PL221245B1

PL221245B1 - Essential oil of English lavender and its application

Info

Publication number: PL221245B1
Application number: PL398838A
Authority: PL
Inventors: Michalina Adaszyńska; Maria Swarcewicz; Agata Markowska-Szczupak
Original assignee: Univ West Pomeranian Szczecin Tech
Priority date: 2012-04-17
Filing date: 2012-04-17
Publication date: 2016-03-31
Also published as: PL398838A1

Description

Opis wynalazkuDescription of the invention

Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie olejku eterycznego z lawendy wąskolistnej odmiany „Blue River” (L. angustifolia spp. angustifolia cv. Blue River).The present invention relates to the use of narrow-leaved lavender essential oil of the "Blue River" cultivar (L. angustifolia spp. Angustifolia cv. Blue River).

Oporność mikroorganizmów na antybiotyki jest obecnie poważnymi problemem zarówno z medycznego, jak i ekonomicznego względu. Szacuje się, że z powodu lekoodpornych bakterii, tylko w Polsce, umiera około 20-30 tys. osób. Główną przyczyną antybiotykoodporności jest nadużywanie i nieracjonalne stosowanie antybiotyków przez ludzi. Problem ten dotyczy w równej mierze zastosowań medycznych (np. zbyt częste stosowanie antybiotyków, przerywanie terapii po ustąpieniu pierwszych symptomów choroby, wyrzucanie „resztek” po antybiotykach do kosza itp.), weterynaryjnych i rolniczych (np. nystatyna jest powszechnym dodatkiem stosowanym, jako składnik pasz dla zwierząt). Oporność na antybiotyki u bakterii związana jest z pojawieniem się samoistnych mutacji genowych (tj. dziedzicznych zmian genetycznych) w plazmidowym DNA. Zmienione plazmidy są w „prosty” sposób przekazywane innym grupom bakterii. W ten sposób lekoodporność rozszerza się, a w środowisku powstają szczepy odporne na dwa, lub więcej antybiotyków jednocześnie. Gatunek Staphylococcus aureus stanowi obecnie jeden z głównych czynników zakażeń szpitalnych. (Exner M.(2007), Divergent opinions on surface disinfection: myths or prevention? A review of the literature, GMS Krankenhaushygiene Interdisziplinar, 2(1):1-7). Poważne niebezpieczeństwo stanowią zwłaszcza wieloantybiotykooporne gronkowce złociste, wśród nich szczep MRSA. Staphylococcus aureus (MRSA) oporny na metylocylinę jest też oporny na wszystkie aktualnie dostępne antybiotyki z grupy β-laktamów, w tym penicyliny (np. penicylina, amoksycylina), penicyliny przeciw gronkowcowe (metylocylina, oksacylina), cefalosporyny (np. cefaleksyna, cefazolina, cefuroksym) i karbapenemy. Oporność u gronkowców typu MRSA polega na syntezie „nowych” białek, które powodują związanie antybiotyku. Ze względu na możliwość powstania różnych kombinacji tworzonych białek, taką odporność nazywamy heterogenną. U 90% szczepów MRSA, występuje ponadto krzyżowa oporność na inne antybiotyki stosowane w leczeniu popularnych infekcji bakteryjnych (np. makrolity i fluorochinole). Gronkowiec złocisty wywołuje najczęściej ropne zapalenie skóry (postać różnego rodzaju czyraków, ropni), śluzówek, tkanki łącznej oraz kości. W przypadku przedostania się do krwiobiegu może uszkodzić lub wywołać ogniska zapalne organów wewnętrznych. Konsekwencją tego może być sepsa, prowadząca nawet do śmierci. Szczepy MRSA kolonizują i wywołują zakażenia w dużej grupie pacjentów. Najczęściej zakażenia te występują na oddziałach intensywnej opieki medycznej, chirurgicznych i niektórych specjalności medycznych (np. geriatrycznych czy na oddziałach przeznaczonych dla chorych na AIDS). Przyczyną mogą być liczne czynniki, które obejmują dostępność dogodnych miejsc do kolonizacji, np. rany operacyjne, drogi dożylnego podawania leków itd. Z literatury wynika (Ates D.A., Erdourul T., (2003). Antimicrobial activities of various medicinal and commercial plant extracts. Turk, J. Biol. 27: 157-162), że przy zwalczaniu lekoopornych bakterii skuteczną alternatywą dla antybiotyków mogą być olejki eteryczne oraz niektóre metabolity roślinne. Wiele z nich wykazuje silne właściwości antybakteryjne lub bakteriostatyczne. Działanie różnych odmian olejków lawendowych (Lavendula angustifolia) wobec szczepów gronkowców, w tym metycylonoopornych (MRSA) jest słabo poznane. Linalol, główny składnik olejku uzyskanego z gatunku Lavandula angustifolia przez Horvatha (Horvath G, Jάmbor N., Vegh A., Boszormenyi A., Lemberkovics E., Hethelyi E., Kovάcs K., Kocsis B., 2010). Antimicrobial activity of essentials oils: the possibilities of TLC-bioautography, Flavour, Fragr. 25(3): 178-182 oraz Martino (Martino D.L., Feo D.V., Nazzaro F., (2009). Chemical composition and in vitro antimicrobial and mutagenic activities of seven Lamiacease Essentials iols. Molecules, 14 4212-4230) nie wykazywał działania wobec szczepów Staphylococcus aureus. Rodzaj Lavandula obejmuje 32 gatunki sklasyfikowane w sześciu sekcjach. Do tej pory nie porównywano aktywności różnych odmian Lavandula angustifolia. Według danych literaturowych olejki z Lavandula angustifolia wykazują najbardziej zmienny skład, przykładem może być porównanie składu olejku w zależności od kraju pochodzenia. W olejku pochodzącym z Bułgarii zawartość ocymenów mieściła się w przedziale 6,8-7,7%, linalolu, 30-34%, octanu linalolu 35-38%, natomiast lawandulolu im jego octanu nie zidentyfikowano (Boelens M.H. 1995, Chemical and sensory evaluation of Lavandula oils. Perf. Flav. 20: 23-51). W oleju pochodzącym z Chin nie zidentyfikowano ocymenów, a