PL226294B1 - Lactobacillus rhamnosus bacterium strain and method for obtaining L-calcium lactate, using that strain - Google Patents
Lactobacillus rhamnosus bacterium strain and method for obtaining L-calcium lactate, using that strainInfo
- Publication number
- PL226294B1 PL226294B1 PL411316A PL41131615A PL226294B1 PL 226294 B1 PL226294 B1 PL 226294B1 PL 411316 A PL411316 A PL 411316A PL 41131615 A PL41131615 A PL 41131615A PL 226294 B1 PL226294 B1 PL 226294B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- medium
- atcc
- strain
- amount
- lactobacillus rhamnosus
- Prior art date
Links
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 title claims description 28
- MKJXYGKVIBWPFZ-CEOVSRFSSA-L calcium;(2s)-2-hydroxypropanoate Chemical compound [Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O.C[C@H](O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-CEOVSRFSSA-L 0.000 title claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 44
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 36
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 35
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 20
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 19
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 18
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 18
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 17
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 16
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 16
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 16
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 12
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 claims description 10
- 240000007054 Avena nuda Species 0.000 claims description 8
- 235000007317 Avena nuda Nutrition 0.000 claims description 8
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 7
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims description 5
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 4
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 4
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 3
- -1 K 2 HPO 4 Chemical class 0.000 claims description 3
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 3
- 239000005457 ice water Substances 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 2
- 238000007664 blowing Methods 0.000 claims description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 claims 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 claims 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 42
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 27
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- 229960000448 lactic acid Drugs 0.000 description 22
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 21
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 20
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 description 12
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 description 12
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 description 12
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 10
- 241000917009 Lactobacillus rhamnosus GG Species 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 6
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 6
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 6
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 5
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 229940059406 lactobacillus rhamnosus gg Drugs 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- USSIQXCVUWKGNF-UHFFFAOYSA-N 6-(dimethylamino)-4,4-diphenylheptan-3-one Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(CC(C)N(C)C)(C(=O)CC)C1=CC=CC=C1 USSIQXCVUWKGNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 3
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N L-Fucose Natural products C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 3
- HEBKCHPVOIAQTA-IMJSIDKUSA-N L-arabinitol Chemical compound OC[C@H](O)C(O)[C@@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N L-ribopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N 0.000 description 3
- 241000817819 Lactobacillus rhamnosus CASL Species 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 3
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 229930182843 D-Lactic acid Natural products 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N D-lactic acid Chemical compound C[C@@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 2
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 2
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 2
- 241000186673 Lactobacillus delbrueckii Species 0.000 description 2
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 description 2
- 241001177290 Lactobacillus rhamnosus ATCC 8530 Species 0.000 description 2
- 241000917016 Lactobacillus rhamnosus Lc 705 Species 0.000 description 2
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 2
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 229940022769 d- lactic acid Drugs 0.000 description 2
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 2
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 2
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N hydroquinone O-beta-D-glucopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- BJHIKXHVCXFQLS-PQLUHFTBSA-N keto-D-tagatose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-PQLUHFTBSA-N 0.000 description 2
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 2
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 2
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N (R)-amygdalin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H](C#N)C=2C=CC=CC=2)O1 XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- JJTUDXZGHPGLLC-IMJSIDKUSA-N 4511-42-6 Chemical compound C[C@@H]1OC(=O)[C@H](C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000209761 Avena Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N D-melezitose Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 101100275882 Emericella nidulans (strain FGSC A4 / ATCC 38163 / CBS 112.46 / NRRL 194 / M139) csnA gene Proteins 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 241000520134 Enterococcus mundtii Species 0.000 description 1
- 101100326871 Escherichia coli (strain K12) ygbF gene Proteins 0.000 description 1
- 101100438439 Escherichia coli (strain K12) ygbT gene Proteins 0.000 description 1
- 101100005249 Escherichia coli (strain K12) ygcB gene Proteins 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 241000577554 Lactobacillus zeae Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- AYRXSINWFIIFAE-UHFFFAOYSA-N O6-alpha-D-Galactopyranosyl-D-galactose Natural products OCC1OC(OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O)C(O)C(O)C1O AYRXSINWFIIFAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 108091081548 Palindromic sequence Proteins 0.000 description 1
- 244000140570 Pinus monophylla Species 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 101100166134 Streptococcus thermophilus (strain ATCC BAA-491 / LMD-9) cas9-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100166135 Streptococcus thermophilus (strain ATCC BAA-491 / LMD-9) cas9-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 101100329497 Thermoproteus tenax (strain ATCC 35583 / DSM 2078 / JCM 9277 / NBRC 100435 / Kra 1) cas2 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000019714 Triticale Nutrition 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- DRQXUCVJDCRJDB-UHFFFAOYSA-N Turanose Natural products OC1C(CO)OC(O)(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 DRQXUCVJDCRJDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 229940089837 amygdalin Drugs 0.000 description 1
- YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N amygdalin Natural products OCC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(C#N)c3ccccc3 YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 229960000271 arbutin Drugs 0.000 description 1
- 229920001585 atactic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 description 1
- 210000004666 bacterial spore Anatomy 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 235000015191 beet juice Nutrition 0.000 description 1
- 229920000704 biodegradable plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940057801 calcium lactate pentahydrate Drugs 0.000 description 1
- HPVJXNNKHRNBOY-VFGZHDCSSA-L calcium;(2s)-2-hydroxypropanoate;pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O.C[C@H](O)C([O-])=O HPVJXNNKHRNBOY-VFGZHDCSSA-L 0.000 description 1
- JCFHGKRSYPTRSS-UHFFFAOYSA-N calcium;2-hydroxypropanoic acid;hydrate Chemical compound O.[Ca].CC(O)C(O)=O JCFHGKRSYPTRSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 101150000705 cas1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150117416 cas2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150055191 cas3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150038500 cas9 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 101150008672 csn-1 gene Proteins 0.000 description 1
- YXVFQADLFFNVDS-UHFFFAOYSA-N diammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(C(=O)O)CC([O-])=O YXVFQADLFFNVDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000000806 elastomer Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N eucalyptosin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(OC(C#N)C=2C=CC=CC=2)OC(CO)C(O)C1O YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-CQUJWQHSSA-N gentiobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-CQUJWQHSSA-N 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N melezitose Chemical compound O([C@@]1(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)CO)CO)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- HOVAGTYPODGVJG-WLDMJGECSA-N methyl D-glucoside Chemical compound COC1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HOVAGTYPODGVJG-WLDMJGECSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N p-hydroxyphenyl beta-D-alloside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000007151 ring opening polymerisation reaction Methods 0.000 description 1
- 101150101962 rplI gene Proteins 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N turanose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(=O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 241000228158 x Triticosecale Species 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest szczep bakterii Lactobacillus rhamnosus oraz sposób otrzymywania mleczanu wapnia przy użyciu tego szczepu.The subject of the invention is a strain of Lactobacillus rhamnosus bacteria and a method of obtaining calcium lactate using this strain.
Dotychczas znane są szczepy bakterii z gatunku Lactobacillus rhamnosus, jak Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103, Lactobacillus rhamnosus GG, Lactobacillus rhamnosus Lc705, Lactobacillus rhamnosus ATCC 8530, Lactobacillus rhamnosus CASL.So far, bacterial strains of the Lactobacillus rhamnosus species are known, such as Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103, Lactobacillus rhamnosus GG, Lactobacillus rhamnosus Lc705, Lactobacillus rhamnosus ATCC 8530, Lactobacillus rhamnosus CASL.
Kwas L-mlekowy lub jego sole znajdują zastosowanie w produkcji biodegradowalnych tworzyw sztucznych - polimleczanów PLA. Produkcja biodegradowalnego polimeru PLA wymaga optycznie czystego kwasu L-mlekowego, który jest przerabiany na LL-laktyd, prekursor izotaktycznego krystalicznego kwasu polimlekowego o pożądanych cechach fizykochemicznych. L L-la ktyd poddaje się następnie reakcji polimeryzacji z otwarciem pierścienia co prowadzi do wytworzenia polilaktydu PLA. Zastosowanie do produkcji polimeru mieszaniny racemicznej DL kwasu mlekowego prowadzi do powstawania ataktycznego polimeru o strukturze bezpostaciowej i cechach elastomeru. Kwas L-mlekowy jest produkowany metodami fermentacyjnymi przy wykorzystaniu wyselekcjonowanych szczepów bakterii mlekowych zdolnych do syntezy izomeru L kwasu mlekowego. Podstawową zaletą metody fermentacyjnej jest fakt, iż przy doborze odpowiedniego mikroorganizmu otrzymuje się jeden izomer kwasu mlekowego, w przeciwieństwie do metod chemicznych, gdzie produktem jest mieszanina racemiczna. Wybór drobnoustroju do produkcji kwasu L-mlekowego metodą fermentacyjną zależy przede wszystkim od rodzaju węglowodanów stosowanych do fermentacji. Do pożądanych cech drobnoustrojów wykorzystywanych w przemyśle do produkcji tego kwasu zalicza się: zdolność do szybkiej i całkowitej fermentacji sacharydów, niskie zapotrzebowanie szczepów na substancje azotowe, wysoką wydajność produkcji, a przede wszystkim wytwarzanie pożądanej formy izomerycznej i małej ilości produktów ubocznych. Bakterie produkujące kwas mlekowy powinny być odporne na niskie pH pożywki i rosnąć w podwyższonej temperaturze 40-55°C. Cechami takimi charakteryzują się, między innymi, baterie mlekowe należące do rodzajów Lactobacillus i Enterococcus. Kwas mlekowy jest produkowany na skalę przemysłową z wykorzystaniem różnych substratów takich jak glukoza, sacharoza, sacharoza techniczna, laktoza, melasa buraczana i trzcinowa, serwatka, permeat serwatki WPC, hydrolizaty skrobi zbóż (kukurydza, owies, żyto, pszenżyto, jęczmień, pszenica, ryż) i roślin okopowych (ziemniaki, kasawa), hydrolizaty surowców lignocelulozowych.L-lactic acid or its salts are used in the production of biodegradable plastics - PLA polylactates. The production of biodegradable PLA polymer requires optically pure L-lactic acid, which is converted to LL-lactide, a precursor to the isotactic crystalline polylactic acid with the desired physicochemical characteristics. The L L-la keptide is then subjected to a ring-opening polymerization reaction leading to the production of PLA polylactide. The use of the racemic DL-lactic acid mixture in the polymer production leads to the formation of an atactic polymer with an amorphous structure and elastomer characteristics. L-lactic acid is produced by fermentation methods using selected strains of lactic bacteria capable of synthesizing the L isomer of lactic acid. The main advantage of the fermentation method is the fact that, when selecting the appropriate microorganism, one isomer of lactic acid is obtained, as opposed to chemical methods where the product is a racemic mixture. The choice of microorganism for fermentation production of L-lactic acid depends primarily on the type of carbohydrate used for fermentation. The desirable characteristics of microorganisms used in industry for the production of this acid include: the ability to quickly and completely ferment saccharides, low demand of the strains for nitrogenous substances, high production efficiency, and above all, the production of the desired isomeric form and a small amount of by-products. Lactic acid producing bacteria should be resistant to the low pH of the medium and grow at an elevated temperature of 40-55 ° C. Such features are characterized, inter alia, by lactic acid batteries belonging to the genera Lactobacillus and Enterococcus. Lactic acid is produced on an industrial scale using various substrates such as glucose, sucrose, technical sucrose, lactose, beet and cane molasses, whey, WPC whey permeate, cereal starch hydrolysates (corn, oats, rye, triticale, barley, wheat, rice). ) and root crops (potatoes, cassava), hydrolysates of lignocellulosic raw materials.
