagtag agcaagcgga gaagtcggaa tgtacaeacc tcgggagggc a
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1440
1500
1551 <210> 7 <211> 1065 <212> DNA <213> Brevundimonas sp, POC 21 <400 7 gccgcgtgaa tgatgaaggt cttaggattg taaaattctt tcaccgggga cgataatgac ggtaeecgga gaagaagccc cggetaaatt cgtgccagca gcagcggtaa tacgaagggg gctagegttg cteggaatta ctgggcgtaa agggegcgta ggcggategt taagtcagag gtgaaatccc agggctcaac cctggaactg cctttgatac tggegatett gagtatgaga gaggtatgtg gaaetccgag tgtagaggtg aaattcgtag atatteggaa gaacaceagt ggcgaaggcg aaatactggc tcattaatga cgctgaggag cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgat tgctagttgt cgggctgcat gcagttcggt gacgcagcta acgcattaag caatecgcct ggggagtacg gtcgcaagat taaaactcaa aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcgc agaaccttac caccttttga catgcctgga ccgccacgga gacgtggctt tccattcggg gactaggaaa caggtgctgc atggctgtag tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag teccgcaacg agcgcaaccc tcgccattag ttgccatcat ttagttggga actctaatgg gactgccggt gctaagccgg aggaaggtgg ggatgacgtc aagtcctcat ggcccttaca gggtgggata aacacgtgct acaatggaga ctacagaggg ttaatcetta aaagtcgtat cagttcggat tgtcctctge aactcgaggg catgaagttg gaategetag gaategegga teageatgea gcggtgaata egttcacggg ccttgtacac accgcccgte acaeęatggg agttggttęt accegaaggę ggtgęgętaa ęęągcagtgg aggęaęęcga ccacggtagg gtaagcgact ggggtgaagt cttaataagg taacc <210 8 <211> 1529 <212> DNA <213> Bacillus sp, PSUB 1 <400 8 tcagtaagtc gtaacaaggt aacaaagtag agtttgatca tggctcagga cgaacgctgg cggcgtgcct aatacatgca agtcgągagg acagatggga gcttgctccc tgatgttagc ggcggacggg tgagtaacac gtgggtaacc tgcctgtaag actgggataa ctccgggaaa ccggggctaa taccggatgg ttgtttgaac cgcatggttc agacataaaa ggtggcttcg gctaccactt acagatggac ccgcggcgca ttagetagtt ggtgaggtaa cggctcacca aggcgacgat gcgtagccga cctgagaggg tgatcggcca caatgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccgca atggacgaaa gtctgacgga gcaacgccgc gtgagtgatg aaggttttcg gatcgtaaag atctgttgtt agggaagaac aagtgccgtt caaatagggc ggcaccttga cggtacctaa ccagaaagcc acggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt gtacggaatt attgggcgta aagggctcgc aggcggtttc ttaagtctga tgtgaaagce cccggctcaa ccggggaggg tcattggaaa ctggggaact tgagtgcaga agaggagagt ggaattecac gtgtagcggt gaaatgcgta gagatgtgga ggaacaccag tggcgaaggc gactctctgg tctgtaactg acgctgagga gcgaaagcgt ggggagcgaa caggattaga taccetggta gtccacgccg taaacgatga gtgctaagtg ttagggggtt tccgcccctt agtgctgcag ctaacgcatt aagcactceg cctggggagt acggtcgcaa gactgaaact caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct tgaćatććtc tgacaatcct agagatagga cgtoccatte gggggćagag tgacaggtgg tgcatggttg tagtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtccagca aegagcgcaa
120 180 240 300
360 420
480 540
600 660 720 7Θ0 840
900
960 1020 1065
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
PL 229 447 Β1 cccttgatct gctacaatgg gttctcagtt gcggatcagc acgagagttt tgggacagat tagttgccag tggggatgac acagaacaaa cggatcgcag atgecgcggt gtaacacccg gattggggtg cattcagttg gtcaaatcat gggcagcgaa tctgcaactc gaatacgttc aagtcggtga aagtcgtaa ggcactctaa catgcccctt accgcgaggt gactgcgtga ecgggccttg ggtaaccttt ggtgactgcc atgaactggg taagccaatc agctggaatc tacacaccgc taggagccag ggtgacaaac ctacacaagt ccacaaatct gctagtaatc ccgtcacacc ccgccgaagg