głównymi składnikami były: linalol (24-36%),octan linalolu (2-36%), lawandulol i jego octan (1,6-1,7%). W olejku otrzymanym w Indiach także nie zidentyfikowano ocymenów, a udziały głównych składników były następujące: linalol-10%, octan linalolu-45%, lavandulul-0,1% (Cong Y., Abulizi P., Zhi L., Wang X. (2008). ChemiPL 221 245 B1 cal composition of the essentials oil from Lavendula angustifolia from Xinjiang, China. Chem. Nat. Comp. 44: 810-815).Antibiotic resistance of microorganisms is a major problem today, both medically and economically. It is estimated that about 20-30 thousand die in Poland only due to drug-resistant bacteria. people. The main cause of antibiotic resistance is the abuse and irrational use of antibiotics by humans. This problem applies equally to medical (e.g. too frequent use of antibiotics, discontinuation of therapy after the first symptoms of the disease have subsided, throwing the "remains" of antibiotics into the bin, etc.), veterinary and agricultural (e.g. nystatin is a common additive used as an ingredient) animal feed). Antibiotic resistance in bacteria is associated with the emergence of spontaneous gene mutations (ie, heritable genetic changes) in plasmid DNA. The altered plasmids are "simply" passed on to other groups of bacteria. In this way, drug resistance is expanded, and strains resistant to two or more antibiotics at the same time are formed in the environment. The Staphylococcus aureus species is currently one of the major contributors to nosocomial infections. (Exner M. (2007), Divergent opinions on surface disinfection: myths or prevention? A review of the literature, GMS Krankenhaushygiene Interdisziplinar, 2 (1): 1-7). A serious danger is especially posed by the multi-antibiotic-resistant staphylococcus aureus, including the MRSA strain. Staphylococcus aureus (MRSA) resistant to methylcillin is also resistant to all β-lactam antibiotics currently available, including penicillins (e.g. penicillin, amoxicillin), anti-staphylocillin penicillins (methylcillin, oxacillin), cephalosporins, cephalosporins, cefuroxime) and carbapenems. Resistance in MRSA-type staphylococci is the synthesis of "new" proteins that cause the antibiotic to bind. Due to the possibility of the formation of various combinations of proteins formed, this resistance is called heterogeneous. In 90% of MRSA strains, there is also cross-resistance to other antibiotics used to treat common bacterial infections (e.g. macrolytes and fluoroquinols). Golden staphylococcus most often causes purulent inflammation of the skin (various types of boils, abscesses), mucous membranes, connective tissue and bones. If it enters the bloodstream, it can damage or cause inflammation of internal organs. Sepsis can be the consequence, even leading to death. MRSA strains colonize and infect a large number of patients. These infections are most common in intensive care, surgical and some medical specialties (e.g. geriatric and AIDS wards). The reason may be numerous factors, which include the availability of convenient sites for colonization, e.g. surgical wounds, intravenous drug administration routes, etc. The literature shows (Ates DA, Erdourul T., (2003) Antimicrobial activities of various medicinal and commercial plant extracts. Turk, J. Biol. 27: 157-162) that essential oils and some plant metabolites may be effective alternatives to antibiotics in combating drug-resistant bacteria. Many of them show strong antibacterial or bacteriostatic properties. The effect of various types of lavender oils (Lavendula angustifolia) against staphylococcal strains, including methicillin-resistant (MRSA), is poorly understood. Linalool, the main component of the oil obtained from the species Lavandula angustifolia by Horvath (Horvath G, Jάmbor N., Vegh A., Boszormenyi A., Lemberkovics E., Hethelyi E., Kovάcs K., Kocsis B., 2010). Antimicrobial activity of essentials oils: the possibilities of TLC-bioautography, Flavor, Fragr. 25 (3): 178-182 and Martino (Martino DL, Feo DV, Nazzaro F., (2009). Chemical composition and in vitro antimicrobial and mutagenic activities of seven Lamiacease Essentials iols. Molecules, 14 4212-4230) showed no effect against Staphylococcus aureus strains. The genus Lavandula includes 32 species classified into six sections. The activity of different Lavandula angustifolia cultivars has not been compared so far. According to the literature data, Lavandula angustifolia oils show the most variable composition, an example being the comparison of the composition of the oil depending on the country of origin. In the oil from Bulgaria, the content of ocymenes was in the range of 6.8-7.7%, linalool, 30-34%, linalool acetate 35-38%, while lawandulol and its acetate were not identified (Boelens MH 1995, Chemical and sensors evaluation of Lavandula oils. Perf. Flav. 20: 23-51). No ocymenes were identified in the Chinese oil, and the main ingredients were: linalool (24-36%), linalool acetate (2-36%), lavandulol and its acetate (1.6-1.7%). In the oil obtained in India also no ocymenes were identified, and the proportions of the main components were as follows: linalool-10%, linalool acetate-45%, lavandulul-0.1% (Cong Y., Abulizi P., Zhi L., Wang X. (2008). ChemiPL 221 245 B1 cal composition of the essentials oil from Lavendula angustifolia from Xinjiang, China. Chem. Nat. Comp. 44: 810-815).

