PL224660B1

PL224660B1 - New analogues of 1,2,4-triazoles and method for obtaining 1,2,4-triazoles

Info

Publication number: PL224660B1
Application number: PL408971A
Authority: PL
Inventors: Andrzej Niewiadomy; Monika M. Karpińska; Joanna Wietrzyk; Joanna Matysiak; Mariusz Gagoś
Original assignee: Inst Immunologii I Terapii Doświadczalnej; Inst Przemysłu Organicznego; Univ Przyrodniczy W Lublinie
Priority date: 2014-07-23
Filing date: 2014-07-23
Publication date: 2017-01-31
Also published as: PL408971A1; WO2016013947A1

Abstract

The present invention relates to new analogs of 1,2,4-triazoles of the general formula (I) with different type of substitution of 2,4-dihydroxyphenyl system. The analogs have antiproliferative properties. Furthermore, a process for the preparation of new analogs was disclosed.

Description

Przedmiotem wynalazku są nowe analogi 1,2,4-triazoli oraz sposób otrzymywania analogówThe invention relates to new analogs of 1,2,4-triazoles and a method for the preparation of analogs

1.2.4- triazoli, zwłaszcza analogów o właściwościach leczniczych.1.2.4- triazoles, especially analogues with medicinal properties.

W zależności od budowy analogi 1,2,4-triazoli skondensowane z 6-członowymi pierścieniami karbo- i heterocyklicznymi wykazują zróżnicowane działanie biologiczne. Związki bazujące na układzieDepending on the structure, analogs of 1,2,4-triazoles fused with 6-membered carbo- and heterocyclic rings show different biological activity. System-based relationships

1.2.4- triazolo[3,4-a]ftalazyny znane są głównie jako antagoniści receptorów GABA (głównie podjednostek a3 i a5) oraz jako ligandy o wysokim powinowactwie do receptorów bramek kanałów wapniowych. Charakteryzuje je między innymi działanie przeciwkonwulsyjne. W przeglądzie piśmiennictwa wskazuje się na pochodne 1,2,4-triazolo[4,3-b]pirydazyny również jako na agonistów receptorów GABA. Związki charakteryzuje przy tym działanie antykonwulsyjne, przeciwwirusowe oraz właściwości cytostatyczne. Pochodne 1,2,4-triazolo[4,3-a]pirimidyny działają natomiast głównie jako antagoniści receptorów adenozynowych. Wiele z nich wykazuje również aktywność przeciwnowotworową. Tego typu działanie przepisywane jest pochodnym sulfonamidowym, hydrazynowym, oraz pirazolowym. Inne wykazują właściwości przeciwzapalne, przeciwbólowe oraz przeciwbakteryjne.1.2.4-triazolo [3,4-a] phthalazines are known mainly as antagonists of GABA receptors (mainly α3 and α5 subunits) and as ligands with high affinity for calcium channel gate receptors. They are characterized by, inter alia, anti-convulsive effects. The literature review mentions 1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine derivatives also as agonists of GABA receptors. The compounds are characterized by anticonvulsant, antiviral and cytostatic properties. The 1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine derivatives, on the other hand, act mainly as adenosine receptor antagonists. Many of them also show anti-cancer activity. This type of action is prescribed for the sulfonamide, hydrazine and pyrazole derivatives. Others have anti-inflammatory, analgesic and antibacterial properties.

Skondensowany układ 1,2,4-triazolo[4,3b]pirydazyny generalnie otrzymywany jest w reakcji cyklizacji pochodnych 3-hydrazynowych, 3-hydrazydowych lub 3-hydrazonowych pirydazyny z użyciem stosownych czynników zamykających układy liniowe i odpowiednich środowisk reakcyjnych. Znane są opisy między innymi z publikacji: Deeb A., Hassaneen M., Kotb M., Heteroatom Chemistry, 2005, 16, 278-284. Pyridazine Derivatives and Related Compounds, Part 8: Synthesis of Different Heterocycles from 3-Hydrazinopyridazine; Collins I., Castro J. L., Street L.J., Tetrahedron Lett. 2000, 41, 781-784. Rapid analogue synthesis of trisubstituted triazolo[4,3-b]pyridazines; Skoumbourdis A.P., LeClair C.A., Stefan E., Tuijanski A.G., Maguire W., Titus S.A., Huang R., Auld D.S., Inglese J., Austin C.P., Michnick S.W., Xia M., Thomas C.J. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2009, 19, 3686-3692. Exploration and optimization of substituted triazolothiadiazines and triazolopyridazines as PDE4 inhibitors, pozwalające w poszczególnych przypadkach na otrzym anie ograniczonego zakresu modyfikacji podstawowego układu.The 1,2,4-triazolo [4,3b] pyridazine condensed system is generally obtained by cyclization of pyridazine-3-hydrazine, 3-hydrazide or 3-hydrazone derivatives using appropriate linear system closers and appropriate reaction media. Descriptions are known, inter alia, from the publications: Deeb A., Hassaneen M., Kotb M., Heteroatom Chemistry, 2005, 16, 278-284. Pyridazine Derivatives and Related Compounds, Part 8: Synthesis of Different Heterocycles from 3-Hydrazinopyridazine; Collins I., Castro J. L., Street L.J., Tetrahedron Lett. 2000, 41, 781-784. Rapid analogue synthesis of trisubstituted triazolo [4,3-b] pyridazines; Skoumbourdis A.P., LeClair C.A., Stefan E., Tuijanski A.G., Maguire W., Titus S.A., Huang R., Auld D.S., Inglese J., Austin C.P., Michnick S.W., Xia M., Thomas C.J. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2009, 19, 3686-3692. Exploration and optimization of substituted triazolothiadiazines and triazolopyridazines as PDE4 inhibitors, allowing a limited range of modifications to the basic system in individual cases.

Skondensowany układ 1,2,4-triazolo[4,3-b]pirymidyny najczęściej otrzymywany jest w analogicznych procesach cyklizacji z zastosowaniem odpowiednio 2-hydrazynowych (hydrazonowych) pochodnych. Także kondensacja 1,2-dihydro-2-tiooksopirymidyn-4(3H)onów z chlorkami hydrazonylu prowadzi do opisywanych połączeń, co znane jest z publikacji Hassaneen H.M., Abdelhadi H.A., Abdallah T.A., Tetrahedron 2001, 57, 10133-10138. Novel synthesis of 1,2,4-triazolo[4,3-a]pyrimidin-5-one derivatives. Niestandardowa reakcja otrzymywania 1,2,4-triazolo[4,3-b]pirymidyny przedstawiona jest natomiast przez Dandia A., Singh R., Singh D., Kapil A., Letters in Organie Chemistry, 2009, 6, 100-105. Facile Regioselective Green Synthesis of Triazolo [4,3-a] Pyrimidines in Aqueous Medium, gdzie wieloskładnikowa kondensacja 2-amino-1,3,4-triazolu, aktywnej grupy metylowej cyjanooctanu etylu oraz aldehydu 4-chlorobenzoesowego (grupa karbonylowa) prowadzi do opisywanych układów.The condensed 1,2,4-triazolo [4,3-b] pyrimidine system is most often obtained in analogous cyclization processes with the use of 2-hydrazine (hydrazone) derivatives, respectively. Also the condensation of 1,2-dihydro-2-thioxopyrimidin-4 (3H) ones with hydrazonyl chlorides leads to the described combinations, which is known from Hassaneen H.M., Abdelhadi H.A., Abdallah T.A., Tetrahedron 2001, 57, 10133-10138. Novel synthesis of 1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidin-5-one derivatives. A non-standard reaction for 1,2,4-triazolo [4,3-b] pyrimidine is presented by Dandia A., Singh R., Singh D., Kapil A., Letters in Organic Chemistry, 2009, 6, 100-105 . Facile Regioselective Green Synthesis of Triazolo [4,3-a] Pyrimidines in Aqueous Medium, where the multi-component condensation of 2-amino-1,3,4-triazole, the active methyl group of ethyl cyanoacetate and 4-chlorobenzaldehyde (carbonyl group) leads to the described systems.

Żadna z opisywanych metod syntezy nie obejmuje otrzymywania skondensowanych pochodnych triazolowych z podstawnikiem 2,4-dihydroksyfenylowym w pozycji 3 układu skondensowanego lub jego formą zmodyfikowaną.None of the described synthetic methods involve the preparation of fused triazole derivatives with a 2,4-dihydroxyphenyl substituent in the 3-position of the condensed system or its modified form.