1200
1260
1320
1380
1440
1500
1529 <210 9 <211> 1537 <212> DNA <213> Bacillus: sp, PSUB 9 <400 9 gtaagtagta acaaggtaac caagtagagt ttgatcatgg cteaggacga acgctggcgg cgtgcctaat acatgcaagt cgagcggaca gatgggagct tgctccctga tgttagcggc ggacgggtga gtaacacgtg ggtaacctgc ctgtaagact gggataactc cgggaaaccg gggctaatac cggatggttg tttgaaccgc atggttcaga cataaaaggt ggcttcggct accacttaca gatggacccg cggcgcatta gctagttggt gaggtaacgg ctcaccaagg caacgatgcg tagccgacct gagagggtga tcggccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggćagća gtagggaatc ttććgćaatg gacgaaagtć tgacggagca acgccgcgtg agtgatgaag gttttcggat cgtaaagctc tgttgttagg gaagaacaag tgccgttcaa atagggcggę aęęttgaęgg taęętaacęa gaaagęęaęg gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttgtc cggaattatt gggcgtaaag ggctcgcagg cggtttctta agtctgatgt gaaagccccc ggctcaaccg gggagggtca ttggaaactg gggaacttga gtgcagaaga ggagagtgga attccacgtg tagcggtgaa atgcgtagag atgtggagga acaccagtgg cgaaggcgac tctctggtct gtaactgacg ctgaggagcg aaagcgtggg gagcgaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa acgatgagtg ctaagtgtta gggggtttcc gccccttagt gctgcagcta acgcattaag cactccgeet ggggagtacg gtcgcaagac tgaaactcaa aggaattgac gggggcccge acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgaga agaaccttac caggtattga eatcctctga caatcctaga gataggacgt ccccttcggg ggcagagtga caggtggtgc atggttgtcg ^cagct^cgtg tcgtgagaig ttgggttsaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttgatcttag ttgccagcat tcagttgggc actctaaggt gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc aaatcatcat gccccttatg acctgggcta cacacgtgct acaatggaca gaacaaaggg cagcgaaacc gcgaggttaa gccaatccca caaatctgtt ctcagttcgg atcgcagtct gcaactcgac tgcgtgaagc tggaatcgct agtaatcgcg gatcagcatg ccgcggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccacg agagtttgta acacccgaag tcggtgaggt aaccttttag gagccagccg ccgaaggtgg gacagatgat tggggtgaag tcgtaacaag gtaacca <210 10 <211> 1590 <212> DNA <213> Bacillus sp, LPMIX 2 <400 10 aagtagagtt tgatcatggc tcaggacgaa cgctggcggc gtgcctaata catgcaagtc gagcgaatct gatgggagct tgctccctga tgattagcgg cggacgggtg agtaacacgt gggtaacctg cctgtaagac tgggataact ccgggaaacc ggggctaata ccggataact tttttcttcg catgaaggag aattgaaaga tggctccggc tatcacttac agatggaccc gcggcgcatt agctagttgg tgaggtaacg gctcaccaag gcgacgatgc gtagccgact tgagagggtg atcggccaca ctgggactga gacacggcec agactcetaa gggaggcagc agtagggaat cttccgcaat ggacgaaagt ctgacggagc aacgccgcgt gagtgatgaa ggttttcgga tcgtaaaact ctgttgttag ggaagaacaa gtatcgttcg aatagggcgg taccttgacg gtacctaacc agaaagccac ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg caagcgttgt ecggaattat tgggcgtaaa gcgcgcgcag gcggtttctt aagtctgatg tgaaatcttg cggctcaacc gcaagcggcc attggaaact gggagacttg agtgcagaag aggagagtgg aattccacgt gtagcggtga aatgcgtaga gatgtggagg aacaccagtg gcgaaggcga ctctctggtc tgtaactgac gctgaggcgc gaaagcgtgg ggagcgaaca ggattagata cęętggtagt ęcacgęęgta aacgatgagt gctaagtgtt agagggtttc cgccctttag tgctgcagct aacgcattaa gcactccgcc tggggagtac ggccgcaagg ctgaaactca aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1440
1500
1537
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
950