Podobnie dużym problemem XXI wieku są choroby wywoływane przez niektóre grzyby. Jednym z czynników alergenów i stanów zapalnych w organizmie ludzkim są grzyby. Zasadniczą role odgrywają Candida albicans i Trichophyton rubrum. Produkty metabolizmu grzybów wnikają głęboko w skóro lub ślazówkę stając się przyczyna szeregu alergiczno-zapalnych reakcji. Grzybem najczęściej atakującym skórę pacjentów jest Trichophyton rubrum. Wielu alergologów uważa, że wchłaniany przez skórę i błony śluzowe antygen Trichophyton może alergizować narządy wstrząsowe (górne i dolne drogi oddechowe), prowadząc do nieuleczalnych chorób skóry i układu oddechowego - astmy. U zainfekowanych Trichophyton, obserwuje się polipy nosa, zapaleniem zatok lub astmę endogenną. Natomiast w krajach rozwiniętych na schorzenia spowodowane przez drożdżaki cierpi powyżej 30% populacji. Obecnie tego typu infekcje są 15 razy częstsze niż 15 lat temu. Śmiertelność z powodu zachorowania na drożdżycę w grupie osób wysokiego ryzyka wzrosła do 50% (chorujących na białaczkę, zespół zaburzeń odporności. AIDS oraz noworodków zakażonych przez matkę). Rozwój nowych strategii zapobiegania i leczenia grzybic prawdopodobnie, dlatego jest najważniejszym wyzwaniem, jakie zostało postawione współczesnej nauce, zajmującej się tym problemem. Schorzenie to wywołuje wiele gatunków drożdży/rodzaju Candida. U większości ludzi spotyka się je w przewodzie pokarmowym, jamie ustnej oraz narządach płciowych. W związku z powszechnością ich występowania trudno jest określić, kiedy i dlaczego mogą stać się patogenem. Najczęstsza przyczyną rozwoju tej choroby są zaburzenia składu flory bakteryjnej jelita grubego, spowodowane antybiotykoterapią oraz równoczesną dysfunkcją systemu odporności organizmu. Leczenie kandydozy przy pomocy leków przeciwgrzybiczych zawierających, np. nystatynę (Mycolog. Mycostatin, Mytrex, Nilstat, Nystex), ketokonazol (Nizoral) czy amfoterycynę (Fungizone) może spowodować rozwój szczepów drożdży, które są odporne na te leki i jeszcze bardziej osłabić system obronny z tego powodu wielu lekarzy nie stosuje już tych leków lub przypisuje je tylko na krótki okres czasu, gdyż mogą one spowodować uszkodzenie narządów wewnętrznych. Z literatury Reichling J., Schnitzler P., Suschke U., Saller R. (2009). Essential oils of aromatic plants with antimicrobial, antifungal, antiviral and cytotoxic properties - an overview. Forschende. Kompelentarmedizin 16: 79-90 wynika, że przy zwalczaniu patogennych grzybów skuteczną alternatywą dla leków syntetycznych mogą być olejki eteryczne oraz niektóre metabolity roślinne. Wiele z nich wykazuje silne właściwości przeciwgrzybicze. Działanie różnych odmian olejków lawendowych wobec grzybów, w tym Candida albicans i Trichophyton rubrum jest słabo poznane. Olejki uzyskane z gatunku Lavandula angustifolia opisane w Agarwal V, Lal P., Pruthi V. (2010). Effect of Plants Oils on Candida albicans. Journal of Microbiology, Immunology and Infection.43, (5):447-451 oraz Cavanagh M.A. Wilkinson J.M. (2006). Bioactivity of Lavandula. Assesment of Lavandula Essential Oils, Hydrosols and Plant Etracts. A report for the Rural Industrial Research and Development Corporation, nie wykazywały działania wobec szczepów Candidia albicans. Olejki lawendowe z lawendy lekarskiej mają wszechstronne zastosowanie, między innymi w medycynie, kosmetologii oraz jako naturalne biopestycydy. Znane są ich przeciwbólowe, antyseptyczne i antybiotyczne właściwości.Diseases caused by certain fungi are a similar problem in the 21st century. One of the factors of allergens and inflammation in the human body is fungi. Candida albicans and Trichophyton rubrum play an essential role. The products of fungal metabolism penetrate deeply into the skin or mucosa, causing a number of allergic and inflammatory reactions. The fungus that most often attacks the skin of patients is Trichophyton rubrum. Many allergists believe that the Trichophyton antigen absorbed through the skin and mucous membranes may cause allergic reactions to the shock organs (upper and lower respiratory tract), leading to incurable diseases of the skin and respiratory system - asthma. In infected with Trichophyton, nasal polyps, sinusitis, or endogenous asthma are observed. However, in developed countries, more than 30% of the population suffer from diseases caused by yeasts. Today, such infections are 15 times more common than 15 years ago. Mortality due to yeast infection in the high-risk group increased to 50% (suffering from leukemia, immune disorders, AIDS and newborns infected by the mother). The development of new strategies for the prevention and treatment of mycoses is probably the most important challenge that has been faced by modern science dealing with this problem. It is caused by many yeast species / genus Candida. Most people find them in the digestive tract, mouth and genitals. Due to their common occurrence, it is difficult to determine when and why they can become a pathogen. The most common cause of the development of this disease are disturbances in the composition of the bacterial flora of the large intestine, caused by antibiotic therapy and the simultaneous dysfunction of the immune system. Treatment of candidiasis with antifungal drugs containing e.g. nystatin (Mycolog. Mycostatin, Mytrex, Nilstat, Nystex), ketoconazole (Nizoral) or amphotericin (Fungizone) may result in the development of yeast strains that are resistant to these drugs and further weaken the immune system for this reason, many doctors no longer use these drugs or prescribe them only for a short period of time, as they can damage internal organs. From the literature of Reichling J., Schnitzler P., Suschke U., Saller R. (2009). Essential oils of aromatic plants with antimicrobial, antifungal, antiviral and cytotoxic properties - an overview. Forschende. Kompelentarmedizin 16: 79-90 shows that essential oils and some plant metabolites may be an effective alternative to synthetic drugs in combating pathogenic fungi. Many of them show strong antifungal properties. The effects of lavender oil varieties on fungi, including Candida albicans and Trichophyton rubrum, are poorly understood. Oils obtained from the species Lavandula angustifolia described in Agarwal V, Lal P., Pruthi V. (2010). Effect of Plants Oils on Candida albicans. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 43, (5): 447-451 and Cavanagh M.A. Wilkinson J.M. (2006). Bioactivity of Lavandula. Assesment of Lavandula Essential Oils, Hydrosols and Plant Etracts. A report for the Rural Industrial Research and Development Corporation, showed no activity against Candidia albicans strains. Lavender oils from the medical lavender are widely used, including in medicine, cosmetology and as natural biopesticides. They are known for their analgesic, antiseptic and antibiotic properties.