W tradycyjnej, fermentacyjnej technologii wytwarzania kwasu mlekowego wykorzystuje się szczepy bakterii Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii charakteryzujące się wysokim optimum temperatury wzrostu 50-55°C, odpornością na niskie pH i dużą szybkością fermentacji. Szczepy należące do tego gatunku wytwarzają w przewadze kwas D-mlekowy lub mieszaninę racemiczną 50% formy L i 50% formy D. Ich podstawowym ograniczeniem jest wąskie spektrum fermentowanych sacharydów, co sprawia, że mogą one fermentować jedynie niektóre substraty (glukoza, fruktoza, mannoza, sacharoza, maltoza, laktoza - 20% szczepów) i surowce zawierające te sacharydy. Bakterie Lactobacillus delbrueckii ssp. delbrueckii fermentują preferencyjnie sacharozę, a fermentacja glukozy zachodzi wolno. Ponieważ bakterie mlekowe są wrażliwe na niskie pH powodowane wytwarzaniem kwasu mlekowego, pożywkę zobojętnia się roztworem wodorotlenku sodu, wodą amoniakalną lub wodorotlenkiem wapnia. Najczęściej do pożywki dodaje się zmieloną kredę (węglan wapnia) w ilości niezbędnej do zobojętnienia powstającego kwasu mlekowego, co stabilizuje pH podczas procesu fermentacji na poziomie 5,4-5,6. Proces fermentacji zachodzi w temperaturze 50-55°C w ciągu 2 do 8 dni (zwykle 4-5 dni).The traditional fermentation technology for the production of lactic acid uses strains of Lactobacillus delbrueckii ssp. Delbrueckii bacteria characterized by a high optimum growth temperature of 50-55 ° C, resistance to low pH and high fermentation rate. Strains belonging to this species predominantly produce D-lactic acid or a racemic mixture of 50% L form and 50% D form. Their basic limitation is the narrow spectrum of fermented saccharides, which means that they can only ferment some substrates (glucose, fructose, mannose). , sucrose, maltose, lactose - 20% of the strains) and raw materials containing these saccharides. Lactobacillus delbrueckii ssp. Delbrueckii bacteria preferentially ferment sucrose and glucose fermentation is slow. Since lactic acid bacteria are sensitive to the low pH caused by the production of lactic acid, the medium is neutralized with sodium hydroxide solution, ammonia water or calcium hydroxide. Most often, ground chalk (calcium carbonate) is added to the medium in the amount necessary to neutralize the lactic acid formed, which stabilizes the pH during the fermentation process at the level of 5.4-5.6. The fermentation process takes place at a temperature of 50-55 ° C for 2 to 8 days (usually 4-5 days).
Do produkcji kwasu L-mlekowego w skali przemysłowej wykorzystuje się także szczepy bakterii Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei subspecies paracasei, Lactobacillus rhamnosus (szczepy Lactobacillus rhamnosus CASL, Lactobacillus rhamnosus M1), Lactobacillus zeae, Enterococcus faecium, Enterococcus mundtii.Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei subspecies paracasei, Lactobacillus rhamnosus (Lactobacillus rhamnosus CASL, Lactobacillus rhamnosus M1 strains), Lactobacillus zeae, Enterococcus faecium, Enterococcus faecium.
Znany jest sposób fermentacyjny wytwarzania kwasu L-mlekowego przy użyciu szczepu Lactobacillus rhamnosus CASL z hydrolizatu skrobi zawartej w bulwach manioku Manihot esculenta. Szczep ten produkuje kwas L-mlekowy z wydajnością dochodzącą do 96% osiągając końcowe stężenie produktu na poziomie 180 g/l.There is known a fermentative method for the production of L-lactic acid using the Lactobacillus rhamnosus CASL strain from the starch hydrolyzate contained in Manihot esculenta cassava tubers. This strain produces L-lactic acid with an efficiency of up to 96% reaching a final product concentration of 180 g / l.
Znany jest także sposób wytwarzania kwasu L-mlekowego przy użyciu szczepu Lactobacillus rhamnosus M1 z hydrolizatu skrobi kukurydzianej.There is also known a method of producing L-lactic acid using the Lactobacillus rhamnosus M1 strain from corn starch hydrolyzate.
PL 226 294 B1PL 226 294 B1
Wysokie wymagania pokarmowe bakterii mlekowych sprawiają że pożywka wzbogacana jest w organiczne formy azotu w postaci ekstraktu drożdżowego, namoku kukurydzianego, ekstraktu kiełków słodowych, hydrolizatów białek i innych źródeł aminokwasów oraz witamin.Due to the high nutritional requirements of lactic bacteria, the medium is enriched with organic nitrogen forms in the form of yeast extract, corn steep, malt sprout extract, protein hydrolysates and other sources of amino acids and vitamins.
Czysty kwas L-mlekowy wytwarza się także przy użyciu szczepu przetrwalnikujących bakterii Bacillus coagulans w warunkach beztlenowych oraz przy użyciu szczepu Enterococcus mundtii z surowców zawierających D-ksylozę.Pure L-lactic acid is also produced using the bacterial spore strain Bacillus coagulans under anaerobic conditions and with the Enterococcus mundtii strain from raw materials containing D-xylose.
Szczep bakterii Lactobacillus rhamnosus BioPL1 stanowiący przedmiot wynalazku, został zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów PCM w Instytucie Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk im. Ludwika Hirszfelda we Wrocławiu, pod numerem B/00049.The bacterial strain Lactobacillus rhamnosus BioPL1, which is the subject of the invention, has been deposited in the Polish Collection of PCM Microorganisms at the Institute of Immunology and Experimental Therapy of the Polish Academy of Sciences. Ludwik Hirszfeld in Wrocław, under the number B / 00049.
Szczep bakterii Lactobacillus rhamnosus BioPL1 wyizolowano z fermentującej roślinnej kiszonki paszowej. Szczep ten charakteryzuje się zdolnością do wzrostu w temperaturze 45°C, co odróżnia go od blisko spokrewnionych gatunków Lactobacillus casei oraz Lactobacillus paracasei subspecies paracasei, których optymalna temperatura wzrostu jest niższa i wynosi 37°C. Przynależność gatunkową nowego szczepu określono metodą sekwencjonowania genu 16S rybosomalnego RNA i stwierdzono, że jest on podobny do znanych szczepów Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103, Lactobacillus rhamnosus GG, Lactobacillus rhamnosus Lc705, Lactobacillus rhamnosus ATCC 8530, których sekwencje DNA zdeponowano w GenBank Database Narodowego Instytutu Zdrowia (NIH, National Institute of Health, USA) pod numerami AP011548, FM179322, NC013199, CP003094.The Lactobacillus rhamnosus BioPL1 bacterial strain was isolated from fermenting plant fodder silage. This strain is characterized by the ability to grow at a temperature of 45 ° C, which distinguishes it from closely related Lactobacillus casei and Lactobacillus paracasei subspecies paracasei species, whose optimal growth temperature is lower and amounts to 37 ° C. The species affiliation of the new strain was determined by sequencing the 16S ribosomal RNA gene and it was found to be similar to the known strains of Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103, Lactobacillus rhamnosus GG, Lactobacillus rhamnosus Lc705, Lactobacillus rhamnosus at the National Health Institute (ATCCB NIH, National Institute of Health, USA) at AP011548, FM179322, NC013199, CP003094.
Na końcu opisu jest zamieszczony wykaz pełnej sekwencji genu 16S rRNA szczepu Lactobacillus rhamnosus BioPL1, w porównaniu z analogicznymi sekwencjami genu 16S rRNA szczepów Lactobacillus rhamnosus, ATCC 53103, GG, Lc705 i ATCC 8530. Sekwencja DNA genu 16S rybosomalnego RNA szczepu BioPL1 jest w 100% zgodna z analogiczną sekwencją szczepu ATCC 8350 i różni się dwoma nukleotydami z analogiczną sekwencją szczepów GG oraz ATCC 53103 (99,9% zgodności) oraz jednym nukleotydem z sekwencją szczepu Lc705 (99,9%). Dane te wskazują jednoznacznie na przynależność szczepu BioPL1 do gatunku Lactobacillus rhamnosus, lecz jednocześnie nie świadczą o identyczności tego szczepu ze szczepem Lactobacillus rhamnosus ATCC 8530.At the end of the description there is a listing of the complete sequence of the 16S rRNA gene of the Lactobacillus rhamnosus BioPL1 strain, compared to the corresponding sequences of the 16S rRNA gene of the Lactobacillus rhamnosus strains, ATCC 53103, GG, Lc705 and ATCC 8530. The DNA sequence of the 16S ribosomal RNA gene in 100% BioPL1 is it is consistent with the analogous sequence of the ATCC 8350 strain and differs in two nucleotides with the analogous sequence of the GG and ATCC 53103 strains (99.9% agreement) and one nucleotide with the sequence of the Lc705 strain (99.9%). These data clearly indicate that the BioPL1 strain belongs to the Lactobacillus rhamnosus species, but at the same time they do not prove the identity of this strain with the Lactobacillus rhamnosus ATCC 8530 strain.
Szczep bakterii Lactobacillus rhamnosus BioPL1 wytwarza preferencyjnie wyłącznie kwas L-mlekowy i fermentuje glicerol, D-arabinozę, D-rybozę, galaktozę, glukozę, fruktozę, mannozę, ramnozę, dulcytol, inozytol, mannitol, sorbitol, N-acetyloglukozaminę, amigdalinę, arbutynę, eskulinę, salicynę, celobiozę, maltozę, laktozę, sacharozę, trehalozę, melezytozę, amidon (skrobia), gentiobiozę, tagatozę, L-fukozę, L-arabitol i glukonian oraz nie fermentuje sorbozy, metylo-D-glukozydu i turanozy. Nowy szczep zawiera system CRISPR-Cas (ang. Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-CRISPR-associated proteins), który zabezpiecza komórki bakterii przed inwazją obcego DNA fagowego lub plazmidowego. System ten składa się z czterech genów csn1, cas1, cas2, i cas3 kodujących białka sprzężone ze zgrupowanymi, regularnie przedzielonymi krótkimi palindromowymi powtórzeniami (CRISPR). Powtarzalną sekwencję nukleotydów o długości 36 par zasad w strukturze CRISPR szczepu Lactobacillus rhamnosus BioPL1 przedstawiono na końcu opisu, przy czym pogrubioną i podkreśloną czcionką zaznaczono różnice pomiędzy prostymi powtórzeniami.The bacterial strain Lactobacillus rhamnosus BioPL1 preferentially produces only L-lactic acid and ferments glycerol, D-arabinose, D-ribose, galactose, glucose, fructose, mannose, rhamnose, dulcitol, inositol, mannitol, sorbitol, N-acetylglucdalin, N-acetylglucdalin. esculin, salicin, cellobiose, maltose, lactose, sucrose, trehalose, melesitose, amidone (starch), gentiobiose, tagatose, L-fucose, L-arabitol and gluconate, and does not ferment sorbose, methyl turanone-glucoside. The new strain contains the Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-CRISPR-associated proteins (CRISPR-Cas) system, which protects bacterial cells from invasion by foreign phage or plasmid DNA. This system consists of the four genes csn1, cas1, cas2, and cas3 coding for proteins linked to clustered, regularly spaced short palindrome repeats (CRISPR). The repeating sequence of 36 bp nucleotides in the CRISPR structure of the Lactobacillus rhamnosus BioPL1 strain is shown at the end of the description, the differences between the simple repetitions in bold and underlined letters.