PL 229 447 Β1 gt-ttaatt-cg aagcaacgcg aagaacctta ccaggtct-tg acatcctctt gacctcccta1020 gagataggga tttcccttcg gggaaaggag tgacaggtgg tgcatggttg tcgtcagctc1090 gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa accttgacct tagttgccag1140 catttagttg ggcactctaa ggtgactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac1200 gtcaaatcat aatgcacctt atgaactggg ctaaacacgt gctacaatgg atggtacaaa1260 gggctgeaag aecgcgaggt ttagceaatc ccataaaace attetcagtt cggattgtaa1320 gctgaaacta gcatacatga agacggaatc gotagtaatc gcggatcage atgcagcggt1380 gaatacgttc ccgggGcttg tacacaccgc ccgtcacgcc acgagagttt gtaacacccg1440 gggtcggtag ggtaaacttt tggagceaga cggagaaggt gggggagatg agtgggtgaa1500 gtoataacgc gtaccagggt ggtgggtagt gggcgggagg agggtggagg agtaagtgag 1560 aggagggggg gaagggaagć1580 <210 11 <211> 1042 <212> DNA <213> Brsvundimonas sp. LPMIX 5 <400 11 aggattgtaa aattchttca ccggggacga taatgacggt acaaggagaa gaagcccagg60 ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggggct agcgttgctc ggaattactg120 ggcgtaaagg gcgcgtaggc ggatcgttaa gtcagaggtg aaatcacagg gctcaaccct180 ggaactgcct ttgataętgg cgatcttgag tatgagagag gtatgtggaa ctccgagtgt240 agaggtgaaa ttcgtagata ttcggaagaa cacaagtgga gaaggcgaca taatggctaa300 ttactgacgc tgaggcgcga aagcgtgggg agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc360 aćgcegtaaa cgatgattgc -tagttg-tcgg gctgćaŁgća gttćggtgac geagGtaacg420 cattaagcaa tccgcctggg gagtacggtc gcaagattaa aactcaaagg aattgacggg490 ggeccgeaea agcggtggag catgtggttt aattegaaga aacgegcaga accttaccae540 cttttgacat gcctggacag ccacggagac gtggctttcc cttcggggac taggacacag600 gtgctgaatg gctgtagtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtac cgcaacgagc660 gcaacactcg ccattagttg ccatcattta gttgggaact ctaatgggac tgccggtgct720 aagacggagg aaggtgggga tgacgtaaag tactcatggc acttaaaggg tgggatacaa780 acgtgctaca atggcgacta cagagggtta atecttaaaa gtcgtctcag ttcggattgt840 aatctgcaac tcgagggeat gaagttggaa tcgctagtaa tcgaggatca gcatgccgcg900 gggę^atacg ttaccgggcc ttgtacacgc cgcccgtcac accatgggag ttggttctac960 ccgagggggt gggctaacca gcagtggagg cagccgacca ęggtaggggt gagggactgg1020 ggggagtcgt gacaagggaa cc1042 <210 12 <211> 844 <212> DNA <213> Brwibacterium sp. LPMIX 6 <40012 ecagtagagt ctgatcatgg atcaggacga acgatggc-tg cgtgcttaaa acatgcaagt60 cgaacgctga agacgacagc ttgctgttgg tggatgagtg gcgaaagggt gagtaacacg120 tgagtaacct gaccctgatt tcgggataag cctgggaaac tgggtctaat accggatatg180 aacaatcttt gcatgagggt tggtggaaag tttttcgahc ggggatgggc tcgcggcata240 tcagcttgtt ggtggggtaa tggcctacca aggcgacgac gggtagccgg cctgagaggg300 cgaacggcca cactgggact gagaoacggc caagactcct acgggaggea gcagtgggga360 at-attgcaca atgggggaaa ccctgatgca gcgacgcagc gtgcgggatg acggccttcg420 ggttgtaaac cgcttteagc agggaagaag egaaagtgac ggtaectgca gaagaagtae480 cggataacta cgtgccagca gcagcggtaa tacgtagggt acgagagttg tccggaatta540 ttgggcgtaa agagctGgta ggtggttggt cacgtctgat gtggaaacgc aacgcttaac600 gttgcgcgtg aagtgggtac gggctgacta gagtgcagta ggggagtctg gaattcatgg660 tgtagcggtg aaatgegcag atateaggag gaacacaggt ggcgaagggg ggactotggg720 ć-tgtaac-tgg gaćtgaggag cgaaagaatg gggagćgaac agga-ttttt-t accctagtaa780 tccatgccgc aaacgttggg aactaggtgg gegggatatt cccctttatt aaaaaagaag840 agga844 <210 13 <211> 1561 <212> DNA <213> Bacillus sp. LPOC 3