Nieoczekiwanie okazało się, że można uzyskać olejki eteryczne o właściwościach antybakteryjnych i przeciwgrzybicznych z ozdobnej odmiany lawendy.It was surprisingly found that essential oils with antibacterial and antifungal properties can be obtained from ornamental lavender.

Olejek eteryczny z lawendy wąskolistnej (Lavandula angustifolia L.) uzyskano z ozdobnej odmiany „Blue River”. Olejek zawiera 1-heksanol, α-pinen, kamfen, β-pinen, 1-okten-3-ol, 3-okranon, octan heksylu, β-cymen, limonen, eukaliptol, trans^-ocimem, cis^-ocimem, τ-terpinem, cis-βterpineol, tlenek linalolu, linalol, allo-ocimen, lawandulol, 1-terpinen-4-ol, butanian heksylu, a-terpineol, geraniol, antranilan linalolu, kamfen, propionian nerylu, octan geraniolu, a-begamoten, a-santalen, karifilen, β-seskwifellandren, τ-muurolen, a-amorfen, tlenek kariofilenu, epibicykloseskwifellandren.Narrow-leaved lavender (Lavandula angustifolia L.) essential oil was obtained from the ornamental 'Blue River' variety. The oil contains 1-hexanol, α-pinene, camphene, β-pinene, 1-octene-3-ol, 3-okranone, hexyl acetate, β-cymene, limonene, eucalyptol, trans ^ -ocim, cis ^ -ocim, τ -terpinem, cis-βterpineol, linalool oxide, linalool, allo-ocimene, lavandulol, 1-terpinen-4-ol, hexyl butanoate, a-terpineol, geraniol, linalool anthranilate, camphene, neryl propionate, geraniol acetate, a-begamotene, a-santalene, cariphilene, β-sesquifellandrene, τ-muurolene, a-amorphene, caryophyllene oxide, epibicyclosequifellandrene.

Zastosowanie olejku eterycznego z lawendy wąskolistnej ozdobnej odmiany „Blue River” do zwalczania bakterii szczepów Staphylococcus aureus, w tym, szczepu wieloantybiotykoopornego gronkowca złocistego MRSA/ORSA (ang. Methicyllin-Resistant Staphylococcus aureus/OxacillinResistant Staphylococcus aureus).The use of ornamental narrow-leaved lavender oil of the "Blue River" variety to combat Staphylococcus aureus bacteria, including the MRSA / ORSA (Methicyllin-Resistant Staphylococcus aureus / OxacillinRes a Staphusylococcus) strain.

Inne zastosowanie olejku eterycznego z lawendy wąskolistnej ozdobnej odmiany „Blue River” to zastosowanie do zwalczania grzybów z rodzaju Candidia albicans i Trichophyton rubrum.Another application of narrowleaf lavender essential oil of the ornamental "Blue River" variety is in the control of Candidia albicans and Trichophyton rubrum.

Olejkowi twórcę nadali nazwę Michalina.The artist named Olejek Michalina.

Dla celów niniejszego wynalazku określono aktywność olejków z kwiatów różnych odmian lawendy wąskolistnej (Lavandula angustifolia). Ekstrakcji olejków dokonana przy Pomocy metody zaproponowanej przez Farmakopeę Europejską (European Pharmacopoeia 5.0. (2004). EDQM, Stras4For the purposes of the present invention, the activity of the flower oils of different varieties of the narrow-leaved lavender (Lavandula angustifolia) was determined. Extraction of oils by the method proposed by the European Pharmacopoeia (European Pharmacopoeia 5.0. (2004). EDQM, Stras4

PL 221 245 B1 burg). Skład olejku określono za pomocą metody GC/MS przy użyciu aparatu firmy Agilent model 6890 z kolumną chromatograficzną HP-5MS. Analizę jakościową prowadzono na podstawie widm MS, porównując je z widmami z bibliotek NIST. Tożsamość związków potwierdzono indeksami retencji z danych piśmiennictwa. Skład ilościowy olejku eterycznego oraz ekstraktu określono przyjmując, że suma poszczególnych związków wynosi 100%.PL 221 245 B1 burg). The composition of the oil was determined by the GC / MS method using an Agilent model 6890 apparatus with an HP-5MS chromatography column. Qualitative analysis was performed on the basis of the MS spectra, comparing them with spectra from the NIST libraries. The identity of the compounds was confirmed by retention indices from the literature data. The quantitative composition of the essential oil and the extract was determined assuming that the sum of individual compounds is 100%.

Aktywność antymikrobiologiczna uzyskanego olejku została określona zgodnie z procedurą opracowaną przez Blanca (Blanc S., Lugeon C., Wenger A., Siegrist H.H., Francioli P., (1994). Quantitative antybiogram typing using inhibition zone diameters compared with ribotyping for epidemiological typing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus” J. Clin. Microbiol. 32(10): 2505-2509). W kontekście niniejszego wynalazku określenie „aktywność antymikrobiologiczna” oznaczało, że występuje działanie bakteriobójcze i/lub bakteriostatyczne.The antimicrobial activity of the obtained oil was determined in accordance with the procedure developed by Blanc (Blanc S., Lugeon C., Wenger A., Siegrist HH, Francioli P., (1994). Quantitative antibiogram typing using inhibition zone diameters compared with ribotyping for epidemiological typing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus ”J. Clin. Microbiol. 32 (10): 2505-2509). In the context of the present invention, the term "antimicrobial activity" means that there is a bactericidal and / or bacteriostatic effect.