Region zgrupowanych regularnie przedzielonych krótkich palindromowych powtórzeń (CRISPR) zawiera 21 prostych powtórzeń o długości 36 nukleotydów i występującej 17 razy sekwencji DNA 5'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCAAGAGC-3', a także zawiera 20 unikalnych i charakterystycznych sekwencji łącznikowych (ang. spacers) o kolejności nukleotydów przedstawionej na końcu opisu, przy czym na końcu opisu, dla porównania, przedstawiono także sekwencje palindromowe powtórzeń systemu CRISPR-Cas szczepów Lactobacillus rhamnosus GG i ATCC53103.The regularly grouped spaced short palindromic repeat (CRISPR) region contains 21 straight repeats of 36 nucleotides in length with 17 times the 5'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCAAGAGC-3 'DNA sequence, and 20 unique and distinctive spacer sequences in the nucleotide sequence shown at the end of the description, and at the end of the description, for comparison, also the palindromic sequences of the CRISPR-Cas system repeats of the Lactobacillus rhamnosus GG and ATCC53103 strains.
Z porównania wynika, iż sekwencje łącznikowe systemu CRISPR-Cas szczepów Lactobacillus rhamnosus GG i ATCC53103 występują w ilości 24 sztuk i różnią się całkowicie od sekwencji łącznikowych szczepu Lactobacillus rhamnosus BioPL1.The comparison shows that the linker sequences of the CRISPR-Cas system of the Lactobacillus rhamnosus GG and ATCC53103 strains are present in the number of 24 pieces and are completely different from the linker sequences of the Lactobacillus rhamnosus BioPL1 strain.
Nowy szczep bakterii ma charakterystyczne cechy gatunku Lactobacillus rhamnosus, komórki mają kształt krótkich gramdodatnich pałeczek połączonych w łańcuszki, jest nieruchliwy, nieprzetrwalnikujący, nie wytwarza katalazy oraz oksydazy.The new strain of bacteria has the characteristic features of the Lactobacillus rhamnosus species, the cells have the shape of short gram-positive rods connected in chains, it is immobile, non-sporulating, does not produce catalase and oxidase.
Nowy szczep charakteryzuje się metabolizmem względnie heterofermentatywnym wytwarzając kwas L-mlekowy jako główny produkt fermentacji sacharydów. Spośród 49 substratów wchodzących w skład testu API 50CHL BioMerieux Francja, fermentuje 29 badanych substancji: glicerol, D-arabinozę, D-rybozę, galaktozę, glukozę, fruktozę, mannozę, ramnozę, dulcytol, inozytol, mannitol, sorbitol, N-acetylo-glukozaminę, amigdalinę, arbutynę, eskulinę, salicynę, celobiozę, maltozę, laktozę, sacharozę, trehalozę, melezytozę, amidon (skrobia), gentiobiozę, tagatozę, L-fukozę, L-arabitol, gluko4The new strain is characterized by relatively heterofermentative metabolism, producing L-lactic acid as the main product of saccharide fermentation. Of the 49 substrates included in the API 50CHL BioMerieux France test, 29 test substances are fermented: glycerol, D-arabinose, D-ribose, galactose, glucose, fructose, mannose, rhamnose, dulcitol, inositol, mannitol, sorbitol, N-acetyl-glucosamine , amygdalin, arbutin, esculin, salicin, cellobiose, maltose, lactose, sucrose, trehalose, melezitose, amidone (starch), gentiobiosis, tagatose, L-fucose, L-arabitol, glucose
PL 226 294 B1 nian. W odróżnieniu od szczepu typowego nie fermentuje sorbozy, metylo-D-glukozydu i turanozy. Fermentacja D-arabinozy, dulcytolu, skrobi (amidonu), L-fukozy L-arabitolu odróżnia ten szczep od typowych przedstawicieli tego gatunku.PL 226 294 B1. Contrary to the typical strain, it does not ferment sorbose, methyl-D-glucoside and turanose. Fermentation of D-arabinose, dulcitol, starch (amidone), L-fucose L-arabitol distinguishes this strain from typical representatives of this species.
Nowy szczep dobrze rośnie w pożywce płynnej wg De Man, Rogosa, Sharpe o nazwie handlowej MRS zawierającej fermentowane monosacharydy jak i disacharydy w ilości 2% wagowych/objętościowych. Na pożywce MRS z dodatkiem 2% wagowych/objętość D-glukozy zestalonej agarem szczep rośnie w postaci średniej wielkości wypukłych błyszczących kolonii o średnicy 2-3 mm i jasno kremowej barwie.The new strain grows well in the liquid medium according to De Man, Rogosa, Sharpe under the trade name MRS containing fermented monosaccharides and disaccharides in the amount of 2% w / v. On MRS medium supplemented with 2% w / v of agar-solidified D-glucose, the strain grows into medium-sized, convex shiny colonies 2-3 mm in diameter and light cream in color.
W systemie CRISPR pomiędzy palindromowymi powtórzeniami znajdują się unikalne sekwencje nukleotydów zwane łącznikami o długości 30-31 par zasad odpowiedzialne za odporność komórek bakterii na atak określonego bakteriofaga lub plazmidu. Sekwencje te po transkrypcji na RNA i odpowiedniej obróbce rybonukleazami, wraz z białkami Cas i Csn, rozpoznają obce DNA fagowe lub plazmidowe i hamują jego replikację. System CRISPR-Cas rejestruje historię infekcji fagowych lub plazmidowych danego szczepu i jest jego unikalną cechą genetyczną odróżniającą go od innych szczepów tego samego gatunku. Jest to rodzaj odcisku palca pozwalający na bezbłędną identyfikację szczepu zawierającego system CRISPR-Cas.In the CRISPR system, between the palindromic repeats there are unique nucleotide sequences called 30-31 bp linkers that are responsible for the resistance of bacterial cells to attack by a specific bacteriophage or plasmid. These sequences, when transcribed into RNA and appropriately processed with ribonuclease, together with the Cas and Csn proteins, recognize foreign phage or plasmid DNA and inhibit its replication. The CRISPR-Cas system records the history of phage or plasmid infections of a given strain and is its unique genetic trait that distinguishes it from other strains of the same species. It is a type of fingerprint that allows you to correctly identify the strain containing the CRISPR-Cas system.
Na końcu opisu przedstawiono także unikalną charakterystyczną sekwencję CRISPR w nowym szczepie Lactobacillus rhamnosus BioPL1, o długości 1357 par zasad.At the end of the description is also shown the unique characteristic CRISPR sequence in the new strain of Lactobacillus rhamnosus BioPL1, 1357 bp long.
Sposób otrzymywania L-mleczanu wapnia, w drodze hodowli szczepu bakterii mlekowych Lactobacillus rhamnosus, polegający na hodowli inokulum bakterii w wyjałowionej płynnej pożywce inokulacyjnej zawierającej glukozę, Pepton Bacto, ekstrakt drożdżowy, CaCO3 oraz wodę destylowaną, o początkowym pH = 7,2, w temperaturze 37-45°C w czasie 24 godziny, następnie zaszczepieniu otrzymanym inokulum wyjałowionej pożywki produkcyjnej zawierającej ekstrakt drożdżowy, produkt pochodzenia roślinnego i/lub zwierzęcego, sole mineralne, jak K2HPO4, NaH2PO4, MgSO47H2O, MnSO<H2O, nadto CaCO3 i wodę destylowaną, o początkowym pH=7,2 i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wgłębnej w warunkach beztlenowych, a po jej zakończeniu na dodaniu do bioreaktora zawiesiny Ca(OH)2, inaktywacji bakterii, oddzieleniu biomasy bakterii od brzeczki pofermentacyjnej zawierającej L-mleczan wapnia i krystalizacji L-mleczanu wapnia z brzeczki, według wynalazku charakteryzuje się tym, że stosuje się szczep bakterii Lactobacillus rhamnosus BioPL1. Hodowlę inokulum prowadzi się na pożywce zawierającej w 1 l pożywki 50 g glukozy, 5 g Pepton Bacto,10 g ekstraktu drożdżowego, 25 g CaCO3 i wodę destylowaną do 1000 ml. Hodowlę produkcyjną prowadzi się w pożywce zawierającej jako produkt pochodzenia roślinnego lub zwierzęcego sok gęsty cukrowniczy, enzymatyczny hydrolizat ziarna owsa nagiego Avena nuda, koncentrat permeatu serwatki lub glukozę w ilości 5-15% wagowych, ekstrakt drożdżowy w ilości 1-5 g/l pożywki, K2HPO4 w ilości 0,5-2,5 g/l pożywki, NaH2PO4 w ilości 0,5-2,5 g/l pożywki, MgSO47H2O w ilości 0,02-0,2 g/l pożywki, MnSO<H2O w ilości 0,05-0,2 g/l pożywki, CaCO3 w ilości 25,0-83,0 g/l pożywki i wodę destylowaną do 1000 ml, zaszczepionej inokulum użytym w ilości 10-50 ml/l, w temperaturze 35-45°C przy pH zmieniającym się samorzutnie od 7,2 do 5,2 w czasie 30-72 godziny. Krystalizację L-mleczanu wapnia z brzeczki pofermentacyjnej prowadzi się w temperaturze 0-5°C, po czym powstający krystaliczny L-mleczan wapnia oddziela się od ługu pokrystalizacyjnego, przemywa wodą lodową i suszy w suszarce próżniowej lub z nawiewem gorącego powietrza.A method of obtaining calcium L-lactate by culturing the lactobacilli strain Lactobacillus rhamnosus, consisting in culturing the inoculum of bacteria in a sterilized liquid inoculum medium containing glucose, Bacto peptone, yeast extract, CaCO3 and distilled water, with an initial pH = 7.2, at a temperature of 37-45 ° C for 24 hours, then inoculating the obtained inoculum of sterile production medium containing yeast extract, a product of plant and / or animal origin, mineral salts, such as K 2 HPO 4 , NaH 2 PO 4 , MgSO 4 7H 2 O, MnSO <H 2 O, moreover CaCO3 and distilled water, with an initial pH = 7.2 and submerged production culture under anaerobic conditions, and after its completion by adding Ca (OH) 2 suspension to the bioreactor, bacterial inactivation, separation of bacterial biomass from the wort post-fermentation containing calcium L-lactate and crystallization of calcium L-lactate from the wort, according to the invention, is characterized in that the Lact bacterial strain is used obacillus rhamnosus BioPL1. The culture of the inoculum is carried out on a medium containing 50 g of glucose, 5 g of Bacto peptone, 10 g of yeast extract, 25 g of CaCO3 and distilled water to 1000 ml in 1 liter of medium. The production culture is carried out in a nutrient medium containing sugar dense juice, enzymatic hydrolyzate of naked oat grain Avena nuda, whey permeate concentrate or glucose in the amount of 5-15% by weight, yeast extract in the amount of 1-5 g / l of the medium, as a product of plant or animal origin, K2HPO4 in the amount of 0.5-2.5 g / l of the medium, NaH2PO4 in the amount of 0.5-2.5 g / l of the medium, MgSO 4 7H 2 O in the amount of 0.02-0.2 g / l of the medium, MnSO <H 2 O in the amount of 0.05-0.2 g / l of the medium, CaCO3 in the amount of 25.0-83.0 g / l of the medium and distilled water to 1000 ml, inoculated with the inoculum used in the amount of 10-50 ml / l , at a temperature of 35-45 ° C with a spontaneously changing pH from 7.2 to 5.2 during 30-72 hours. Calcium L-lactate crystallization from the fermentation broth is carried out at a temperature of 0-5 ° C, then the formed crystalline calcium L-lactate is separated from the post-crystallization liquor, washed with ice water and dried in a vacuum dryer or with hot air blowing.