PL 229 447 Β1 <400> 13 acaagtagag catggctcag gagcttgctc agactgggat tcaaggatga ttggtggggt cacactggga caatggacga agctctgttg accagaaagc tgtccggaat ccccggctca tggaattcca cgactctctg ataccctggt tagtgctgca tcaaąggaat gcgaagaacc cggggacaga taagtcccgc aggtgactgc tatgacctgg tttagccaat aagctggaat gtacacaccg tatggagcca a tttgatcatg gacgaacgct ccggatgtta aactccggga aagacggttt aatggctcac ctgagacacg aagtctgacg ttagggaaga cacggctaac tattgggcgt accggggagg cgtgtagcgg gtctgtaact agtccacgcc gctaacgcat tgaegggggc ttaccaggtc gtgacaggtg aacgagcgca cggtgacaaa gctacacacg cccataaatc cgctagtaat cccgtcacac gccgccgaag ggtcagtaag ggcggcgtgc gcggcggacg aaccggagct cggetgtcac caaggcgacg gcccagactc gagcaacgcc acaagtgcga tacgtgccag aaagggetcg gtcattggaa tgaaatgcgt gacgctgagg gtaaacgatg taagcactcc ccgcacaagc ttgacatcct gtgcatggtt accettgate ccggaggaag tgctacaatg tgttctcagt ggcggatcag cacgagagtt gtggggcaga tcgtaacaag ctaatacatg ggtgagtaac aataccggat ttacagatgg atgcgtagca ctacgggagg gcgtgagtga gagtaactgc cagccgcggt caggcggttt actgggaaac agagatgtgg agcgaaagcg agtgctaagt gcctggggag ggtggagcat ctgacaaccc gtcgtcagct ttagttgcca gtggggatga gacagaaaaa tcggatcgca catgccgcgg tgcaacaccc tgattggggt gtaaccaagt caagtcgagc aegtgggtaa agttccttga acccgcggcg gacctgagag cagcagtagg tgaaggtttt tcgcaccttg aatacgtagg ćttaagtctg ttgagtgcag aggaacacca gttagggggt tacggtcgca gtggtttaat tagagatagg cgtgtcgtga gcatttagtt cgtcaaatca agggctgcga gtctgcaact tgaatacgtt gaagtcggtg gaagtcgtaa agagtttgat gaacagaagg cctgcctgta accgcatggt cattagctag ggtgatcggc gaatcttccg cggatcgtaa acggtaccta tggcaagcgt atgtgaaage aagaggagag gtggcgaagg acaggattag ttccgcccct agactgaaac tcgaagcaac gctttcactt gatgttgggt gggcaetcta tcatgcccet gaccgcaagg cgactgcgtg accgggcctt aggtaacett caaggtaaaa
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1440
1500
1560
1561
1542 DNA
Bacillus sp. LPSUB 4 14 <210 <211> <212>
<213> <400 tcagtaagtc cggcgtgact gcggaggacg aaccggggct cggctgtaac caaggcaacg gcccagactc gagcaacgcc acaagtgcta ctacgtgcca taaagcgcgc ggtcattgga gtgaaatgcg tgacactgag cgtaaacgat ttaagcactc cccgcacaag cttgacatcc ggtgcatggt aacccttgat accggaggaa gtgctacaat ccgttctcag tcgcggatca ccaagagagt ggtgggacag gtaacaaggt aatacatgca ggtgagtaac aataccggat ttatggatgg atgcgtagcc ctacgggagg gcgtgagtga gttgaataag gcagccgcgg gcaggtggtt aactgggaga tagagatatg gcgcgaaagc gagtgctaag cgcctgggga cggtggagca tctgaaaacc tgtcgtcagc cttagttgcc ggtggggatg ggacggtaca ttcggattgt gcatgccgcg ttgtaacacc atgattgggg aaccaagcag agtcgagcga aegtgggtaa aacattttga acacgcgtcg gacctgagag cagaagtagg tgaaggcttt ctggcacctt taatacgtag tcttaagtct cttgagtgca gaggaacacc gtggggagca tgttagaggg gtacggccgc tgtggtttaa ctagagatag tcgtgtcgtg atcattaagt acgtcaaatc aagagctgca aggctgcaac gtgaatacgt cgaagtcggt tgaagtcgta agtttgatca atggattgag cctgcccata actgcatggt cattagctag ggtgatcggc gaatattccg cgggtcgtaa gacggtacct gtggcaagcg gatgtgaaag gaagaggaaa agtggcgaag aacaggatta tttccgccct aaggctgaaa ttctaagcaa ggcttctcct agatgttggg tgggcactct atcatgcccc agaccgcgag tcgcctacat tcccgggcct ggggtaacct acaaggtaac tggctcagga agettgetet agac tggga t tcgaaattga ttggtgaggt cacactggga caatggacga aactctgttg aaccagaaag ttatccggaa cccacggctc gtggaattcc gcgactttct gataccctgg ttagtgctga ctcgaaggaa cgcgaagaac tcgggagcag ttaagtcccg aaggtgactg ttatgacctg gtggagctaa gaagctggaa tgtacacacc ttttggagcc ca tgaacgetgg caagaagtta aactccggga aaggcggctt aacggctcac ctgagacacg aagtctgacg ttagggaaga ccacggctaa ttattgggcg aaccgtggag atgtgtagcg ggtctgtaac tagtccacgc agttaacgca ttgacggggg cttaccaggt agtgacaggt caacgagcgc ccggtgacaa ggctacacac tctcataaaa tcgctagtaa gcccgtcaca agccgcctaa