Olejek oraz jego zastosowanie według wynalazku opisano szczegółowo w przykładach wykonania.The oil and its use according to the invention are described in detail in the working examples.

P r z y k ł a d 1P r z k ł a d 1

W celu ekstrakcji olejku rozdrobniony materiał roślinny zalano wodą destylowaną i ogrzewano w temperaturze wrzenia wody. Kwiaty lawendy z odmiany „Blue River” w ilości 20 g poddawano trzy godzinnej hydrodestylacji w aparacie Derynga, licząc od chwili rozpoczęcia wrzenia zawartości kolby. Po zakończeniu ogrzewania pozostawiono całość do ochłodzenia, a następnie odizolowany w skraplaczu olejek eteryczny „Michalina” był rozpuszczany w chlorku metylenu i suszony za pomocą bezwodnego siarczanu (VI) sodu. Po odsączeniu środka suszącego olejek zagęszczano. Stwierdzono, że olejek „Michalina” miał w swoim składzie (według wzrastającego czasu retencji): 1-heksanol (0,40%), a-pinen (0,20%), kamfen (0,10%), β-pinen (0,17%), 1-okten-3-ol (0,30%), 3-oktanon (0,58%), octan heksylu (1,76%), β-cymen (0,81%), limonen (0,08%), eukaliptol (0,94%), trans-3-ocimen (2,94%), cis-3-ocimen (2,44%), τ-terpinen (0,36%), cis-3-terpineol (0,19%), tlenek linalolu (1,49%), linalol (18,61%), allo-ocimen (0,45%), Iawandulol (4,27%), 1-terpinen-4-ol (5,53%), butanian heksylu (1,58%) a-terpineol (7,94%), geraniol (8,83%), antranilan linalilu (12,78%), kamfen (0,44%), propionian nerylu (2,82%), octan geraniolu (4,12%), a-bergamoten (0,48%), a-santalen (1,39%), kariofilen (2,78%), β-seskwifellandren (1,31%), τ-muurolen (0,48%), a-amorfen (0,50%), tlenek kariofilenu (2,12%), epibicykloseskwifellandren (0,41%). Określono aktywność antybakteryjną olejku „Michalina”. W tym celu 18 godzinne hodowle szczepu gronkowca złocistego Staphylococcus aureus PCM 2054/ATCC 25923 oraz szczepu wyizolowanego ze skóry (MRSA/ORSA) zawieszono w płynnym podłożu (ZWP), a następnie rozcieńczono fizjologicznym roztworem NaCl do gęstości 0,5 MeFaranda. Tak uzyskaną zawiesinę bakterii nanoszono równomiernie na całej powierzchni płytki z podłożem stałym Mueller-Hintona II (Oxid) przy użyciu sterylnych pałeczek do wymazów. Krążki bibułowa (o średnicy 6 mm) nasączano 10 μl olejku lawendowego z odmiany „Blue River” (czas nasączania: 1-2 minuty) i niezwłocznie nanoszono symetrycznie na inokulowaną płytkę. Płytki inkubowano przez 24 godziny w temperaturze 37°C. Po upływie tego czasu, mierzono strefy zahamowania wzrostu (jako średnice milimetrach). Po trzech powtórzeniach prowadzenia doświadczeń, określono, że olejek lawendowy „Michalina”, użyty w ilości 10 μl na krążek, zahamował wzrost szczepów gronkowca złocistego (średnia wartość stref zahamowania wzrostu szczepów w mm: 19,5 dla szczepu referencyjnego; 18,2 dla szczepu wieloantybiotykoopornego).In order to extract the oil, the shredded plant material was poured over with distilled water and heated to the boiling point of water. Lavender flowers of the "Blue River" variety, in the amount of 20 g, were subjected to three-hour hydrodistillation in a Deryg apparatus, counted from the moment the contents of the flask began to boil. After heating was stopped, it was allowed to cool, and then the "Michalina" essential oil isolated in the condenser was dissolved in methylene chloride and dried with anhydrous sodium sulfate. After the drying agent was filtered off, the oil was concentrated. It was found that "Michalina" oil had in its composition (according to the increasing retention time): 1-hexanol (0.40%), a-pinene (0.20%), camphene (0.10%), β-pinene ( 0.17%), 1-octene-3-ol (0.30%), 3-octanone (0.58%), hexyl acetate (1.76%), β-cymene (0.81%), limonene (0.08%), eucalyptol (0.94%), trans-3-ocimene (2.94%), cis-3-ocimene (2.44%), τ-terpinene (0.36%), cis -3-terpineol (0.19%), linalool oxide (1.49%), linalool (18.61%), allo-ocimene (0.45%), ivandulol (4.27%), 1-terpinene- 4-ol (5.53%), hexyl butanoate (1.58%) a-terpineol (7.94%), geraniol (8.83%), linalyl anthranilate (12.78%), camphene (0.44 %), neryl propionate (2.82%), geraniol acetate (4.12%), a-bergamotene (0.48%), a-santalene (1.39%), caryophyllene (2.78%), β -sesquifellandren (1.31%), τ-muurolene (0.48%), a-amorphene (0.50%), caryophyllene oxide (2.12%), epibicyclosesquifellandren (0.41%). The antibacterial activity of "Michalina" oil was determined. For this purpose, 18-hour cultures of the Staphylococcus aureus PCM 2054 / ATCC 25923 strain and the skin-isolated strain (MRSA / ORSA) were suspended in a liquid medium (ZWP) and then diluted with physiological NaCl solution to a density of 0.5 MeFarand. The thus obtained bacterial suspension was applied evenly over the entire surface of the Mueller-Hinton II solid support (Oxid) plate using sterile swab sticks. Paper discs (6 mm diameter) were soaked in 10 μl of "Blue River" lavender oil (soaking time: 1-2 minutes) and immediately placed symmetrically on the inoculated plate. The plates were incubated for 24 hours at 37 ° C. After this time, the zones of inhibition of growth were measured (as diameters in millimeters). After three repetitions of the experiments, it was determined that lavender oil "Michalina", used in the amount of 10 μl per disc, inhibited the growth of Staphylococcus aureus strains (mean value of zones of inhibition of growth of the strains in mm: 19.5 for the reference strain; 18.2 for the strain multi-antibiotic resistant).