W wyniku hodowli szczepu Lactobcillus rhamnosus BioPL1 w pożywkach produkcyjnych uzyskuje się L-mleczan wapnia, który może być stosowany jako dodatek do pasz dla bydła, trzody chlewnej i drobiu. L-mleczan wapnia może być również wykorzystywany jako surowiec do otrzymywania czystego kwasu L-mlekowego do zastosowań w przemyśle spożywczym bądź do produkcji biodegradowalnych polimerów - polimleczanu PLA.By culturing the Lactobcillus rhamnosus BioPL1 strain in production media, calcium L-lactate is obtained, which can be used as a feed additive for cattle, pigs and poultry. Calcium L-lactate can also be used as a raw material for the production of pure L-lactic acid for use in the food industry or for the production of biodegradable polymers - PLA polylactate.
Przedmiot wynalazku ilustrują poniższe przykłady.The following examples illustrate the subject matter of the invention.
P r z y k ł a d 1P r z k ł a d 1
Szczep bakterii Lactobacillus rhamnosus BioPL1, przechowywany w formie zamrożonej zawiesiny komórek w pożywce MRS z dodatkiem 15% objętościowo glicerolu, uaktywniono przez jego rozmrożenie i posiew redukcyjny na zestaloną agarem pożywkę MRS, po czym płytki Petriego inkubowano w czasie od 48 do 72 godzin w temperaturze od 37 do 45°C. Po tym czasie na powierzchni pożywki agarowej wyrosły pojedyncze kolonie bakterii o średnicy od 1 do około 2,5 mm. Kolonie bakterii sprawdzono mikroskopowo pod kątem prawidłowej morfologii komórek bakterii i obecności potencjalnych zakażeń innymi bakteriami. Do sporządzenia hodowli inokulacyjnej wybrano dwa razy po trzy sprawdzone największe kolonie i przeniesiono je do 10 ml jałowej płynnej pożywki MRS o następująPL 226 294 B1 cym składzie [g/l]: glukoza 20,0, ekstrakt drożdżowy 4,0, ekstrakt mięsny 8,0, cytrynian di-amonu 2,0, wodorofosforan di-potasu 2,0, octan sodu 5,0, MgSO<7H2O 0,2, MnSO<4H2O 0,05, woda destylowana do 1000 ml. Początkowe pH pożywki nastawiono na 7,2 za pomocą 30% roztworu NaOH, rozlano po 10 ml do probówek bakteriologicznych i sterylizowano w temperaturze 121°C przez 15 minut. Zaszczepione probówki inkubowano w temperaturze od 37 do 45°C przez 16-24 godziny. Mikroskopowo sprawdzono czy otrzymane hodowle bakterii nie zawierają obcej mikroflory. Zawartość poszczególnych probówek przeniesiono jałowo do dwóch porcji po 250 ml pożywki inokulacyjnej o następującym składzie [g/l]: glukoza 50,0, Pepton Bacto 5,0, ekstrakt drożdżowy 10,0, CaCO3 25,0, woda destylowana do 1000 ml. Początkowe pH pożywki nastawiono na 7,2 za pomocą 30% roztworu NaOH, rozlano po 250 ml do butelek o pojemności 500 ml z zakrętką i sterylizowano w temperaturze 121°C przez 15 minut. Zaszczepione butelki inkubowano w temperaturze od 37 do 45°C przez 24 godziny. Po hodowli sprawdzono jakość otrzymanego inokulum metodą mikroskopową i makroskopowo. Całkowite rozpuszczenie się kredy i intensywne gazowanie wskazywało na dobrą jakość otrzymanego inokulum. Do zaszczepienia bioreaktora wybierano inokulum ocenione jako bardziej aktywne. Proces fermentacji mlekowej prowadzono w bioreaktorze o pojemności 7,0 l zawierającym 5 l jałowej pożywki o następującym składzie [g/l]: sok gęsty buraczany 66°Bx 227,3, ekstrakt drożdżowy K2HPO4 0,5, NaH2PO4 0,5, MgSO<7H2O 0,2, MnSO<H2O 0,05, CaCO3 83,4, odpieniacz „Structol” 0,2, woda destylowana do 1000 ml. Początkowe pH pożywki nastawiono na 7,2 za pomocą 30% roztworu NaOH. Pożywkę sterylizowano w bioreaktorze z włączonym mieszadłem (200 obrotów/minutę) w temperaturze 121°C przez 30 minut. Po sterylizacji i ochłodzeniu zawartości bioreaktora do temperatury roboczej uzupełniono jego zawartość do objętości 5 l jałową wodą destylowaną. Bioreaktor zaszczepiono 250 ml wcześniej przygotowanego inokulum. Proces fermentacji mlekowej prowadzono w temperaturze 42°C z mieszaniem (300 obrotów/ minutę) w czasie 45 godzin. Końcowa wartość pH pożywki fermentacyjnej wynosiła 5,2. Po zakończeniu procesu fermentacji do bioreaktora dodano 30% zawiesinę Ca(OH)2 w ilości niezbędnej do zobojętnienia wolnego kwasu mlekowego i alkalizacji środowiska do pH = 10,0. Zawartość bioreaktora ogrzano do temperatury 80°C w celu inaktywacji komórek bakterii i koagulacji białek wytworzonych w procesie fermentacji. Po ochłodzeniu do temperatury 50°C brzeczkę pofermentacyjną w ilości 4900 ml odwirowano w litrowych porcjach (4500 obrotów/min., 40°C, 15 minut). Oddzielono supernatant od skoagulowanej biomasy otrzymując 4800 ml klarownej brzeczki pofermentacyjnej i 193,3 g mokrej masy bakterii i osadów organicznych i nieorganicznych. Zawartość bezwodnego mleczanu wapnia w brzeczce pofermentacyjnej wynosiła 189 g/l, a w przeliczeniu na czysty kwas mlekowy 156,0 g/l, co stanowiło 97% wydajności konwersji cukru do kwasu L-mlekowego. Do oznaczenia zawartości kwasów D- i L-mlekowego wykorzystano testy enzymatyczne o nazwie handlowej „D-Lactic Acid Test” i „L-Lactic Acid Test” firmy Megazyme. Udział procentowy izomeru kwasu L-mlekowego w otrzymanym kwasie mlekowym wynosił 98,1%.The Lactobacillus rhamnosus BioPL1 bacterial strain, stored in the form of a frozen cell suspension in MRS medium supplemented with 15% v / v glycerol, was activated by thawing and streaking on solidified MRS agar medium, after which the Petri plates were incubated for 48 to 72 hours at a temperature from 37 to 45 ° C. After this time, single colonies of bacteria with a diameter of 1 to about 2.5 mm grew on the surface of the agar medium. Bacterial colonies were checked microscopically for normal bacterial cell morphology and for the presence of potential infections with other bacteria. For the preparation of the inoculum, three checked largest colonies were selected twice and transferred to 10 ml of sterile liquid MRS medium with the following composition [g / l]: glucose 20.0, yeast extract 4.0, meat extract 8, 0, di-ammonium citrate 2.0, di-potassium hydrogen phosphate 2.0, sodium acetate 5.0, MgSO <7H 2 O 0.2, MnSO <4H 2 O 0.05, distilled water up to 1000 ml. The initial pH of the medium was adjusted to 7.2 with 30% NaOH solution, poured 10 ml into bacteriological tubes and sterilized at 121 ° C for 15 minutes. Inoculated tubes were incubated at 37 to 45 ° C for 16-24 hours. It was checked microscopically whether the obtained bacterial cultures did not contain foreign microflora. The contents of each test tube were sterile transferred to two 250 ml portions of the inoculum medium with the following composition [g / l]: glucose 50.0, Peptone Bacto 5.0, yeast extract 10.0, CaCO3 25.0, distilled water to 1000 ml. The initial pH of the medium was adjusted to 7.2 with 30% NaOH solution, poured 250 ml into 500 ml bottles with a screw cap and sterilized at 121 ° C for 15 minutes. The inoculated bottles were incubated at 37 to 45 ° C for 24 hours. After the cultivation, the quality of the obtained inoculum was checked by microscopic and macroscopic methods. The complete dissolution of the chalk and the intense gassing indicated the good quality of the obtained inoculum. The inoculum judged to be more active was selected for inoculating the bioreactor. The lactic fermentation process was carried out in a bioreactor with a capacity of 7.0 l containing 5 l of sterile medium with the following composition [g / l]: thick beet juice 66 ° Bx 227.3, yeast extract K2HPO4 0.5, NaH2PO4 0.5, MgSO < 7H 2 O 0.2, MnSO <H 2 O 0.05, CaCO 3 83.4, "Structol" skimmer 0.2, distilled water up to 1000 ml. The initial pH of the medium was adjusted to 7.2 with 30% NaOH solution. The medium was sterilized in a bioreactor with an on stirrer (200 rpm) at 121 ° C for 30 minutes. After sterilization and cooling the contents of the bioreactor to operating temperature, its contents were made up to 5 l with sterile distilled water. The bioreactor was inoculated with 250 ml of the previously prepared inoculum. The lactic acid fermentation process was carried out at 42 ° C with stirring (300 rpm) for 45 hours. The final pH of the fermentation broth was 5.2. After completion of the fermentation process, a 30% Ca (OH) 2 suspension was added to the bioreactor in the amount necessary to neutralize the free lactic acid and make the medium alkaline to pH = 10.0. The content of the bioreactor was heated to 80 ° C in order to inactivate bacterial cells and to coagulate proteins produced in the fermentation process. After cooling to 50 ° C, 4900 ml of the fermentation broth was centrifuged in liter portions (4500 rpm, 40 ° C, 15 minutes). The supernatant was separated from the coagulated biomass, obtaining 4800 ml of clear fermentation broth and 193.3 g of wet weight of bacteria and organic and inorganic sediments. The content of anhydrous calcium lactate in the fermentation broth was 189 g / l, and in terms of pure lactic acid 156.0 g / l, which was 97% of the sugar-to-L-lactic acid conversion efficiency. To determine the content of D- and L-lactic acids, enzymatic tests under the trade name "D-Lactic Acid Test" and "L-Lactic Acid Test" by Megazyme were used. The percentage of L-lactic acid isomer in the obtained lactic acid was 98.1%.