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1440
1500
1542
PL 229 447 Β1 <210> 15 <211> 1488 <212> DNA <213> Micrococcus sp. LPSUB 9 <400> 15 cagagtttga tcatggctca ggatgaacgc tggcggcgtg cttaacacat gcaagtcgaa cgatgaagcc cagcttgctg ggtggattag tggcgaacgg gtgagtaaca cgtgagtaac ctgcccttaa ctctgggata agcctgggaa actgggtcta ataccggata ggagcgtcca ccgcatggtg ggtgttggaa agatttatcg gttttggatg gactcgcggc ctatcagctt gttggtgagg taatggctca ccaaggcgac gacgggtagc cggcctgaga gggtgaccgg ccacactggg actgagacac ggcccagact cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgc acaatgggcg caagcctgat gcagcgacgo cgcgtgaggg atgacggcct tcgggttgta aacctctttc agtagggaag aagcgaaagt gacggtacct gcagaagaag caccggctaa ctacgtgeea gcagccgcgg taatacgtag ggtgcgagcg ttatccggaa ttattgggcg taaagagctc gtaggcggtt tgtcgcgtct gtcgtgaaag tacggggctt aaccccggat etgaggtggg tacgggcaga ctagagtgca gtaggggaga ctggaattcc tggtgtagcg gtggaatgcg cagatatcag gaggaacacc gatggcgaag gcaggtctct gggctgtaac tgacgctgag gagcgaaagc atggggagcg aacaggatta gataccctgg tagtccatgc cgtaaacgtt gggcactagg tgtggggacc attccacggt ttccgcgccg cagctaacgc attaagtgcc ccgcctgggg agtacggccg caaggctaaa acteaaagga attgaegggg gcccgcacaa gcggcggagc atgcggatta attcgatgca aegcgaagaa ccttaccaag gćttgaćatg ttctćgatcg ccgtagagat acggtttccc ctttggggcg ggttcaćagg tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaaagagcg caaccatcgt tccatgttgc cagcacgtaa tggtggggac tcatgggaga ctgccggggt caactcggag gaaggtgagg acgacgtcaa atcatcatgc cccttatgtc ttgggcttca cgcatgctac aatggccggt acaatgggtt gcgatactgt gaggtggagc tąatcęęaaa aagccggtct cagttcggat tggggtctga aactcgaccc catgaagtcg gagtcgctag taatcgcaga tcagcaacgc tgcggtgaat aagttaacgg gccttgtaaa eaacgecagt caagtcacga aagttggtaa cacccgaagc eggtggccta acccttgtgg ggggagccgt cgaaggtggg aaoagcgatt gggaataagt cgtaaeaagg taaccaag <210> 16 <211> 1557 <212> DNA <213> Solibaeillus sp. LPSUB 13 <400> 16 aaagttataa caccteggct gtatatctec ctaaoaaggt aaoctagtag agtttgatea tggctcagga egaaegctgg aggcgtgoct aatacatgaa agtcgagaga attgatttgg agcttgctcc aatgatgtta gcggcggacg ggtgagtaac acgtgggtaa cctgccttat agattgggat aacttcggga aaacggagct aatacagaat aataattttt gaaacatgtc agttagttga ąagaeggfctt ęggetgtcae tataagatgg acącgeggcg cattagetag ttggtgaggt aaaggctaac caaggaaacg atgagtagac gaactgagag ggtgatcgga cacactggga ctgagaeaag gcacagactc ctaegggagg cagcagtagg gaatcttcca caatgggcga aagactgatg gagcaacgae gagtgagtga agaaggattt cggttcgtaa aactctgttg caagggaaga acaagtagcg tagtaactgg cgctaccttg acggtacett gttagaaagc caaggctaac taegtgeeag oagaegcggt aatacgtagg tggcaagcgt tgtecggaat tattgggcgt aaagcgagcg caggtggtta cttaagtetg atgtgaaage ccacggctca aacgtggagg gtcattggaa aatggggaac ttgagtgcag aagaggaaag tggaattcaa agtgtagcgg tgaaatgcgt agagatttgg aggaaaacca gtggagaagg cgactttctg