P r z y k ł a d 2P r z k ł a d 2

Olejek „Michalina” utrzymano jak w przykładzie 1, a tym, że do otrzymania olejku zastosowano kwiaty z innego zbioru. Olejek ten wykazał ten sam skład jakościowy, natomiast był zmienny w stężeniach związków: 1-heksanol (0,10%), a-pinen (0,98%), kamfen (0,12%), β-pinen (0,13%), 1-okten-3-ol (0,20%), 3-okten (0,48%), octan heksylu (1,76%), β-cymen (0,81%), limonen (9,37%), eukaliptol (1,78%), trans^-ocimen (2,32%), cis^-ocimem (2,55%), τ-terpinen (0,36%), cis^-terpineol (0,19%), tlenek linalolu (1,17%), linalol (17,32%), lawandulol (4,27%), 1-terpinen-4-ol (4,77%), butanian heksylu (0,65%), a-terpineol (8,76%), geraniol (2,28%), antranilan linalilu (17,21%), kamfen (0,44%), propionan nerylu (2,25%), octan geraniolu (4,08%), a-bergamoten (0,24%), a-santalen (1,80%), kariofilen (3,64%), β-seskwifellandren (1,31%), τ-muurolen (0,52%), a-amorfen (0,60%), tlenek kariofilenu (2,32%), epibicykloseskwifellandren (0,53%).The "Michalina" oil was kept as in Example 1 except that flowers from a different set were used to obtain the oil. This oil showed the same qualitative composition, but it was variable in the concentrations of the following compounds: 1-hexanol (0.10%), a-pinene (0.98%), camphene (0.12%), β-pinene (0.13 %), 1-octene-3-ol (0.20%), 3-octene (0.48%), hexyl acetate (1.76%), β-cymene (0.81%), limonene (9, 37%), eucalyptol (1.78%), trans ^ -ocimene (2.32%), cis ^ -ocimen (2.55%), τ-terpinene (0.36%), cis ^ -terpineol (0 , 19%), linalool oxide (1.17%), linalool (17.32%), lavandulol (4.27%), 1-terpinen-4-ol (4.77%), hexyl butanoate (0.65 %), a-terpineol (8.76%), geraniol (2.28%), linalyl anthranilate (17.21%), camphene (0.44%), neryl propionate (2.25%), geraniol acetate ( 4.08%), a-bergamotene (0.24%), a-santalene (1.80%), caryophyllene (3.64%), β-sesquifellandren (1.31%), τ-muurolene (0, 52%), a-amorphene (0.60%), caryophyllene oxide (2.32%), epibicyclosequifellandrene (0.53%).

Dla porównania do badań wykorzystano także olejek z innej odmiany lawendy wąskolistnej, odmiany „Ellegance Purple”, który zawierał w swoim składzie (według wzrastającego czasu retencji): a-pinen (0,23%), β-pinen (0,23%), (0,43%), 1-okten-3-ol (0,87%), octan heksylu (0,45%), β-cymen (0,69%), eukaliptol (0,99%), cis^-ocimen (1,13%), τ-terpinen (0,39%), cis^-terpineol (0,20%), tlenekFor comparison, the study also used the oil from another variety of narrow-leaved lavender, the "Ellegance Purple" variety, which contained in its composition (according to the increasing retention time): a-pinene (0.23%), β-pinene (0.23%) , (0.43%), 1-octene-3-ol (0.87%), hexyl acetate (0.45%), β-cymene (0.69%), eucalyptol (0.99%), cis ^ -ocimene (1.13%), τ-terpinene (0.39%), cis ^ -terpineol (0.20%), oxide

PL 221 245 B1 linalolu (3,19%), linalol (22,42%), alloocim (0,57%) alkan for (0,63%), lawandulol (4,64%), 1-terpinen-4-ol (6,14%), butanian heksylu (1,04%), a-terpineol (3,98%), geraniol (1,41%), antranilan linalilu (7,74%), octan geraniolu (2,37%), a-bergamoten (0,46%), kariofilen (5,52%), τ-muurolen (0,46%), a-amorfen (0,68%), tlenek kariofilenu (4,26%), epibicykloseskwifellandren (1,89%). Olejki zostały użyte w ilości 10 μΐ na krążek. Płytki inkubowano przez 24 godziny w temperaturze 37°C, po czym następował odczyt. Mierzono strefy zahamowania wzrostu, (jako średnicę w milimetrach). Po trzech powtórzeniach prowadzenia doświadczeń, określono, że olejek lawendowy z odmiany „Blue River”, użyty w ilości 10 μΐ na krążek, zahamował wzrost szczepów gronkowca złocistego (17,5 mm dla szczepu referencyjnego; 18,5 dla szczepu wieloantybiotykoopornego). Olejek lawendowy z innej odmiany ozdobnej, odmiany „Ellegance Purple” nie wykazał aktywności przeciwdrobnoustrojowej.PL 221 245 B1 linalool (3.19%), linalool (22.42%), alloocim (0.57%) alkane (0.63%), lavandulol (4.64%), 1-terpinene-4- ol (6.14%), hexyl butanoate (1.04%), a-terpineol (3.98%), geraniol (1.41%), linalyl anthranilate (7.74%), geraniol acetate (2.37 %), a-bergamotene (0.46%), caryophyllene (5.52%), τ-muurolene (0.46%), a-amorphene (0.68%), caryophyllene oxide (4.26%), epibicykloseskwifellandren (1.89%). The oils were used in the amount of 10 μΐ per disc. The plates were incubated for 24 hours at 37 ° C and then read. The zones of inhibition of growth were measured (as diameter in millimeters). After three replications of the experiments, it was determined that lavender oil of the "Blue River" variety, used at 10 μΐ per disk, inhibited the growth of Staphylococcus aureus (17.5 mm for the reference strain; 18.5 for the multi-antibiotic resistant strain). Lavender oil from another ornamental variety, the "Ellegance Purple" variety, showed no antimicrobial activity.