Istotą wynalazku są nowe analogi 1,2,4-triazoli o wzorze ogólnym I:The essence of the invention are new analogs of 1,2,4-triazoles of general formula I:

PL 224 660 B1 ze zróżnicowanym rodzajem podstawienia układu 2,4-dihydroksyfenylowego, gdzie:PL 224 660 B1 with different types of substitution of the 2,4-dihydroxyphenyl system, where:

Ri = H, HO-, Me-, MeOR2 = H, Me-, Et-, Pr-, iPr-, Cl-, HO-, MeO-, EtORi = H, HO-, Me-, MeOR2 = H, Me-, Et-, Pr-, iPr-, Cl-, HO-, MeO-, EtO

R3= H, HO-, Me-, MeOR' = H, Cl, Br, F3CX = N, Y = CH w pierwszym wariancie zaś w drugim wariancie X = CH, Y = N.R3 = H, HO-, Me-, MeOR '= H, Cl, Br, F3CX = N, Y = CH in the first variant and in the second variant X = CH, Y = N.

Wśród wielu możliwych analogów 1,2,4 triazoli, ze względu na ich właściwości antyproliferacyjne istotne są między innymi następujące związki:Among the many possible analogues of 1,2,4 triazoles, the following compounds are important due to their antiproliferative properties:

• 6-chloro-3-(2,4-dihydroksyfenylo)-1,2,4-triazolo[4,3-b]pirydazyna, • 6-chloro-3-(2,4-dihydroksy-3-metylofenylo)-1,2,4-triazolo[4,3-b]pirydazyna, • 6-chloro-3-(5-etylo-2,4-dihydroksyfenylo)-1,2,4-triazolo[4,3-b]pirydazyna, • 6-chloro-3-(5-chloro-2,4-dihydroksyfenylo)-1,2,4-triazolo[4,3-b]pirydazyna, • 6-chloro-3-(2,3,4-trihydroksyfenylo)-1,2,4-triazolo[4,3-b]pirydazyna, • 3-(2,4-dihydroksyfenylo)-7-(trifluorometyIo)-1,2,4-triazolo[4,3-a]pirymidyna, • 3-(2,4-dihydroksy-3-metylofenylo)-7-(trifluorometylo)-1,2,4-triazolo[4,3-a]pirymidyna, • 3-(5-etylo-2,4-dihydroksyfenylo)-7-(trifluorometylo)-1,2,4-triazolo[4,3-a]pirymidyna, • 3-(5-chloro-2,4-dihydroksyfenylo)-7-(trifluorometylo)-1,2,4-triazolo[4,3-a]pirymidyna,• 6-chloro-3- (2,4-dihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine, • 6-chloro-3- (2,4-dihydroxy-3-methylphenyl) - 1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine, • 6-chloro-3- (5-ethyl-2,4-dihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine , • 6-chloro-3- (5-chloro-2,4-dihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine, • 6-chloro-3- (2,3,4- trihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine, • 3- (2,4-dihydroxyphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine, • 3- (2,4-dihydroxy-3-methylphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine, • 3- (5-ethyl-2,4 -dihydroxyphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine, • 3- (5-chloro-2,4-dihydroxyphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2 , 4-triazolo [4,3-a] pyrimidine,

Sposób otrzymywania związków z grupy 3-arylopodstawionych 1,2,4-triazoli polega na reakcji heteroarylohydrazyn z szeregiem modyfikowanych odczynników tioarylodujących. Przebiegające „on pot” kolejne procesy to terminalna transformacja tiohydrazydowa, równowagowe regiospecjalne przegrupowanie anularne oraz izomeryzacja tion/tiolowa warunkująca endocyklizację przez elimin ację H₂S.The method of obtaining compounds from the group of 3-aryl substituted 1,2,4-triazoles is based on the reaction of heteroaryl hydrazines with a number of modified thioaryl coding reagents. The subsequent "on sweat" processes are the terminal thiohydrazide transformation, equilibrium regiospecial anular rearrangement and thion / thiol isomerization conditioning endocyclization by elimination of H ₂ S.

Podstawione do układów heterocyklicznych liniowe ugrupowania tiohydrazydowe związków przejściowych można traktować jako ambidentne kwasy (lub aniony), z których uwalniane są łatwo odchodzące jony SH^- deprotonizujące atomy azotu. Przy odpowiedniej zasadowości i stereodostępności atomów azotu układu heterocyklicznego szybkość i wydajność reakcji warunkuje również odpowiednie podstawienie układu tiokarbonylowego reagentów elektrofilowych.The linear thiohydrazide moieties of the intermediates substituted for heterocyclic systems can be treated as ambiguous acids (or anions), from which the easily departing SH ions are released ^- deprotonizing nitrogen atoms. With the appropriate basicity and stereavailability of nitrogen atoms of the heterocyclic system, the speed and efficiency of the reaction also determine the appropriate substitution of the thiocarbonyl system of electrophilic reagents.

Istota sposób otrzymywania analogów 1,2,4-triazoli o Wzorze ogólnym I, w którym do roztworu wprowadza się substraty, po czym wydziela się produkt znamienny tym, że w jednowodorotlenowym alkoholu z dodatkiem pirydyny poddaje się reakcji heteroarylohydrazynę z substancją E o Wzorze ogólnym II:The essence of the method for the preparation of 1,2,4-triazole analogs of the general formula I, in which the substrates are introduced into the solution, and then the product is separated, characterized in that a heteroarylhydrazine is reacted with the substance E of the general formula II in a monohydric alcohol with the addition of pyridine :

gdzie R = H, Me, Pr, iPr, Et, Cl, OH, MeO, EtO po czym uzyskaną mieszaninę poreakcyjną rozdziela się na osad I i przesącz I, który następnie zatęża się, zaś uzyskany tym sposobem osad II krystalizuje się z wodnego roztworu jednowodorotlenowego alkoholu. Jednowodorotlenowy alkohol korzystnie stanowi etanol albo metanol. W przypadku gdy związek końcowy wypada z roztworu podczas przebiegu reakcji, to osad I łączy się z osadem II, po czym ich mieszaninę poddaje się krystalizacji. Wśród heteroarylohydrazyn szczególnie przydatna jest 3-chloro-6-hydrazynopirydazyna albo 2-hydrazyno-4-(trifluorometylo)pirymidyna.where R = H, Me, Pr, iPr, Et, Cl, OH, MeO, EtO, then the obtained reaction mixture is separated into precipitate I and filtrate I, which is then concentrated, and the precipitate obtained in this way is crystallized from an aqueous solution monohydric alcohol. The monohydric alcohol is preferably ethanol or methanol. In the event that the final compound drops out of solution during the course of the reaction, precipitate I is combined with precipitate II, and their mixture is then crystallized. Among the heteroarylhydrazines, 3-chloro-6-hydrazinopyridazine or 2-hydrazine-4- (trifluoromethyl) pyrimidine is particularly suitable.

Natomiast w zależności od położenia i rodzaju podstawnika R substancja E przyjmuje postać:However, depending on the location and type of the R substituent, the E substance takes the form:

STB: sulfotlenek bis[(2,4-dihydroksyfenylo)metanotionu],STB: bis [(2,4-dihydroxyphenyl) methanothionium] sulfoxide,

S3MTB: sulfotlenek bis[(2,4-dihydroksy-3-metylofenylo)metanotionu],S3MTB: bis [(2,4-dihydroxy-3-methylphenyl) methanothionium] sulfoxide,

S5MTB: sulfotlenek bis[(2,4-dihydroksy-5-metylofenylo)metanotionu],S5MTB: bis [(2,4-dihydroxy-5-methylphenyl) methanothionium] sulfoxide,

SETB: sulfotlenek bis[(5-etylo-2,4-dihydroksyfenylo)metanotionu],SETB: bis [(5-ethyl-2,4-dihydroxyphenyl) methanothion] sulfoxide,

SCITB: sulfotlenek bis[(5-chloro-2,4-dihydroksyfenylo)metanotionu] alboSCITB: bis [(5-chloro-2,4-dihydroxyphenyl) methanothionium] sulfoxide or

S3TTB: sulfotlenek bis[(2,3,4-trihydroksyfenylo)metanotionu].S3TTB: bis [(2,3,4-trihydroxyphenyl) methanothionium sulfoxide].