gtetgtaaet gacactgagg egcgaaagag tggggageaa aeaggattag ataecatggt agtaaaegac gtaaacgatg agtgctaagt gttggggggt ttccgcaact cagtgctgća gGtaaegcat taagćactcć gcćtggggag tacggtcgca agaGtgaaać tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagaat gtggtttaat tcgaagcaaa gcgaagaacc ttaccaggtc ttgacatccc ggtgaacact atggagacat agtttcacct tcgggggcaa cggtgacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg caacccttat tcttagttgc catcattcag ttgggcactc taaggagact gccggtgata aaccggagga aggtggggat gacgtcaaat catcatgccc attatgacct gggatacaaa cgtgctaaaa tggacggtaa aaacggttgc caaccegcga gggggagcta atccgataaa accgttctca gttcggattg taggctgcaa ctcgcctaca tgaagccgga atcgctagta atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac accacgagag tttgtaacac ccgaagtcgg tgaggtaacc
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1440
1488
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
900
960
1020
1080
1140
1200
1260
1320
1380
1440
1500
PL 229 447 Β1 ttttggagcc agccgccgaa ggtgggatag atgattgggg tgaagtagta acaaggt
1557 <210> 17 <211> 847 <212> DNA <213> Lysinibacillus śp. LPSUB 15 <400> 17 gtagagtttg gcgaacagag gcaacctacc tttcacctca ggcgcattag agagggtgat tagggaatct atttcggttc cttgacggta taggtggcaa tctgatgtga gcagaagagg accagtggcg agcaaacagg aggggtt atcatggctc aaggagcttg ttatagtttg tggtgaaaca ctagttggtg cggccacact tccacaatgg g-taaaactct ccttattaga gcgttgtccg aagcccacgg atagtggaat aaggcgacta attagatacc aggacgaacg ctccttcgac ggataactcc ctgaaagacg aggtaacggc gggachgaga gcgaaagcct gttgtaaggg aagccacggc gaattattgg ataaacagtg tccaagtgta tctggtctgt ctggtagtcc ctggcggcgt gttagcggcg gggaaaccgg gtttcggctg tcaccaaggc eaeggeccag gatggagcaa aagaacaagt taactacgtg gcgtaaagcg gagggtcatt gcggtgaaat aactgacaat acgccgtaaa gcctaataca gacgggtgag ggctaataaa tcgctatagg gacgatgcgt actccŁacgg cgccgcgtga acagtagtaa ccagcagccg cgcgaaggtg ggaaactggg gcgtagagat gagggcgcga cgatggagtg tgcaagtega taacacgtgg gaataatctg atgggcccgc agccgacctg gaggcagcag gtgaagaagg ctggctgtac cggtaatacg gtttcttaag agacttgagt ttggaggaaa aagcgtgggg ctaagtgtta
120
180
240
300
360
420
480
540
600
660
720
780
840
Claims (13)
1. Konsorcjum mikroorganizmów zdolnych do hydrolizy białek i tłuszczy w osadach ściekowych i/lub skażonych glebach, znamienne tym, że obejmuje następujące mieszaniny szczepów bakteryjnych:
- Stenotrophomonas sp. POC 10, Klebsiella sp. POC 16, Brevundimonas sp. POC 21, Bacillus sp. PSUB 1 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr depozytu B/00087); i
- Bacillus sp. PSUB 9, Bacillus sp. LPMIX 2, Brevundimonas sp. LPMIX 5 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00088); i
- Brevibacterium sp. LPMIX 6, Bacillus sp. LPSUB 4, Micrococcus sp. LPSUB 9 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00089), i
- Staphylococcussp. PGN 1, Solibacillussp. LPSUB 13, Lysinibacillussp. LPSUB 15 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00090), i
- Bacillus sp. ΡΜΙΧ 8, Bacillus sp. LPOC 3, Ochrobactrum sp. POC 9, Rummeliibacillus sp. POC 4 (mieszanina zdeponowana w PCM pod nr B/00091).
2. Konsorcjum mikroorganizmów według zastrz. 1, znamienne tym, że poszczególne szczepy w każdej mieszaninie wymieszane są w równym stosunku ilościowym.