Następnie przeprowadzono krystalizację L-mleczanu wapnia. W tym celu klarowną brzeczkę pofermentacyjną (4800 ml) przeniesiono do krystalizatora i pozostawiono w temperaturze +4°C przez 24 godziny. Zawartość krystalizatora uległa zestaleniu do gęstej pasty. Oddzielono kryształy pięciowodnego L-mleczanu wapnia przez odwirowanie powstałej pasty (4500 obrotów/ minutę, +4°C, 15 minut) otrzymując 2427 g mokrego mleczanu wapnia oraz 2400 ml ługu pokrystalizacyjnego. Mleczan wapnia wysuszono w suszarce z nawiewem powietrza (44°C) otrzymując 890,5 g suchego produktu. Ług pokrystalizacyjny zatężono w wyparce próżniowej (60°C, 120 obrotów/minutę, 9000 Pa) do 1/3 objętości (800 ml) i poddano kolejnej krystalizacji, w wyniku której otrzymano 481,3 g mokrego mleczanu wapnia. Otrzymane kryształy pięciowodnego mleczanu wapnia przemyto wodą lodową o temperaturze 0°C i odwirowano (4500 obrotów/minutę, 4°C, 15 minut). Po płukaniu otrzymano 403,2 g mokrej masy mleczanu wapnia, a po jego wysuszeniu uzyskano 171,4 g suchego mleczanu wapnia. Po krystalizacji pozostało 400 ml ługu i 300 ml popłuczyn. Ogółem z procesu fermentacji otrzymano 1061,9 g suchego L-mleczanu wapnia, co stanowiło 82,6% wydajności w przeliczeniu na wykorzystany cukier. Pozostały w ługu pokrystalizacyjnym i popłuczynach mleczan wapnia wyodrębniono dodatkowo w kolejnym procesie krystalizacji.Then crystallization of calcium L-lactate was performed. For this purpose, the clear fermentation broth (4800 ml) was transferred to a crystallizing dish and left at + 4 ° C for 24 hours. The content of the crystallizer solidified to a thick paste. The crystals of calcium L-lactate pentahydrate were separated by centrifuging the resulting paste (4500 rpm, + 4 ° C, 15 minutes), obtaining 2427 g of wet calcium lactate and 2400 ml of post-crystallization liquor. The calcium lactate was dried in a forced air oven (44 ° C), yielding 890.5 g of dry product. The post-crystallization liquor was concentrated in a vacuum evaporator (60 ° C, 120 rpm, 9000 Pa) to 1/3 volume (800 ml) and further crystallized, which gave 481.3 g of wet calcium lactate. The obtained calcium lactate pentahydrate crystals were washed with 0 ° C ice water and centrifuged (4500 rpm, 4 ° C, 15 minutes). After rinsing, 403.2 g of wet weight of calcium lactate was obtained, and after drying it, 171.4 g of dry calcium lactate was obtained. After crystallization, 400 ml of lye and 300 ml of washes remained. In total, 1061.9 g of dry calcium L-lactate were obtained from the fermentation process, which was 82.6% of the yield in terms of the sugar used. The calcium lactate remaining in the post-crystallization liquor and washings was additionally isolated in the subsequent crystallization process.
P r z y k ł a d 2P r z k ł a d 2
Proces fermentacji mlekowej prowadzono w bioreaktorze o pojemności 7,0 l zawierającym 5 l jałowej pożywki o następującym składzie [g/l]: glukoza 150,0, ekstrakt drożdżowy 5,0, K2HPO4 2,6, (NH4)2SO4 2,5, MgSO<7H2O 0,2, MnSO<H2O 0,05, CaCO3 83,4, woda wodociągowa do 1000 ml. Początkowe pH pożywki nastawiano na 7,2 za pomocą 30% roztworu NaOH. Pożywkę sterylizowano w bioreaktorze z włączonym mieszadłem (200 obrotów/minutę) w temperaturze 121°C przez 30 minut.The lactic fermentation process was carried out in a bioreactor with a capacity of 7.0 l containing 5 l of sterile medium with the following composition [g / l]: glucose 150.0, yeast extract 5.0, K2HPO4 2.6, (NH 4 ) 2 SO 4 2 , 5, MgSO <7H 2 O 0.2, MnSO <H 2 O 0.05, CaCO 3 83.4, tap water up to 1000 ml. The initial pH of the medium was adjusted to 7.2 with 30% NaOH solution. The medium was sterilized in a bioreactor with an on stirrer (200 rpm) at 121 ° C for 30 minutes.
PL 226 294 B1PL 226 294 B1
Po sterylizacji i ochłodzeniu zawartości bioreaktora do temperatury roboczej, uzupełniano jego za wartość do objętości 5 l jałową wodą destylowaną. Bioreaktor zaszczepiano 250 ml inokulum otrzymanego z nowego szczepu bakterii Lactobacillus rhamnosus BioPL1 i przygotowanego jak w przykładzie 1. Proces fermentacji mlekowej prowadzono w temperaturze 42°C z mieszaniem (300 obrotów/ minutę) w czasie 72 godzin.After sterilization and cooling the contents of the bioreactor to operating temperature, it was made up to 5 l with sterile distilled water. The bioreactor was inoculated with 250 ml of the inoculum obtained from the new bacterial strain Lactobacillus rhamnosus BioPL1 and prepared as in Example 1. The lactic acid fermentation process was carried out at 42 ° C with stirring (300 rpm) for 72 hours.
Po fermentacji zawartość bezwodnego mleczanu wapnia w brzeczce pofermentacyjnej wynosiła 139 g/l, a w przeliczeniu na czysty kwas 114,8 g/l, co stanowiło 76,5 % wydajności konwersji cukru do kwasu L-mlekowego.After fermentation, the content of anhydrous calcium lactate in the fermentation broth was 139 g / l, and in terms of pure acid 114.8 g / l, which was 76.5% of the sugar-to-L-lactic acid conversion efficiency.
P r z y k ł a d 3P r z k ł a d 3
Proces fermentacji mlekowej prowadzono w bioreaktorze o pojemności całkowitej 1000 ml zawierającym 700 ml jałowej pożywki o składzie [g/l]: glukoza 100,0, ekstrakt drożdżowy 5,0, K2HPO4 2,6, (NaH4)2SO4 2,5, CaCO3 55,6, woda destylowana do 1000 ml. Początkowe pH pożywki nastawiano na 7,0 za pomocą 30% roztworu NaOH. Pożywkę sterylizowano w autoklawie w temperaturze 121°C przez 30 minut. Do zaszczepienia hodowli produkcyjnej użyto inokulum otrzymane z nowego szczepu bakterii Lactobacillus rhamnosus BioPL1 i przygotowane jak w przykładzie 1, w ilości 70 ml. Hodowlę prowadzono w temperaturze 37°C w czasie 53 godziny z mieszaniem (300 obrotów/minutę).The lactic acid fermentation process was carried out in a bioreactor with a total capacity of 1000 ml containing 700 ml of sterile medium with the following composition [g / l]: glucose 100.0, yeast extract 5.0, K2HPO4 2.6, (NaH4) 2SO4 2.5, CaCO3 55 6, distilled water to 1000 ml. The initial pH of the medium was adjusted to 7.0 with 30% NaOH solution. The medium was autoclaved at 121 ° C for 30 minutes. For inoculation of the production culture, an inoculum obtained from a new strain of Lactobacillus rhamnosus BioPL1 bacteria and prepared as in example 1, in the amount of 70 ml was used. The cultivation was carried out at 37 ° C for 53 hours with stirring (300 rpm).
Po procesie fermentacji otrzymano roztwór mleczanu wapnia o stężeniu 105,2 g/l, a w przeliczeniu na czysty kwas 86,9 g/l, co stanowiło 93,2% wydajności konwersji cukru do kwasu L-mlekowego. W pożywce pozostało 6,8 g/l nieprzefermentowanej glukozy.After the fermentation process, a solution of calcium lactate was obtained with a concentration of 105.2 g / l, and 86.9 g / l as pure acid, which was 93.2% of the sugar-to-L-lactic acid conversion efficiency. 6.8 g / L of unfermented glucose remained in the medium.
P r z y k ł a d 4P r z k ł a d 4
Pożywka produkcyjna do fermentacji mlekowej zawierała enzymatyczny hydrolizat śruty owsa nagiego o zawartości cukrów redukujących 191,7 g/l. Hydrolizat śruty owsa nagiego przygotowano znaną metodą z 1,5 kg surowca, wykorzystując do procesu handlowe preparaty enzymatyczne - termostabilną α-amylazę „Aquazym ATL”, glukoamylazę „Spritase GA 14400” oraz słód owsiany z owsa nagiego. Proces fermentacji mlekowej prowadzono w kolbach stożkowych z płaskim dnem o pojemności 300 ml zawierających 200 ml jałowej pożywki o następującym składzie [g/l]: hydrolizat śruty owsa nagiego 625 ml (120 g cukrów redukujących), ekstrakt drożdżowy 1,0; K2HPO4 0,5, NaH2PO4 0,5, MgSO<7H2O 0,2, MnSO<H2O 0,05, CaCO3 67,0, woda destylowana do 1000 ml. Początkowe pH pożywki nastawiano na 7,2 za pomocą 30% roztworu NaOH. Pożywkę sterylizowano w autoklawie w temperaturze 121°C przez 30 minut. Do zaszczepienia hodowli produkcyjnej użyto inokulum otrzymane z nowego szczepu bakterii Lactobacillus rhamnosus BioPL1 i przygotowane jak w przykładzie 1, w ilości 10 ml. Hodowlę prowadzono w temperaturze 42°C przez 48 godzin na wytrząsarce (100 obrotów/minutę).The production medium for lactic acid fermentation contained the enzymatic hydrolyzate of naked oat middlings with a reducing sugar content of 191.7 g / l. The hydrolyzate of naked oat middlings was prepared using a known method from 1.5 kg of raw material, using commercial enzyme preparations - thermostable α-amylase "Aquazym ATL", glucoamylase "Spritase GA 14400" and naked oat malt. The lactic acid fermentation process was carried out in 300 ml flat bottom conical flasks containing 200 ml of sterile medium with the following composition [g / l]: hydrolyzate of naked oat meal 625 ml (120 g reducing sugars), yeast extract 1.0; K2HPO4 0.5, NaH2PO4 0.5, MgSO <7H 2 O 0.2, MnSO <H 2 O 0.05, CaCO 3 67.0, distilled water to 1000 ml. The initial pH of the medium was adjusted to 7.2 with 30% NaOH solution. The medium was autoclaved at 121 ° C for 30 minutes. To inoculate the production culture, the inoculum obtained from the new strain of Lactobacillus rhamnosus BioPL1 bacteria and prepared as in example 1, in the amount of 10 ml was used. The cultivation was carried out at 42 ° C for 48 hours on a shaker (100 rpm).