PL 224 660 B1PL 224 660 B1

Synteza przebiega według SchematuThe synthesis follows the Scheme

Przejściowe izomeryzujace formy liniowe mogą być uznane za część sztywnego, w miarę koplanarnego układu i nie mają możliwości swobodnego obrotu przez wiązanie wielokrotne, co ułatwia procesy endocyklizacji. Przegrupowania izomeryzacyjne wywołują zmiany struktury ele ktronowej, momentu dipolowego, kształtu powierzchni ekwipotencjalnej. W przypadku wielocentrycznej zasadowości reagentów nukleofilowych, war unkiem jest odpowiednia lokalizacja ugrupowania NHNH₂ umożliwiająca kierunkową protonizację/deprotonizację atomów azotu i stabilizację przez utworzenie uprzywilejowanych geometrycznie pierścieni.Transient isomerizing linear forms can be considered part of a rigid, relatively coplanar system and are not allowed to rotate freely through multiple bonds, which facilitates endocycling processes. Isomerization rearrangements cause changes in the electron structure, the dipole moment, and the shape of the equipotential surface. In the case of polycentric basicity of nucleophilic reagents, a condition is the appropriate location of the NHNH ₂ moiety to allow directional protonization / deprotonization of nitrogen atoms and stabilization by formation of geometrically privileged rings.

W przypadku wyszukiwania właściwych kierunków modyfikacji podstawnika fenolowego rozbudowano pierścień grupami o zmiennej charakterystyce elektronowej (pola rności) mając na uwadze większą możliwość zbliżenia cząsteczki do miejsc wiążących wodorowo czy lokalizację w przestrzeniach hydrofobowych, uwzględniając funkcje benzenodiolu (benzotriolu) w oddziaływaniach z celami molekularnymi. Ten kierunek zmian - R uwzględnia również lub przede wszys tkim wpływ podstawienia na przebieg kolejnych reakcji przejściowych jak i właściwości produktu końcowego.In the case of searching for the right directions of modification of the phenolic substituent, the ring was expanded with groups with variable electronic characteristics (ery field), with a view to a greater possibility of bringing the molecule closer to hydrogen binding sites or its location in hydrophobic spaces, taking into account the functions of benzenediol (benzotriol) in interactions with molecular targets. This direction of changes - R takes into account also, or above all, the influence of substitution on the course of subsequent transient reactions and the properties of the final product.

W tych szeregach otrzymano też odpowiednie 2,3,4 - i 2,4,6-trihydroksyfenylowe analogi. Było to interesujące, bo te kierunki podstawienia mają wpływ zarówno na charakter oddziaływań elektronowych i sterycznych w każdym obszarze wiązań wodorowych oraz zmiany energii cząst eczek.The corresponding 2,3,4- and 2,4,6-trihydroxyphenyl analogs were also obtained in these series. It was interesting because these directions of substitution influence both the nature of electronic and steric interactions in each hydrogen bond region and the energy changes of molecules.

Wynalazek jest bliżej przedstawiony w następujących przykładach.The invention is illustrated in the following examples.

P r z y k ł a d 1 - Wzór IIIP r z k ł a d 1 - Formula III

6-chloro-3-(2,4-dihydroksyfenylo)-1,2,4-triazolo[4,3-b]pirydazyna6-chloro-3- (2,4-dihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine

0,007 mola 3-chloro-6-hydrazynopirydazyny oraz 0,007 mola sulfotlenku bis[(2,4-dihydroksyenylo)metanotionu] (STB) przenoszono do 35 mL EtOH i ogrzewano we wrzeniu 3 h. Mieszaninę poreakcyjną przefiltrowano na gorąco przez lejek Buchnera. Otrzymano osad I i przesącz I, przy czym osad I odrzucono. Przesącz I zatężono do sucha, dodano 32 mL układu rozpuszczalników MeOH/woda (1:1) i pozostawiono na 24 h. Wydzielony osad II odfiltrowano i przekrystalizowano z 20 mL układu rozpuszczalników MeOH/woda (2:3). Otrzymano związek o Wzorze III.0.007 mol of 3-chloro-6-hydrazinopyridazine and 0.007 mol of bis [(2,4-dihydroxyenyl) methanothion] sulfoxide (STB) were transferred to 35 mL of EtOH and heated to reflux for 3 h. The reaction mixture was filtered hot through a Buchner funnel. Precipitate I and filtrate I were obtained, while precipitate I was discarded. Filtrate I was concentrated to dryness, 32 mL of MeOH / water (1: 1) solvent system was added and left for 24 h. The separated precipitate II was filtered off and recrystallized from 20 mL of MeOH / water (2: 3) solvent system. Compound of Formula III is obtained.

Wydajność 68%, t.t. 201-203°C (R). Dla wzoru: C11H7CIN4O2, M=262,65 obliczono: C, 50,30; H, 2,69; N, 21,33;Yield 68%, mp. 201-203 ° C (R). For the formula: C11H7CIN4O2, M = 262.65 Calculated: C, 50.30; H, 2.69; N, 21.33;

otrzymano: C, 50,22; H, 2,68; N, 21,29.found C, 50.22; H, 2.68; N, 21.29.

IR (KBr, cm^-1): 3090 (OH + CAR-H), 1627 (C=N), 1564 (C=C), 1539 (C=C), 1473, 1416, 1304, 1233, 1185 (C-OH), 1133, 1086, 1013, 973, 844, 810, 779, 745, 704;IR (KBr, cm ^-1 ): 3090 (OH + CAR-H), 1627 (C = N), 1564 (C = C), 1539 (C = C), 1473, 1416, 1304, 1233, 1185 (C -OH), 1133, 1086, 1013, 973, 844, 810, 779, 745, 704;

PL 224 660 B1 ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d_e δ, ppm): 11,20 (s, 1H, C2'-OH), 9,95 (s, 1H, C4-OH), 8,52 (d, J=9,8 Hz, 1H, C8-H), 8,13 (d, J=8,2 Hz, 1H, Ca-H), 7,54 (d, J=9,7 Hz, 1H, C7-H), 8,0 (dd, J=7,8 i 2,4 Hz, 1H, C₅~H), 6,51 (d, J=2,5 Hz, 1H, C3-H); MS (El, m/z): 262 (M^o+, 21), 227 (10), 205 (5), 199 (18), 171 (8), 121 (9), 168 (85), 108 (2), 79(4), 52 (4), 39 (5).GB ¹ 224 660 B1 H NMR (500 MHz, DMSO-d _e δ, ppm): 11.20 (s, 1H, C2'-OH), 9.95 (s, 1H, C4-OH), 8.52 (d, J = 9.8 Hz, 1H, C8-H), 8.13 (d, J = 8.2 Hz, 1H, Ca-H), 7.54 (d, J = 9.7 Hz, 1H, C7-H), 8.0 (dd, J = 7.8 and 2.4 Hz, 1H, C ₅ ~ H), 6.51 (d, J = 2.5 Hz, 1H, C3-H ); MS (EI, m / z): 262 (Mo ⁺ , 21), 227 (10), 205 (5), 199 (18), 171 (8), 121 (9), 168 (85), 108 (2 ), 79 (4), 52 (4), 39 (5).

P r z y k ł a d 2 - Wzór IVP r z k ł a d 2 - Formula IV

6-chloro-3-(2,4-dihydroksy-3-metylofenylo)-1,2,4-triazolo[4,3-b]pirydazyna6-chloro-3- (2,4-dihydroxy-3-methylphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine

0,0017 mola 3-chloro-6-hydrazynopirydazyny oraz 0,0017 mola S3MTB przenoszono do 8,5 mL metanolu i ogrzewano we wrzeniu 2,5 h. Mieszaninę poreakcyjną na gorąco przefiltrowano przez lejek Buchnera. Otrzymano osad I i przesącz I, przy czym osad I odrzucono. Przesącz I zatężono a wydzi elony osad II przekrystalizowano z układu rozpuszczalników metanol/woda (4 mL) (2:3). Otrzymano związek o wzorze IV.0.0017 mol of 3-chloro-6-hydrazinopyridazine and 0.0017 mol of S3MTB were transferred to 8.5 mL of methanol and refluxed for 2.5 h. The hot reaction mixture was filtered through a Buchner funnel. Precipitate I and filtrate I were obtained, while precipitate I was discarded. Filtrate I was concentrated and the eluted precipitate II was recrystallized from a methanol / water (4 mL) solvent system (2: 3). Compound of formula IV is obtained.