3. Konsorcjum mikroorganizmów według zastrz. 2, znamienne tym, że wszystkie mieszaniny połączone są w równym stosunku ilościowym.
4. Preparat do katalizowania hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych, znamienny tym, że obejmuje konsorcjum mikroorganizmów według dowolnego z zastrz. 1 do 3, przy czym preparat obejmuje również substancje uzupełniające i/lub pomocnicze, przy czym związki trudno degradowane wybrane są ze związków ropopochodnych, korzystniej olei mineralnych.
5. Zastosowanie konsorcjum mikroorganizmów określonych w zastrz. 1-3 i/lub preparatu określonego w zastrz. 4 do hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i/lub związków organicznych w glebach i/lub zwiększania wydajności utylizacji osadów ściekowych podczas produkcji biogazu w procesie fermentacji metanowej i/lub zwiększenia namnażania mikroorganizmów metanogennych, przy czym związki trudno degradowane wybrane ze związków ropopochodnych, korzystniej olei mineralnych.
6. Zastosowanie według zastrz. 5, znamienne tym, że konsorcjum mikroorganizmów i/lub preparat stosowane są bezpośrednio w komorach fermentacyjnych.
PL 229 447 Β1
7. Sposób hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i/lub związków organicznych w glebach, znamienny tym, że obejmuje wykorzystanie konsorcjum mikroorganizmów określonego w zastrz. 1-3 i/lub preparatu określonego w zastrz. 4, przy czym związki trudno degradowane wybrane są ze związków ropopochodnych, korzystniej olei mineralnych.
8. Sposób według zastrz. 7, znamienny tym, że konsorcjum mikroorganizmów i/lub preparat stosowane są bezpośrednio w komorach fermentacyjnych.
9. Sposób według dowolnego z zastrz. 7-8, znamienny tym, że hydroliza prowadzona jest w warunkach tlenowych lub beztlenowych.
10. Sposób według dowolnego z zastrz. 7-9, znamienny tym, że hydroliza prowadzona jest w temperaturze od 10 do 42°C, korzystniej w 20-37°C.
11. Sposób według dowolnego z zastrz. 7-10, znamienny tym, że hydroliza prowadzona jest w pH od 2 do 12, korzystniej w zakresie pH 5-10.
12. Sposób według dowolnego z zastrz. 7-11, znamienny tym, że hydroliza w osadach ściekowych prowadzona jest w temperaturze 30-37°C przy pH 7-10.
13. Sposób według dowolnego z zastrz. 7-12, znamienny tym, że hydroliza prowadzona jest w środowisku o podwyższonym stężeniu jonów metali ciężkich, szczególnie kadmu, chromu, miedzi, ołowiu, niklu, cynku.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL413998A PL229447B1 (pl) | 2015-09-18 | 2015-09-18 | Konsorcjum mikroorganizmów zdolnych do hydrolizy białek i tłuszczy w osadach ściekowych i/lub skażonych glebach, preparat je obejmujący, zastosowanie konsorcjum oraz sposób hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i/lub związków organicznych w glebach |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL413998A PL229447B1 (pl) | 2015-09-18 | 2015-09-18 | Konsorcjum mikroorganizmów zdolnych do hydrolizy białek i tłuszczy w osadach ściekowych i/lub skażonych glebach, preparat je obejmujący, zastosowanie konsorcjum oraz sposób hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i/lub związków organicznych w glebach |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL413998A1 PL413998A1 (pl) | 2017-03-27 |
| PL229447B1 true PL229447B1 (pl) | 2018-07-31 |
Family
ID=58360263
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL413998A PL229447B1 (pl) | 2015-09-18 | 2015-09-18 | Konsorcjum mikroorganizmów zdolnych do hydrolizy białek i tłuszczy w osadach ściekowych i/lub skażonych glebach, preparat je obejmujący, zastosowanie konsorcjum oraz sposób hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i/lub związków organicznych w glebach |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL229447B1 (pl) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL442546A1 (pl) * | 2022-10-17 | 2024-04-22 | Uniwersytet Warszawski | Zastosowanie szczepu Ochrobactrum sp. POC9 i/lub kompozycji jego metabolitów do bioremediacji gleb zanieczyszczonych metalami ciężkimi i związkami organicznymi, promowania wzrostu roślin i poprawy jakości mikrobiologicznej gleby |
-
2015
- 2015-09-18 PL PL413998A patent/PL229447B1/pl unknown
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL442546A1 (pl) * | 2022-10-17 | 2024-04-22 | Uniwersytet Warszawski | Zastosowanie szczepu Ochrobactrum sp. POC9 i/lub kompozycji jego metabolitów do bioremediacji gleb zanieczyszczonych metalami ciężkimi i związkami organicznymi, promowania wzrostu roślin i poprawy jakości mikrobiologicznej gleby |