P r z y k ł a d 3P r z k ł a d 3

Olejek eteryczny „Michalina” i zawiesinę bakterii przygotowano jak w przykładzie 1. Pozostałe warunki bez zmian. Dla porównania zamiast samego olejku z odmiany „Blue River” użytego w ilości 10 μl na krążek, zastosowano także krążki zawierające 10 μg olejku lawendowego z odmiany „Ellegance Purple”, 10 μg gentamycyny oraz 10 μg amoksycyliny. Płytki inkubowano przez 24 godziny w temperaturze 37°C, po czym następował odczyt. Mierzono strefy zahamowania wzrostu (jako średnicę w milimetrach). Po trzech powtórzeniach prowadzenia doświadczeń, określono, że olejek lawendowy z odmiany „Blue River”, użyty w ilości 10 μl na krążek, zahamował wzrost szczepów gronkowca złocistego w tym samym stopniu jak gentamycyna (17,0 mm dla szczepu referencyjnego; 18,0 dla szczepu wieloantybiotykoopornego). Amoksycylina zahamowała jedynie wzrost szczepu referencyjnego (30,0 mm), natomiast olejek lawendowy z odmiany „Ellegance Purple” nie wykazał aktywności przeciwdrobnoustrojowej.The "Michalina" essential oil and the bacterial suspension were prepared as in Example 1. Other conditions remained unchanged. For comparison, discs containing 10 µg of "Ellegance Purple" lavender oil, 10 µg of gentamicin and 10 µg of amoxicillin were also used instead of the "Blue River" oil alone used per disc. The plates were incubated for 24 hours at 37 ° C and then read. The zones of inhibition of growth were measured (as diameter in millimeters). After three repetitions of the experiments, it was determined that lavender oil from the "Blue River" variety, used at 10 μl per disc, inhibited the growth of Staphylococcus aureus strains to the same extent as gentamicin (17.0 mm for the reference strain; 18.0 for multi-antibiotic-resistant strain). Amoxicillin only inhibited the growth of the reference strain (30.0 mm), while lavender oil from the "Ellegance Purple" variety did not show any antimicrobial activity.

P r z y k ł a d 4P r z k ł a d 4

Przygotowano olejek jak w przykładzie pierwszym. Określono aktywność antygrzybiczą olejku „Michalina”. W tym celu przygotowano hodowle szczepu grzybów Candida albicans i Trichophyton rubrum wyizolowanych ze zmian chorobowych. Przygotowano pożywkę SGA (Sabouraud Dextrose Agar) o składzie na 1 L wody destylowanej: 5 g pepton, 5 g pepton K, 40 g glukoza, 15 g agar, pH 5,9. Uzyskaną zawiesinę grzybów nanoszono równomiernie na całej powierzchni płytki przy użyciu sterylnych pałeczek do wymazów. Krążki bibułowe (o średnicy 6 mm) nasączano 10 μl olejku lawendowego z odmiany „Blue River” (czas nasączania: 1-2 minuty) i niezwłocznie nanoszono symetrycznie na inokulowaną płytkę. Płytki inkubowano przez 8 dni w temperaturze 25°C. Po upływie tego czasu, mierzono strefy zahamowania wzrostu (jako średnicę milimetrach). Po trzech powtórzeniach prowadzenia doświadczeń, określono, że olejek lawendowy „Michalina” użyty w ilości 10 μl na krążek, zahamował wzrost szczepów Candida albicans (średnia wartość stref zahamowania wzrostu szczepów w mm: 18,1) oraz Trichophyton rubrum (średnia wartość stref zahamowania wzrostu szczepów w mm: 30,6).The oil was prepared as in the first example. The antifungal activity of "Michalina" oil was determined. For this purpose, cultures of the fungi Candida albicans and Trichophyton rubrum isolated from the lesions were prepared. SGA medium (Sabouraud Dextrose Agar) was prepared with the composition of 1 L of distilled water: 5 g peptone, 5 g peptone K, 40 g glucose, 15 g agar, pH 5.9. The obtained mushroom suspension was evenly applied over the entire surface of the plate using sterile swab sticks. Paper discs (6 mm in diameter) were soaked in 10 µl of "Blue River" lavender oil (soaking time: 1-2 minutes) and immediately placed symmetrically on the inoculated plate. The plates were incubated for 8 days at 25 ° C. After this time, the zones of inhibition of growth were measured (as a diameter in millimeters). After three repetitions of the experiments, it was determined that the lavender "Michalina" oil used in the amount of 10 μl per disc inhibited the growth of Candida albicans strains (mean value of zones of inhibition of growth of strains in mm: 18.1) and Trichophyton rubrum (mean value of zones of growth inhibition strains in mm: 30.6).