Wydajność 73%, t.t. 151-152°C. Dla wzoru: C12H9CIN4O2, M=276,68 obliczono: C, 52,09; H, 3,28; N, 20,25;73% yield, mp. 151-152 ° C. For the formula: C12H9CIN4O2, M = 276.68 Calculated: C, 52.09; H, 3.28; N, 20.25;

otrzymano: C, 51,94; H, 3,30; N, 20,18.found C, 51.94; H, 3.30; N, 20.18.

IR (KBr, cm^-1): 3434, 3099 (OH), 3043 (Car-H), 2924 (CH), 1621 (C=N), 1533 (C=C), 1459, 1386, 1323, 1267, 1235, 1206, 1168 (C-OH), 1134, 1085, 1054, 951, 894, 855, 814, 795, 778, 758, 742, 707, 628;IR (KBr, cm ^-1 ): 3434, 3099 (OH), 3043 (Car-H), 2924 (CH), 1621 (C = N), 1533 (C = C), 1459, 1386, 1323, 1267, 1235, 1206, 1168 (C-OH), 1134, 1085, 1054, 951, 894, 855, 814, 795, 778, 758, 742, 707, 628;

¹H NMR (500 MHz, CDCI3, δ, ppm): 11,62 (s, 1H, C₂-OH), 9,99 (s, 1H, C4-OH), 8,55 (d, J=9,7 Hz, 1H, Cs-H), 8.24 (d, J=8,5 Hz, 1H, Ο^Ή), 7,58 (d, J=9,7 Hz, 1H, C7-H), 6,62 (d, J=8,7 Hz, 1H, C₅'-H), 2,10 (s, 3H, CH3); MS (El, m/z): 276 (M+, 53), 241 (100), 213 (3), 138 (3), 94 (8), 64 (5), 39 (5). ¹ H NMR (500 MHz, CDCl3, δ, ppm): 11.62 (s, 1H, C ₂ OH), 9.99 (s, 1H, C4-OH), 8.55 (d, J = 9 , 7 Hz, 1H, Cs-H), 8.24 (d, J = 8.5 Hz, 1H, Ο ^ Ή), 7.58 (d, J = 9.7 Hz, 1H, C7-H), 6 , 62 (d, J = 8.7Hz, 1H, C ₅ '-H), 2.10 (s, 3H, CH3); MS (EI, m / z): 276 (M +, 53), 241 (100), 213 (3), 138 (3), 94 (8), 64 (5), 39 (5).

P r z y k ł a d 3 - Wzór VP r z k ł a d 3 - Formula V

6-chloro-3-(5-etylo-2,4-dihydroksyfenylo)-1,2,4-triazolo[4,3-b]pirydazyna6-chloro-3- (5-ethyl-2,4-dihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine

0,0017 mola 3-chloro-6-hydrazynopirydazyny oraz 0,0017 mola SEBT przenoszono do 8,5 mL metanolu i ogrzewano we wrzeniu 3 h. Mieszaninę poreakcyjną na gorąco przefiltrowano przez lejek Buchnera. Otrzymano osad I i przesącz I, przy czym osad I odrzucono. Przesącz I zatężono a wydzi elony osad II przekrystalizowano z układu rozpuszczalników metanol/woda (5 mL) (3:1). Otrzymano związek o wzorze V. Wydajność 71%, t.t. 141-143°C. Dla wzoru: C₁₃H₁₁CIN₄O₂, M=290,71 obliczono: C, 53,71; H, 3,81; N, 19,27;0.0017 moles of 3-chloro-6-hydrazinopyridazine and 0.0017 moles of SEBT were transferred to 8.5 mL of methanol and heated to reflux for 3 h. The hot reaction mixture was filtered through a Buchner funnel. Precipitate I and filtrate I were obtained, while precipitate I was discarded. Filtrate I was concentrated and the eluted precipitate II was recrystallized from a methanol / water (5 mL) solvent system (3: 1). Compound of formula V was obtained. Yield 71%, mp 141-143 ° C. For the formula: C ₁₃ H ₁₁ CIN ₄ O ₂ , M = 290.71 Calculated: C, 53.71; H, 3.81; N, 19.27;

otrzymano: 53,84; H, 3,80; N, 19,36.found: 53.84; H, 3.80; N, 19.36.

IR(KBr, cm^-1): 2965 (OH, C_AR-H), 2924 (CH), 1617 (C=N), 1559 (C=C), 1439,1407, 1274, 1245, 1141, 1089, 1039, 1013, 972, 930, 903, 846, 802, 766, 744;IR (KBr, cm ^-1 ): 2965 (OH, C _AR -H), 2924 (CH), 1617 (C = N), 1559 (C = C), 1439.1407, 1274, 1245, 1141, 1089, 1039, 1013, 972, 930, 903, 846, 802, 766, 744;

¹H NMR(500 MHz, CDCI₃, δ, ppm): 9,95 (s, 1H, C₄'-OH), 8,51 (d, J=9,7 Hz, 1H, C₈-H), 7,79 (s, 1H, Ca-H), 7,54 (d, J=9,7, 1H, C₇-H), 6,56 (s, 1H, C₃-H), 2,54 (m, 2H, CH₂CH₃), 1,16 (t, 3H, CH₂CH); MS (El, m/z): 290 (M+, 32), 277 (33), 275 (100), 78 (4), 69 (5), 64 (4). ¹ H NMR (500 MHz, CDCl ₃ , δ, ppm): 9.95 (s, 1H, C ₄ '-OH), 8.51 (d, J = 9.7 Hz, 1H, C ₈ -H) , 7.79 (s, 1H, Ca-H), 7.54 (d, J = 9.7, 1H, C ₇ -H), 6.56 (s, 1H, C ₃ -H), 2, 54 (m, 2H, CH ₂ CH ₃ ), 1.16 (t, 3H, CH ₂ CH); MS (EI, m / z): 290 (M +, 32), 277 (33), 275 (100), 78 (4), 69 (5), 64 (4).

P r z y k ł a d 4 - Wzór VIP r z k ł a d 4 - Model VI

6-chloro-3-(5-chloro-2,4-dihydroksyfenylo)-1,2,4-triazolo[4,3-b]pirydazyna6-chloro-3- (5-chloro-2,4-dihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine

0,0017 mola 3-chloro-6-hydrazynopirydazyny oraz 0,0017 mola SClTB przenoszono do 8,5 mL metanolu i ogrzewano we wrzeniu 3 h. Mieszaninę poreakcyjną pozostawiono na 24 h w temperaturze pokojowej i przefiltrowano przez lejek Buchnera. Otrzymano osad I i przesącz I, przy czym osad I odrzucono. Przesącz I zatężono a wydzielony osad II przekrystalizowano z układu rozpuszczalników metanol/woda (2:3). Otrzymano związek o wzorze VI.0.0017 mol of 3-chloro-6-hydrazinopyridazine and 0.0017 mol of SClTB were transferred to 8.5 mL of methanol and refluxed for 3 hours. The reaction mixture was left for 24 hours at room temperature and filtered through a Buchner funnel. Precipitate I and filtrate I were obtained, while precipitate I was discarded. Filtrate I was concentrated and the separated precipitate II was recrystallized from a methanol / water solvent system (2: 3). Compound of formula VI is obtained.

Wydajność: 69%, t.t. 167-168°C. Dla wzoru: C₁₁H₆CI₂N₄O₂, M=297,10 obliczono: C, 44,47; H, 2,04; N, 18,86; otrzymano: C, 44,38; H, 2,03; N, 18,92.Yield: 69%, mp 167-168 ° C. For the formula: C ₁₁ H ₆ Cl ₂ N ₄ O ₂ , M = 297.10 Calculated: C, 44.47; H, 2.04; N, 18.86; found C, 44.38; H, 2.03; N, 18.92.