Po procesie fermentacji otrzymano roztwór mleczanu wapnia o stężeniu 117,7 g/l, a w przeliczeniu na czysty kwas 97,2 g/l, co stanowiło 90,7% wydajności konwersji cukru do kwasu mlekowego. Udział procentowy izomeru kwasu L-mlekowego w otrzymanym kwasie mlekowym wynosił 98,5%.After the fermentation process, a calcium lactate solution was obtained with a concentration of 117.7 g / l, and in terms of pure acid 97.2 g / l, which was 90.7% of the sugar-lactic acid conversion efficiency. The percentage of L-lactic acid isomer in the obtained lactic acid was 98.5%.
P r z y k ł a d 5P r z k ł a d 5
Proces fermentacji mlekowej prowadzono w kolbach stożkowych z płaskim dnem o pojemności 500 ml zawierających 200 ml jałowej pożywki o następującym składzie [g/l]: koncentrat permeatu serwatki (80% wagowych laktozy) 150,0, ekstrakt drożdżowy 5,0, K2HPO4 2,6, MgSO47H2O 0,2, MnSO<H2O 0,05, CaCO3 67,0, woda destylowana do 1000 ml. Początkowe pH pożywki nastawiano na 7,2 za pomocą 30% roztworu NaOH. Pożywkę sterylizowano w autoklawie w temperaturze 121°C przez 30 minut. Do zaszczepienia hodowli produkcyjnej użyto inokulum otrzymane z nowego szczepu bakterii Lactobacillus rhamnosus BioPL1 i przygotowane jak w przykładzie 1, w ilości 10 ml. Hodowlę prowadzono w temperaturze 42°C przez 48 godzin na wytrząsarce (100 obrotów/minutę).The lactic acid fermentation process was carried out in 500 ml flat-bottomed conical flasks containing 200 ml of sterile medium with the following composition [g / l]: whey permeate concentrate (80% by weight lactose) 150.0, yeast extract 5.0, K 2 HPO 4 2.6, MgSO 4 7H 2 O 0.2, MnSO <H 2 O 0.05, CaCO3 67.0, distilled water to 1000 ml. The initial pH of the medium was adjusted to 7.2 with 30% NaOH solution. The medium was autoclaved at 121 ° C for 30 minutes. To inoculate the production culture, the inoculum obtained from the new strain of Lactobacillus rhamnosus BioPL1 bacteria and prepared as in example 1, in the amount of 10 ml was used. The cultivation was carried out at 42 ° C for 48 hours on a shaker (100 rpm).
Po procesie fermentacji otrzymano roztwór mleczanu wapnia o stężeniu 125,7 g/l, a w przeliczeniu na czysty kwas 103,8 g/l, co stanowiło 86,5% wydajności konwersji laktozy do kwasu mlekowego.After the fermentation process, a calcium lactate solution was obtained with a concentration of 125.7 g / l, and in terms of pure acid 103.8 g / l, which was 86.5% of the efficiency of lactose conversion to lactic acid.
PL 226 294 B1PL 226 294 B1
Wykaz pełnej sekwencji genu 16S rRNA szczepu Lactobacillns rhamnosus BioPLlList of the full sequence of the 16S rRNA gene of the Lactobacillns rhamnosus BioPLl strain
BioPLl (1)BioPLl (1)
GG (1)GG (1)
ATCC 53103 (1)ATCC 53103 (1)
ATCC 8530 [1)ATCC 8530 [1)
Lc705 [1)Lc705 [1)
Konsensus [1)Consensus [1)
BioPLl (51)BioPLl (51)
GG (51)GG (51)
ATCC 53103 (51)ATCC 53103 (51)
ATCC 8530 (51)ATCC 8530 (51)
Lc705 (51)Lc705 (51)
Konsensus (51)Consensus (51)
BioPLl (101)BioPLl (101)
GG (101)GG (101)
ATCC 53103 (101)ATCC 53103 (101)
ATCC 8530 (101)ATCC 8530 (101)
Lc705 (101)Lc705 (101)
Konsensus (101)Consensus (101)
BioPLl (151)BioPLl (151)
GG (151)GG (151)
ATCC 53103 (151)ATCC 53103 (151)
ATCC 8530 (151)ATCC 8530 (151)
Lc705 (151)Lc705 (151)
Konsensus (151)Consensus (151)
BioPLl (201)BioPLl (201)
GG (201)GG (201)
ATCC 53103 (201)ATCC 53103 (201)
ATCC 8530 (201)ATCC 8530 (201)
LC705 (201)LC705 (201)
Konsensus (201)Consensus (201)
BioPLl (251)BioPLl (251)
GG (251)GG (251)
5050
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCSTGCCTAATACATGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCSTGCCTAATACATG
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATG
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATG
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATG
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATG
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGAGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATG
100100
CAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAATCAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAAT
CAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAATCAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAAT
CAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAATCAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAAT
CAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAATCAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAAT
CAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAATCAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAAT
CAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAATCAAGTCGAACGAGTTCTGATTATTGAAAGGTGCTTGCATCTTGATTTAAT
101 150101 150
TTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAATTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGTGGGTAACCTGCCCTTAA
TTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAATTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGTGGGTAACCTGCCCTTAA
TTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAATTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGTGGGTAACCTGCCCTTAA
TTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAATTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGTGGGTAACCTGCCCTTAA
TTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAATTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGTGGGTAACCTGCCCTTAA
TTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAATTTGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACGTGGGTAACCTGCCCTTAA
151 200151 200
GTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAAGTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAA
GTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAA gtgggggataacatttggaaacagatgctaataccgcataaatgcaagaaGTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAA gtgggggataacatttggaaacagatgctaataccgcataaatgcaagaa
GTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAAGTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAA
GTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAAGTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAA
GTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAAGTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAAATCCAAGAA
201 250 ccgcatggttcttggctgaaagatggcgtSaagctatcgcttttggatgga ccgcatggttcttggctgaaagatggcgiaagctatcgcttttggatgga ccgcatggttcttggctgaaagatggcgiaagctatcgcttttggatgga ccgcatggttcttggctgaaagatggcgtaagctatcgcttttggatgga ccgcatggttcttggctgaaagatggcgcaagctatcgcttttggatgga ccgcatggttcttggctgaaagatggcgtaagctatcgcttttggatgga201 250 ccgcatggttcttggctgaaagatggcgtSaagctatcgcttttggatgga ccgcatggttcttggctgaaagatggcgiaagctatcgcttttggatgga ccgcatggttcttggctgaaagatggcgiaagctatcgcttttggatgga ccgcatggttcttggctgaaagatggcgtaagctatcgcttttggatgga ccgcatggttcttggctgaaagatggcgcaagctatcgcttttggatgga ccgcatggttcttggctgaaagatggcgtaagctatcgcttttggatgga
251 300 cccgcggcgtattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcaatga cccgcggcgtattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcaatga251 300 cccgcggcgtattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcaatga cccgcggcgtattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcaatga
PL 226 294 B1PL 226 294 B1
ATCC 53103 ATCC 8530 LC705ATCC 53103 ATCC 8530 LC705
KonsensusConsensus
BioPLlBioPLl
GGGG
ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705
KonsensusConsensus
BioPLlBioPLl
GGGG
ATCC 53103 ATCC 8530ATCC 53103 ATCC 8530
Lc705Lc705
KonsensusConsensus
BioPLlBioPLl
GGGG
ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705
KonsensusConsensus
BioPLlBioPLl
GGGG
ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705
KonsensusConsensus
BioPLlBioPLl
GGGG
ATCC 53103 ATCC 8530 LC705ATCC 53103 ATCC 8530 LC705
Konsensus (251) CCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAATGA (251) CCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAATGA (251) CCCGCGGCGTAT TAGCTAGT TGGTGAGGTAACGGCT CACCAAGGCAATGA (251) CCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAATGAConsensus (251) CCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAATGA (251) CCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAATGA (251) CCCGCGGCGTAT TAGCTAGT TGGTGAGGTAACGGCT CACCAAGGCAATGA (251) CCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAATGA
301 350 (301) TACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG (301) TAC3TAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG (301) TACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG (301) TACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG (301) TACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG (301) TACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG301 350 (301) TACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG (301) TAC3TAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG (301) TACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG (301) TACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG (301) TACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG (301) TACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGG
351 400 (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA351 400 (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA (351) CCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCA
401 450 (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA401 450 (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA (401) AGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAA
451 500 (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA451 500 (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA (451) ACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGA
501 550 (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA501 550 (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA (501) CGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTA
PL 226 294 B1PL 226 294 B1
BioPLl (551) GG (551)BioPLl (551) GG (551)
ATCC 53103 (551)ATCC 53103 (551)
ATCC 8530 (551)ATCC 8530 (551)
Lc705 (551)Lc705 (551)
Konsensus (551)Consensus (551)
BioPLl (601) GG (601)BioPLl (601) GG (601)
ATCC 53103 (601)ATCC 53103 (601)
ATCC 8530 (601)ATCC 8530 (601)
Lc705 (601)Lc705 (601)
Konsensus (601)Consensus (601)
BioPLl (651) GG (651)BioPLl (651) GG (651)
ATCC 53103 (651)ATCC 53103 (651)
ATCC 8530 (651)ATCC 8530 (651)
Lc705 (651)Lc705 (651)
Konsensus (651)Consensus (651)
BioPLl (701) GG (701)BioPLl (701) GG (701)
ATCC 53103 (701)ATCC 53103 (701)
ATCC 8530 (701)ATCC 8530 (701)
Lc705 (701)Lc705 (701)
Konsensus (701)Consensus (701)
BioPLl (751) GG (751)BioPLl (751) GG (751)
ATCC 53103 (751)ATCC 53103 (751)
ATCC 8530 (751)ATCC 8530 (751)
Lc705 (751)Lc705 (751)
Konsensus (751)Consensus (751)
BioPLl (801) GG (801)BioPLl (801) GG (801)
ATCC 53103 (801)ATCC 53103 (801)
551 600 atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgC atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgc atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgc atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgc atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgc atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgc551 600 atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgC atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgc atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgc atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgc atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgc atacgtaggtggcaagcgttatccggatttattgggcgtaaagcgagcgc
601 650 aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt601 650 aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt aggcggttttttaagtctgatgtgaaagccctcggcttaaccgaggaagt
651 700 gcatcggaaactgggaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat gcatcggaaactggaaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat gcatcggaaactggaaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat gcatcggaaactggGaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat gcatcggaaactggGaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat gcatcggaaactgggaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat651 700 gcatcggaaactgggaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat gcatcggaaactggaaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat gcatcggaaactggaaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat gcatcggaaactggGaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat gcatcggaaactggGaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat gcatcggaaactgggaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccat
701 750 gtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc gtgtagcggtgaaatgcc-tagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc gtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc gtgtagcggtgaaatgcc-tagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc gtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc gtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc701 750 gtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc gtgtagcggtgaaatgcc-tagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc gtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc gtgtagcggtgaaatgcc-tagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc gtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc gtgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggc
751 800 ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaa ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaa ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaa ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtac-cgaa ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaa ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaa751 800 ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaa ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaa ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaa ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtac-cgaa ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaa ggctgtctggtctgtaactgacgctgaggctcgaaagcatgggtagcgaa
801 850 caggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgaatgctaggtg caggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgaatgctaggtg caggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgaatgctaggtg801 850 caggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgaatgctaggtg caggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgaatgctaggtg caggattagataccctggtagtccatgccgtaaacgatgaatgctagggatgaatgctagg
PL 226 294 B1PL 226 294 B1
ATCC 8530 ¢801)ATCC 8530 ¢ 801)
Lc705 (801)Lc705 (801)
Konsensus (801)Consensus (801)
BioPLl (851) GG (851)BioPLl (851) GG (851)
ATCC 53103 (851)ATCC 53103 (851)
ATCC 8530 (851)ATCC 8530 (851)
Lc705 (851)Lc705 (851)
Konsensus (851)Consensus (851)
BioPLl (901) GG (901)BioPLl (901) GG (901)
ATCC 53103 (901)ATCC 53103 (901)
ATCC 8530 (901)ATCC 8530 (901)
Lc705 (901)Lc705 (901)
Konsensus (901)Consensus (901)
BioPLl (951) GG (951)BioPLl (951) GG (951)
ATCC 53103 (951)ATCC 53103 (951)
ATCC 8530 (951)ATCC 8530 (951)
Lc705 (951)Lc705 (951)
Konsensus (951)Consensus (951)
BioPLl (1001) GG (1001)BioPLl (1001) GG (1001)
ATCC 53103 (1001) ATCC 8530 (1001) Lc705 (1001)ATCC 53103 (1001) ATCC 8530 (1001) Lc705 (1001)
Konsensus (1001)Consensus (1001)
BioPLl (1051) GG_B (1051)BioPLl (1051) GG_B (1051)
ATCC 53103 (1051)ATCC 53103 (1051)
ATCC 8530 (1051) Lc705 (1051)ATCC 8530 (1051) Lc705 (1051)
Konsensus (1051)Consensus (1051)
CAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTG CAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTG CAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTG 851 900CAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTG CAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTG CAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGC51
TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCG TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCG TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCC TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCG TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCG TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCG 901 950TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCG TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCG TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCC TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCG TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCG TTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCG 901 950
CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACCCAAAGGAATTGACGGGGGCC CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC 951 1000CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACCCAAAGGAATTGACGGGGGCC CCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCC 951 1000
CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCT CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCT CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCT CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCT CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCT CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAAC.CT 1001 1050CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCT CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCT CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCT CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCT CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCT CGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAAC.CT 1001 1050
TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCAGGTTTCCCCTTC TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCgGGTTTCCCCTTC TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATC^GGTTTCCCCTTC TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCAGGTTTCCCCTTC TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCJtGGTTTCCCCTTC TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCAGGTTTCCCCTTC 1051 1100TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCAGGTTTCCCCTTC TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCgGGTTTCCCCTTC TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATC ^ GGTTTCCCCTTC TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCAGGTTTCCCCTTC TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCJtGGTTTCCCCTTC TACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCAGGTTTCCCCTTC 1051 1100
GGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAG GGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGGGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAG GGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAG
GGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGGGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAG
GGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGGGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAG
GGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGGGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAG
GGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGGGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAG
PL 226 294 B1PL 226 294 B1
BioPLlBioPLl
GGGG
ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705
KonsensusConsensus
BioPLlBioPLl
GGGG
ATCC 53103 ATCC 8530ATCC 53103 ATCC 8530
Lc705Lc705
KonsensusConsensus
BioPLlBioPLl
GGGG
ATCC 53103 ATCC 8530 Lc7Q5ATCC 53103 ATCC 8530 Lc7Q5
KonsensusConsensus
BioPLlBioPLl
GGGG
ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705
KonsensusConsensus
BioPLlBioPLl
GGGG
ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705ATCC 53103 ATCC 8530 Lc705
KonsensusConsensus
BioPLlBioPLl
GGGG
ATCC 53103 (110.1) (1101) (1101) (1101) (1101) (1101) (1151) (1151) (1151) (1151) (1151) (1151) (1201) (1201) (1201) (1201) (1201) (1201) (1251) (1251) (1251) (1251) (1251) (1251) (1301) (1301) (1301) (1301) (1301) (1301) (1351) (1351) (1351)ATCC 53103 (110.1) (1101) (1101) (1101) (1101) (1101) (1151) (1151) (1151) (1151) (1151) (1151) (1201) (1201) (1201) (1201) (1201) (1201) (1251) (1251) (1251) (1251) (1251) (1251) (1301) (1301) (1301) (1301) (1301) (1301) (1351) (1351) (1351) )
1101 115Ό1101 115Ό
ATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG ATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG ATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG ATGTTGGGiTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG ATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG ATGrTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG 1151 1200ATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG ATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG ATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG ATGTTGGGiTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG ATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG ATGrTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAG 1151 1200
CATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGG CATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGG CATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGG catttagtigggcactctAgtaagactgccggtgacaaaccggaggaagg catttagttgggcactctagtaagactgccggtgacaaaccggaggaagg catttagttgggcactctagtaagactgccggtgacaaaccggaggaagg 1201 1250 tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt 1251 1300 gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc 1301 1350 tcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacga tcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacga tcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacga tcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacga tcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacga tcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacgaCATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGG CATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGG CATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGG catttagtigggcactctAgtaagactgccggtgacaaaccggaggaagg catttagttgggcactctagtaagactgccggtgacaaaccggaggaagg catttagttgggcactctagtaagactgccggtgacaaaccggaggaagg 1201 1250 tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt tggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgt 1251 1300 gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc gctacaatggatggtacaacgagttgcgagaccgcgaggtcaagctaatc 1301 1350 tcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacga t cttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacga tcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacga tcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacga tcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacga tcttaaagccattctcagttcggactgtaggctgcaactcgcctacacga
1351 1400 agtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgcggtgaatacgttc agtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgcggtgaatacgttc agtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgcggtgaatacgttc1351 1400 agtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgcggtgaatacgttc agtcggaatcgctagtaatcgcggatcagcacgccgcggtgaatacgttc agtcggaatcgctagtaatcgcggatcgctgaccgacgctg
PL 226 294 B1PL 226 294 B1
AGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTC
AGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTC
AGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTC
1401 14501401 1450
CCGGGCCTTC-TACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG CCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG ęCGGGGGTTGTACAGACCGGCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG CCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG CCGGGCCTTGTACACAĆCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG CCGGGCCTTC-TACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG 1451 1500CCGGGCCTTC-TACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG CCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG ęCGGGGGTTGTACAGACCGGCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG CCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG CCGGGCCTTGTACACAĆCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG CCGGGCCTTC-TACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCG 1451 1500
AAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTGTAAGGTGGGACAA AAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTCTAAGGTGGGACAA AAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGGGAGCCGTCTAAGGTGGGACAA AAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTCTAAGGTGGGACAA AAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTCTAAGGTGGGACAAAAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTGTAAGGTGGGACAA AAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTCTAAGGTGGGACAA AAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGGGAGCCGTCTAAGGTGGGACAA AAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTCTAAGGTGGGACAA AAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTCTAAGGTGGGACAA
AAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTCTAAGGTGGGACAA 15.01 1550AAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGAGCGAGCCGTCTAAGGTGGGACAA 15.01 1550
ATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTGATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTG
ATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTGATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTG
ATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTGATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTG
ATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTGATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTG
ATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACĆTGCGGCTGATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACĆTGCGGCTG
ATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTGATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTG
155.1155.1
GATCACCTGATCACCT
GATCACCTGATCACCT
GATCACCTGATCACCT
GATCACCTGATCACCT
GATCACCTGATCACCT
GATCACCTGATCACCT
Wykaz sekwencji łącznikowych regionu palindromowych powtórzeń (CRISPR) nowego szczepu a . 5' -GCGTTTAGAATGATGCCACTTGAATGCTGT- 3' b. 5' -AGTGTGATCCTCATCACCTCTTTGCCACTA-3'List of linker sequences of the palindromic repeat region (CRISPR) of the new a strain. 5 '-GCGTTTAGAATGATGCCACTTGAATGCTGT- 3' b. 5 '-AGTGTGATCCTCATCACCTCTTTGCCACTA-3'
C. 5' -GATCGAATGCCTCATGAAATCGTATGTGCG- 3'C. 5 '-GATCGAATGCCTCATGAAATCGTATGTGCG- 3'
PL 226 294 B1PL 226 294 B1
d.5'-TTTAGCAACAACCTACACGGTTATTTGTGG-3'd.5'-TTTAGCAACAACCTACACGGTTATTTGTGG-3 '
d. 5' -TTGGATTTCTTTGGAACAGTGACCGGCAGAA-3'd. 5 '-TTGGATTTCTTTGGAACAGTGACCGGCAGAA-3'
e. 5'-CTTAAAAGAGGTAATTAAAAATGGAAAATT-3'e. 5'-CTTAAAAGAGGTAATTAAAAATGGAAAATT-3 '
f. . 5' -ATTTTGATACTGAAATTGGTGAAAGTAAAG-3' g . 5'-CGCAGCAGGTTAGTCAAGTGGCTAGTAGTC-3' h . 5' -AATAGGAAACGTGAGTGTGTCTAAGCCCGT-3' i . 5'-TTCTGCATCAACTGCCAAATATTTTTTGCT-3' j , 5'-CACAAGCAGACGCGAATACCTATCAGTCTT-3'f. 5 '-ATTTTGATACTGAAATTGGTGAAAGTAAAG-3' g. 5'-CGCAGCAGGTTAGTCAAGTGGCTAGTAGTC-3 'h. 5 '-AATAGGAAACGTGAGTGTGTCTAAGCCCGT-3' i. 5'-TTCTGCATCAACTGCCAAATATTTTTTGCT-3 'j, 5'-CACAAGCAGACGCGAATACCTATCAGTCTT-3'
k. 5'-TTGGGATTGGTAAGCTGCGACATGAATTTA-3'k. 5'-TTGGGATTGGTAAGCTGCGACATGAATTTA-3 '
l. 5' - GGATCAAGGC GT T CGCGGACAAGCAAGACA-3'l. 5 '- GGATCAAGGC GT T CGCGGACAAGCAAGACA-3'
m. 5'-TCCCATGATGTTCTTGGGGCTTATCAGCGT-3'm. 5'-TCCCATGATGTTCTTGGGGCTTATCAGCGT-3 '
n. 5'-GTGATCATTGGTCACTGCTTAGGCCACAGC-3'n. 5'-GTGATCATTGGTCACTGCTTAGGCCACAGC-3 '
o. 5'-AAGTGTCATGGAAGCAATATCACTCTTCTT-3'o. 5'-AAGTGTCATGGAAGCAATATCACTCTTCTT-3 '
p. 5'-ACGTTTAGAATGATACCACTTGGATGTTGT-3'p. 5'-ACGTTTAGAATGATACCACTTGGATGTTGT-3 '
q. 5'-AGCCCTGAAAGAAATTGATTACGGTGTATT-3'q. 5'-AGCCCTGAAAGAAATTGATTACGGTGTATT-3 '
r. 5' -AGGCGAAGAACTGGCGCTGACAGTCGGTGA-3'’r. 5 '-AGGCGAAGAACTGGCGCTGACAGTCGGTGA-3' '
s. 5 ’-ACTCGGGTATTGACAAAGATCGACGCGGCA-31 s. 5 '-ACTCGGGTATTGACAAAGATCGACGCGGCA-3 1
Sekwencje palindromowych powtórzeń systemu CRISPR - Cas szczepu Lactobacillus rhamnosus BioPLlSequences of palindromic repeats of the CRISPR system - Cas of the Lactobacillus rhamnosus BioPLl strain
Sekwencja prostego palindromowego powtórzenia systemu Liczba powtórzeń 5 ’ -GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCAAGAGC-3 ’ 17 ’ -GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCĄAGAftC-3 1 3 ’ -GTCTCAGGTAGATGTCAGATCPAAĄACCTTCAGTGA-3 ' 1Simple Palindromic System Repeat Sequence Number of Repetitions 5 '-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCAAGAGC-3' 17 '-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCĄAGAftC-3 1 3' -GTCTCAGGTAGATGTCAGATCPAAĄACC 3 '' 1
Pogrubioną i podkreśloną czcionką zaznaczono różnice pomiędzy prostymi powtórzeniamiDifferences between simple repetitions are marked in bold and underlined font
Sekwencje palindromowych powtórzeń systemu CRISPR-Cas szczepów Lactobacillus rhamnosus GG i ATCC53103Sequences of the palindromic repeats of the CRISPR-Cas system of Lactobacillus rhamnosus GG and ATCC53103 strains
L.p. Sekwencja prostego palindromowego powtórzenia Liczba powtórzeń 1 5'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCAAGAGC-3' 21L.p. Simple palindrome repeat sequence Number of repeats 1 5'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCAAGAGC-3 '21
PL 226 294 B1PL 226 294 B1
5'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATTAATCAGTTCAAGAGC-3' 15'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATTAATCAGTTCAAGAGC-3 '1
5'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCAAGAGG-3' 15'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCAAGAGG-3 '1
5'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCAAGAAT-3' 15'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAATCAGTTCAAGAAT-3 '1
5'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAAAAAAACTTCAGTG-31 15'-GTCTCAGGTAGATGTCAGATCAAAAAAACTTCAGTG-3 1 1
Pogrubioną i podkreśloną czcionką zaznaczono różnice pomiędzy prostymi powtórzeniamiDifferences between simple repetitions are marked in bold and underlined font
Charakterystyczna sekwencja CRISPR w nowym szczepie Lactobacillus rhamnosusCharacteristic CRISPR sequence in a new Lactobacillus rhamnosus strain
BioPLl, o długości 1357 par zasad.BioPLl, 1357 base pairs long.
>BioPll-CRISPR gtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcgcgtttagaatgatgccacttgaatgctgtgtct caggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcagtgtgatcctcatcacctctttgccactagtctcagg tagatgtcagatcaatcagttcaagagcgatcgaatgcctcatgaaatcgtatgtgcggtctcaggtaga tgtcagatcaatcagttcaagagctttagcaacaacctacacggttatttgtgggtctcaggtagatgtc agatcaatcagttcaagagcttggatttctttggaacagtgaccggcagaagtctcaggtagatgtcaga tcaatcagttcaagagccttaaaagaggtaattaaaaatggaaaattgtctcaggtagatgtcagatcaa tcagttcaagagcattttgatactgaaattggtgaaagtaaaggtctcaggtagatgtcagatcaatcag ttcaagagccgcagcaggttagtcaagtggctagtagtcgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttca agagcaataggaaacgtgagtgtgtctaagcccgtgtctcaggtagatgtcagatcaatcagtteaagag cttctgcatcaactgccaaatattttttgctgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagccac aagcagacgcgaatacctatcagtcttgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcttgggat tggtaagetgcgacatgaatttagtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcggatcaaggcg ttcgcggacaagcaagacagtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagctcccatgatgttctt ggggcttatcagcgtgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcgtgatcattggtcactgct taggccacagcgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcaagtgtcatggaagcaatatcac tcttcttgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcacgtttagaatgataccacttggatgt tgtgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagaacagccctgaaagaaattgattacggtgtattg tctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagaacaggcgaagaactggcgctgacagtcggtgagtctc aggtagatgtcagatcaatcagttcaagaacactcgggtattgacaaagatcgacgcggcagtctcaggt agatgtcagatcaaaaaccttcagtga> BioPll-CRISPR gtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcgcgtttagaatgatgccacttgaatgctgtgtct caggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcagtgtgatcctcatcacctctttgccactagtctcagg tagatgtcagatcaatcagttcaagagcgatcgaatgcctcatgaaatcgtatgtgcggtctcaggtaga tgtcagatcaatcagttcaagagctttagcaacaacctacacggttatttgtgggtctcaggtagatgtc agatcaatcagttcaagagcttggatttctttggaacagtgaccggcagaagtctcaggtagatgtcaga tcaatcagttcaagagccttaaaagaggtaattaaaaatggaaaattgtctcaggtagatgtcagatcaa tcagttcaagagcattttgatactgaaattggtgaaagtaaaggtctcaggtagatgtcagatcaatcag ttcaagagccgcagcaggttagtcaagtggctagtagtcgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttca agagcaataggaaacgtgagtgtgtctaagcccgtgtctcaggtagatgtcagatcaatcagtteaagag cttctgcatcaactgccaaatattttttgctgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagccac aagcagacgcgaatacctatcagtcttgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcttgggat tggtaagetgcgacatgaatttagtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcggatcaaggcg ttcgcggacaagcaagacagtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagctcccatgatgttctt ggggcttatcagcgtgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcgtgatcattgg tcactgct taggccacagcgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcaagtgtcatggaagcaatatcac tcttcttgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagagcacgtttagaatgataccacttggatgt tgtgtctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagaacagccctgaaagaaattgattacggtgtattg tctcaggtagatgtcagatcaatcagttcaagaacaggcgaagaactggcgctgacagtcggtgagtctc aggtagatgtcagatcaatcagttcaagaacactcgggtattgacaaagatcgacgcggcagtctcaggt agatgtcagatcaaaaaccttcagtga
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL411316A PL226294B1 (en) | 2015-02-19 | 2015-02-19 | Lactobacillus rhamnosus bacterium strain and method for obtaining L-calcium lactate, using that strain |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL411316A PL226294B1 (en) | 2015-02-19 | 2015-02-19 | Lactobacillus rhamnosus bacterium strain and method for obtaining L-calcium lactate, using that strain |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL411316A1 PL411316A1 (en) | 2016-08-29 |
| PL226294B1 true PL226294B1 (en) | 2017-07-31 |
Family
ID=56760146
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL411316A PL226294B1 (en) | 2015-02-19 | 2015-02-19 | Lactobacillus rhamnosus bacterium strain and method for obtaining L-calcium lactate, using that strain |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL226294B1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL422602A1 (en) * | 2017-08-21 | 2019-02-25 | Politechnika Łódzka | Lactic bacterial strain of Lactobacillus rhamnosus |
-
2015
- 2015-02-19 PL PL411316A patent/PL226294B1/en unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL422602A1 (en) * | 2017-08-21 | 2019-02-25 | Politechnika Łódzka | Lactic bacterial strain of Lactobacillus rhamnosus |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL411316A1 (en) | 2016-08-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nguyen et al. | Production of L-lactic acid from a green microalga, Hydrodictyon reticulum, by Lactobacillus paracasei LA104 isolated from the traditional Korean food, makgeolli | |
| Kadam et al. | Strain improvement of Lactobacillus delbrueckii NCIM 2365 for lactic acid production | |
| CN105132322B (en) | One lactobacillus plantarum and application thereof | |
| CA2054329C (en) | Process for preparing trehalulose and isomaltulose | |
| CN105112326B (en) | A kind of bacillus and its high-density cultivation method | |
| JP7353689B2 (en) | Production of lactic acid from organic waste using Bacillus coagulans spore composition | |
| US20190169586A1 (en) | Lactic acid-utilizing bacteria genetically modified to secrete polysaccharide-degrading enzymes | |
| US20130171705A1 (en) | Novel lactic acid bacterium and method for producing l-lactic acid using same | |
| CN105132321B (en) | A kind of VREF and the culture medium of high density solid state fermentation thereof and method | |
| CN111728081A (en) | Compound bacterium fermentation liquor for feed additive and preparation method thereof | |
| CN115181707A (en) | A strain of Bacillus subtilis and its liquid-solid two-phase fermentation method | |
| CN102533622B (en) | A succinic acid-producing Actinobacillus succinate | |
| KR100832146B1 (en) | Thermophilic Microbial Bacillus Coagulans Strain SIM-7 DSM 14043 and mixtures thereof for producing L (+)-lactate from fermentable sugars and mixtures thereof | |
| CN111944730B (en) | Lactobacillus paracasei capable of efficiently utilizing jerusalem artichoke powder and application thereof | |
| CN101914477A (en) | A strain of Lactobacillus plantarum and its use | |
| KR20240061652A (en) | Pretreatment of organic waste for lactic acid production using compositions of Bacillus coagulans spores | |
| PL226294B1 (en) | Lactobacillus rhamnosus bacterium strain and method for obtaining L-calcium lactate, using that strain | |
| CN117143770B (en) | Wettman coagulans GLM336 and application thereof | |
| CN105802871B (en) | Lactic acid bacteria and its application in the preparation of straw feed | |
| CN115873743B (en) | High-allantoin-yield fermentation lactobacillus mucilaginosus and application thereof | |
| CN115927041B (en) | Lactobacillus rhamnosus NP150707 and application thereof | |
| CN1982460A (en) | Separation of tropical candiyeast strain and production of xylitol | |
| CN109423467A (en) | A kind of lactobacillus plantarum of lactic acid high yield and its purposes in food and field of fodder | |
| RU2175014C2 (en) | Method of lactic acid producing | |
| Rathoure | Microbial biomass production |