| PL247596B1 (pl) * | 2022-10-17 | 2025-08-04 | Univ Warszawski | Sposób bioremediacji gleb zanieczyszczonych metalami ciężkimi, poprawy jakości mikrobiologicznej gleby oraz promowania wzrostu roślin |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL413998A1 (pl) | 2017-03-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Alalawy et al. | Explication of structural variations in the bacterial and archaeal community of anaerobic digestion sludges: an insight through metagenomics | |
| Lee et al. | Enhanced and balanced microalgal wastewater treatment (COD, N, and P) by interval inoculation of activated sludge | |
| Nakasaki et al. | Comparison of organic matter degradation and microbial community during thermophilic composting of two different types of anaerobic sludge | |
| Tsioulpas et al. | Phenolic removal in olive oil mill wastewater by strains of Pleurotus spp. in respect to their phenol oxidase (laccase) activity | |
| Sun et al. | Performance and microbial community analysis of an algal-activated sludge symbiotic system: effect of activated sludge concentration | |
| Hong et al. | Bioaugmentation treatment of nitrogen-rich wastewater with a denitrifier with biofilm-formation and nitrogen-removal capacities in a sequencing batch biofilm reactor | |
| Fu et al. | Impacts of microaeration on the anaerobic digestion of corn straw and the microbial community structure | |
| Sasaki et al. | Syntrophic degradation of proteinaceous materials by the thermophilic strains Coprothermobacter proteolyticus and Methanothermobacter thermautotrophicus | |
| Molinuevo-Salces et al. | Performance comparison of two photobioreactors configurations (open and closed to the atmosphere) treating anaerobically degraded swine slurry | |
| Chen et al. | Effects of increasing organic loading rate on performance and microbial community shift of an up-flow anaerobic sludge blanket reactor treating diluted pharmaceutical wastewater | |
| Morales et al. | Comparison of bacterial communities in New England Sphagnum bogs using terminal restriction fragment length polymorphism (T-RFLP) | |
| Lins et al. | Impact of several antibiotics and 2-bromoethanesulfonate on the volatile fatty acid degradation, methanogenesis and community structure during thermophilic anaerobic digestion | |
| Zuo et al. | Microbial community structure analyses and cultivable denitrifier isolation of Myriophyllum aquaticum constructed wetland under low C/N ratio | |
| Zhang et al. | Effects of biomass pyrolysis derived wood vinegar on microbial activity and communities of activated sludge | |
| Quan et al. | Mechanistic study of on-site sludge reduction in a baffled bioreactor consisting of three series of alternating aerobic and anaerobic compartments | |
| Hou et al. | Metagenomics-based interpretation of the impacts of silica nanoparticles exposure on phenol treatment performance in sequencing batch reactor system | |
| US9371545B2 (en) | Consortium and preparation of microorganisms for catalyzing cellulose hydrolysis, preparation for methane fermentation supplementation, combination preparation, use thereof and method using the same | |
| Kaparullina et al. | Stenotrophomonas chelatiphaga sp. nov., a new aerobic EDTA-degrading bacterium | |
| Yasin et al. | Enhanced reduction of waste activated sludge at a low temperature by locally isolated strains Pseudomonas sp. VNT and Aeromonas sp. VNT | |
| Pascon et al. | Amylolytic microorganism from São Paulo zoo composting: isolation, identification, and amylase production | |
| Cheng et al. | Dynamic bacterial community changes in the autothermal thermophilic aerobic digestion process with cell lysis activities, shaking and temperature increase | |
| KR19990030821A (ko) | 폭기조내의 미생물을 이용한 오. 폐수처리용 미생물 처리제 및 그 제조방법 | |
| Dong et al. | Bioaugmentation with novel heterotrophic nitrifying bacteria enhances nitrogen removal in low C/N wastewater: elucidating nitrogen metabolic traits and reactor-scale validation | |
| CN110104798B (zh) | 一种用于污水处理的复合微生物制剂及应用 | |
| PL229447B1 (pl) | Konsorcjum mikroorganizmów zdolnych do hydrolizy białek i tłuszczy w osadach ściekowych i/lub skażonych glebach, preparat je obejmujący, zastosowanie konsorcjum oraz sposób hydrolizy białek, tłuszczy i związków trudno degradowanych w osadach ściekowych i/lub związków organicznych w glebach |