IR (KBr, cm^-1): 3419 (OH), 3086 (Car-H), 2922 (C-H), 1611 (C=N), 1562 (C=C), 1539 (C=C), 1493, 1478, 1410, 1337, 1298, 1261, 1234, 1183 (C-OH), 1158, 1095, 1057, 1018, 991, 944, 898, 837, 783, 757, 739;IR (KBr, cm ^-1 ): 3419 (OH), 3086 (Car-H), 2922 (CH), 1611 (C = N), 1562 (C = C), 1539 (C = C), 1493, 1478 , 1410, 1337, 1298, 1261, 1234, 1183 (C-OH), 1158, 1095, 1057, 1018, 991, 944, 898, 837, 783, 757, 739;

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d_e, δ, ppm) 11,82 (s, 1H, C₂-OH), 10,87 (s, 1H, C4-OH), 8,54 (d, J= 9,7 Hz, 1H, C8-H), 7,94 (s, 1H, C_ff-H), 7,57 (d, J=9,7 Hz, 1H, C7-H), 6,56 (s, 1H, C₃~H); MS (El, m/z, B): 297 (M+, 2), 296 (100), 262 (13), 233 (12), 205 (6), 170 (12), 158 (6), 142 (10), 134 (5), 99 (7), 79 (5), 69 (7), 51 (5), 38 (15), 36 (44). ¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d _s, δ, ppm) 11.82 (s, 1H, C ₂ OH), 10.87 (s, 1H, C4-OH), 8.54 (d, J = 9.7 Hz, 1H, C8-H), 7.94 (s, 1H, C _ff -H), 7.57 (d, J = 9.7 Hz, 1H, C7-H), 6.56 (s, 1H, C ₃ ~ H); MS (EI, m / z, B): 297 (M +, 2), 296 (100), 262 (13), 233 (12), 205 (6), 170 (12), 158 (6), 142 ( 10), 134 (5), 99 (7), 79 (5), 69 (7), 51 (5), 38 (15), 36 (44).

P r z y k ł a d 5 - Wzór VIIP r z k l a d 5 - Formula VII

6-Chloro-3-(2,3,4-trihydroksyfenylo)-1,2,4-triazolo[4,3-b]pirydazyn6-Chloro-3- (2,3,4-trihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazines

0,0017 mola 3-chloro-6-hydrazynopirydazyny oraz 0,0017 mola sulfotlenku bis[(2,3,4-trihydroksyfenylo)metanotionu] (S3TTB) przenoszono do 8,5 mL metanolu i ogrzewano we wrzeniu 3 h. Mieszaninę poreakcyjną przefiltrowano na gorąco przez lejek Buchnera. Otrzymano osad I i przesącz I,0.0017 mol of 3-chloro-6-hydrazinopyridazine and 0.0017 mol of bis [(2,3,4-trihydroxyphenyl) methanothion] sulfoxide (S3TTB) were transferred to 8.5 mL of methanol and heated to reflux for 3 h. hot through a Buchner funnel. The precipitate I and filtrate I were obtained,

PL 224 660 B1 przy czym osad I odrzucono. Przesącz I zatężono, a wydzielony osad II przekrystalizowano z układu rozpuszczalników metanol/woda (2:3) (4 mL). Otrzymano związek o wzorze VII.Pellet I was discarded. The filtrate I was concentrated and the separated precipitate II was recrystallized from the solvent system methanol / water (2: 3) (4 mL). Compound of formula VII is obtained.

Wydajność 63%, t.t. 172-172°C. Dla wzoru: C11H7N4O2CI, M=278,66 obliczono: C, 47,41; H, 2,53; N, 20,11;Yield 63%, mp. 172-172 ° C. For Formula: C11H7N4O2Cl, M = 278.66 Calculated: C, 47.41; H, 2.53; N, 20.11;

otrzymano: C, 47,50; H, 2,50; N, 20,16.found C, 47.50; H, 2.50; N, 20.16.

IR (KBr, cm^-1): 3397 (OH), 3228 (OH), 1630 (C=N), 1508 (C=C), 1479, 1420, 1328, 1297, 1231, 1174 (C-OH), 1083, 1010, 980, 897, 801, 720;IR (KBr, cm ^-1 ): 3397 (OH), 3228 (OH), 1630 (C = N), 1508 (C = C), 1479, 1420, 1328, 1297, 1231, 1174 (C-OH), 1083, 1010, 980, 897, 801, 720;

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃, δ, ppm): 11,81 (s, 1H, C₂-OH), 10,32 (s, 1H, C4'-OH), 8,85 (s, 1H, Cs-H), 8,54 (d, J=9,7 Hz, 1H, Cs-H), 7,87 (d, J=9,7 Hz, 1H, C7-H), 6,65 (d, J=7,3 Hz, 1H, C6'-H), 6,52 (d, J=7,3 Hz, 1H, C₅~H); MS (El, m/z): 278 (M^o+, 21), 276 (14), 258 (7), 244 (17), 215 (12), 200 (51), 168 (85), 158 (10), 152 (39), 128 (13), 112 (25), 95 (13), 79 (32), 72 (15), 69 (30), 45 (24), 39 (36), 36 (49). ¹ H NMR (500 MHz, _CDCl3, δ, ppm): 11.81 (s, 1H, C ₂ OH), 10.32 (s, 1H, C4'-OH), 8.85 (s, 1H , Cs-H), 8.54 (d, J = 9.7 Hz, 1H, Cs-H), 7.87 (d, J = 9.7 Hz, 1H, C7-H), 6.65 ( d, J = 7.3 Hz, 1H, C 6'-H), 6.52 (d, J = 7.3 Hz, 1H, C ₅ -H); MS (EI, m / z): 278 (Mo ⁺ , 21), 276 (14), 258 (7), 244 (17), 215 (12), 200 (51), 168 (85), 158 (10 ), 152 (39), 128 (13), 112 (25), 95 (13), 79 (32), 72 (15), 69 (30), 45 (24), 39 (36), 36 (49 ).

P r z y k ł a d 6 - Wzór VIIIP r z k l a d 6 - Formula VIII

3-(2,4-dihydroksyfenylo)-7-(trifluorometylo)-1,2,4-triazolo[4,3-a]pirymidyna3- (2,4-dihydroxyphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine

0,0014 mola 2-hydrazyno-(4-trifluorometylo)pirymidyny oraz 0,0014 mola STB przenoszono do 7 mL metanolu i ogrzewano we wrzeniu 3 h. Mieszaninę poreakcyjną pozostawiono na 24 h w temperaturze pokojowej i przefiltrowano przez lejek Buchnera. Otrzymano osad I i przesącz I, przy czym osad I odrzucono. Przesącz I zatężono i dodano 12 mL układu rozpuszczalników metanol/woda (1:1). Wydzielony osad II przekrystalizowano z 6 mL metanolu. Otrzymano związek o wzorze VIII. Wydajność 66%, t.t. 185-186°C. Dla wzoru: C1₂HyF₃N4O₂, M=296,19 obliczono: C, 48,66; H, 2,38; N, 18,91;0.0014 mol of 2-hydrazino- (4-trifluoromethyl) pyrimidine and 0.0014 mol of STB were transferred to 7 mL of methanol and refluxed for 3 h. The reaction mixture was left for 24 h at room temperature and filtered through a Buchner funnel. Precipitate I and filtrate I were obtained, while precipitate I was discarded. Filtrate I was concentrated and 12 mL of a methanol / water solvent system (1: 1) was added. The separated precipitate II was recrystallized from 6 mL of methanol. The compound of formula VIII is obtained. Yield 66%, mp 185-186 ° C. For the formula: C1 ₂ HyF ₃ N 4 O ₂ , M = 296.19 Calculated: C, 48.66; H, 2.38; N, 18.91;

otrzymano: C, 48,54; H, 2,37; N, 18,86.found C, 48.54; H, 2.37; N, 18.86.