P r z y k ł a d 5P r z k ł a d 5

Olejek „Michalina” otrzymano jak w przykładzie 1, z tym, że do otrzymania olejku zastosowana kwiaty z innego zbioru. Olejek ten wykazał ten sam skład jakościowy. Dla porównania do badań wykorzystano także olejek z innej odmianę lawendy wąskolistnej, odmiany „Ellegance Purple”, który zawierał w swoim składzie (według wzrastającego czasu retencji): a-pinen, β-pinen, 1-okten-3-ol, octan heksylu, β-cymen, eukaliptol, cis^-ocimen, τ-terpinen, cis^-terpineol, tlenek linalolu, linalol, alloocimen, Iawandulol, 1-terpinen-4-ol, butanian heksylu, a-terpineol, geraniol, antranilan linalilu, octan geraniolu, a-bergamoten, kariofilen, τ-muurolen. a-amorfen, tlenek kariofilenu, epibicykloseskwifllandren. Płytki inkubowano przez 8 dni w temperaturze 25°C, po czym następował odczyt. Mierzono strefy zahamowania wzrostu (jako średnicę w milimetrach). Po trzech powtórzeniach prowadzenia doświadczeń, określono, że olejek lawendowy pochodzący z uprawy doświadczalnej, użyty w ilości 10 μl na krążek, zahamował wzrost szczepów Candida albicans (średnia wartość stref zahamowania wzrostu szczepów w mm: 18,1) oraz Trichophyton rubrum (średnia wartość stref zahamowania wzrostu szczepów w mm: 30,6). Natomiast olejek lawendowy z odmiany „Ellegance Purple nie wykazał działania przeciwgrzybiczego.The "Michalina" oil was obtained as in Example 1, except that flowers from a different set were used to obtain the oil. This oil showed the same qualitative composition. For comparison, the study also used the oil from another variety of narrow-leaved lavender, the "Ellegance Purple" variety, which contained in its composition (according to the increasing retention time): a-pinene, β-pinene, 1-octene-3-ol, hexyl acetate, β-cymene, eucalyptol, cis ^ -ocimene, τ-terpinene, cis ^ -terpineol, linalool oxide, linalool, alloocimene, Iawandulol, 1-terpinen-4-ol, hexyl butanoate, a-terpineol, geraniol, linalyl anthranilate, acetate geraniol, a-bergamotene, caryophyllene, τ-muurolene. a-amorphene, caryophyllene oxide, epibicyclosequifllandrene. Plates were incubated for 8 days at 25 ° C and readings were made. The zones of inhibition of growth were measured (as diameter in millimeters). After three repetitions of the experiments, it was determined that the lavender oil from the experimental cultivation, used in the amount of 10 μl per disc, inhibited the growth of Candida albicans strains (mean value of zones of inhibition of growth of strains in mm: 18.1) and Trichophyton rubrum (mean value of zones growth inhibition of the strains in mm: 30.6). On the other hand, lavender oil from the 'Ellegance Purple' variety did not show any antifungal activity.

P r z y k ł a d 6P r z k ł a d 6

Olejek eteryczny „Michalina” i zawiesinę grzybów przygotowano jak w przykładzie 1. Pozostałe warunki bez zmian. Dla porównania zamiast samego olejku z odmiany „Blue River” użytego w ilości 10 μl na krążek, zastosowano także krążki zawierające 10 μl handlowego olejku lawendowego (Lavandula angustifolia), 10 μl olejku lawendowego z odmiany „Ellegance Purple” oraz syntetyczny"Michalina" essential oil and mushroom suspension were prepared as in Example 1. Other conditions remained unchanged. For comparison, instead of the oil of the "Blue River" variety used in the amount of 10 μl per disk, disks containing 10 μl of commercial lavender oil (Lavandula angustifolia), 10 μl of lavender oil from the "Ellegance Purple" variety and synthetic

PL 221 245 B1 antybiotyk flukonazol (10 μg). Płytki inkubowano przez 8 dni w temperaturze 25°C, po czym następował odczyt. Mierzono strefy zahamowania wzrostu (jako średnicę w milimetrach). Po trzech powtórzeniach prowadzenia doświadczeń, określono, że olejek lawendowy „Michalina”, użyty w ilości 10 μΐ na krążek, zahamował wzrost szczepów grzybów z rodzaju Candida albicans i Trichophyton rubrum w większym stopniu niż użyty antybiotyk. Natomiast olejek pochodzenia handlowego oraz z odmiany „Ellegance Purple” nie wykazywał aktywności przeciwdrobnoustrojowej.The antibiotic fluconazole (10 μg). Plates were incubated for 8 days at 25 ° C and readings were made. The zones of inhibition of growth were measured (as diameter in millimeters). After three repetitions of the experiments, it was determined that lavender oil "Michalina", used in the amount of 10 μΐ per disk, inhibited the growth of fungi of the genus Candida albicans and Trichophyton rubrum to a greater extent than the antibiotic used. On the other hand, the oil of commercial origin and of the "Ellegance Purple" variety did not show any antimicrobial activity.

Claims

Patent claims

1. The use of decorative narrow-leaved lavender oil of the "Blue River" variety containing: 1-hexanol, α-pinene, camphene, β-pinene, 1-octene-3-ol, 3-octanone, hexyl acetate, β-cymene, limonene , eucalyptol, trans ^ -ocimene, cis ^ -ocimene, τ-terpinene, cis ^ -terpineol, linalool oxide, linalool, allo-ocimene, lavandulol, 1-terpinen-4-ol, hexyl butanoate, α-terpineol, geraniol, linalyl anthranilate, camphene, neryl propionate, geraniol acetate, a-berganotene, α-santalene, caryophyllene, β-sesquifellandren, τ-muurolene, a-amorphene, cariophyllene oxide, epibicycloseskwifellandren for the production of a drug, to combat aureus strains including aureus strains. type MRSA / ORSA.

2. Application of narrow-leaved lavender essential oil ornamental variety "Blue River" containing: 1-hexanol, a-pinene, camphene, β-pinene, 1-octene-3-ol, 3-octanoone, hexyl acetate, β-cymene, limonene , eucalyptol, trans ^ -ocimene, cis ^ -ocimem, τ-terpinene, cis ^ -terpineol, linalool oxide, linalool, allo-ocimene, lavandulol, 1-terpineon-4-ol, hexyl butanoate, a-terpineol, geraniol, linalillum anthranilate, camphene, neryl propionate, geraniol acetate, a-bergamotene, a-santalene, caryophyllene, β-sesquifellandrene, τ-muurolene, a-amorphene, caryophyllene oxide, epibicycloseskwifellandren for the preparation of a drug of the genus Candida albiconans.