IR (KBr, cm^-1): 3201, 3117 (OH), 1630 (C=N), 1587 (C=C), 1555 (C=C), 1528, 1455, 1432, 1402, 1375, 1337, 1302,1274,1201 (C-OH), 1159, 1087, 1005, 978, 969, 866, 819, 784, 776, 761, 716, 686, 653, 640.IR (KBr, cm ^-1 ): 3201, 3117 (OH), 1630 (C = N), 1587 (C = C), 1555 (C = C), 1528, 1455, 1432, 1402, 1375, 1337, 1302 , 1274, 1201 (C-OH), 1159, 1087, 1005, 978, 969, 866, 819, 784, 776, 761, 716, 686, 653, 640.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d_e, δ): 10,94 (s, 1H, C₂-OH), 10,13 (s, 1H, C4-OH), 9,75 (d, J= 6,9 Hz, 1H, Ca-H), 7,97 (d, J=8,6 Hz, 1H, Ca~H), 7,89 (d, J=6,9 Hz, 1H, C5-H), 6,50 (d, J=8,6 i 2,3 Hz, 1H, C₅~H), 6,42 (d, J=2,3 Hz, 1H, C₃-H); MS (El, m/z): 296 (M+), 278, 340, 227, 166, 121, 109, 80, 52, 40. ¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d _e, δ): 10.94 (s, 1H, C ₂ OH), 10.13 (s, 1H, C4-OH), 9.75 (d, J = 6.9 Hz, 1H, Ca-H), 7.97 (d, J = 8.6 Hz, 1H, Ca ~ H), 7.89 (d, J = 6.9 Hz, 1H, C5-H ), 6.50 (d, J = 8.6 and 2.3 Hz, 1H, C ₅ -H), 6.42 (d, J = 2.3 Hz, 1H, C ₃ -H); MS (EI, m / z): 296 (M +), 278, 340, 227, 166, 121, 109, 80, 52, 40.

P r z y k ł a d 7 - Wzór IXP r z k l a d 7 - Formula IX

3-(2,4-dihydroksy-3-metylofenylo)-7-(trifluorometylo)-1,2,4-triazolo[4,3-a]pirymidyna3- (2,4-dihydroxy-3-methylphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine

0,0014 mola 2-hydrazyno-4-(trifluorometylo)pirymidyny oraz 0,0014 mola S3MTB przenoszono do 7 mL metanolu i ogrzewano we wrzeniu 3 h. Mieszaninę poreakcyjną na gorąco przefiltrowano przez lejek Buchnera. Otrzymano osad I i przesącz I. Przesącz I zatężono, a wydzielony osad II połączono z osadem I, przefiltrowano i przekrystalizowano z 4 mL układu rozpuszczalników metanol/woda (3:1). Otrzymano związek o wzorze IX.0.0014 mol of 2-hydrazine-4- (trifluoromethyl) pyrimidine and 0.0014 mol of S3MTB were transferred to 7 mL of methanol and refluxed for 3 h. The hot reaction mixture was filtered through a Buchner funnel. Precipitate I and filtrate I were obtained. Filtrate I was concentrated, and the separated precipitate II was combined with precipitate I, filtered and recrystallized from 4 mL of a methanol / water solvent system (3: 1). Compound of formula IX is obtained.

Wydajność 82%, t.t. 280-281°C. Dla wzoru: C₁₃H₉F₃N₄O₂, M=310,23 obliczono: C, 50,33; H, 2,92; N, 18,06; otrzymano: C, 50,41; H, 2,92; N, 18,02.Yield 82%, mp 280-281 ° C. For the formula: C ₁₃ H ₉ F ₃ N ₄ O ₂ , M = 310.23 Calculated: C, 50.33; H, 2.92; N, 18.06; found C, 50.41; H, 2.92; N, 18.02.

IR (KBr, cm^-1): 3176 (OH), 2927 (C-H), 1617 (C=N), 1553 (C=C), 1436, 1402,1382, 1341, 1294, 11592 (C-OH), 1154, 1101, 1074, 1014, 966, 910, 877, 859, 821, 798, 784, 770, 728, 715;IR (KBr, cm ^-1 ): 3176 (OH), 2927 (CH), 1617 (C = N), 1553 (C = C), 1436, 1402.1382, 1341, 1294, 11592 (C-OH), 1154, 1101, 1074, 1014, 966, 910, 877, 859, 821, 798, 784, 770, 728, 715;

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d_e, δ, ppm): 11,23 (s, 1H, C₂-OH), 10,02 (s, 1H, C4-OH), 9,75 (d, J=6,9 Hz, 1H, Cs-H), 7,89 (d, J=6,9 Hz, 1H, C5-H), 7,84 (d, J=8,6 Hz, 1H, Ce-H), 6,57 (d, J=8,6 Hz, 1H, C₅~H), 2,08 (s, 3H, CH₃); MS 10 (El, m/z, B): 310 (M+, 100), 296 (6), 281 (10), 265 (4), 253 (4), 223 (3), 164 (16), 148 (11), 119 (4), 94(4), 65 (4), 39(4). ¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d _s, δ, ppm): 11.23 (s, 1H, C ₂ OH), 10.02 (s, 1H, C4-OH), 9.75 (d, J = 6.9 Hz, 1H, Cs-H), 7.89 (d, J = 6.9 Hz, 1H, C5-H), 7.84 (d, J = 8.6 Hz, 1H, Ce -H), 6.57 (d, J = 8.6 Hz, 1H, C ₅ -H), 2.08 (s, 3H, CH ₃ ); MS 10 (EI, m / z, B): 310 (M +, 100), 296 (6), 281 (10), 265 (4), 253 (4), 223 (3), 164 (16), 148 (11), 119 (4), 94 (4), 65 (4), 39 (4).

P r z y k ł a d 8 - Wzór XP r z k ł a d 8 - Formula X

3-(5-etylo-2,4-dihydroksyfenylo)-7-(trifluorometylo)-1,2,4-triazolo[4,3-a]pirymidyna3- (5-ethyl-2,4-dihydroxyphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine

0,0014 mola 2-hydrazyno-4-(trifluorometylo)pirymidyny oraz 0,0014 mola sulfotlenku bis[(5-etylo-2,4-dihydroksyfenylo)metanotionu] (SETB) przenoszono do 7 mL metanolu i ogrzewano we wrzeniu (3 h). Mieszaninę poreakcyjną pozostawiono na 24 h w temperaturze pokojowej, po czym przefiltrowano. Otrzymano przesącz I i osad I, przy czym osad I odrzucono. Przesącz I zatężono do sucha, dodano 5 ml eteru dietylowego, wymieszano i pozostawiono na (1 h) w temperaturze pokojowej. Po przefiltrowaniu otrzymany osad II przekrystalizowano z 5 mL układu rozpuszczalników metanol/woda (3:2).0.0014 moles of 2-hydrazine-4- (trifluoromethyl) pyrimidine and 0.0014 moles of bis [(5-ethyl-2,4-dihydroxyphenyl) methanothion] sulfoxide (SETB) were transferred to 7 mL of methanol and heated to reflux (3 hr. ). The reaction mixture was left for 24 h at room temperature and then filtered. Filtrate I and precipitate I were obtained, while precipitate I was discarded. Filtrate I was concentrated to dryness, 5 ml of diethyl ether were added, stirred and left for (1 h) at room temperature. After filtration, the obtained precipitate II was recrystallized from 5 mL of methanol / water (3: 2).

Wydajność 76%, t.t. 196°C. Dla wzoru: C₁₄H₁₁F₃N₄O₂, M=324,26 obliczono: C, 51,86; H, 3,42; N, 17,28;Yield 76%, mp 196 ° C. For the formula: C ₁₄ H ₁₁ F ₃ N ₄ O ₂ , M = 324.26 Calculated: C, 51.86; H, 3.42; N, 17.28;

otrzymano: C, 51,78; H, 3,44; N, 17,21.found C, 51.78; H, 3.44; N, 17.21.

PL 224 660 B1PL 224 660 B1

IR (KBr, cm^-1): 3245 (OH), 3057 (Car-H), 2948 (C-H), 1623 (C=N), 1592 (C=N), 1507 (C=C), 1492, 1451, 1370, 1328, 1275, 1247, 1218 (O-OH), 1186, 1144, 1039, 1008, 922, 835, 791,763, 730;IR (KBr, cm ^-1 ): 3245 (OH), 3057 (Car-H), 2948 (CH), 1623 (C = N), 1592 (C = N), 1507 (C = C), 1492, 1451 , 1370, 1328, 1275, 1247, 1218 (O-OH), 1186, 1144, 1039, 1008, 922, 835, 791, 763, 730;

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d_e, δ, ppm): 10,76 (s, 1H, C₂-OH), 10,11 (s, 1H, C4-OH), 9,76 (d, J= 6,9 Hz, 1H, C6-H), 7,90 (d, J=6,7 Hz, 1H, O₅-H), 7,84 (s, 1H, Oe-H), 6,40 (s, 1H, Cy-H), 2,55 (q, 2H, CI±CH3),1,17 (s, 3H, CH₂CH₂); MS (EI, m/z, B): 324 (M^o+, 38), 309 (M^o+-CH3, 100), 212 (15), 181 (24), 164 (8), 165 (16), 149 (6), 121 (3), 68 (8), 65 (5), 39 (4). ¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d _s, δ, ppm): 10.76 (s, 1H, C ₂ OH), 10.11 (s, 1H, C4-OH), 9.76 (d, J = 6.9 Hz, 1H, C6-H), 7.90 (d, J = 6.7 Hz, 1H, O ₅ -H), 7.84 (s, 1H, Oe-H), 6, 40 (s, 1H, Cy-H), 2.55 (q, 2H, CI ± CH3), 1.17 (s, 3H, CH ₂ CH _2); MS (EI, m / z, B): 324 (Mo ⁺ , 38), 309 ( ^{Mo + -} CH 3, 100), 212 (15), 181 (24), 164 (8), 165 (16), 149 (6), 121 (3), 68 (8), 65 (5), 39 (4).

P r z y k ł a d 9 - WzórXIP r z x l a d 9 - Model XI

3-(5-chloro-2,4-dihydroksyfenylo)-7-(trifluorometylo)-1,2,4-triazolo[4,3-a]pirymidyna3- (5-chloro-2,4-dihydroxyphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine

0,0014 mola 2-hydrazyno-4-(trifluorometylo)pirymidyny oraz 0,0014 mola SCITB przenoszono do 7 mL metanolu i ogrzewano we wrzeniu 3 h. Mieszaninę poreakcyjną pozostawiono na 24 h w temperaturze pokojowej i przefiltrowano przez lejek Buchnera. Otrzymano osad I i przesącz I. Przesącz I zatężono a uzyskany osad II połączono z osadem I. Mieszaninę osadów przekrystalizowano z układu rozpuszczalników metanol/woda (1:1) (6 mL). Otrzymano związek o wzorze XI. Wydajność: 68%, t.t. 188-189°C. Dla wzoru: C1₂H6ClF3N4O₂, M=330,65 obliczono: O, 43,59; H, 1,83; N, 16,94;0.0014 mol of 2-hydrazine-4- (trifluoromethyl) pyrimidine and 0.0014 mol of SCITB were transferred to 7 mL of methanol and refluxed for 3 h. The reaction mixture was left for 24 h at room temperature and filtered through a Buchner funnel. Precipitate I and filtrate I were obtained. Filtrate I was concentrated and the resulting precipitate II was combined with precipitate I. The mixture of precipitates was recrystallized from a solvent system of methanol / water (1: 1) (6 mL). Compound of formula XI is obtained. Yield: 68%, mp 188-189 ° C. For the formula: C1 ₂ H6ClF3N4O ₂ , M = 330.65 Calculated: 0.43.59; H, 1.83; N, 16.94;

otrzymano: C, 43,66; H, 1,82; N, 17,00.found C, 43.66; H, 1.82; N, 17.00.

IR (KBr, cm^-1): 3260 (OH), 3072 (Car-H), 2954 (C-H), 2849 (C-H), 1606 (C=N), 1583 (C=C), 1484, 1445, 1364, 1335, 1304, 1273, 1252, 1224, 1192 (O-OH), 1159, 1142, 1050, 1000, 909, 829, 789, 758, 724;IR (KBr, cm ^-1 ): 3260 (OH), 3072 (Car-H), 2954 (CH), 2849 (CH), 1606 (C = N), 1583 (C = C), 1484, 1445, 1364 , 1335, 1304, 1273, 1252, 1224, 1192 (O-OH), 1159, 1142, 1050, 1000, 909, 829, 789, 758, 724;

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d_e, δ ppm): 10,94 (s, 1H, C_z-OH), 10,47 (s, 1H, C4-OH), 8,79 (d, J=4,9 Hz, 1H, C6-H), 8,14 (s, 1H, Os-H), 7,28 (d, J=4,9 Hz, 1H, C_s-H), 6.65 (s, 1H, O₅~H); MS (EI, m/z, B): 331 (M++1,67), 330 (M+, 2), 261 (3), 189 (34), 187 (100), 178 (4), 164 (5), 131 (6), 94 (4), 69 (6). ¹ H NMR (500 MHz, DMSO-d _e , δ ppm): 10.94 (s, 1H, C _z -OH), 10.47 (s, 1H, C4-OH), 8.79 (d, J = 4.9 Hz, 1H, C6-H), 8.14 (s, 1H, Os-H), 7.28 (d, J = 4.9 Hz, 1H, C _s -H), 6.65 (s , 1H, O ₅ ~ H); MS (EI, m / z, B): 331 (M ++ 1.67), 330 (M +, 2), 261 (3), 189 (34), 187 (100), 178 (4), 164 ( 5), 131 (6), 94 (4), 69 (6).

Użytą w powyższych przykładach 3-chloro-6-hydrazynopirydazynę (3-chloro-6-hydrazinopyridazine) zakupiono wg katalogu Aldrich, nr kat. 632619, zaś 2-hydrazyno-4-(trifluorometylo)pirymidynę {N-[4-(trifluoromethyl)pirimidin-2-yl]hydrazine lub 2-hydrazino-4-(trifluoromethyl)pirimidine} zakupiono wg katalogu Fluorochem, nr kat. 017278.The 3-chloro-6-hydrazinopyridazine (3-chloro-6-hydrazinopyridazine) used in the above examples was purchased from Aldrich catalog number 632619, and 2-hydrazine-4- (trifluoromethyl) pyrimidine {N- [4- (trifluoromethyl) pirimidin-2-yl] hydrazine or 2-hydrazino-4- (trifluoromethyl) pyrimidine} was purchased from the Fluorochem catalog, cat. no. 017278.

P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z yC o r s e c t i o n

Otrzymane związki sprawdzono pod kątem działania przeciwnowotworowego. W tym celu wykonano badania na aktywność antyproliferacyjną w stosunku do następujących komórek ludzkich nowotworów: pęcherza moczowego HCV 29T, płuc A549, sutka T47D oraz gruczolakoraka okrężnicy SW707. Wyniki doświadczeń w postaci ID₅₀ (dawka powodująca zahamowanie proliferacji 50% populacji komórek nowotworowych) wyznaczone dla każdego związku na komórkach poszczególnych linii zebrano w Tabeli 1. Przyjętym kryterium aktywności nowych związków w badaniach przesiewowych in vitro jest poziom ID₅₀ nie wyższy niż 4 μg/mL [Geran RI i wsp. Oancer Ohemotherapy Reports, 3,2(part3):59-61, 1972].The obtained compounds were checked for anti-tumor activity. For this purpose, tests were performed on the antiproliferative activity against the following human tumor cells: bladder HCV 29T, lung A549, breast T47D and colon adenocarcinoma SW707. The results of the experiments in the form of ID ₅₀ (the dose inhibiting the proliferation of 50% of the population of tumor cells) determined for each compound on the cells of individual lines are presented in Table 1. The adopted criterion for the activity of new compounds in the in vitro screening is the ID ₅₀ level not higher than 4 μg / mL [Geran RI et al. Oancer Ohemotherapy Reports, 3.2 (part3): 59-61, 1972].

Test cytotoksyczny SRBCytotoxic SRB test

Badania wykonano przy użyciu testu cytotoksycznego SRB, mierzącego zahamowanie proliferacji komórek docelowych w 72-godzinnej hodowli. in vitro [Skehan et al., J. Natl. Oancer Inst., 82:1107-1112, 1990].The studies were performed using the cytotoxic SRB assay measuring inhibition of target cell proliferation in a 72-hour culture. in vitro [Skehan et al., J. Natl. Oancer Inst., 82: 1107-1112,1990].

Roztwory wyjściowe testowanych związków o stężeniu 1 mg/mL przygotowa no ex tempore do każdego doświadczenia rozpuszczając 1 mg preparatu w 100 μL DMSO + 900 μL medium hodowlanego. Rozpuszczalnikiem dla dalszych rozcieńczeń było medium hodowlane. Związki testowano w stężeniach 100, 10, 1, 0.1 μg/mL. Jako kontrolę zastosowano cisplatynę w stężeniach 100, 10, 1, 0.1 μg/mL oraz DMSO w stężeniach odpowiadających jego stężeniu w próbkach związków: 1, 0,1, 0,01 i 0,001%. W każdym doświadczeniu próbki zawierające określone stężenia preparatu nanoszono w trzech powtórzeniach. Doświadczenia powtarzano trzy razy.Stock solutions of test compounds at a concentration of 1 mg / mL were prepared ex tempore for each experiment by dissolving 1 mg of the preparation in 100 μL DMSO + 900 μL culture medium. The solvent for further dilutions was the culture medium. Compounds were tested at concentrations of 100, 10, 1, 0.1 µg / mL. As a control, cisplatin was used at concentrations of 100, 10, 1, 0.1 µg / mL and DMSO at concentrations corresponding to its concentration in the samples of compounds: 1, 0.1, 0.01 and 0.001%. In each experiment, samples containing specific concentrations of the preparation were applied in triplicate. The experiments were repeated three times.

Linie komórkoweCell lines

W badaniach zastosowano linie komórkowe znajdujące się w banku linii komórkowych Instytutu Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN we Wrocławiu. Komórki hodowane były w medium RPMI + opti-MEM (1:1) z dodatkiem 5% FBS, 2 mM glutaminy, 1 mM pirogronianu sodu oraz 0,8 mg/L insuliny w przypadku linii T47D. Wszystkie media zawierały antybiotyki: 100 mg/ml streptomycyny i 100 U/mL penicyliny. Komórki hodowano w wilgotnej atmosferze 5% CO₂ w 37°C.The research used cell lines from the cell line bank of the Institute of Immunology and Experimental Therapy of the Polish Academy of Sciences in Wrocław. Cells were grown in RPMI + opti-MEM (1: 1) medium with 5% FBS, 2 mM glutamine, 1 mM sodium pyruvate and 0.8 mg / L insulin for the T47D line. All media contained antibiotics: 100 mg / ml streptomycin and 100 U / ml penicillin. Cells were cultured in a humidified atmosphere of 5% CO ₂ at 37 ° C.

Badania wykonano w Instytucie Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN we Wrocławiu.The research was carried out at the Institute of Immunology and Experimental Therapy of the Polish Academy of Sciences in Wrocław.

PL 224 660 B1PL 224 660 B1

T a b e l a 1. Aktywność antyproliferacyjna związkówT a b e l a 1. Antiproliferative activity of compounds

Przykład Example R R HCV29T HCV29T A549 A549 T47D T47D SW707 SW707 ID50 [gg/mL] ID50 [gg / mL] 1 1 R1=R2=R₃= =HR1 = R2 = _R3 = H 10,03 ± 2,50 10.03 ± 2.50 3,40 ± 1,10 3.40 ± 1.10 7,10 ± 0,20 7.10 ± 0.20 1,80 ± 1,40 1.80 ± 1.40 2 2 R1=-CH3 R1 = -CH3 20,70 ± 4,84 20.70 ± 4.84 nie badano not tested nie badano not tested nie badano not tested 3 3 R2=-C2Hs R2 = -C2Hs 4,29 ± 0,84 4.29 ± 0.84 26,26 ± 8,89 26.26 ± 8.89 12,87 ± 4,41 12.87 ± 4.41 4,25 ± 0,87 4.25 ± 0.87 4 4 R2=-C2Hs R2 = -C2Hs 9,23 ± 0,14 9.23 ± 0.14 nie badano not tested nie badano not tested nie badano not tested 5 5 R1=-OH R1 = -OH 34,12 ± 11,60 34.12 ± 11.60 nie badano not tested nie badano not tested nie badano not tested 6 6 R1=R2=R₃= =HR1 = R2 = _R3 = H 3,91 ± 0,43 3.91 ± 0.43 5,30 ± 2,64 5.30 ± 2.64 0,61 ± 0,30 0.61 ± 0.30 3,28 ± 0,56 3.28 ± 0.56 7 7 R1=-CH3 R1 = -CH3 32,37 ± 5,08 32.37 ± 5.08 nie badano not tested nie badano not tested nie badano not tested 8 8 R2=-C2Hs R2 = -C2Hs 10,11 ± 3,55 10.11 ± 3.55 nie badano not tested nie badano not tested nie badano not tested 9 9 R2=-Cl R2 = -Cl 3,53 ± 0,14 3.53 ± 0.14 4,29 ± 0,36 4.29 ± 0.36 1,34 ± 0,65 1.34 ± 0.65 3,20 ± 0,18 3.20 ± 0.18 Kontrola Control cisplatyna cisplatin 5,29 ± 1,85 5.29 ± 1.85 2,55 ± 1,13 2.55 ± 1.13 6,30 ± 2,10 6.30 ± 2.10 3,62 ± 1,07 3.62 ± 1.07

Zastrzeżenia patentowePatent claims

Claims

1. New analogs of 1,2,4-triazoles of the general formula I:

with a different type of substitution of the 2,4-dihydroxyphenyl system, where:

R ₁ = H, HO-, Me-, MeOR ₂ = H, Me-, Et-, Pr-, iPr-, Cl-, HO-, MeO-, EtOR3 = H, HO-, Me-, MeOR '= H, Cl, Br, F ₃ CX = N, Y = CH or X = CH, Y = N.

2. An analog according to claim The process of claim 1, wherein it is 6-chloro-3- (2,4-dihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine.

3. An analog according to claim The process of claim 1, wherein it is 6-chloro-3- (2,4-dihydroxy-3-methylphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine.

4. An analog according to claim The process of claim 1, wherein it is 6-chloro-3- (5-ethyl-2,4-dihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine.

5. An analog according to claim The process of claim 1, wherein it is 6-chloro-3- (5-chloro-2,4-dihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine.

6. An analog according to claim The process of claim 1, wherein it is 6-chloro-3- (2,3,4-trihydroxyphenyl) -1,2,4-triazolo [4,3-b] pyridazine.

7. An analog according to claim The process of claim 1, wherein it is 3- (2,4-dihydroxyphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine.

8. An analog according to claim The process of claim 1, wherein it is 3- (2,4-dihydroxy-3-methylphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine.

PL 224 660 B1

9. An analog according to claim The process of claim 1, wherein it is 3- (5-ethyl-2,4-dihydroxyphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine.

10. An analog according to claim The process of claim 1, wherein it is 3- (5-chloro-2,4-dihydroxyphenyl) -7- (trifluoromethyl) -1,2,4-triazolo [4,3-a] pyrimidine.

11. Method for the preparation of 1,2,4-triazole analogues of the general formula I:

in which the reactants are introduced into the solution and the product is isolated, characterized in that in a monohydric alcohol with the addition of pyridine, heteroarylhydrazine is reacted with a substance of the general formula II:

where: R = H, Me, Et, Pr, iPr, Cl, OH, MeO, EtO then the obtained reaction mixture is separated into a precipitate I and filtrate I, which is then concentrated, then the obtained precipitate II is crystallized from an aqueous solution monohydric alcohol.

12. The method according to p. The method of claim 11, characterized in that sediment I is combined with sediment II.

13. The method according to p. The process of claim 11, wherein the heteroarylhydrazine is 3-chloro-6-hydrazinopyridazine.

14. The method according to p. The process of claim 11, wherein the heteroarylhydrazine is 2-hydrazine-4- (trifluoromethyl) pyrimidine.

15. The method according to p. 11. The process of claim 11, wherein the substance of the general Formula II is bis [(2,4-dihydroxyphenyl) methanethionium sulfoxide].

16. The method according to p. 11. The process of claim 11, wherein the substance of the general Formula II is bis [(5-ethyl-2,4-dihydroxyphenyl) methanethionium sulfoxide].

17. The method according to p. 11. The process of claim 11, wherein the substance of the general Formula II is bis [(2,4-dihydroxy-3-methylphenyl) methanothionium] sulfoxide.

18. The method according to p. 11. The process of claim 11, wherein the substance of the general Formula II is bis [(5-chloro-2,4-dihydroxyphenyl) methanethionium sulfoxide].

19. The method according to p. 11. The process of claim 11, wherein the substance of the general Formula II is bis [(2,3,4-trihydroxyphenyl) methanethionium sulfoxide].

20. The method according to p. 11. The process of claim 11, wherein the substance of the general Formula II is bis [(2,4-dihydroxy-5-methylphenyl) methanothionium sulfoxide].

21. The method according to p. A process as claimed in claim 11, characterized in that the monohydric alcohol is ethanol or methanol.